专利名称：治疗心脑血管疾病的复方灯盏细辛制剂及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明是一种治疗心脑血管疾病的复方灯盏细辛制剂及其制备方法和应用，属于中药的技术领域。
背景技术：
脑血管疾病临床上主要分为出血性脑血管病和缺血性脑血管病，缺血性脑血管病(动脉粥样硬化性血栓性脑梗塞、脑栓塞和腔隙性脑梗塞)最为常见，约为出血性脑血管病的3倍。大量的流行病学研究表明，脑血栓形成又占到整个脑血管病的40～60％，脑出血占16～39％，蛛网膜下腔出血占10％左右，脑栓塞约占3～8％。世界卫生组织1971～1974年统计的6391例按诊断分类的脑卒中，结果脑梗塞最常见，平均占40％以上；其次为脑内出血，占16％；蛛网膜下腔出血在8％以上；脑栓塞占3.5～5％。美国Framingham18年随访发现脑血栓形成占57％，脑栓塞占15％，脑出血占5％，蛛网膜下腔出血占12％。随着工业化程度的增长，以及人民群众生活水平的提高，饮食结构的改变，高血压，高血糖，高血脂，吸烟，饮酒等人群的增多，脑血管病的发病率呈逐年上升趋势。缺血性脑血管病是中老年人的常见疾病，其发病急，死亡率、致残率均较高，是中老年人三大主要死因之一。对于脑梗塞的治疗原则以减少血栓形成，减少脑组织坏死，保护脑细胞为主，西医药的治疗主要有溶栓、抗凝、抗血小板聚集、脑保护、血管扩张、钙拮抗治疗。这些药物如同大多数化学药一样，临床应用也受到越来越多显现出来的副作用的限制。常用的抗血栓治疗有溶栓剂(尿激酶，链激酶等)、抗凝剂(肝素、双香豆素、华法令、新抗凝片等)、钙离子拮抗剂(氟桂嗪、尼莫地平、尼卡地平、脑益嗪、硝苯地平、利多氟嗪等)，大多具有见效快的特点，但易出现出血性疾病、胃肠道反应以及过敏、头痛、头晕、恶心、低血压、皮疹等不良反应，并常常受到并发症的影响而应用受限，故临床应用非常谨慎。而中国专利公报公开的专利申请号为03136116、名称为“一种治疗血液粘稠症的中药制剂及其制备方法”的申请，这份发明使用了比较多的中药材配伍，制备比较复杂，特别是制备中药注射剂是很困难的，不利于控制其生产质量。鉴于此，十分有必要研发一种配伍简单合理，疗效可行的中药组方。
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗心脑血管疾病的复方灯盏细辛中药制剂及其制备方法和应用；本发明针对现有技术，本方根据风痰流窜经络，血脉痹阻，经隧不通，气不能行，血不能濡，故肢体废而不用成半身不遂的病因病机，遵“治风先治血，血行风之灭”之理，采取活血化瘀通络之法。以性味苦温的灯盏细辛为君，用之化瘀通络；赤芍味苦微寒，入血分，凉血热，散瘀血，通经络，治血热瘀滞，助君药以达活血化瘀、散瘀通络之效，用之为臣。二药合用具有活血化瘀，通经活络的功能。组方有用药精简力专、作用途径直接之长，无偏温偏凉之弊，有较为明显的用药特色。本发明不仅对于治疗心脑血管疾病如冠心病、心绞痛、心律失常、脑血栓、老年性痴呆等有较好的疗效，还可以用于治疗肝肾综合症、心肺病、糖尿病及其并发症等疾病。而且本发明选用的灯盏细辛细辛、赤芍，主要含灯盏细辛花素、芍药苷，工艺合理可行，制备过程中不会产生过敏性物质，更加安全有效，可供病人长期使用。
本发明是这样构成的按照重量百分比计算，它是由灯盏细辛1～99％和赤芍99～1％与适当的辅料制备而成。
优选为按照重量百分比计算，它是由灯盏细辛20～80％和赤芍80～20％与适当的辅料制作而成。
准确的说按照重量百分比计算，它是由赤芍60％与灯盏细辛40％制作而成。
所述组方中的赤芍与灯盏细辛可以是药材或者是由相应比例药材制备得到的提取物，其中灯盏细辛提取物可以是灯盏细辛醇提取物、灯盏细辛水提取物、灯盏细辛水提醇沉提取物、灯盏细辛半仿生提取物、灯盏细辛超临界萃取物或者以上各提取物的精制品；赤芍提取物可以是赤芍醇提取物、赤芍水提取物、赤芍水提醇沉提取物、赤芍半仿生提取物、赤芍超临界萃取物或者以上各提取物的精制品。
所述的制剂为直接用于注射给药的小容量注射液、直接供静脉滴注的静脉输液、需稀释后用于静脉滴注的注射用浓溶液和用冷冻干燥法或喷雾干燥法制得的注射用无菌粉末和无菌块状物，片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、丸剂、软胶囊剂、口服液体制剂、口腔崩解片或分散片剂。
制剂中含有黄酮类成分和苷类成分，以重量百分比计算，注射剂中黄酮类成分和苷类成分含量之和不低于制剂中扣除辅料量和水分量的总固体量的25％。
所述的治疗心脑血管疾病的复方灯盏细辛制剂的制备方法取赤芍药材，粉碎后加入水或乙醇溶液提取，合并提取液，过滤，浓缩得赤芍粗提物，也可在此基础上采用乙醇沉淀法、柱层析法、萃取法、絮凝沉淀法中的一种或几种联合使用进行适当精制，得赤芍精提物；取灯盏细辛药材，粉碎后加入水或乙醇溶液提取，合并提取液，过滤，浓缩得灯盏细辛粗提物，也可在此基础上采用乙醇沉淀法、柱层析法、萃取法、絮凝沉淀法中的一种或几种联合使用进行适当精制，得灯盏细辛精提物，将灯盏细辛粗提物或精提物与赤芍粗提物或精提物混合均匀，加辅料制成不同的制剂。
优选为灯盏细辛加5～12倍量水煎煮1～5次，每次0.5～2小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩，加乙醇使含醇量达30～80％，不断搅拌，静置6～24小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩，用盐酸调pH值，保温，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至pH值，真空干燥，得灯盏细辛提取物；赤芍加3～10倍量水煎煮1～5次，每次0.5～2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩，加乙醇使含醇量达40～80％，搅拌均匀，静置6～24小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩，用水饱和的正丁醇提取1～5次，合并正丁醇液，用水洗1～3次，减压回收正丁醇，残留物加乙醇溶解，上聚酰胺柱，用乙醇洗脱，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得赤芍提取物，将灯盏细辛提取物与赤芍提取物混合均匀，加辅料制成不同的制剂。
准确的说灯盏细辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度50℃时1.09～1.11，加乙醇使含醇量达55％，不断搅拌，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度50℃时1.10～1.12，用盐酸调pH值至2，55℃保温6小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至pH值3～4，真空干燥，得灯盏细辛提取物；赤芍加8倍量水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度50℃时1.06～1.08，加乙醇使含醇量达60％，搅拌均匀，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度50℃时1.18～1.20，用1/2倍量水饱和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/8倍量水洗1次，减压回收正丁醇，残留物加45％乙醇7500ml溶解，上聚酰胺柱，1500g，Φ12cm，径高比1∶6，吸附流速0.5BV/h，BV-湿柱体积＝干树脂重量的5倍体积，用45％乙醇22500ml洗脱，洗脱流速1BV/h，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得赤芍提取物，将灯盏细辛提取物与赤芍提取物混合均匀，加辅料制成不同的制剂。
所述制剂中的注射用无菌块状物这样制备取灯盏细辛提取物、赤芍提取物和10g甘露醇，加1800ml注射用水，搅拌使溶解，用饱和氢氧化钠溶液调pH值至7.0～7.5，加注射用水至2000ml，混匀，煮沸30分钟，分装于已处理好的输液瓶中，塞入丁基橡胶塞及薄膜，轧铝盖，流通蒸汽灭菌30分钟，冷藏24小时，在无菌条件下用0.45μm和0.22μm微孔滤膜滤过，滤液分装，每瓶2.0ml，冷冻干燥，第一阶段的平衡冻结温度为0℃时的平衡时间为1.5小时，即搁板温度与产品温度基本一致的时间；第二阶段冻结温度从0℃到最低共熔温度-16℃时，搁板温度与产品温度平衡时间为1.5小时；第三阶段继续降温至-45℃，约需1.5小时，保持此温度1.5小时，直至产品完全冻牢，即开始抽真空，进入干燥程序，在45℃恒温下-抽真空，使干燥室的气压降至13.332～266.64Pa，在此压力下缓慢升温，2～4℃/h，至最低共熔点温度，时间约为12小时，升华干燥完成后，继续在13.332Pa低压条件下，升温干燥以除去残余水分，时间约为12～15小时，保持35℃以上干燥3小时，压盖，即得。
所述制剂中的注射液和注射用浓溶液这样制备取灯盏细辛提取物、赤芍提取物，加入适量注射用水溶解，按体积加入1.0％的活性炭，煮沸，保持微沸30min，稍冷滤过，滤液加注射用水至规定量，用饱和氢氧化钠溶液调pH值至7.0～7.5，煮沸，4℃冷藏过夜，粗滤、精滤，加注射用水，分装到安剖瓶，封口灭菌即得小容量注射液或注射用浓溶液。
所述制剂中的葡萄糖或氯化钠静脉输液这样制备取灯盏细辛提取物、赤芍提取物，加入适量注射用水溶解，加入规定量的葡萄糖或氯化钠，混合溶解后按体积加入1.0％的活性炭，煮沸，保持微沸30min，稍冷滤过，滤液加注射用水至规定量，再用饱和氢氧化钠溶液调pH值至7.0～7.5，煮沸，4℃冷藏过夜，粗滤、精滤，加注射用水，分装，灭菌即得。
所述制剂中的注射用无菌粉末这样制备取灯盏细辛提取物、赤芍提取物，加1800ml注射用水，搅拌使溶解，用饱和氢氧化钠溶液调pH值至7.0～7.5，加注射用水至2000ml，混匀，煮沸30分钟，分装到搪瓷盘中，冷冻干燥，第一阶段的平衡冻结温度为0℃时的平衡时间为1.5小时，即搁板温度与产品温度基本一致的时间；第二阶段冻结温度从0℃到最低共熔温度-16℃时，搁板温度与产品温度平衡时间为1.5小时；第三阶段继续降温至-45℃，约需1.5小时，保持此温度1.5小时，直至产品完全冻牢，即开始抽真空，进入干燥程序，在45℃恒温下-抽真空，使干燥室的气压降至13.332～266.64Pa，在此压力下缓慢升温，2～4℃/h，至最低共熔点温度，时间约为12小时，升华干燥完成后，继续在13.332Pa低压条件下，升温干燥以除去残余水分，时间约为12～15小时，保持35℃以上干燥3小时，在无菌条件下分装到西林瓶中，即得。
所述制剂中的注射用无菌粉末还可以这样制备取灯盏细辛提取物、赤芍提取物，混匀，加入适量注射用水溶解，按体积加入1.0％的活性炭，煮沸，保持微沸30min，稍冷滤过，滤液加注射用水至规定量，用饱和氢氧化钠溶液调pH值至7.0～7.5，煮沸，4℃冷藏过夜，粗滤、精滤，在进风温度为150℃，出风温度为60℃，气流速度为20m·s-1的条件下喷雾干燥得粉末，分装，即得。
本发明中灯盏细辛提取物可以是黄酮类成分含量大于90％的总黄酮有效部位，赤芍提取物可以是苷类成分含量大于90％的总苷有效部位。
本发明中赤芍及赤芍提取物还可以用等量的白芍及白芍提取物替代。
所述的制剂也可以用于制备治疗肝肾综合症、心肺病、糖尿病及其并发症等疾病的药物。
也就是说，本发明制备的产品可以用于治疗肝肾综合症、心肺病、糖尿病及其并发症等疾病。
与现有技术相比，本方根据风痰流窜经络，血脉痹阻，经隧不通，气不能行，血不能濡，故肢体废而不用成半身不遂的病因病机，遵“治风先治血，血行风之灭”之理，采取活血化瘀通络之法。以性味苦温的灯盏细辛为君，用之化瘀通络；赤芍味苦微寒，入血分，凉血热，散瘀血，通经络，治血热瘀滞，助君药以达活血化瘀、散瘀通络之效，用之为臣。二药合用具有活血化瘀，通经活络的功能。组方有用药精简力专、作用途径直接之长，无偏温偏凉之弊，有较为明显的用药特色，通过合理可行的工艺，制备过程中不会产生过敏性物质，保证了产品的安全有效，可供病人长期使用。
本申请人在研制过程中，对每个环节都进行了详细的研究提取工艺路线研究通过对方中药物所含化学成分研究，分析每味药材的有效成分与药理作用，结合不同提取溶剂、不同提取方法的药效学试验研究及指标成分的转移率，确定了本方的基本工艺路线。
组方配比及拆方研究我们以小鼠急性脑缺血的保护作用为评价指标，对方中两味药材组成配比进行最佳处方筛选，结果表明灯盏细辛与赤芍用量之比为1∶1.5为该方的最佳配方。同时以小鼠急性脑缺血作用为指标进行拆方研究，结果表明各给药组均能延长急性脑缺血小鼠的呼吸维持时间，两药合用的作用强度显著优于单味用药组(P＜0.01)。
提取方法和提取条件的选择方中两味药材经不同提取溶剂、不同提取方法以及单独提取、合并提取，以化学指标成分及药效学试验等指标进行动态跟踪，试验结果提示两味药材不宜混合提取，以水煎煮提取制备的样品生理活性较强，制剂中有效成分的提取率高，制剂质量易于控制。试验中对溶剂用量、提取时间、提取次数等进行了正交试验，筛选最优提取工艺。
分离、纯化工艺在药材的提取物中，除有效成分外，尚含许多杂质成分，为保证产品的质量和有利于产品的质量控制，需进一步精制纯化，尽可能地除去水提液中的大分子粘液质、蛋白质、淀粉及固体微粒等杂质，提高有效成分的含量。经不同方法对比试验，两味药材的煎煮液均可采用乙醇处理。灯盏细辛酸化精制；赤芍用正丁醇提取(试验采用大孔吸附树脂吸附分离、正丁醇提取等方法进行理化性质研究及药效学试验，结果表明赤芍中的活性成分之一酚酸类成分主要存在于水洗液和流穿液中，而对大鼠局灶性脑缺血(MCAO)脑血流量的影响以及对小鼠急性脑缺血的保护作用试验结果均显示水洗液和流穿液仍有较强的药理活性，说明大孔吸附树脂分离不能将有效成分有效富集)。经纯化精制的样品综合指标好，主要成分的纯度和收率较高，产品质量易于控制，经试验研究方法的考察和对精制组分(半成品)的药效学试验结果表明，该工艺合理、可行。
除鞣质方法选择赤芍中含有鞣质，必须进行除鞣质处理。经各种除鞣质方法的对比研究，采用对鞣质吸附力极强的聚酰胺除鞣质。结果表明，该法去除鞣质效果较好，有效成分损失少，芍药苷的转移率高，样品中的鞣质检查符合规定，小鼠的异常毒性检查可达120倍以上(经对市售几种中药注射剂进行对比检查，小鼠的异常毒性大多在60倍左右)，明显高于其他除鞣质方法。说明本品用聚酰胺去除鞣质的方法可行，制剂的安全性得到有效保证。
半成品干燥方法的选择经对不同干燥条件的试验对比，结果表明，真空干燥对有效成分的影响较小，干燥速度快，温度低，样品质地疏松，易于溶解。
制剂成型工艺研究经对附加剂的选择及用量、pH值的影响、灭菌条件的优选、冷冻干燥工艺等试验，确定了制剂成型工艺的基本参数及制剂半成品投料的处方。
此外，本发明还在实施方式中提供了其他提取工艺、多种制剂的详细制作工艺，可以直接用于指导实际生产。
申请人进行了一系列实验，可以证明本发明提供的药物具有有效的效果。
实验例1不同配方的药效学比较研究(1)对急性血瘀大鼠血液流变性的影响大鼠70只，雌雄各半，体重270±20g连续给药12天，末次给药后1h，除正常对照组外其余各组均sc注射肾上腺素0.8mg/kg，共两次，两次间隔4h。在两次之间(前后各间隔2小时)，将大鼠浸入冰水中5min，禁食。次日晨股动脉采血，肝素钠抗凝，测定血流变各指标。
组别 血浆粘度 红细胞压积 还原粘度正常对照1.52±0.34 0.43±0.11 7.78±0.29模型对照2.15±0.18 0.55±0.04 8.39±3.43赤芍2g/kg 1.96±0.24 0.48±0.27 8.20±2.54灯盏细辛2g/kg 1.81±0.18 0.45±0.08 8.10±1.72白芍2g/kg 1.98±0.27 0.49±0.39 8.21±1.33灯盏白芍提取液 1.70±0.45 0.44±0.87 7.85±1.33灯盏赤芍提取液 1.68±0.19 0.43±0.15 7.81±1.64结果表明，灯盏花主要成分是灯盏花素总黄酮，化学名为4，5，6-三羟基黄酮-7-葡萄糖醛酸甙，具有抑制血小板积聚、抑制凝血功能、改善微循环的作用，能抑制钙泵对钙离子的转运；赤芍能降低血浆脂质过氧化物，减少钙沉积于动脉壁，影响钙代谢，平衡抗动脉粥样硬化；灯盏细辛和赤芍配伍后有较强改善血瘀模型血液状态的能力，能使血瘀大鼠血浆粘度、红细胞压积、血小板聚集显著降低，本发明组方能够联合增效。该实验还证明用等量的白芍及白芍提取物替代赤芍及赤芍提取物得到的制剂具有基本相同的效果。
(2)对血瘀模型家兔血液流变性的影响家兔64只，随机分为8组，每组8只，♀♂各半。各组动物先耳缘静脉注射(iv)给药。空白及模型对照组注射生理盐水(NS)1ml/kg，阳性药组iv葛根素注射液30mg/kg(以NS配成30mg/ml)，实验组分别注射0.25mg/ml的药液(以NF配成)，给药量均为1ml/kg，连续给药两周(14d)，于给药的第2、13d，除空白对照组外，各兔分别经耳缘静脉注10％高分子右旋糖酐5ml/kg，每日两次，造成血瘀模型。末次给药后，再次注射10％高分子右旋糖酐5ml/kg，15min后，心脏采取空腹血6ml，进行血液流变学指标检测，其中血小板聚集率用LBY-NJ2型血小板聚集仪，采用比浊法测定其它采用LBY-N6A+旋转式锥板粘度仪测定。
对家兔血小板聚集和纤维蛋白原的影响(x±s，n＝6)组别 剂量 体重(kg) 血小板聚集(％) 纤维蛋白原(g/L)空白组- 2.41±0.2216.33±1.73 2.87±3.18模型组- 2.49±0.1639.06±17.13 2.65±1.29阳性药组 30mg/kg 2.38±0.1512.48±0.36 3.04±2.88灯盏∶赤芍(1∶99) 2g/kg 2.40±0.2713.11±0.23 2.91±1.53灯盏∶赤芍(1∶4) 2g/kg 2.39±0.3513.02±3.05 2.95±1.32灯盏∶赤芍(2∶3) 2g/g 2.37±0.1312.50±0.40 3.03±0.87灯盏∶赤芍(4∶1) 2g/kg 2.40±0.1513.19±0.30 2.90±0.69灯盏∶赤芍(99∶1) 2g/g 2.41±0.2713.23±0.42 2.96±0.58初步实验表明，灯盏、赤芍配伍有效，本申请人还在工艺研究过程中进行了详细的组方配比与拆方研究。
实验例2提取工艺研究为了解本方对脑血管疾病作用的有效部位和主要有效成分，我们对本方提取溶剂、提取方法(合煎、单煎)，以及组方配比、不同给药途径、不同提取分离、精制纯化方法的药效学和化学成分的动态变化进行了研究。试验结果表明其药理活性与药液中的物质基础有关，复方药效优于任何单味药；血管内给药作用明显优于血管外给药；两味药材纯化精制后不但保留了有效成分，而且制剂质量得到有效提高，达到静脉注射用制剂的质量要求。
1提取溶剂、提取方法的选择 以小鼠急性脑缺血的保护作用为评价指标，采用系统溶剂法，对两味药材分别提取、混合提取、分别提取后混合样品进行试验。
1.1样品制备 取灯盏细辛、赤芍药材，分别用醋酸乙酯、正丁醇、乙醇和水依次提取，分段制样，得样品TR1(A)、TR1(B)、TR1(C)、TR1(D)、TR2(A)、TR2(B)、TR2(C)、TR2(D)、TR3(A)、TR3(B)、TR3(C)、TR3(D)、TR4(A)、TR4(B)、TR4(C)、TR4(D)提取物。上述各样品，于水浴上进一步除去残留溶剂，加适量水微热溶解，调pH值至6，充分搅拌，滴加5％明胶溶液至无沉淀产生，再加乙醇使含醇量为75％，静置12小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩近干，加水稀释至每1ml含2.0g生药，调pH值至7.0，煮沸，放冷，滤过，冷藏24小时，用0.45μm微孔滤膜滤过，滤液分装，灭菌，备用。对上述样品进行药效学试验比较，考察该方提取溶媒、提取方法。
1.2实验方法及结果取昆明种小鼠约180只，体重18～22g，雌雄兼用，随机分为18组，每组10只(雌雄各半)。样TR-12.4g生药/kg；样TR-23.6g生药/kg；样TR-36.0g生药/kg；样TR-46.0g生药/kg；阳性对照药4.0ml/kg；模型组给予等容积的生理盐水。各组均通过尾静脉给药，给药容积为10ml/kg。静脉给药15min后，仰卧位固定，用0号手术缝线两端结扎双侧颈总动脉(合并迷走神经)后中间剪断。记录小鼠的呼吸维持时间，结果见下表。
试验结果表明，除TR-1(A)、TR-1(B)、TR-1(D)、TR-2(A)、TR-3(A)、TR-3(D)六个样品外，各给药组均能延长急性脑缺血的小鼠呼吸维持时间，与模型组比较差异显著(P＜0.05、P＜0.01)。其中乙醇和正丁醇提取液作用比较明显，与模型组比较有显著性差异(P＜0.05、P＜0.01)，而醋酸乙酯和水提液的作用较上述两种溶剂的作用差。
试验结果提示第一，该方中的有效成分主要为极性较大的物质，同时说明有机溶剂提取后，水提液中仍有活性成分，为排除溶剂使用先后对药理作用的影响，两味药材分别选择水、乙醇等进行验证试验。第二，样品4的作用明显比样品3强，说明两药分开提取比合并提取效果好。
对急性脑缺血小鼠呼吸维持时间的影响(x±s，n＝10)
与模型组比较*P＜0.05 **P＜0.01注样品TR1为灯盏细辛药材单独提取，样品TR2为赤芍药材单独提取。样品TR3为两味药材混合提取，样品TR4为分别单独提取后，提取物混合制样。A-醋酸乙酯提取，B-正丁醇提取，C-为乙醇提取，D为水煮提取。阳性对照药复方丹参注射液，上海通用药业股份有限公司产品，批号0302182。
2单独提取或合并提取工艺选择为进一步确定本方的提取工艺，以小鼠急性脑缺血的保护作用为评价指标，对方中两味药材单独提取或合并提取工艺进行试验比较。
2.1样品制备单独水煎煮提取取灯盏细辛100g，加12倍量水煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，浓缩至每1ml含生药2g的浓度，加乙醇使含醇量为60％，搅拌，静置24小时，滤过，浓缩，再加乙醇使含醇量为70％，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩近干，得灯盏细辛提取物；再取赤芍药材150g，加10倍量水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至每1ml含生药2g的浓度，加乙醇使含醇量为60％，搅拌，静置12小时，滤过，回收溶剂并浓缩至每1ml含2g生药，滴加5％明胶溶液至无沉淀产生，再加乙醇使含醇量为75％，静置12小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩近干，得赤芍提取物。取赤芍和灯盏细辛提取物加注射用水120ml微热溶解，调pH值至7.0，补加注射用水至125ml，煮沸，放冷，滤过，冷藏24小时，用0.45μm微孔滤膜滤过，滤液分装，灭菌，即得(每1ml含生药2.0g)。
合并水煎煮提取取灯盏细辛100g、赤芍药材150g，加10倍量水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至每1ml含生药2g的浓度，加乙醇使含醇量为60％，搅拌，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇至并浓缩至每1ml含生药2g，滴加5％明胶溶液至无沉淀产生，再加乙醇使含醇量为75％，静置12小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩近干，得提取物，加注射用水120ml微热溶解，调pH值至7.0，补加注射用水至125ml，煮沸，放冷，滤过，冷藏24小时，用0.45μm微孔滤膜滤过，滤液分装，灭菌，即得(每1ml含生药2.0g)。
阳性对照药复方丹参注射液，规格2ml/支。上海通用药业股份有限公司第三公司，批号0302182。
药物稀释方法 临用前用0.9％的氯化钠注射液稀释至适当的浓度，备用。
2.2药效学试验方法及结果对小鼠急性脑缺血的保护作用 取昆明种小鼠约40只，体重18～22g，雌雄兼用，随机分为4组，每组10只(雌雄各半)。样TF1、2给药剂量为2.5g生药/kg；阳性对照药4.0ml/kg；模型组给予等容积的生理盐水。各组均通过尾静脉给药，给药容积为10ml/kg。静脉给药15min后，仰卧位固定，用0号手术缝线两端结扎双侧颈总动脉(合并迷走神经)后中间剪断。记录小鼠的呼吸维持时间，试验结果见下表。
对急性脑缺血小鼠呼吸维持时间的影响(x±s，n＝10)
与模型组比较*P＜0.05、**P＜0.01TF-1合并提取样，TF-2单独提取样，下同试验结果表明，各给药组均能延长急性脑缺血的小鼠呼吸维持时间，与模型组比较差异显著(P＜0.05、P＜0.01)，其中两味药材分开提取作用较明显(P＜0.01)，组间比较无显著性差异(P＞0.05)。
2.3样品中指标成分的转移率分别取上述样品，依法测定灯盏细辛中野黄芩苷和赤芍中芍药苷的含量，计算转移率，结果见下表。
不同提取方法指标成分转移率试验结果 分开提取样品的野黄芩苷和芍药苷转移率均明显高于合并提取样品，主要是由于在煎煮过程中，提取液pH值较低(pH＝4～5)，影响有效成分的提取，尤其对野黄芩苷的影响较大。
综上，乙醇和水是灯盏细辛和赤芍的有效提取溶剂，单独提取和合并提取的提取物均能延长急性脑缺血小鼠呼吸维持时间。尽管组间比较无显著性差异，但单独提取的作用明显优于合并提取；水煎煮提取野黄芩苷和芍药苷在样品中的转移率较高，分开提取野黄芩苷和芍药苷转移率明显高于合并提取。结合药效学试验结果分析，本品中野黄芩苷和芍药苷为本方有效物质，故本方宜以价廉的水为溶剂煎煮提取，两味药材不宜合并煎煮。
3组方配比与拆方研究 本方为验方，临床应用组方配比不尽相同，为进一步探讨本发明产品(冻干粉针)组方配比及组方的合理性，以小鼠急性脑缺血、缺氧的保护作用为评价指标，对方中两味药材组成配比及拆方进行药效学试验研究。
3.1组方配比研究3.1.1处方-1(灯盏细辛∶赤芍＝1∶1)取灯盏细辛120g，加12倍量水煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，浓缩至每1ml含生药2g的浓度，加乙醇使含醇量为60％，搅拌，静置24小时，滤过，浓缩，再加乙醇使含醇量为70％，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩近干，得灯盏细辛提取物。再取赤芍120g，加10倍量水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至每1ml含生药2g的浓度，加乙醇使含醇量为60％，搅拌，静置12小时，滤过，浓缩，滴加5％明胶溶液至无沉淀产生，再加乙醇使含醇量为75％，静置12小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩近干，得赤芍提取物。取赤芍和灯盏细辛提取物加注射用水适量微热溶解，调pH值至7.0，补加注射用水至120ml，煮沸，放冷，滤过，冷藏24小时，用0.45μm微孔滤膜滤过，滤液分装，灭菌，即得(每1ml含生药2g)。
处方-2(灯盏细辛∶赤芍＝1∶1.5)取灯盏细辛120g，赤芍180g，分别按上法操作得提取物。取两提取物加适量注射用水微热溶解，调pH值至7.0，补加注射用水至150ml，同法操作即得。
处方-3(灯盏细辛∶赤芍＝1∶2)取灯盏细辛120g，赤芍240g，分别按上法操作。取两提取物加适量注射用水微热溶解，调pH值至7.0，补加注射用水至180ml，同法操作即得。
处方-4(灯盏细辛∶赤芍＝2∶1)取灯盏细辛180g，赤芍90g，分别按上法操作。取两提取物加适量注射用水微热溶解，调pH值至7.0，补加注射用水至135ml，同法操作即得。
药物稀释方法临用前用0.9％的氯化钠注射液(广西浦北制药厂，批号A0301153)稀释至适当的浓度，备用。
3.1.2试验方法及结果对小鼠急性脑缺血的保护作用取昆明种小鼠约210只，体重18～22g，雌雄兼用，随机分为21组，每组10只(雌雄各半)。各剂量组按下表给药；模型组给予等容积的生理盐水。各组均通过尾静脉给药，给药容积为10ml/kg。静脉给药15min后，仰卧位固定，用0号手术缝线两端结扎双侧颈总动脉(合并迷走神经)后中间剪断。记录小鼠的呼吸维持时间，试验结果见下表。
对急性脑缺血小鼠呼吸维持时间的影响(x±s，n＝10)
与模型组比较*P＜0.05、**P＜0.01，与处方2比较#P＜0.05、##P＜0.01CF-1～CF-4处方1～处方4，下同。
结果表明，4种不同配比组方的提取物均能不同程度延长急性脑缺血小鼠呼吸维持时间。按改进寇氏法计算各配比组方的半数有效量(ED50)由小到大依次为处方2(1.09g生药/kg)＜处方3(1.54g生药/kg)＜处方1(1.60g生药/kg)＜处方4(1.66g生药/kg)。处方2的ED50显著小于处方1、4；处方2小于处方3，但差别不显著。由上可知，处方2效果最佳，即灯盏细辛与赤芍用量之比为1∶1.5。
3.2组方拆方研究3.2.1样品制备灯盏细辛样品取灯盏细辛300g，加12倍量水煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，浓缩至每1ml含生药2g的浓度，加乙醇使含醇量为60％，搅拌，静置24小时，滤过，浓缩，再加乙醇使含醇量为70％，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩近干，得灯盏细辛提取物。加注射用水适量微热溶解，调pH值至7.0，补加注射用水至150ml，煮沸，放冷，滤过，冷藏24小时，用0.45μm微孔滤膜滤过，分装，灭菌，即得(每1ml含生药2g)。
赤芍样品取赤芍450g，加10倍量水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至每1ml含生药2g的浓度，加乙醇使含醇量为60％，搅拌，静置12小时，滤过，浓缩，滴加5％明胶溶液至无沉淀产生，再加乙醇使含醇量为75％，静置12小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩近干，得赤芍提取物。加注射用水适量微热溶解，调pH值至7.0，补加注射用水至225ml，煮沸，放冷，滤过，冷藏24小时，用0.45μm微孔滤膜滤过，分装，灭菌，即得(每1ml含生药2g)。
二药合用样品取灯盏细辛300g、赤芍450g，分别按上述方法提取，得提取物。两提取物合并，加注射用水适量微热溶解，调pH值至7.0，补加注射用水至375ml，煮沸，放冷，滤过，冷藏24小时，用0.45μm微孔滤膜滤过，分装，灭菌，即得(每1ml含生药2g)。
3.2.2试验方法及结果3.2.2.1对小鼠急性脑缺血的保护作用取昆明种小鼠50只，体重18～22g，雌雄兼用，随机分为5组，每组10只(雌雄各半)。样CFYJ-1给药剂量为1.0g生药/kg，样CFYJ-2给药剂量为1.5g生药/kg，样CFYJ-3给药剂量为2.5g生药/kg；阳性对照组4.0ml/kg；模型组给予等容积的生理盐水。各组均通过尾静脉给药，给药容积为10ml/kg。静脉给药15min后，仰卧位固定，用0号手术缝线两端结扎双侧颈总动脉(合并迷走神经)后中间剪断。记录小鼠的呼吸维持时间，试验结果见下表。
对急性脑缺血小鼠呼吸维持时间的影响(x±s，n＝10)
与模型组比较*P＜0.05、**P＜0.01与CFJY-3组比较#P＜0.05、##P＜0.01CFJY-1灯盏细辛CFJY-2赤芍CFJY-3灯盏细辛+赤芍试验结果表明，各给药组均能延长急性脑缺血小鼠的呼吸维持时间，与模型组比较差异显著(P＜0.05、P＜0.01)；灯盏细辛与赤芍合并用药组，作用强度显著优于单味用药组(P＜0.01)，说明复方的作用明显优于单方。
3.2.2.2处方交互作用分析为进一步研究两药合用后可能存在的交互作用，采用L4(23)正交实验进行交互作用分析，结果见下表。
L4(23)正交实验表及结果(x±s，n＝10)
从上表的结果直观分析，各因素影响药效的顺序为，灯盏细辛对于药效的贡献略大于赤芍(A＞B)；正交实验方差分析表明，灯盏细辛或赤芍对于药效均有极显著影响(P＜0.01)，而且两药存在明显的交互作用(P＜0.01)。交互作用分析如下
将不用药试验组作为基数(23.60)，灯盏细辛药效＝(32.66-23.60)，赤芍药效＝(32.23-23.60)，灯盏+赤芍药效＝(58.73-23.60)。由于(58.73-23.60)＞(32.66-23.60)+(32.23-23.60)，故灯盏细辛与赤芍存在交互作用，说明两药合用具有协同效果。
4.系统工艺研究4.1灯盏细辛提取工艺研究
4.1.1煎煮工艺的正交试验正交试验因素水平表设计根据试验结果，加水量、煎煮时间、煎煮次数是影响煎煮效率的主要因素，按每个因素3水平，用L9(34)正交表安排试验。以野黄芩苷收率为考察指标，对提取工艺进行探讨。
因素水平表
灯盏细辛煎煮工艺条件L9(34)正交试验安排及结果
方差分析表
F0.05(2，2)＝19.00 F0.01(2，2)＝99.00结果分析从上表中的结果直观分析，各因素影响提取效率的顺序为C＞B＞A，其中提取次数和提取时间对提取工艺影响较大；方差分析结果表明，提取次数有极显著性差异(P＜0.01)，提取时间有显著性差异(P＜0.05)，两者结论一致。最佳工艺条件为A3B1C3，在A因素中最佳工艺和次佳工艺的极差较小，从节省能源和时间的角度考虑，次佳工艺为A2B1C3。故以最佳工艺A3B1C3和次佳工艺A2B1C3进行重复试验(结果见下表)。
正交试验重复结果
从上表结果可见，甲乙两工艺的野黄芩苷收率无明显差异，从省工省时、降低能耗的角度，选择乙工艺进行生产。即加药材重量10倍的水(第一次多加3倍量)，煎煮3次，每次0.5小时。
4.1.2灯盏细辛纯化方法的选择灯盏细辛的有效成分为黄酮类化合物，该类化合物为多元酚类，可溶于水、乙醇，在酸性条件下析出沉淀，不溶于水，在中性和弱碱性条件下溶解，故采用乙醇沉淀、酸化处理的方法精制除杂。
4.1.2.1醇沉工艺的正交试验正交试验因数水平表设计药液的相对密度、醇沉浓度(根据试验结果，野黄芩苷在50％乙醇中溶解度较好，故醇浓度范围定在45-65％试验)、放置时间是影响醇沉工艺的主要因素，按每个因素3水平，用L9(34)正交表安排试验(下表)。以野黄芩苷提取率为考察指标，对提取工艺进行探讨。
因素水平表
样品制备取相当于100g生药的水煎液9份，分别浓缩至所需浓度，按正交试验表所示条件进行试验。取样测定野黄芩苷浓度，计算野黄芩苷量，以野黄芩苷转移率为指标进行评价，结果见下表。
灯盏细辛醇沉工艺条件L9(34)正交试验安排及结果
方差分析表
F0.05(2，2)＝19.00 F0.01(2，2)＝99.00。
结果分析从上表中的结果直观分析，各因素影响醇沉效率的顺序为A＞B＞C，其中相对密度和乙醇浓度对转移率影响较大；方差分析结果表明，相对密度对转移率有极显著性影响(P＜0.01)，乙醇浓度对转移率有显著性影响(P＜0.05)，两者结论一致，最佳工艺条件为A3B1C3，次佳工艺A2B2C2。在A、B因素中，最佳工艺和次佳工艺的极差较小，B因素中乙醇浓度低于50％时醇沉液滤过较困难，C因素为次要因素，综合考虑，以最佳工艺A3B1C3和次佳工艺A2B2C2进行重复试验(结果见下表)。
正交试验重复结果
从上表结果可见，甲乙两工艺的野黄芩苷转移率无明显差异，但甲工艺由于乙醇浓度过低，溶液不易沉清，样品过滤时较困难，故选择乙工艺进行生产。即煎煮液浓缩至相对密度为1.10(50℃)、加乙醇使含醇量为55％，搅拌，放置12小时，滤过，滤液减压回收乙醇。
4.1.2.2酸化条件的优化灯盏细辛中黄酮类为多元酚类，在酸性条件下可析出沉淀，不溶于水，在中性和弱碱性条件下溶解，故采用酸化处理的方法制备灯盏细辛提取物。
酸化工艺正交试验因数水平表设计药液的相对密度、pH值、保温温度、放置时间是影响酸化工艺的主要因素，按每个因素3水平，用L9(34)正交表安排试验(下表)。以野黄芩苷提取率考察指标，对酸化工艺进行考察。
因素水平表
样品制备取相当于50g生药的药液18份，浓缩至所需浓度，按正交试验表所示条件试验，收集沉淀物，用70％乙醇溶解至500ml，测定野黄芩苷含量，以野黄芩苷的转移率为评价指标进行评价。
正交工艺试验结果酸化工艺条件L9(34)正交试验安排及结果
方差分析表
F0.05(2，9)＝4.26 F0.01(2，9)＝8.02。
结果分析从结果直观分析，各因素影响酸化效率的顺序为B＞C＞A＞D，其中pH值、保温温度和相对密度对工艺影响较大；方差分析结果表明，各因素均有极显著性差异(P＜0.01)，最佳工艺条件为A2B2C3D2，在C、D因素中最佳工艺和次佳工艺的极差较小，综合考虑，选次佳工艺为A2B2C2D1。以最佳工艺A2B2C3D2和次佳工艺A2B2C2D1进行重复试验，结果见下表。
正交试验重复结果
从上结果可见，甲乙两工艺的野黄芩苷收率无明显差异，从省工省时的角度，选择乙工艺进行生产。即药液浓缩至相对密度1.11(50℃)，用盐酸调pH值至2，于55℃保温6小时。
4.1.3灯盏细辛提取物干燥方法的选择取灯盏细辛1500g，加10倍量水煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度1.10(50℃)，加2倍量85％乙醇，不断搅拌，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.10(50℃)，用盐酸调pH值至2，55℃保温6小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至pH值3～4，均分为3份。按条件进行干燥，取干燥品测定提取物在不同条件下干燥后野黄芩苷的损失率，试验结果见下表。
不同干燥条件对野黄芩苷的影响
试验结果表明，在各干燥条件下野黄芩苷的转移率无明显差异，真空干燥速度快，干燥时间短，样品质地疏松，故选用60～80℃真空干燥。
4.2赤芍的提取工艺研究4.2.1煎煮工艺的正交试验正交试验因素水平表设计加水量、煎煮时间、煎煮次数是影响煎煮效率的主要因素，按每个因素3水平，用L9(34)正交表安排试验。以芍药苷提取率和固体物收率为考察指标，对提取工艺进行探讨。
因素水平表
赤芍煎煮工艺条件L9(34)正交试验安排及结果
芍药苷收率方差分析表
F0.05(2，2)＝19.00 F0.01(2，2)＝99.00。
总固体收率方差分析表
F0.05(2，2)＝19.00 F0.01(2，2)＝99.00。
结果分析从结果直观分析，以芍药苷收率为考察指标时，各因素影响提取效率的顺序为C＞B＞A，其中提取次数和提取时间对提取工艺影响较大；方差分析结果表明，提取次数有极显著性差异(P＜0.01)，提取时间有显著性差异(P＜0.05)，两者结论一致，最佳工艺条件为A3B2C3，在A因素中最佳工艺和次佳工艺的极差较小，从节省能源和时间的角度考虑，次佳工艺为A2B2C3。从结果直观分析，以总固体收率为考察指标时，各因素影响提取效率的顺序为C＞B＞A，其中提取次数和提取时间对提取工艺影响较大；方差分析结果表明，提取次数及提取时间有显著性差异(P＜0.05)，两者结论一致，最佳工艺条件为A2B2C3，此工艺条件与以芍药苷收率为考察指标的次佳工艺一致。综合分析上述两项考察指标，以最佳工艺甲A3B2C3和乙A2B2C3进行重复试验(结果见下表)。
正交试验重复结果
从结果可见，甲乙两工艺的芍药苷及总固体收率无明显差异，从省工省时、降低能耗的角度，选择乙工艺进行生产。即加药材重量8倍的水(第一次多加2倍量)，煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，适当浓缩，备用。
4.2.2 赤芍提取液分离纯化分离纯化方法的选择在赤芍水煎煮提取物中，除有效成分外，尚含许多杂质成分，为保证产品的质量和有利于产品的质量控制，需进一步精制纯化，尽可能地除去水提液中的大分子粘液质、蛋白质、淀粉及固体微粒等杂质。试验曾采用乙醇沉淀、放置冷藏、离心、正丁醇萃取、过D101树脂等提取方法处理，试验结果表明，用乙醇沉淀、正丁醇提取的方法纯化样品的综合指标好，主要成分的收率较高，产品质量易控制。
4.2.2.1醇沉工艺的正交试验正交试验因数水平表设计药液的相对密度、醇沉浓度、放置时间是影响醇沉工艺的主要因素，按每个因素3水平，用L9(34)正交表安排试验。以芍药苷转移率为考察指标，对醇沉工艺进行考察。
因素水平表
样品制备取相当于100g生药的水煎液9份，分别浓缩至所需浓度。按正交试验表进行试验，药液滤过，测定总体积。取样测定芍药苷浓度，计算芍药苷量，以芍药苷的转移率为评价指标进行评价，结果见下表。
赤芍醇沉工艺条件L9(34)正交试验安排及结果
方差分析表
F0.05(2，2)＝19.00 F0.01(2，2)＝99.00。
结果分析从结果直观分析，各因素影响醇沉效率的顺序为B＞A＞C，其中相对密度和乙醇浓度对提取工艺影响较大；方差分析结果表明，相对密度和乙醇浓度有显著性意义(P＜0.05)，两者结论一致，最佳工艺条件为A1B3C1。在有显著性影响的B因素中，最佳工艺和次佳工艺的极差较小，C因素极差较小，从节能省时考虑，故次佳工艺为A1B2C2。为进一步证实该工艺的合理性，以最佳工艺A1B3C1和次佳工艺A1B2C2进行重复试验。
正交试验重复结果
结果可见，甲乙两工艺的芍药苷转移率无明显差异，而乙工艺有明显的省时，低耗的优点，选择乙工艺进行生产。即煎煮液浓缩至相对密度为1.07(50℃)、加乙醇使含醇量为60％，搅拌，放置12小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩，备用。
4.2.2.2正丁醇分离提取条件考察赤芍中主要含单萜类和酚酸类化合物，该类化合物极性较大，精制纯化应选择极性较大的有机溶剂。试验结果表明，正丁醇对上述成分具有较好的选择性溶解，故选择正丁醇进行精制纯化。
正丁醇提取次数的研究取本品600g，水煎煮浓缩乙醇沉淀处理，回收乙醇，浓缩至相对密度1.19(50℃、每毫升含生药1.5克；pH4)，均分为4份，1份用于测定总固体物重、芍药苷含量，另3份分别用1/2倍量水饱和的正丁醇各萃取5次，分取正丁醇液，测定芍药苷含量和总固体物重，计算芍药苷和总固体物转移率，试验结果见下表。
试验结果表明，正丁醇萃取5次，总固体物转移率为17.37％，芍药苷总量转移率大于97％，说明正丁醇提取可除去大量的杂质。正丁醇萃取4次，芍药苷总量的转移率已达95％以上，总固体物转移率为16.39％，正丁醇萃取5次，芍药苷总量的转移率仅增加1.55％，总固体物转移率增加0.98％。为降低生产成本，减少工序，保证质量，可确定用1/2倍量水饱和正丁醇提取4次。为进一步考察正丁醇提取的效率，对正丁醇萃取工艺进行验证试验。
正丁醇萃取提取次数考察试验结果(n＝3)
水洗正丁醇提取液对芍药苷含量的影响在上述工艺处理过程中，样品中仍残留部分糖和无机盐等极性较强的成分，为尽可能纯化样品，正丁醇液用少量水洗，试验结果表明，水洗后总固体物可降低12％左右，芍药苷总量的保留率达95％以上。
正丁醇提取液水洗用量的考察取正丁醇提取验证试验提取液混匀，精密测定总固体物重、芍药苷含量。取正丁醇提取液4份，每份200ml，分别用不同量的水洗1次，分取正丁醇液，测定芍药苷和总固体物，计算保留率，试验结果见下表。
不同量水洗正丁醇液试验结果
试验结果表明，用1/8倍量(25ml)水洗正丁醇液，芍药苷总量的保留率较高，总固体物减少相对较多。
正丁醇提取液水洗次数的考察取正丁醇提取液3份，每份200ml，分别用1/8倍量的水洗3次，分取水层液，测定芍药苷和总固体物损失率，试验结果见下表。
正丁醇液水洗次数试验结果(n＝3)
试验结果表明，正丁醇液用水洗1次，总固体物降低较明显，水洗2次后，总固体物变化较小，而芍药苷累计损失相对较大，故可确定用1/8倍量水洗正丁醇液1次。
4.2.2.3除鞣质方法的选择赤芍中含有鞣质，正丁醇提取样品在未经处理前的鞣质检查不合格，必须进行除鞣质处理。除鞣质的方法主要有石灰乳法、聚酰胺法、明胶法、改良明胶法和碱性醇沉淀法、酸性沉淀法等，根据本品的特点，试验中曾采用明胶法进行试验，结果发现芍药苷的损失率较大，除鞣质效果不理想。鞣质为多元酚化合物，易被聚酰胺吸附，且吸附力极强，不易被醇洗脱，因此，利用单萜苷和小分子酚酸类物质在醇溶液中不易被聚酰胺吸附，而鞣质在醇溶液中仍能被吸附的性质与鞣质分离。试验结果表明，该法去除中药注射液中的鞣质效果较好，有效成分损失少，样品中的鞣质检查符合规定。在异常毒性试验中，发现残留鞣质对小鼠的毒性较大，通过聚酰胺除鞣质，可以使小鼠的异常毒性(无小鼠死亡)从传统的除鞣质方法的30倍增加到120倍(致死浓度的倍数)，说明本品用聚酰胺去除鞣质的方法可行。下面通过试验对聚酰胺除鞣质的条件进行考察样品制备 取赤芍药材，按制备工艺制备回收正丁醇后的残留物，减压干燥，粉碎，备用。
吸附容量的考察 取样品3.10g，加45％乙醇溶解至120ml，分别各取20ml(约0.6g生药/ml)加入已处理好聚酰胺1、2、3、4、5、6g，不时搅拌，静态吸附3小时，滤过，滤液水浴挥至近干，残渣加水适量溶解，调pH至7，加水定容至10ml，滤过，取滤液1ml，加新配制的1％鸡蛋清5ml，摇匀，放置10分钟，观察溶液浑浊或沉淀情况，结果见下表。
聚酰胺吸附容量考察结果
“+”表示有浑浊或沉淀，“±”表示有不明显浑浊，“-”即表示无浑浊或沉淀。
试验结果表明，聚酰胺吸附容量小于每1g吸附4.0g生药时，可去除样品中的鞣质，吸附容量＝上柱液中生药量/聚酰胺干重。为保证产品的质量，规定吸附容量为每3g生药使用1g聚酰胺。
洗脱溶媒浓度的选择 取样品若干份，每份分别用l20ml15％、30％、45％、60％、75％乙醇溶解，上已处理好聚酰胺柱(24g，径高比1∶6，Φ3cm)，分别用15％、30％、45％、60％、75％乙醇各360ml洗脱，洗脱速度2ml/min。自下口流出有色液时，收集洗脱液，洗脱液用相应浓度的乙醇定容至600ml，取样测定芍药苷浓度和总固体物重。再取样品溶液100ml，水浴挥至近干，残渣加水适量溶解，调pH至7，加水定容至10ml，滤过，分别取滤液依法进行鞣质检查。
试验结果和洗脱曲线表明，芍药苷量和总固体物重随乙醇浓度的增大而增加，当乙醇浓度增大至45％时，芍药苷含量趋于平衡，芍药苷转移率达95％以上，说明45％乙醇可使芍药苷有效解析；在此条件下总固体物重也趋于平衡，总固体物转移率为77.27％，降低了22.73％，达到纯化精制的目的；且低于60％乙醇洗脱液鞣质检查均为阴性，说明选择小于60％乙醇洗脱，鞣质未被解析下来。综合考虑，洗脱溶媒浓度定为45％乙醇。
洗脱溶媒浓度选择试验结果
吸附流速 取样品若干份，每份3.10g(合生药72g，固形物4.3％)，加45％乙醇溶解至120ml，上已处理好的聚酰胺柱(24g，径高比1∶6，Φ3cm)，分别以0.5、1、1.5、2、2.5、3ml/mi n的流速进行动态吸附，补加45％乙醇液洗脱，自下口流出有色液时收集洗脱液120ml。取洗脱液20ml，水浴挥至近干，残渣加水适量溶解，调pH至7，加水定容至10ml，滤过，分别取滤液依法进行鞣质检查，结果见下表。
聚酰胺吸附流速考察结果
注湿柱体积(BV)是干树脂重量的5倍。
吸附时间240、120、80、60、48、40min试验结果表明，吸附流速小于1.5ml/min(0.75BV/h)时，鞣质被聚酰胺有效吸附，吸附流速大于2ml/min(1BV/h)时，流穿液中鞣质检查不合格，为保证产品质量，吸附流速应控制在1ml/min(即每小时0.5BV)，直至成分开始流出。
洗脱溶媒用量 取样品若干份，每份分别用45％乙醇溶解至120ml，上已处理好聚酰胺柱(24g，径高比1∶6，Φ3cm)，以1ml/min吸附流速进行动态吸附，分别用120、240、360、480、600ml，45％乙醇为洗脱剂，以2ml/min的流速进行动态洗脱，自下口流出有色液时，分别收集洗脱液，取样测定芍药苷量和总固体物重，计算转移率，结果见下表。
聚酰胺洗脱剂用量考察结果
试验结果表明，芍药苷量和总固体物重随45％乙醇用量的增大而增加，当乙醇用量增大至3BV时，芍药苷含量趋于平衡，芍药苷转移率达95％以上，说明3倍量45％乙醇可使芍药苷解析基本完全；在此条件下总固体物重也趋于平衡，总固体物转移率为76.51％，从提高工作效率和经济效率角度考虑，洗脱溶媒用量定为3倍柱体积45％乙醇。
洗脱流速 取样品若干份，每份分别用45％乙醇溶解至120ml，上已处理好聚酰胺柱(24g，径高比1∶6，Φ3cm)，以1ml/min吸附流速进行动态吸附，用360ml(3BV)45％乙醇为洗脱剂，分别以1、2、3、4、5ml/min的流速进行动态洗脱。收集洗脱液用45％乙醇定容至600ml，取样测定芍药苷浓度和总固体物重。取样品溶液100ml，水浴挥至近干，残渣加水适量溶解，调pH至7，加水定容至10ml，滤过，分别取滤液依法进行鞣质检查，结果见下表。
聚酰胺洗脱流速试验结果
试验结果表明，洗脱流速为2ml/min(即1BV/h)时芍药苷洗脱率和总固体物转移率最高分别达96.78％、77.51％，随洗脱流速加快而降低。洗脱流速大于3ml/min(即1.5BV/h)，芍药苷洗脱率和总固体物转移率下降明显，而1ml/min、2ml/min洗脱流速的解析量无明显差异，各洗脱流鞣质检查均为阴性，为缩短生产时间，提高生产效率，选用2ml/min(即1BV/h)的解析速度。
4.2.3赤芍半成品干燥方法的选择取聚酰胺上柱工艺验证试验的剩余流穿液和洗脱液，合并，混匀，测定芍药苷含量。取相当于200g生药的流穿液和洗脱液3份，分别减压回收乙醇，残留物按条件进行干燥，取干燥品测定残留物在不同条件下干燥后芍药苷含量和总固体物重，计算芍药苷损失率，试验结果见下表。
不同干燥条件对芍药苷和总固体物的影响
试验结果表明，60～80℃真空干燥对芍药苷的影响较小，损失率为1.5％左右，且真空干燥速度快，温度低，样品质地疏松，易于粉碎，故选用60～80℃真空干燥。
4.3制剂成型工艺研究4.3.1附加剂选择及其用量确定经以甘露醇、葡萄糖、右旋糖苷对产品冻干剂的外观性状、色泽、疏松程度、是否有绒毛状物质形成等观察比较，结果以加入一定量的甘露醇时，产品外观形状、成型性好，溶解性好，质量稳定，试验结果见下表。
填充剂加入量与冻干品成型的关系
试验结果表明，100ml药液中加入甘露醇的量达到0.5g以上时，可保持样品冻干前的体积和形状，无硬壳，色泽好，不萎缩，样品呈疏松多孔状结构，复水性好。从成品色泽、溶解性、成形性、经济等方面综合考虑，故确定每处方量可加甘露醇10g。
4.3.2配液pH值确定本品处方中两味药材主要含黄酮类、单萜类、酚酸类化合物，在中性或碱性条件下溶解性较好，故在配液时调节适宜的pH值，有利于药物的溶解，增加制剂的稳定性，但pH值超过7.5时，药液易变为浅墨绿色，色泽加深，在预试验基础上，对配液时pH值的调节进行了试验。
取提取物5份，每份10.0g(赤芍提取物7.20g，灯盏细辛提取物2.30g，甘露醇0.50g)，分别加注射用水60ml，搅拌用饱和氢氧化钠溶液调不同pH，使溶解，定容至100ml，加0.5％的活性碳，混匀煮沸灭菌30分钟，放冷。用0.45μm和0.22μm微孔滤膜滤过，检查灭菌后注射液的澄明度、色泽及pH值的变化，结果见下表。
不同pH值对注射剂澄明度及色泽的影响
注“+”表示不合格，“-”合格试验结果表明，当配液pH值高于7.0以上时，注射剂澄明度均合格，配液pH值高于7.5以上时，药液灭菌后色泽加深，易变为浅墨绿色。灭菌后pH值下降0.6～1.0左右，故本品配液时pH值应控制在6.50～7.50，成品pH值控制在5.50～7.0。
4.3.3冷冻干燥工艺4.3.3.1最低共熔点的测定为保证产品的质量，预冻温度应控制在所测药液低共熔点以下10～20℃左右，使溶剂、溶质固化。最低共熔点采用电阻法测定。
最低共熔点的测定结果
从测定结果可知，本制剂的最低共熔点在-16℃。即在冷冻过程中，必须将物料预冻至-16℃以下，才能开始进行升华干燥。
4.3.3.2预冻操作 预冻操作分为三个阶段第一阶段预冻至冰刚好形成的温度，即平衡冻结温度；第二阶段预冻至产品的最低共熔温度，使产品冻结；第三阶段继续降温至最低共熔点温度以下，使产品完全冻牢。预冻速度对产品的质量有一定影响，因此，应根据具体样品对预冻三个阶段的参数进行测定，总结经验，以指导生产。
冻结过程中搁板温度、产品温度与时间的关系
第一阶段的平衡冻结温度为0℃时的平衡时间为1.5小时，即搁板温度与产品温度基本一致的时间；第二阶段冻结温度从0℃到最低共熔温度-16℃时，搁板温度与产品温度平衡时间为1.5小时；第三阶段继续降温至-45℃，约需1.5小时，保持此温度1.5小时，直至产品完全冻牢，即开始抽真空，进入干燥程序。
4.3.3.3干燥程序 在恒温下(-45℃)抽真空，使干燥室的气压降至13.332～266.64Pa，在此压力下缓慢升温(2～4℃/h)至最低共熔点温度，时间约为12小时，升华干燥完成后，继续在低压条件下(13.332Pa)升温干燥以除去残余水分，时间约为12～15小时，保持35℃以上干燥3小时，记录搁板温度与产品温度，绘制搁板温度随时间变化的曲线。
实验例3制剂药效学研究(1)对血瘀模型家兔血液流变性的影响家兔40只，随机分为4组，每组8只，♀♂各半，分别为空白对照组、模型对照组、阳性药对照组及本发明注射液组。各组动物先耳缘静脉注射(iv)给药。空白及模型对照组注射生理盐水(NS)1ml/kg，阳性药组iv葛根素注射液30mg/kg(以NS配成30mg/ml)，实验组分别注射0.25mg/ml的药液(以NF配成)，给药量均为1ml/kg，连续给药两周(14d)，于给药的第2、13d，除空白对照组外，各兔分别经耳缘静脉注10％高分子右旋糖酐5ml/kg，每日两次，造成血瘀模型。末次给药后，再次注射10％高分子右旋糖酐5ml/kg，15min后，心脏采取空腹血6ml，进行血液流变学指标检测，其中血小板聚集率用LBY-NJ2型血小板聚集仪，采用比浊法测定其它采用LBY-N6A+旋转式锥板粘度仪测定。
对家兔血小板聚集和纤维蛋白原的影响(x±s，n＝6)组别剂量(mg/kg) 体重(kg) 血小板聚集(％) 纤维蛋白原(g/L)空白组 - 2.31±0.1515.54±2.46 2.53±1.16模型组 - 2.45±0.0838.27±15.05 2.73±1.41阳性药组 30 2.37±0.1112.74±3.47 3.12±1.83本发明实验组 0.25 2.32±0.2414.80±1.36 2.69±2.32结果表明本发明制剂对血瘀型疾病疗效好。
(2)对大鼠慢性肝损伤的作用健康Wistar大鼠，体重120～160g，随机分为4组正常对照组、CCl4模型组、本发明粉针剂组。采用CCl4制备大鼠肝纤维化模型，秋水仙碱组、配伍组于造模的第1天开始给药，均为灌胃给药，本发明粉针剂3.40g/kg；正常对照组、CCl4模型组给予等量的0.9％NaCl溶液。各组动物于造模10w后断头处死。取血分离血清测定肝功能。
各组大鼠肝功能变化(x±s)组别 nALT(IU/L)Glb(ρB/g/L) Alb(ρB/g/L)正常组10 35.50±2.42 25.74±2.13 34.20±1.57模型组9115.27±11.2832.58±3.19 26.95±2.14本发明粉针剂组11 59.72±13.39 26.23±2.80 33.01±3.63结果表明，本发明制剂对大鼠慢性肝损伤有显著改善作用。
具体的实施方式本发明的实施例1灯盏细辛3000g 赤芍4500g灯盏细辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度50℃时1.09～1.11，加乙醇使含醇量达55％，不断搅拌，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度50℃时1.10～1.12，用盐酸调pH值至2，55℃保温6小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至pH值3～4，真空干燥，得灯盏细辛提取物；赤芍加8倍量水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度50℃时1.06～1.08，加乙醇使含醇量达60％，搅拌均匀，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度50℃时1.18～1.20，用1/2倍量水饱和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/8倍量水洗1次，减压回收正丁醇，残留物加45％乙醇7500ml溶解，上聚酰胺柱，1500g，Φ12cm，径高比1∶6，吸附流速0.5BV/h，BV-湿柱体积＝干树脂重量的5倍体积，用45％乙醇22500ml洗脱，洗脱流速1BV/h，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得赤芍提取物。
本发明的实施例2灯盏细辛3000g 赤芍4500g灯盏细辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度50℃时1.09～1.11，加乙醇使含醇量达55％，不断搅拌，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度50℃时1.10～1.12，用盐酸调pH值至2，55℃保温6小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至pH值3～4，真空干燥，得灯盏细辛提取物；赤芍加8倍量水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度50℃时1.06～1.08，加乙醇使含醇量达60％，搅拌均匀，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度50℃时1.18～1.20，用1/2倍量水饱和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/8倍量水洗1次，减压回收正丁醇，残留物加45％乙醇7500ml溶解，上聚酰胺柱，1500g，Φ12cm，径高比1∶6，吸附流速0.5BV/h，BV-湿柱体积＝干树脂重量的5倍体积，用45％乙醇22500ml洗脱，洗脱流速1BV/h，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得赤芍提取物。
取灯盏细辛提取物、赤芍提取物和10g甘露醇，加1800ml注射用水，搅拌使溶解，用饱和氢氧化钠溶液调pH值至7.0～7.5，加注射用水至2000ml，混匀，煮沸30分钟，分装于已处理好的输液瓶中，塞入丁基橡胶塞及薄膜，轧铝盖，流通蒸汽灭菌30分钟，冷藏24小时，在无菌条件下用0.45μm和0.22μm微孔滤膜滤过，滤液分装，每瓶2.0ml，冷冻干燥，第一阶段的平衡冻结温度为0℃时的平衡时间为1.5小时，即搁板温度与产品温度基本一致的时间；第二阶段冻结温度从0℃到最低共熔温度-16℃时，搁板温度与产品温度平衡时间为1.5小时；第三阶段继续降温至-45℃，约需1.5小时，保持此温度1.5小时，直至产品完全冻牢，即开始抽真空，进入干燥程序，在45℃恒温下-抽真空，使干燥室的气压降至13.332～266.64Pa，在此压力下缓慢升温，2～4℃/h，至最低共熔点温度，时间约为12小时，升华干燥完成后，继续在13.332Pa低压条件下，升温干燥以除去残余水分，时间约为12～15小时，保持35℃以上干燥3小时，压盖，即得注射用无菌块状物，静脉滴注，一次2支，一日1次，用250ml0.9％生理盐水溶解后使用，每支装200mg；以重量百分比计算，注射剂中黄酮类成分和苷类成分含量之和不低于制剂中扣除辅料量和水分量的总固体量的25％。
本发明的实施例3灯盏细辛3000g 赤芍4500g灯盏细辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度50℃时1.09～1.11，加乙醇使含醇量达55％，不断搅拌，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度50℃时1.10～1.12，用盐酸调pH值至2，55℃保温6小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至pH值3～4，真空干燥，得灯盏细辛提取物；赤芍加8倍量水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度50℃时1.06～1.08，加乙醇使含醇量达60％，搅拌均匀，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度50℃时1.18～1.20，用1/2倍量水饱和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/8倍量水洗1次，减压回收正丁醇，残留物加45％乙醇7500ml溶解，上聚酰胺柱，1500g，Φ12cm，径高比1∶6，吸附流速0.5BV/h，BV-湿柱体积＝干树脂重量的5倍体积，用45％乙醇22500ml洗脱，洗脱流速1BV/h，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得赤芍提取物。
取灯盏细辛提取物、赤芍提取物，加入适量注射用水溶解，按体积加入1.0％的活性炭，煮沸，保持微沸30min，稍冷滤过，滤液加注射用水至规定量，用饱和氢氧化钠溶液调pH值至7.0～7.5，煮沸，4℃冷藏过夜，粗滤、精滤，加注射用水，分装到安剖瓶，封口灭菌即得小容量注射液或注射用浓溶液。
本发明的实施例4灯盏细辛3000g 赤芍4500g
灯盏细辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度50℃时1.09～1.11，加乙醇使含醇量达55％，不断搅拌，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度50℃时1.10～1.12，用盐酸调pH值至2，55℃保温6小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至pH值3～4，真空干燥，得灯盏细辛提取物；赤芍加8倍量水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度50℃时1.06～1.08，加乙醇使含醇量达60％，搅拌均匀，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度50℃时1.18～1.20，用1/2倍量水饱和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/8倍量水洗1次，减压回收正丁醇，残留物加45％乙醇7500ml溶解，上聚酰胺柱，1500g，Φ12cm，径高比1∶6，吸附流速0.5BV/h，BV-柱体积＝干树脂重量的5倍体积，用45％乙醇22500ml洗脱，洗脱流速1BV/h，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得赤芍提取物。
取灯盏细辛提取物、赤芍提取物，加入适量注射用水溶解，加入规定量的葡萄糖或氯化钠，混合溶解后按体积加入1.0％的活性炭，煮沸，保持微沸30min，稍冷滤过，滤液加注射用水至规定量，再用饱和氢氧化钠溶液调pH值至7.0～7.5，煮沸，4℃冷藏过夜，粗滤、精滤，加注射用水，分装，灭菌即得葡萄糖或氯化钠静脉输液。
本发明的实施例5灯盏细辛3000g 赤芍4500g灯盏细辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度50℃时1.09～1.11，加乙醇使含醇量达55％，不断搅拌，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度50℃时1.10～1.12，用盐酸调pH值至2，55℃保温6小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至pH值3～4，真空干燥，得灯盏细辛提取物；赤芍加8倍量水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度50℃时1.06～1.08，加乙醇使含醇量达60％，搅拌均匀，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度50℃时1.18～1.20，用1/2倍量水饱和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/8倍量水洗1次，减压回收正丁醇，残留物加45％乙醇7500ml溶解，上聚酰胺柱，1500g，Φ12cm，径高比1∶6，吸附流速0.5BV/h，BV-湿柱体积＝干树脂重量的5倍体积，用45％乙醇22500ml洗脱，洗脱流速1BV/h，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得赤芍提取物。
取灯盏细辛提取物、赤芍提取物，加1800ml注射用水，搅拌使溶解，用饱和氢氧化钠溶液调pH值至7.0～7.5，加注射用水至2000ml，混匀，煮沸30分钟，分装到搪瓷盘中，冷冻干燥，第一阶段的平衡冻结温度为0℃时的平衡时间为1.5小时，即搁板温度与产品温度基本一致的时间；第二阶段冻结温度从0℃到最低共熔温度-16℃时，搁板温度与产品温度平衡时间为1.5小时；第三阶段继续降温至-45℃，约需1.5小时，保持此温度1.5小时，直至产品完全冻牢，即开始抽真空，进入干燥程序，在45℃恒温下-抽真空，使干燥室的气压降至13.332～266.64Pa，在此压力下缓慢升温，2～4℃/h，至最低共熔点温度，时间约为12小时，升华干燥完成后，继续在13.332Pa低压条件下，升温干燥以除去残余水分，时间约为12～15小时，保持35℃以上干燥3小时，在无菌条件下分装到西林瓶中，即得注射用无菌粉末。
本发明的实施例6灯盏细辛3000g 赤芍4500g灯盏细辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度50℃时1.09～1.11，加乙醇使含醇量达55％，不断搅拌，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度50℃时1.10～1.12，用盐酸调pH值至2，55℃保温6小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至pH值3～4，真空干燥，得灯盏细辛提取物；赤芍加8倍量水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度50℃时1.06～1.08，加乙醇使含醇量达60％，搅拌均匀，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度50℃时1.18～1.20，用1/2倍量水饱和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/8倍量水洗1次，减压回收正丁醇，残留物加45％乙醇7500ml溶解，上聚酰胺柱，1500g，Φ12cm，径高比1∶6，吸附流速0.5BV/h，BV-湿柱体积＝干树脂重量的5倍体积，用45％乙醇22500ml洗脱，洗脱流速1BV/h，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得赤芍提取物。
取灯盏细辛提取物、赤芍提取物，混匀，加入适量注射用水溶解，按体积加入1.0％的活性炭，煮沸，保持微沸30min，稍冷滤过，滤液加注射用水至规定量，用饱和氢氧化钠溶液调pH值至7.0～7.5，煮沸，4℃冷藏过夜，粗滤、精滤，在进风温度为150℃，出风温度为60℃，气流速度为20m·s-1的条件下喷雾干燥得粉末，分装，即得注射用无菌粉末。
本发明的实施例7灯盏细辛100g 赤芍9900g灯盏细辛加5倍量水煎煮0.5小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩，加乙醇使含醇量达30％，不断搅拌，静置6小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩，用盐酸调pH值，保温，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至pH值，真空干燥，得灯盏细辛提取物；赤芍加3倍量水煎煮0.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩，加乙醇使含醇量达40％，搅拌均匀，静置6小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩，用水饱和的正丁醇提取1次，合并正丁醇液，用水洗1次，减压回收正丁醇，残留物加乙醇溶解，上聚酰胺柱，用乙醇洗脱，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得赤芍提取物，将灯盏细辛提取物与赤芍提取物混合均匀，加入大豆油混匀，压制法制丸，即得软胶囊剂。
本发明的实施例8灯盏细辛9900g 赤芍100g灯盏细辛加12倍量水煎煮5次，每次2小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩，加乙醇使含醇量达80％，不断搅拌，静置24小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩，用盐酸调pH值，保温，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至pH值，真空干燥，得灯盏细辛提取物；赤芍加10倍量水煎煮5次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩，加乙醇使含醇量达80％，搅拌均匀，静置24小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩，用水饱和的正丁醇提取5次，合并正丁醇液，用水洗3次，减压回收正丁醇，残留物加乙醇溶解，上聚酰胺柱，用乙醇洗脱，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得赤芍提取物，将灯盏细辛提取物与赤芍提取物混合均匀，加入PEG400混匀，滴制法制丸，即得滴丸剂。
本发明的实施例9灯盏细辛2000g 赤芍8000g灯盏细辛加12倍量水煎煮5次，每次2小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩，加乙醇使含醇量达80％，不断搅拌，静置24小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩，用盐酸调pH值，保温，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至pH值，真空干燥，得灯盏细辛提取物；赤芍加10倍量水煎煮5次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩，加乙醇使含醇量达80％，搅拌均匀，静置24小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩，用水饱和的正丁醇提取5次，合并正丁醇液，用水洗3次，减压回收正丁醇，残留物加乙醇溶解，上聚酰胺柱，用乙醇洗脱，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得赤芍提取物，将灯盏细辛提取物与赤芍提取物混合均匀，加入2％羧甲基纤维素钠，挤出-滚圆法制丸，即得微丸剂。
本发明的实施例10灯盏细辛8000g赤芍2000g灯盏细辛加5倍量水煎煮0.5小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩，加乙醇使含醇量达30％，不断搅拌，静置6小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩，用盐酸调pH值，保温，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至pH值，真空干燥，得灯盏细辛提取物；赤芍加3倍量水煎煮0.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩，加乙醇使含醇量达40％，搅拌均匀，静置6小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩，用水饱和的正丁醇提取1次，合并正丁醇液，用水洗1次，减压回收正丁醇，残留物加乙醇溶解，上聚酰胺柱，用乙醇洗脱，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得赤芍提取物，将灯盏细辛提取物与赤芍提取物混合均匀，，加入3％甲基纤维素，加水湿润，制成颗粒，干燥，加入1％羧甲基淀粉钠，压片，即得分散片剂。
本发明的实施例11灯盏细辛100g 白芍9900g灯盏细辛加5倍量水煎煮0.5小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩，加乙醇使含醇量达30％，不断搅拌，静置6小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩，用盐酸调pH值，保温，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至pH值，真空干燥，得灯盏细辛提取物；白芍加3倍量水煎煮0.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩，加乙醇使含醇量达40％，搅拌均匀，静置6小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩，用水饱和的正丁醇提取1次，合并正丁醇液，用水洗1次，减压回收正丁醇，残留物加乙醇溶解，上聚酰胺柱，用乙醇洗脱，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得白芍提取物，将灯盏细辛提取物与白芍提取物混合均匀，制丸，即得丸剂。
本发明的实施例12灯盏细辛9900g 白芍100g灯盏细辛加12倍量水煎煮5次，每次2小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩，加乙醇使含醇量达80％，不断搅拌，静置24小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩，用盐酸调pH值，保温，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至pH值，真空干燥，得灯盏细辛提取物；白芍加10倍量水煎煮5次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩，加乙醇使含醇量达80％，搅拌均匀，静置24小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩，用水饱和的正丁醇提取5次，合并正丁醇液，用水洗3次，减压回收正丁醇，残留物加乙醇溶解，上聚酰胺柱，用乙醇洗脱，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得白芍提取物，加入蒸馏水，即得口服液。
本发明的实施例13灯盏细辛2000g 白芍8000g灯盏细辛加12倍量水煎煮5次，每次2小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩，加乙醇使含醇量达80％，不断搅拌，静置24小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩，用盐酸调pH值，保温，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至pH值，真空干燥，得灯盏细辛提取物；白芍加10倍量水煎煮5次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩，加乙醇使含醇量达80％，搅拌均匀，静置24小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩，用水饱和的正丁醇提取5次，合并正丁醇液，用水洗3次，减压回收正丁醇，残留物加乙醇溶解，上聚酰胺柱，用乙醇洗脱，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得白芍提取物，将灯盏细辛提取物与白芍提取物混合均匀，制粒，即得颗粒剂。
本发明的实施例14灯盏细辛8000g 白芍2000g灯盏细辛加5倍量水煎煮0.5小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩，加乙醇使含醇量达30％，不断搅拌，静置6小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩，用盐酸调pH值，保温，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至pH值，真空干燥，得灯盏细辛提取物；白芍加3倍量水煎煮0.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩，加乙醇使含醇量达40％，搅拌均匀，静置6小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩，用水饱和的正丁醇提取1次，合并正丁醇液，用水洗1次，减压回收正丁醇，残留物加乙醇溶解，上聚酰胺柱，用乙醇洗脱，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得白芍提取物，将灯盏细辛提取物与白芍提取物混合均匀，加水湿润，制成颗粒，装胶囊，即得胶囊剂。
本发明的实施例15灯盏细辛3000g 赤芍4500g灯盏细辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度50℃时1.09～1.11，加乙醇使含醇量达55％，不断搅拌，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度50℃时1.10～1.12，用盐酸调pH值至2，55℃保温6小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至pH值3～4，真空干燥，得灯盏细辛提取物；赤芍加8倍量水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度50℃时1.06～1.08，加乙醇使含醇量达60％，搅拌均匀，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度50℃时1.18～1.20，用1/2倍量水饱和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/8倍量水洗1次，减压回收正丁醇，残留物加45％乙醇7500ml溶解，上聚酰胺柱，1500g，Φ12cm，径高比1∶6，吸附流速0.5BV/h，BV-湿柱体积＝干树脂重量的5倍体积，用45％乙醇22500ml洗脱，洗脱流速1BV/h，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得赤芍提取物，混匀，乙醇制粒，即得颗粒剂。
本发明的实施例16灯盏细辛3000g 赤芍4500g灯盏细辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度1.09～1.11(50℃)，真空干燥，得灯盏细辛提取物；赤芍加8倍量水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度1.06～1.08(50℃)，真空干燥，得赤芍提取物；将灯盏细辛提取物和赤芍提取物混合，制粒，压片，即得片剂。
本发明的实施例17灯盏细辛3000g 赤芍4500g灯盏细辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度1.09～1.11(50℃)，加乙醇醇沉两次，第一次使含醇量达55％，第二次使含醇量达85％，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.10～1.12(50℃)，真空干燥得灯盏细辛提取物；赤芍加8倍量水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度1.06～1.08(50℃)，加乙醇醇沉两次，第一次使含醇量达50％，第二次使含醇量达80％，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.10～1.12(50℃)，真空干燥得赤芍提取物；将灯盏细辛提取物和赤芍提取物混合，加入糖浆，即得糖浆剂。
本发明的实施例18灯盏细辛3000g 赤芍4500g灯盏细辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度1.09～1.11(50℃)，用盐酸调pH值至4，加入等体积乙酸乙酯，萃取4次，合并乙酸乙酯，减压回收溶剂，真空干燥得灯盏细辛提取物；赤芍加10倍量水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度1.06～1.08(50℃)，用水饱和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/8倍量水洗1次，减压回收正丁醇，真空干燥得赤芍提取物；将灯盏细辛提取物和赤芍提取物混合，加入炼蜜，制丸，即得丸剂。
本发明的实施例18灯盏细辛3000g 赤芍4500g灯盏细辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，过AB-8大孔树脂柱，先用6倍树脂体积水和4倍树脂体积10％乙醇冲洗，再用5倍树脂体积50％乙醇解吸，收集解吸液，减压回收乙醇，真空干燥得灯盏细辛提取物；赤芍加10倍量水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，过ZTC-1型大孔树脂柱，先用4倍树脂体积水和3倍树脂体积10％乙醇冲洗，再用5倍树脂体积60％乙醇解吸，收集解吸液，减压回收乙醇，真空干燥得赤芍提取物；将灯盏细辛提取物和赤芍提取物混合，加入蒸馏水，即得口服液。
本发明的实施例19灯盏细辛3000g 赤芍4500g灯盏细辛加10倍量80％乙醇回流提取3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇浓缩至相对密度1.09～1.11(50℃)，真空干燥得灯盏细辛提取物；赤芍加10倍量70％乙醇回流提取3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇浓缩至相对密度1.09～1.11(50℃)，真空干燥得赤芍提取物；将灯盏细辛提取物和赤芍提取物混合，制粒，即得颗粒剂。
灯盏细辛提取物可以是黄酮类成分含量大于90％的总黄酮有效部位或者按本发明制备方法制的或者市售的，赤芍提取物可以是苷类成分含量大于90％的总苷有效部位或者按本发明制备方法制的或者市售的。
权利要求
1.一种治疗心脑血管疾病的复方灯盏细辛制剂，其特征在于按照重量百分比计算，它是由灯盏细辛1～99％和赤芍99～1％和适当的辅料制作而成。
2.按照权利要求1所述的治疗心脑血管疾病的复方灯盏细辛制剂，其特征在于按照重量百分比计算，它是由灯盏细辛20～80％和赤芍80～20％和适当的辅料制作而成。
3.按照权利要求1或2所述的治疗心脑血管疾病的复方灯盏细辛制剂，其特征在于按照重量百分比计算，它是由赤芍60％与灯盏细辛40％和适当的辅料制作而成。
4.按照权利要求1～3任意一项所述的治疗心脑血管疾病的复方灯盏细辛制剂，其特征在于所述组方中的赤芍与灯盏细辛可以是药材或者是由相应比例药材制备得到的提取物，其中灯盏细辛提取物可以是灯盏细辛醇提取物、灯盏细辛水提取物、灯盏细辛水提醇沉提取物、灯盏细辛半仿生提取物、灯盏细辛超临界萃取物或者以上各提取物的精制品；赤芍提取物可以是赤芍醇提取物、赤芍水提取物、赤芍水提醇沉提取物、赤芍半仿生提取物、赤芍超临界萃取物或者以上各提取物的精制品。
5.按照权利要求1～4任意一项所述的治疗心脑血管疾病的复方灯盏细辛制剂，其特征在于所述的制剂为直接用于注射给药的注射液、直接供静脉滴注的静脉输液、需稀释后用于静脉滴注的注射用浓溶液和用冷冻干燥法或喷雾干燥法制得的注射用无菌粉末和无菌块状物以及片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、丸剂、软胶囊剂、口服液体制剂、口腔崩解片或分散片剂。
6.按照权利要求1～5中任意一项所述的治疗心脑血管疾病的复方灯盏细辛制剂，其特征在于制剂中含有黄酮类成分和苷类成分，以重量百分比计算，注射剂中黄酮类成分和苷类成分含量之和不低于制剂中扣除辅料量和水分量的总固体量的25％。
7.按照权利要求1～4中任意一项所述的治疗心脑血管疾病的复方灯盏细辛制剂，其特征在于灯盏细辛提取物可以是黄酮类成分含量大于90％的总黄酮有效部位，赤芍提取物可以是苷类成分含量大于90％的总苷有效部位。
8.按照权利要求1～4中任意一项所述的治疗心脑血管疾病的复方灯盏细辛制剂，其特征在于用等量的白芍及白芍提取物替代赤芍及赤芍提取物。
9.如权利要求1～5中任意一项所述的治疗心脑血管疾病的复方灯盏细辛制剂的制备方法，其特征在于取赤芍药材，粉碎后加入水或乙醇溶液提取，合并提取液，过滤，浓缩得赤芍粗提物，或在此基础上采用乙醇沉淀法、柱层析法、萃取法、絮凝沉淀法中的一种或几种联合使用进行适当精制，得赤芍精提物；取灯盏细辛药材，粉碎后加入水或乙醇溶液提取，合并提取液，过滤，浓缩得灯盏细辛粗提物，或在此基础上采用乙醇沉淀法、柱层析法、萃取法、絮凝沉淀法中的一种或几种联合使用进行适当精制，得灯盏细辛精提物，将灯盏细辛粗提物或精提物与赤芍粗提物或精提物混合均匀，加辅料制成不同的制剂。
10.按照权利要求9所述的治疗心脑血管疾病的复方灯盏细辛制剂的制备方法，其特征在于灯盏细辛加5～12倍量水煎煮1～5次，每次0.5～2小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩，加乙醇使含醇量达30～80％，不断搅拌，静置6～24小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩，用盐酸调pH值，保温，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至pH值，真空干燥，得灯盏细辛提取物；赤芍加3～10倍量水煎煮1～5次，每次0.5～2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩，加乙醇使含醇量达40～80％，搅拌均匀，静置6～24小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩，用水饱和的正丁醇提取1～5次，合并正丁醇液，用水洗1～3次，减压回收正丁醇，残留物加乙醇溶解，上聚酰胺柱，用乙醇洗脱，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得赤芍提取物，将灯盏细辛提取物与赤芍提取物混合均匀，加辅料制成不同的制剂。
11.按照权利要求10所述的治疗心脑血管疾病的复方灯盏细辛制剂的制备方法，其特征在于灯盏细辛加10倍量水煎煮3次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至相对密度50℃时1.09～1.11，加乙醇使含醇量达55％，不断搅拌，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度50℃时1.10～1.12，用盐酸调pH值至2，55℃保温6小时，倾弃上清液，抽滤，沉淀用水洗至pH值3～4，真空干燥，得灯盏细辛提取物；赤芍加8倍量水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度50℃时1.06～1.08，加乙醇使含醇量达60％，搅拌均匀，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度50℃时1.18～1.20，用1/2倍量水饱和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/8倍量水洗1次，减压回收正丁醇，残留物加45％乙醇7500ml溶解，上聚酰胺柱，1500g，Φ12cm，径高比1∶6，吸附流速0.5BV/h，BV-湿柱体积＝干树脂重量的5倍体积，用45％乙醇22500ml洗脱，洗脱流速1BV/h，收集流穿液和洗脱液，回收乙醇，残留物真空干燥，得赤芍提取物，将灯盏细辛提取物与赤芍提取物混合均匀，加辅料制成不同的制剂。
12.按照权利要求9～11中任意一项所述的治疗心脑血管疾病的复方灯盏细辛制剂的制备方法，其特征在于所述制剂中的注射用无菌块状物这样制备取灯盏细辛提取物、赤芍提取物和10g甘露醇，加1800ml注射用水，搅拌使溶解，用饱和氢氧化钠溶液调pH值至7.0～7.5，加注射用水至2000ml，混匀，煮沸30分钟，分装于已处理好的输液瓶中，塞入丁基橡胶塞及薄膜，轧铝盖，流通蒸汽灭菌30分钟，冷藏24小时，在无菌条件下用0.45μm和0.22μm微孔滤膜滤过，滤液分装，每瓶2.0ml，冷冻干燥，第一阶段的平衡冻结温度为0℃时的平衡时间为1.5小时，即搁板温度与产品温度基本一致的时间；第二阶段冻结温度从0℃到最低共熔温度-16℃时，搁板温度与产品温度平衡时间为1.5小时；第三阶段继续降温至-45℃，约需1.5小时，保持此温度1.5小时，直至产品完全冻牢，即开始抽真空，进入干燥程序，在45℃恒温下-抽真空，使干燥室的气压降至13.332～266.64Pa，在此压力下缓慢升温，2～4℃/h，至最低共熔点温度，时间约为12小时，升华干燥完成后，继续在13.332Pa低压条件下，升温干燥以除去残余水分，时间约为12～15小时，保持35℃以上干燥3小时，压盖，即得。
13.按照权利要求9～11中任意一项所述的治疗心脑血管疾病的复方灯盏细辛制剂的制备方法，其特征在于所述制剂中的注射液和注射用浓溶液这样制备取灯盏细辛提取物、赤芍提取物，加入适量注射用水溶解，按体积加入1.0％的活性炭，煮沸，保持微沸30min，稍冷滤过，滤液加注射用水至规定量，用饱和氢氧化钠溶液调pH值至7.0～7.5，煮沸，4℃冷藏过夜，粗滤、精滤，加注射用水，分装到安剖瓶，封口灭菌，即得。
14.按照权利要求9～11中任意一项所述的治疗心脑血管疾病的复方灯盏细辛制剂的制备方法，其特征在于所述制剂中的葡萄糖或氯化钠静脉输液这样制备取灯盏细辛提取物、赤芍提取物，加入适量注射用水溶解，加入规定量的葡萄糖或氯化钠，混合溶解后按体积加入1.0％的活性炭，煮沸，保持微沸30min，稍冷滤过，滤液加注射用水至规定量，再用饱和氢氧化钠溶液调pH值至7.0～7.5，煮沸，4℃冷藏过夜，粗滤、精滤，加注射用水，分装，灭菌即得。
15.按照权利要求9～11中任意一项所述的治疗心脑血管疾病的复方灯盏细辛制剂的制备方法，其特征在于所述制剂中的注射用无菌粉末这样制备取灯盏细辛提取物、赤芍提取物，加1800ml注射用水，搅拌使溶解，用饱和氢氧化钠溶液调pH值至7.0～7.5，加注射用水至2000ml，混匀，煮沸30分钟，分装到搪瓷盘中，冷冻干燥，第一阶段的平衡冻结温度为0℃时的平衡时间为1.5小时，即搁板温度与产品温度基本一致的时间；第二阶段冻结温度从0℃到最低共熔温度-16℃时，搁板温度与产品温度平衡时间为1.5小时；第三阶段继续降温至-45℃，约需1.5小时，保持此温度1.5小时，直至产品完全冻牢，即开始抽真空，进入干燥程序，在45℃恒温下-抽真空，使干燥室的气压降至13.332～266.64Pa，在此压力下缓慢升温，2～4℃/h，至最低共熔点温度，时间约为12小时，升华干燥完成后，继续在13.332Pa低压条件下，升温干燥以除去残余水分，时间约为12～15小时，保持35℃以上干燥3小时，在无菌条件下分装到西林瓶中，即得。
16.按照权利要求9～11中任意一项所述的治疗心脑血管疾病的复方灯盏细辛制剂的制备方法，其特征在于所述制剂中的注射用无菌粉末还可以这样制备取灯盏细辛提取物、赤芍提取物，混匀，加入适量注射用水溶解，按体积加入1.0％的活性炭，煮沸，保持微沸30min，稍冷滤过，滤液加注射用水至规定量，用饱和氢氧化钠溶液调pH值至7.0～7.5，煮沸，4℃冷藏过夜，粗滤、精滤，在进风温度为150℃，出风温度为60℃，气流速度为20m·s-1的条件下喷雾干燥得粉末，分装，即得。
17.如权利要求1～4中任意一项所述的治疗心脑血管疾病的复方灯盏细辛制剂的应用，其特征在于所述的制剂用于制备治疗肝肾综合症、心肺病、糖尿病及其并发症等疾病的药物。
全文摘要
本发明提供了一种治疗心脑血管疾病的复方灯盏细辛制剂及其制备方法和应用，它是由灯盏细辛1～99％、赤芍99～1％和适当的辅料制作而成的，与现有技术相比，本方遵“治风先治血，血行风之灭”之理，采取活血化淤通络之法，以性味苦温的灯盏细辛为君，用之化淤通络；赤芍味苦微寒，入血分，凉血热，散淤血，通经络，治血热淤滞，助君药以达活血化淤、散淤通络之效，用之为臣；二药合用具有活血化淤，通经活络的功能。组方有用药精简力专、作用途径直接之长，无偏温偏凉之弊，有较为明显的用药特色，通过合理可行的制备工艺，保证了产品的安全有效，可供病人长期使用。
文档编号A61K36/28GK1762434SQ20051010625
公开日2006年4月26日 申请日期2005年9月23日 优先权日2004年9月24日
发明者于文勇 申请人:贵阳云岩西创药物科技开发有限公司