专利名称：一种银杏内酯及其药物制剂的含量测定方法
技术领域：
本发明涉及一种银杏内酯及其药物制剂的质量检测方法，具体地说，是涉及从银杏叶提取的二萜内酯--银杏内酯A、B、C及倍半萜内酯--白果内酯的银杏内酯及其制剂的含量测定方法。
背景技术：
银杏叶提取物及其制剂在发达国家已经应用了几十年，在我国也于近年来得到广泛应用，已取得药品生产批准文号的药厂有20余家。银杏叶提取物制剂在欧洲作为药用，在美国、日本作为保健品，在我国主要作药用。
目前，国内外对银杏叶提取物及其制剂的研究非常广泛。在我国，银杏叶及其制剂广泛用于治疗心脑血管疾病，银杏提取物中有效成分为银杏萜内酯和银杏黄酮。而内酯类含多种二萜内酯和倍半萜内酯，主要的二萜内酯有银杏内酯A、B、C、M等，倍半萜内酯有白果内酯(Bilobalide)，主要用于治疗冠心病、心绞痛、老年痴呆症等疾病。本文所述的银杏内酯主要指二萜内酯和倍半萜内酯。实验证明银杏内酯有其独特的药理作用和临床价值。
银杏提取物中银杏内酯的含量测定文献报道的有薄层色谱法，高效液相-示差折光检测器法，气相—质谱法，液相—质谱法，核磁共振法。而目前药典收载的银杏内酯的含量测定方法为高效液相-蒸发光散射检测器法。但这些方法都各有其局限性。薄层色谱法重现性差，受环境和操作影响大，而气相—质谱法需衍生化，设备昂贵。差示折光检测器，为通用型检测器，但其对温度等外界因素响应过于灵敏，重现性和检测灵敏度差。液相—质谱和核磁共振法法则受条件限制。
蒸发光检测器测定银杏内酯含量时，进样量和峰面积不成线性，所以采用外标两点法对数方程进行银杏内酯含量计算。计算步骤繁多、复杂。用此法得到的数据不够精确，图谱基线噪音大，易漂移，峰形不好。并且蒸发光检测器仪器的使用并不广泛，价格昂贵。此种检测方法仅适合银杏叶粗提物或者提取物纯度不高的情况使用。
由于以前从银杏叶中提取的银杏内酯含量低等原因，使用高效液相-紫外检测器法测定银杏内酯含量时受黄酮等其它提取物的干扰较强，使得采用此法受到一定的局限，因此一般都采用高效液相-蒸发光散射检测器测定其含量，并收载入药典，是目前公认最好的银杏内酯制剂的质量检测方法。
我们在研究过程中惊奇地发现，提取的银杏内酯其银杏内酯纯度高达95％以上，采用高效液相-紫外光检测器法非常合适。用紫外检测器对银杏内酯含量进行检测时，几乎无受黄酮干扰，并且大大简化了计算方法，并且数据精确。采用本发明方法所得图谱，柱效高，分离度好，峰形对称性好并且稳定性和重现性好，操作简便可行。紫外检测器应用广泛，价格比蒸发光检测器低廉。
本发明进一步推动了银杏内酯分析方法研究和质量标准的完善，并为工业化生产节约了成本和人力，是值得推广的简便易行的好方法。
发明内容
本发明是基于蒸发光检测器测定银杏内酯含量(收载于《中华人民共和国药典2005年版一部》)计算方法繁杂并且数据不够精确而发明的，目的在于提供一种简单易行，易于推广的银杏内酯的含量测定方法。本发明利用紫外检测器这一应用广泛的检测器替代蒸发光检测器，节约了成本和人力，而且利用该检测手段，得到的数据精确，计算方法简便可行，为银杏内酯质量标准的完善提供了一种优选的方法。
实施本发明步骤如下1、色谱条件以C18柱为色谱柱；以甲醇-四氢呋喃-水(25∶10∶65)为流动相；检测波长为220nm；理论板数按白果内酯峰计算应不低于3000；峰分离度按银杏内酯C峰和白果内酯峰计应不小于1.5。
2、对照品溶液的制备精密称取银杏内酯A对照品、银杏内酯B对照品、银杏内酯C对照品、白果内酯对照品适量，加50％甲醇溶解并稀释制成每1ml约含1.8mg、0.8mg、1.0mg、2.0mg的混合液，即得。
3、供试品溶液的制备取银杏内酯或者制剂，制成每1ml中约含5mg银杏内酯的溶液，作为供试品溶液；4、测定方法分别精密量取对照品溶液、供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，用外标法计算银杏内酯含量。
供试品高效液相色谱图见附图
I表示银杏内酯CII表示白果内酯III表示银杏内酯AIV表示银杏内酯B采用本发明方法所得图谱，柱效高，分离度好，峰形对称性好。
具体实施例以下实施例旨在进一步说明本发明，并不对本发明的范围加以限制。
实例1银杏内酯提取物含量测定色谱条件以Kromasil的C18柱为色谱柱；以甲醇-四氢呋喃-水(25∶10∶65)为流动相；检测波长为220nm；理论板数按白果内酯峰计算应不低于3000；峰分离度按银杏内酯C峰和白果内酯峰计应不小于1.5。
供试品溶液得制备精密称取银杏内酯适量，用流动相溶解并制成每1ml含5mg银杏内酯的溶液，作为供试品溶液；对照品溶液得制备精密称取银杏内酯A18.12mg、银杏内酯B8.31mg、银杏内酯C10.48mg和白果内酯19.46mg，置10ml量瓶中，加适量50％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得到每ml含银杏内酯A1.81mg、银杏内酯B0.83mg银杏内酯C1.05mg、白果内酯1.95mg的对照品溶液；测定方法精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，用外标法计算银杏内酯含量，即得。
实例2银杏内酯注射液含量测定色谱条件以Kromasil的C18柱为色谱柱；以甲醇-四氢呋喃-水(25∶10∶65)为流动相；检测波长为220nm；理论板数按白果内酯峰计算应不低于3000；峰分离度按银杏内酯C峰和白果内酯峰计应不小于1.5。
供试品溶液得制备银杏内酯注射液规格为10mg/2ml，精密量取该注射液1ml，作为供试品溶液；对照品溶液的制备精密称取银杏内酯A8.80mg、银杏内酯B4.15mg、银杏内酯C4.90mg和白果内酯10.05mg，置5ml量瓶中，加适量甲醇溶解并用流动相稀释至刻度，摇匀，得到每ml含银杏内酯A1.76mg、银杏内酯B0.83mg银杏内酯C0.98mg、白果内酯2.01mg的对照品溶液；测定方法精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，用外标法计算银杏内酯含量，即得。
实例3注射用银杏内酯含量测定色谱条件以Kromasil的C18柱为色谱柱；以甲醇-四氢呋喃-水(25∶10∶65)为流动相；检测波长为220nm；理论板数按白果内酯峰计算应不低于3000；峰分离度按银杏内酯C峰和白果内酯峰记应不小于1.5。
供试品溶液的制备精密称取注射用银杏内酯平均装量下的内容物适量，用流动相溶解并制成每1ml含5mg的银杏内酯溶液，作为供试品溶液；对照品溶液得制备精密称取银杏内酯A18.37mg、银杏内酯B8.14mg、银杏内酯C10.32mg和白果内酯20.48mg，置10ml量瓶中，加适量50％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得到每ml含银杏内酯A1.84mg、银杏内酯B0.81mg银杏内酯C1.03mg、白果内酯2.05mg的对照品溶液；测定方法精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，用外标法计算银杏内酯含量，即得。
权利要求
1.一种银杏内酯的含量测定方法，其特征在于用高效液相—紫外检测器法测定银杏内酯的含量。
2.一种含银杏内酯的药物制剂的含量测定方法，其特征在于，用高效液相—紫外检测器法测定银杏内酯的含量。
3.根据权利要求2所述的含银杏内酯的药物制剂的含量测定方法，其特征在于，含银杏内酯制剂，包括非肠道给药形式的注射液、外用制剂、鼻腔给药、肠道给药形式的胶囊剂、片剂、滴丸剂；其中非肠道给药形式的注射液包括粉针、小针、大输液，外用制剂包括软膏、乳剂、栓剂、膜剂、透皮制剂，肠道给药形式的胶囊剂包括软胶囊、硬胶囊，片剂包括舌下含片、口崩片、分散片、泡腾片、缓释片、控释片。
全文摘要
本发明提供了一种用高效液相一紫外检测器法测定银杏内酯及其药物制剂含量的测定方法，该方法操作和计算简单，使用本发明方法能节约人力从而节约成本，有助于完善银杏内酯质量标准。
文档编号A61J1/00GK1804614SQ200510135340
公开日2006年7月19日 申请日期2005年12月30日 优先权日2005年12月30日
发明者孙毅 申请人:孙毅