专利名称：用于癌症辅助治疗药物制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种用于癌症辅助治疗药物制剂及其制备方法，特别涉及一种以中草药为原料的癌症辅助治疗药物制剂及其制备方法。
背景技术：
黄芪来源豆科植物蒙古黄芪A.membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus Bge.Hsiao干燥根，为传统的补气药，具有补气固表，利尿排脓，敛疮生肌的功效。传统用于提高人体免疫力等功效，同时也被用来补气，比如疲劳，缺乏精力等症状。黄芪的化学成分研究报道很多，从中分离出多糖、皂苷、黄酮、氨基酸、微量元素等。近代药理研究证明，黄芪多糖(polysaccharides)和黄芪皂苷(total Astragloside)为其中的主要成分。其中，黄芪多糖(Astragaluspolysaccharids，APS)具有促进免疫功能、提高巨噬细胞活性、抑制EAS、双向调节血糖等作用。党参为桔梗科植物党参Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.的干燥根，具有补中益气，健脾生津的功效。党参含有多糖、皂苷、挥发油等。
以党参和黄芪为原料制备的参芪扶正注射液是目前临床应用较广的中药制剂，它由等量的党参和黄芪组方而成，临床上对气虚型的晚期肿瘤患者有良好的疗效，具有扶正固本、益气补虚的功效，能帮助癌症患者顺利完成放疗、化疗，减少化疗药物的毒副作用，保护机体的造血功能，能使患者血象升高，改善免疫功能及消化道症状等，提高患者的生存质量，并可治疗心、脑血管等疾病。参芪扶正注射液为水剂，存在运输不便，质量稳定性差等问题，因此有研究者改进其工艺，将其制备成冻干粉针制剂。如申请号为200310113944.1的中国专利申请，用乙醇回流提取的方法获得党参和黄芪中的总皂苷成分，药渣再用水提醇沉的方法获得党参和黄芪中的总多糖成分，将总皂苷和总多糖提取物混合，加入辅料冷冻干燥得冻干粉针制剂。该方法的优点是同时保留了原料药中的总皂苷总多糖类有效成分，然而，由于在总皂苷的提取之后没有进一步的纯化过程，在实践中不适合制备成适合静脉用的粉针制剂。
发明内容
本发明的目的是提供一种有效成分含量高、适合静脉注射使用、高效低毒的用于癌症辅助治疗的药物制剂。
本发明的另一个目的在于提供一种制备上述药物制剂的方法。
本发明提供的用于癌症辅助治疗的药物制剂是采用党参和黄芪为原料，通过包括以下步骤的方法制得(1)取重量比为1∶0.5-2的党参和黄芪饮片，加低元醇回流提取，得提取液和药渣，提取液经浓缩、离心和大孔吸附树脂柱纯化后，进一步用碱性大孔树脂纯化，得总皂苷提取物；(2)步骤(1)得到的药渣去除溶剂后，用水提取，提取液浓缩后，调醇度至50-80％沉淀，沉淀加水溶解后再调醇度至30-40％沉淀，取上清，去除蛋白，进一步调醇度至70-90％沉淀，得粗多糖，用水溶解后顺序采用截流分子量为10,000，10,000和3,000的超滤膜超滤，浓缩液进一步调醇度至70-90％沉淀，取沉淀，干燥粉碎可分别得总多糖提取物A、B和C。
(3)取步骤的(1)总皂苷提取物和步骤(2)的总多糖提取物A、B、C中的一种或两种或三种作为活性成分，二者重量之比是0.1-8∶1，加入适当的药学上可接受的载体，制成注射液、输液剂或者冻干粉针制剂。
本发明中所用的低元醇是指C1-C4的醇，是本领域通常用于提取中药材有效成分，或者是沉淀、纯化水溶液中有效成分或杂质的常规或者已知的C1-C4的醇，例如甲醇、乙醇、异丙醇、丙二醇、正丁醇和/或异丁醇，优选乙醇。所述的提取、纯化、沉淀等过程可以按照本领域常规或者已知的方法进行。
所述的步骤(1)第一步所用大孔树脂可以是任何常规的或者已知的大孔树脂，包括非极性、弱极性、中极性和强极性的大孔树脂，例如常用的ADS-21型大孔树脂、ADS-17型大孔树脂、ADS-16型大孔树脂或ADS-F8型大孔树脂、DM-130、D-101和D-4020、D101型大孔吸附树脂、AB-8型大孔吸附树脂、ZTC-1型大孔吸附树脂和DidaionHP20型大孔吸附树脂等，，优选AB-8型大孔吸附树脂和D101型大孔吸附树脂，更优选D101型大孔吸附树脂，采用树脂的纯化过程可以按照本领域常规或者已知的方法进行。所述的步骤(1)第二步所用大孔树脂是弱碱性大孔吸附树脂可以是任何常规的或者已知的弱碱性大孔树脂，优选D941、D301型大孔吸附树脂，也可以是任何常规的或者已知的弱碱性大孔树脂强碱性大孔树脂，优选D941、D301型大孔吸附树脂。
所述的步骤(2)的去除蛋白的方法可以是本领域技术常规的或者已知的方法，如Sevage法、三氯乙酸法(TCA法)和鞣酸法(TA法)，优选三氯乙酸法，纯化过程可以按照本领域常规或者已知的方法进行。
本发明的步骤(3)所述的药学上可接受的载体，包括制备成注射液所需要的溶剂，该溶剂可以是本领域常用的或者已知的溶剂如水，也可以包括渗透压调节剂，该调节剂可以是本领域常用的或者已知的调节剂，如葡萄糖、氯化钠、果糖、木糖等；步骤(3)所述的药学上可接受的载体，还可以包括制成冻干粉针剂所需要的赋形剂，例如甘露醇、乳糖、甘氨酸等。所述的注射液、输液剂和冻干粉针剂可以按照本领域的常规的或者已知的方法进行；所述的药学上可接受的载体，根据需要还可以包括制成冻干粉针剂所需要的缓冲剂和/或助溶剂等。
所述的步骤(3)总皂苷提取物和总多糖提取物的重量之比优选0.5-5∶1，最优选3∶1。
按照上述方法制备的用于癌症辅助治疗的药物制剂，优选冻干粉针制剂，该冻干粉针制剂优选的是活性成分中总皂苷的重量百分含量为10-32.5％，总多糖的重量百分含量为25-87％，黄芪甲苷的重量百分含量为2.5-7％；更优选的是活性成分中总皂苷的重量百分含量为12.5-32.5％，总多糖的重量百分含量为35-87％，黄芪甲苷的重量百分含量为4.3-7％。
本发明提供还提供了上述优选的冻干粉针制剂的制备方法，包括以下步骤(1)取重量比为1∶0.5-2的党参和黄芪饮片，加低元醇回流提取，得提取液和药渣，提取液经浓缩、离心和大孔吸附树脂柱纯化后，进一步用碱性大孔树脂纯化，得总皂苷提取物；(2)步骤(1)得到的药渣去除溶剂后，用水提取，提取液浓缩后，调醇度至50-80％沉淀，沉淀加水溶解后再调醇度至30-40％沉淀，取上清，去除蛋白，进一步调醇度至70-90％沉淀，得粗多糖，用水溶解后顺序采用截流分子量为10,000，10,000和3,000的超滤膜超滤，浓缩液进一步调醇度至70-90％沉淀，取沉淀，干燥粉碎可分别得总多糖提取物A、B和C。
(3)取步骤的(1)总皂苷提取物和步骤(2)的总多糖提取物A、B、C中的一种或两种或三种作为活性成分，二者重量之比是0.1-8∶1，加入适当的药学上可接受的载体，制成注射液、输液剂或者冻干粉针制剂。
此处的低元醇的概念同前，优选乙醇。
所述的步骤(1)第一步所用大孔树脂可以是任何常规的或者已知的大孔树脂，包括非极性、弱极性、中极性和强极性的大孔树脂，例如常用的ADS-21型大孔树脂、ADS-17型大孔树脂、ADS-16型大孔树脂或ADS-F8型大孔树脂、DM-130、D-101和D-4020、D101型大孔吸附树脂、AB-8型大孔吸附树脂、ZTC-1型大孔吸附树脂和DidaionHP20型大孔吸附树脂等，，优选AB-8型大孔吸附树脂和D101型大孔吸附树脂，更优选D101型大孔吸附树脂，采用树脂的纯化过程可以按照本领域常规或者已知的方法进行。所述的步骤(1)第二步所用大孔树脂是弱碱性大孔吸附树脂可以是任何常规的或者已知的弱碱性大孔树脂，优选D941、D301型大孔吸附树脂，也可以是任何常规的或者已知的弱碱性大孔树脂强碱性大孔树脂，优选D941、D301型大孔吸附树脂。
本发明提供的制备方法，优选的是包括以下步骤(4)取党参和黄芪饮片，加低元醇回流提取，得提取液和药渣，提取液经浓缩、离心、弱极性大孔吸附树脂柱纯化和弱碱性大孔吸附树脂柱纯化，收集洗脱液并浓缩干燥得党参、黄芪总皂苷提取物；(5)步骤(1)得到的药渣去除溶剂后，用水提取，提取液浓缩后，调醇度至50-80％沉淀，沉淀加水溶解后再调醇度至30-40％沉淀，取上清，用三氯乙酸去除蛋白，进一步调醇度至70-90％沉淀，得粗多糖，用水溶解后超滤，浓缩液进一步调醇度至70-90％沉淀，得粗多糖，用水溶解后，采用截流分子量为3000的膜进行超滤，浓缩液进一步调醇度至70-90％沉淀，取沉淀，干燥粉碎得党参、黄芪总多糖提取物。
合并步骤(1)和步骤(2)的党参、黄芪总皂苷提取物和党参、黄芪总多糖提取物，加入适当的药学上可接受的载体，制成冻干粉针制剂。
本发明的冻干粉针制剂在使用前，可以把冻干粉针制剂溶解在注射用水或者其他注射液中，也可以溶解在输液剂中，如用于静脉树注的等渗性介质，例如生理盐水溶液或者5％葡萄糖溶液中。
根据病症、治疗过程和患者的具体情况，使用本发明的药物制剂的用量一般可以每日1～2支，每支相当于原料药5-15g。
本发明的中药组合物的制备方法，其工艺步骤和参数，是发明人在大量的实验基础上确定的，为此发明人付出了大量的创造性的劳动，本发明的方法制备的黄芪总皂苷提取物，总皂苷含量在80％(W/W)以上，转移率在40％以上；总多糖提取物中，总多糖的含量在80％以上，转移率在40％以上。
本发明的药物制剂，具有有效成分含量高、疗效好、毒性低的特点。经药效学证明，本发明的药物制剂本身虽无明显的抗肿瘤作用，但与放疗或化疗药物联合应用有增效和减毒作用，同时能增强机体的免疫功能和抗应激能力，其效果相当于或好于目前临床使用的参芪扶正注射液。本发明的药物制剂经急性毒性试验、长期毒性试验、安全性试验和过敏、刺激等试验研究未发现其有明显的毒副反应。
本发明所用的测定方法如下1、黄芪总皂苷含量测定照分光光度法(《中国药典》2000年版一部附录VA)测定。
对照品溶液的制备精密称取在60℃减压干燥至恒重的黄芪甲苷对照品，用无水乙醇制成每1ml含黄芪甲苷0.4mg的溶液，摇匀，即得。
供试品溶液的制备取本品内容物350mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理20分钟，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置水浴蒸干，残渣用50％甲醇溶液20ml溶解，溶液以每分钟0.5ml的速度通过中性氧化铝柱(4g，100～200目，柱长20cm，内径1cm)，并继续用50％甲醇溶液40ml冲洗，合并通过液及洗液，水浴蒸干，残渣用少量无水乙醇溶解，转移至10ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
标准曲线的制备精密吸取对照品溶液0、100、200、300、400、500、600ul，分别置于10ml具塞刻度试管中，分别补加无水乙醇至0.5ml。名加入8％香草醛无水乙醇试剂0.5ml，摇匀。置冰水浴中缓缓加入72％硫酸5ml，摇匀，62℃水浴保温20min。取出立即置冰水浴冷却至室温，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录VA)在538nm处测定吸收度。以对照品浓度为横座标、吸收度值A为纵座标，绘制标准曲线。
测定法精密吸取供试品溶液0.5ml，置10ml具塞刻度试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入8％香草醛......”起，依法测定吸收度。计算，即得。
2、黄芪甲苷含量测定照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水(37∶63)为流动相，检测波长203nm。理论板数按黄芪甲苷计，应不低于3000。
对照品溶液的制备精密称取在60℃减压干燥至恒重的黄芪甲苷对照品，加甲醇溶解，制成每1ml含0.6mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 精密称取本品内容物约500mg，加水10ml溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇萃取4次，每次20ml，合并正丁醇液，以氨试液洗涤3次，每次20ml，合并正丁醇液，转移至蒸发皿中，水浴蒸干，用甲醇溶解并转移至5ml容量瓶，甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45um滤膜过滤即得。
标准曲线的制备 分别精密吸取上述对照品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、30μl，分别注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定黄芪甲苷峰面积，以对照品进样量logX(μg)为横座标、峰面积值logY(mv.s)为纵座标，绘制标准曲线，测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
3、多糖分子量分布的测定照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用凝胶为填充剂，0.1 M氯化钠为流动相，示差折光检测器，灵敏度为32。GPC软件。
标准曲线的绘制取分子量分别为1270，11600，23800，48600，80900，147600的葡聚糖对照品适量，分别用流动相溶解制成每1mL中约含2mg的溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以标准葡聚糖分子量的对数logMw为纵坐标，以保留时间tR为横坐标，进行回归处理，绘制标准曲线。
供试品溶液的制备 精密称取本品160mg，置5ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法精密吸取供试品溶液25μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。
4、总多糖含量测定照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用凝胶为填充剂，0.1 M氯化钠为流动相，示差折光检测器，灵敏度为32。GPC软件。
对照品溶液的制备精密称取分子量Mw分别为147600，48600，1270的葡聚糖为对照品，配置为浓度分别0.2，0.1，3.2mg/ml的混合对照品溶液，即得。
供试品溶液的制备 精密称取本品160mg，置5ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
具体实施例方式
以下结合实施例对本发明作进一步说明，实施例不以任何方式限制本发明实施例1(1)取党参、黄芪饮片各5000g，加6倍量70％乙醇，回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液(药渣挥去溶剂后备用)，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15～1.25(60℃)的稠膏，加4倍量水使溶解，静置，离心，取上清液加于已处理好的D101型大孔吸附树脂柱上，先用2倍量的蒸馏水洗涤树脂柱，再用80％乙醇的洗脱皂苷类成分，收集4倍于树脂柱体积的80％的乙醇洗脱液，洗脱液过D941型大孔吸附树脂，再用少量80％乙醇洗脱，收集流出液和洗脱液，减压回收乙醇并浓缩至稠膏，浓缩物在60℃下干燥得党参、黄芪总皂苷提取物。
(2)上述挥去溶剂后的药渣，加10倍量水，于60℃浸提2次，每次1.5小时，合并水提液，浓缩至1∶1(每毫升含原生药材1克)，加入乙醇，使醇浓度达到70％，静置24h，倾出上清液，沉淀离心，将离心所得沉淀加适量水(水∶原生药为1∶1)溶解，再加入乙醇，使醇浓度达到35％，静置24h，离心，取上清液，回收尽乙醇，加适量水调整体积至相对密度为1.00~1.05，以1∶1等体积加入5％三氯乙酸溶液，静置4小时，离心，取上清液，加乙醇至含醇量达80％，静置过夜，滤过，得粗多糖，加适量水(水∶原生药材为1∶1)溶解，用截留分子量100000超滤膜超滤，取浓缩液，减压浓缩至相对密度为1.20～1.30(60℃)，加乙醇至含醇量达80％，静置过夜，滤过，取沉淀，用无水乙醇洗涤，真空干燥，粉碎，得总多糖提取物A；透过液用10000超滤膜超滤，取浓缩液，减压浓缩至相对密度为1.20～1.30(60℃)，加乙醇至含醇量达80％，静置过夜，滤过，取沉淀，用无水乙醇洗涤，真空干燥，粉碎，得总多糖提取物B；透过液再用3000超滤膜超滤，取浓缩液，减压浓缩至相对密度为1.20～1.30(60℃)，加乙醇至含醇量达80％，静置过夜，滤过，取沉淀，用无水乙醇洗涤，真空干燥，粉碎，得总多糖提取物C；(3)取重量比为1∶3的党参、黄芪总皂苷及总多糖提取物(包括A、B和C)，加2000ml注射用水使溶解，加入9.5％注射用甘露醇、0.5％聚维酮K30，并用10％氢氧化钠溶液调pH值为6.5～7.5，补加注射用水至2500ml，用0.22μm微孔滤膜滤过，灌装7ml西林瓶中，每瓶2.5ml，冷冻干燥，压盖，封口，即得。
实施例2按照实施例1的方法制备本发明的药物制剂，只是第(1)步中取党参3500g，黄芪6500g，所用的大孔吸附树脂分别是AB-8型大孔吸附树脂和D301型大孔树脂，第(2)步提取所用的低元醇是正丁醇，沉淀所用的低元醇是异丙醇；第(3)步的总多糖提取物是A和B。
实施例3按照实施例1的方法制备本发明的药物制剂，只是第(1)步中取党参6500g，黄芪3500g，步骤(1)所用的大孔吸附树脂是ADS-17型大孔吸附树脂，步骤(2)的去除蛋白的方法是Sevage法。
实施例4(1)取党参、黄芪饮片各5000g，加10倍量60％乙醇，回流提取1次，3小时，提取液(药渣挥去溶剂后备用)减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15～1.25(60℃)的稠膏，加3倍量水使溶解，静置，离心，取上清液加于已处理好的D101型大孔吸附树脂柱上，先用10倍量的蒸馏水洗涤树脂柱，再用80％乙醇的洗脱皂苷类成分，收集3倍于树脂柱体积的80％的乙醇洗脱液，洗脱液过D201型大孔树脂，再用少量80％乙醇洗脱，收集流出液和洗脱液，减压回收乙醇并浓缩至稠膏，浓缩物在50℃下干燥得党参、黄芪总皂苷提取物；(2)上述挥去溶剂后的药渣，加6倍量水，于100℃浸提2次，每次3小时，合并水提液，浓缩至1∶1(每毫升含原生药材1克)，加入乙醇，使醇浓度达到60％，静置24h，倾出上清液，沉淀离心，将离心所得沉淀加适量水(水∶原生药为1∶1)溶解，再加入乙醇，使醇浓度达到35％，静置24h，离心，取上清液，回收尽乙醇，加适量水调整体积至相对密度为1.00~1.05，以1∶1等体积加入5％三氯乙酸溶液，静置4小时，离心，取上清液，加乙醇至含醇量达80％，静置过夜，滤过，得粗多糖，加适量水(水∶原生药材为1∶1)溶解，用截留分子量100000超滤膜超滤，取浓缩液，减压浓缩至相对密度为1.20～1.30(60℃)，加乙醇至含醇量达80％，静置过夜，滤过，取沉淀，用无水乙醇洗涤，真空干燥，粉碎，得总多糖提取物A；透过液用10000超滤膜超滤，取浓缩液，减压浓缩至相对密度为1.20～1.30(60℃)，加乙醇至含醇量达80％，静置过夜，滤过，取沉淀，用无水乙醇洗涤，真空干燥，粉碎，得总多糖提取物B；透过液再用3000超滤膜超滤，取浓缩液，减压浓缩至相对密度为1.20～1.30(60℃)，加乙醇至含醇量达80％，静置过夜，滤过，取沉淀，用无水乙醇洗涤，真空干燥，粉碎，得总多糖提取物C；(3)取重量比为1∶0.1的党参、黄芪总皂苷及总多糖提取物(包括总多糖B和C)，加2000ml注射用水使溶解，加入9.5％注射用甘露醇、0.5％Tween-80，并用10％氢氧化钠溶液调pH值为6.5～7.5，补加注射用水至2500ml，用0.22μm微孔滤膜滤过，灌装7ml西林瓶中，每瓶2.5ml，冷冻干燥，压盖，封口，即得。
实施例5(1)取党参、黄芪饮片各5000g，加8倍量60％乙醇，回流提取2次，每次2小时，提取液(药渣挥去溶剂后备用)减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15～1.25(60℃)的稠膏，加5倍量水使溶解，静置，离心，取上清液加于已处理好的D101型大孔吸附树脂柱上，先用5倍量的蒸馏水洗涤树脂柱，再用80％乙醇的洗脱皂苷类成分，收集2倍于树脂柱体积的80％的乙醇洗脱液，洗脱液过D301型大孔树脂，再用少量80％乙醇洗脱，收集流出液和洗脱液，减压回收乙醇并浓缩至稠膏，浓缩物在60℃下干燥得党参、黄芪总皂苷提取物；(2)上述挥去溶剂后的药渣，加8倍量水，于80℃浸提3次，每次2小时，合并水提液，浓缩至1∶1(每毫升含原生药材1克)，加入乙醇，使醇浓度达到80％，静置24h，倾出上清液，沉淀离心，将离心所得沉淀加适量水(水∶原生药为1∶1)溶解，再加入乙醇，使醇浓度达到40％，静置24h，离心，取上清液，回收尽乙醇，加适量水调整体积至相对密度为1.00~1.05，以1∶1等体积加入5％三氯乙酸溶液，静置4小时，离心，取上清液，加乙醇至含醇量达70％，静置过夜，滤过，得粗多糖，加适量水(水∶原生药材为1∶1)溶解，用截留分子量100000超滤膜超滤，取浓缩液，减压浓缩至相对密度为1.20～1.30(60℃)，加乙醇至含醇量达80％，静置过夜，滤过，取沉淀，用无水乙醇洗涤，真空干燥，粉碎，得总多糖提取物A；透过液用10000超滤膜超滤，取浓缩液，减压浓缩至相对密度为1.20～1.30(60℃)，加乙醇至含醇量达80％，静置过夜，滤过，取沉淀，用无水乙醇洗涤，真空干燥，粉碎，得总多糖提取物B；透过液再用3000超滤膜超滤，取浓缩液，减压浓缩至相对密度为1.20～1.30(60℃)，加乙醇至含醇量达80％，静置过夜，滤过，取沉淀，用无水乙醇洗涤，真空干燥，粉碎，得总多糖提取物C；(3)取重量比为1∶8的党参、黄芪总皂苷及总多糖提取物(包括提取物A、B和C)，加2000ml注射用水使溶解，加入9.5％葡萄糖，并用10％氢氧化钠溶液调pH值为6.5～7.5，补加注射用水至2500ml，用0.22 μ m微孔滤膜滤过，灌装7ml西林瓶中，每瓶2.5ml，冷冻干燥，压盖，封口，即得。
实施例6(1)取党参、黄芪饮片各5000g，加9倍量60％乙醇，回流提取2次，每次1.5小时，提取液(药渣挥去溶剂后备用)减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.15～1.25(60℃)的稠膏，加5倍量水使溶解，静置，离心，取上清液加于已处理好的AB-8型大孔吸附树脂柱上，先用5倍量的蒸馏水洗涤树脂柱，再用80％乙醇的洗脱皂苷类成分，收集3倍于树脂柱体积的70％的乙醇洗脱液，洗脱液过D301型大孔树脂，再用少量80％乙醇洗脱，收集流出液和洗脱液，减压回收乙醇并浓缩至稠膏，浓缩物在60 ℃下干燥得党参、黄芪总皂苷提取物；(2)上述挥去溶剂后的药渣，加8倍量水，于70℃浸提3次，每次3小时，合并水提液，浓缩至1∶1(每毫升含原生药材1克)，加入乙醇，使醇浓度达到70％，静置24h，倾出上清液，沉淀离心，将离心所得沉淀加适量水(水∶原生药为1∶1)溶解，再加入乙醇，使醇浓度达到350％，静置24h，离心，取上清液，回收尽乙醇，加适量水调整体积至相对密度为1.00~1.05，以1∶1等体积加入5％三氯乙酸溶液，静置4小时，离心，取上清液，加乙醇至含醇量达70％，静置过夜，滤过，得粗多糖，加适量水(水∶原生药材为1∶1)溶解，用截留分子量100000超滤膜超滤，取浓缩液，减压浓缩至相对密度为1.20～1.30(60℃)，加乙醇至含醇量达80％，静置过夜，滤过，取沉淀，用无水乙醇洗涤，真空干燥，粉碎，得总多糖提取物A；透过液用10000超滤膜超滤，取浓缩液，减压浓缩至相对密度为1.20～1.30(60℃)，加乙醇至含醇量达80％，静置过夜，滤过，取沉淀，用无水乙醇洗涤，真空干燥，粉碎，得总多糖提取物B；透过液再用3000超滤膜超滤，取浓缩液，减压浓缩至相对密度为1.20～1.30(60℃)，加乙醇至含醇量达80％，静置过夜，滤过，取沉淀，用无水乙醇洗涤，真空干燥，粉碎，得总多糖提取物C；(3)取重量比为1∶4的党参、黄芪总皂苷及总多糖提取物(包括提取物A和C)，加2000ml注射用水使溶解，加入9.5％葡萄糖，并用10％氢氧化钠溶液调pH值为6.5～7.5，补加注射用水至2500ml，用0.22μm微孔滤膜滤过，灌装7ml西林瓶中，每瓶2.5ml，冷冻干燥，压盖，封口，即得。
实施例7抗肿瘤增效试验对环磷酰胺抗Lewis肺癌作用的增效试验于无菌条件下摘取荷Lewis肺癌小鼠的瘤块，除去坏死组织，用玻璃匀浆器匀浆，按1∶4倍用无菌生理盐水稀释，然后无菌条件下每只小鼠(C57BL/6种)右前肢腋窝皮下注射0.2ml，24h后称动物体重并分组。第一组为荷瘤对照组，给等容积生理盐水；第二组为化疗药物组，给环磷酰胺注射剂30mg/kg；第三、四、五组为本发明的药物制剂+化疗药物组，同时给本发明的药物制剂(按实施例1的方法制备)3g生药/kg、6g生药/kg、12g生药/kg和环磷酰胺注射剂30mg/kg。接种肿瘤后第二天开始腹腔注射给药，0.2ml/10g，每天1次，连续10天；接种肿瘤后第二天和第六天分别腹腔注射环磷酰胺注射剂。第10天给药后24h称动物体重，处死小鼠，剥离瘤块并称重，抑瘤率计算同上。试验结果见表1。
表1 本发明的药物制剂对环磷酰胺抗Lewis肺癌作用的影响(x±s)
与荷瘤对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与环磷酰胺组比较，*P＜0.05，**1P＜0.01由表1可见，本实验所用剂量的环磷酰胺能减轻Lewis肺癌小鼠的瘤重，与荷瘤对照组比较有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)。本发明的药物制剂与环磷酰胺联合应用，抗小鼠Lewis肺癌的作用增强，大、中、小剂量组抑瘤率依次为7.044％、43.65％和38.86％，与单独应用环磷酰胺(抑瘤率为35.81)比较，大剂量组有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)，说明本发明的药物制剂能增强环磷酰胺抗小鼠Lewis肺癌作用。
对放疗抗H22肝癌作用的增效试验于无菌条件下抽取荷H22肝癌8天的小鼠腹水，按1∶4倍用无菌生理盐水稀释，然后无菌条件下每只小鼠(ICR种)腹腔注射0.2ml，24h后称动物体重并分组。第一组为为荷瘤对照组，给等容积生理盐水；第二组为放疗组，给小剂量X线照射；第三组为参芪扶正注射液组，给参芪扶正注射液6g生药/kg；第四、五、六组为本发明的药物制剂和小剂量X线照射，同时给本发明的药物制剂(按实施例一的方法制备)3g生药/kg、6g生药/kg、12g生药/kg和小剂量X线照射。接种肿瘤后第二天开始开始腹腔注射给药，0.2ml/10g，每天1次，连续10天；接种肿瘤后第五天给一次性小剂量X线照射(全身照射剂量为12.5mGy/min，总剂量为75mGy)。第10天给药后24h称动物体重，处死小鼠，剥离瘤块并称重，抑瘤率计算同上。试验结果见表13。
表2 本发明的药物制剂对放疗抗H22肝癌作用的影响(x±s)
与荷瘤对照组比较，##P＜0.01；与放疗组比较，**P＜0.01由表2可见，本实验所用剂量的放疗能减轻H22肝癌小鼠的瘤重，与荷瘤对照组比较，有显著性差异(P＜0.01)。本发明的药物制剂与放疗联合应用，抗小鼠H22肝癌的作用增强，大、中、小剂量组抑瘤率依次为57.35％、47.65％和25.54％，与单独应用放疗组(抑瘤率为24.76)比较，有显著性差异(P＜0.01)，，说明本发明的药物制剂能增强放疗抗小鼠H22肝癌作用。参芪扶正注射液与放疗联合应用，抗小鼠H22肝癌的作用轻度增强，抑瘤率为36.54％，但与单独应用放疗组比较无显著性差异(P＞0.05)；与同剂量本发明的药物制剂比较，有显著性差异(P＜0.01)，说明本发明的药物制剂增强放疗抗小鼠H22肝癌作用强于参芪扶正注射液。
权利要求
1.一种用于癌症辅助治疗的药物制剂，采用党参和黄芪为原料，通过包括以下步骤的方法制得(1)取重量比为1∶0.5-2的党参和黄芪饮片，加低元醇回流提取，得提取液和药渣，提取液经浓缩、离心和大孔吸附树脂柱纯化后，进一步用碱性大孔树脂纯化，得总皂苷提取物；(2)步骤(1)得到的药渣去除溶剂后，用水提取，提取液浓缩后，调醇度至50-80％沉淀，沉淀加水溶解后再调醇度至30-40％沉淀，取上清，去除蛋白，进一步调醇度至70-90％沉淀，得粗多糖，用水溶解后顺序采用截流分子量为10,000，10,000和3,000的超滤膜超滤，浓缩液进一步调醇度至70-90％沉淀，取沉淀，干燥粉碎可分别得总多糖提取物A、B和C；(3)取步骤的(1)总皂苷提取物和步骤(2)的总多糖提取物A、B、C中的一种或两种或三种作为活性成分，二者重量之比是0.1-8∶1，加入适当的药学上可接受的载体，制成注射液、输液剂或者冻干粉针制剂。
2.根据权利要求1所述的制剂，其中步骤(3)的总皂苷提取物和总多糖提取物的重量之比是0.5-5∶1。
3.根据权利要求2所述的制剂，其中步骤(3)的总皂苷提取物和总多糖提取物的重量之比是3∶1。
4.根据权利要求1所述的制剂，其中步骤(3)的冻干粉针制剂，活性成分中总皂苷的重量百分含量为10-32.5％，总多糖的重量百分含量为25-87％，黄芪甲苷的重量百分含量为2.5-7％。
5.根据权利要求4所述的制剂，其中步骤(3)的冻干粉针制剂，活性成分中总皂苷的重量百分含量为12.5-32.5％，总多糖的重量百分含量为35-87％，黄芪甲苷的重量百分含量为4.3-7％。
6.权利要求5的制剂的制备方法，包括以下步骤(1)取党参和黄芪饮片，加低元醇回流提取，得提取液和药渣，提取液经浓缩、离心、弱极性大孔吸附树脂柱纯化和弱碱性大孔吸附树脂柱纯化，收集洗脱液并浓缩干燥得党参、黄芪总皂苷提取物；(2)步骤(1)得到的药渣去除溶剂后，用水提取，提取液浓缩后，调醇度至50-80％沉淀，沉淀加水溶解后再调醇度至30-40％沉淀，取上清，用三氯乙酸去除蛋白，进一步调醇度至70-90％沉淀，得粗多糖，用水溶解后超滤，浓缩液进一步调醇度至70-90％沉淀，得粗多糖，用水溶解后，采用截流分子量为3000的膜进行超滤，浓缩液进一步调醇度至70-90％沉淀，取沉淀，干燥粉碎得党参、黄芪总多糖提取物；(3)合并步骤(1)和步骤(2)的党参、黄芪总皂苷提取物和党参、黄芪总多糖提取物，加入适当的药学上可接受的载体，制成冻干粉针制剂。
7.根据权利要求6的方法，其中所述的弱极性大孔树脂是D101型大孔树脂或者AB-8型大孔树脂。
8.根据权利要求7的方法，其中所述的弱碱性大孔树脂是D941、D301或D201型大孔树脂。
9.根据权利要求8的方法，其中所述的低元醇是乙醇。
10.根据权利要求9的方法，包括如下步骤(1)取等量的党参和黄芪饮片，加用5-10倍量的60-80％乙醇，回流提取1-3次，每次1.5-3小时，得提取液和药渣，提取液经浓缩、离心、D101型大孔吸附树脂柱纯化和D941型大孔树脂纯化，收集洗脱液并浓缩干燥得党参、黄芪总皂苷提取物；(2)步骤(1)得到的药渣去除溶剂后，加6-12倍量的水，于50-100℃，浸提1-3次，每次1-2.5小时，调醇度至60-80％沉淀，沉淀加水溶解后再调醇度至30-40％沉淀，取上清，去除蛋白，进一步调醇度至70-90％沉淀，得粗多糖，用水溶解后顺序采用截流分子量为10,000，10,000和3,000的超滤膜超滤，浓缩液进一步调醇度至70-90％沉淀，取沉淀，干燥粉碎得党参、黄芪总多糖提取物；(3)取步骤的(1)总皂苷提取物和步骤(2)的总多糖提取物A、B、C中的一种或两种或三种作为活性成分，二者重量之比是0.1-8∶1，加入适当的药学上可接受的载体，制成冻干粉针制剂。
全文摘要
本发明的目的是提供一种有效成分含量高、适合静脉注射使用、高效低毒的用于癌症辅助治疗的药物制剂。
文档编号A61K9/19GK101084981SQ200610014198
公开日2007年12月12日 申请日期2006年6月8日 优先权日2006年6月8日
发明者夏忠庭, 叶正良, 郑永锋, 李学敏 申请人:天津天士力之骄药业有限公司