专利名称：：非蛋白稳定的梭菌毒素药物组合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及梭菌毒素药物组合物。具体地说，本发明涉及含有非蛋白赋形剂的梭菌毒素药物组合物，所述非蛋白赋形剂的作用是使存在于药物组合物中的梭菌毒素(例如肉毒毒素)稳定。
背景技术：
：药物组合物是一种如下的制剂，它含有至少一种活性成分(例如梭菌毒素)，还含有例如一种或多种赋形剂、緩冲剂、载体、稳定剂、防腐剂和/或填充剂，并且适用于向患者给药以达到期望的诊断结果或治疗效果。本文中公开的药物组合物具有诊断、治疗和/或研究的用途。为达到稳定储存和处理方便，药物组合物可以被制成冻干的(即冷冻千燥的)或真空干燥的粉剂，该粉剂可在向患者给药前用适合的液体复水，例如用生理盐水或水复水。另外，该药物组合物可被制成水溶液或悬浮液。药物组合物可以含有具有蛋白质性质的活性成分。不幸的是，蛋白质活性成分非常难于稳定(即维持在一种生物活性损失最小的状态)，因此导致含蛋白质的药物组合物在制备、复水(如需要)期间和使用前的保存期内损失蛋白质和/或损失蛋白质的活性。稳定性的问题是由于蛋白质变性、降解、二聚化和/或聚合而发生。多种赋形剂，例如白蛋白和明胶，已被用于尝试并稳定存在于药物组合物中的活性成分，并已获得不同程度的成功。此外，例如乙醇之类的防冻剂已被用于减少在冻干法的冷冻条件下的蛋白质变性。蛋白质赋形剂多种蛋白质，例如白蛋白和明胶已被用于稳定存在于一种药物组合物中的肉毒毒素。白蛋白是小且大量的血浆蛋白质。人血清白蛋白的分子量约为69千道尔顿(kD)，已被作为非活性成分用于药物组合物中，并在其中作为存在于药物组合物中的某些蛋白质活性成分的大载体(bulkcarrier)和稳、定剂。白蛋白在药物组合物中的稳定功能可体现在药物组合物的多步制备中和之后的所制备药物组合物的复水时。因此，白蛋白可通过以下方式赋予药物组合物中具有蛋白质性质的活性成分稳定性例如(1)降低蛋白质活性成分与表面(例如实验玻璃器皿、导管的表面)、药物组合物复水的药水瓶和用于注射药物组合物的注射器内表面间的粘着力(通常被称为"粘性，，)。蛋白质活性成分粘附到表面会导致活性成分的损失和剩余蛋白质活性成分的变性，两者都会降低存在于药物组合物中的活性成分的总活性，以及；(2)降低在制备活性成分的低稀释溶液时发生的活性成分的变性。除了能够使药物组合物中的蛋白质活性成分稳定以外，人血清白蛋白在注射入病人体内时还具有通常可忽略免疫原性的优点。一种具致过敏反应和;或抗药性的/生，使得含有免疫原性组分的药物组合物可能难以治愈所要治疗的疾病或障碍。重组白蛋白曾被提出作为肉毒毒素药物组合物中的稳定剂。因此，已出版的申请号为20030118598(Hunt)的美国专利申请中公开了多种赋形剂一例如重组白蛋白、胶原蛋白或淀粉一用于稳定存在于药物组合物中的肉毒毒素的用途。胶原蛋白是哺乳动物中最丰富的蛋白质，约占体内所有蛋白质的四分之一，并且是结締组织(例如皮肤、韧带和腱)的主要组分。天然的胶原蛋白是三个高分子量蛋白质的三螺旋。组成胶原蛋白螺旋的三条蛋白质链的每一条都含有多于1400个氨基酸。在人体中已识别出至少二十五种不同类型的胶原蛋白。胶原蛋白在美容学上已被用作治疗皮肤轮廓问题的一种填充材料，例如用于平滑笑紋和皱紋，眉间紋、眼角紋和嘴唇上下的细小的垂直紋。胶原蛋白还可用于平滑某些术后外伤或痤疮疤痕，以及病毒痘痕、例如水痘痘痕。为达到这些目的，胶原蛋白被注射进真皮以垫尚皮狭。明胶可通过胶原蛋白的水解得到。明胶已被用于一些蛋白质活性成分药物组合物中作为白蛋白的替代物。值得注意的是，明胶是一种来源于动物的蛋白质，因此具有与人血清白蛋白相同的潜在的易感染性风险。中国专利CN1215084中讨论了由天然明胶(一种胶原蛋白水解物)、动物来源的蛋白质、葡聚糖和蔗糖制得的无白蛋白的A型肉毒毒素。美国专利No.6，087，327中还公开了一种由天然明胶制得的A型和B型肉毒毒素的组合物。不幸的是，虽然已知蛋白质赋形剂例如白蛋白或明胶具有稳定作用，但是在药物组合物中使用它们具有明显的缺陷。例如白蛋白和明胶价格昂贵且越来越难以获得。此外，当用血液制品或来源于动物的产品(例如白蛋白和明胶)向患者给药时，会使患者处于获得血液传播的病原菌或感染剂的潜在风险中。因此，已知存在这样的可能性，即在药物组合物中含有来源于动物的蛋白质赋形剂会导致不慎将感染成分掺入药物组合物。例如，已经报道过使用人血清白蛋白会将朊病毒传到药物组合物中。朊病毒是一种具有蛋白质性质的感染颗粒，它被假设是由产生正常蛋白质的相同核酸序列产生的异常构型的同种型。也有进一步假设认为感染性存在于翻译后水平上正常同种型蛋白质对朊病毒同种型的"募集反应(recruitmentreaction)"中。显然，正常的内生细胞蛋白质被诱导而错误折叠成一个致病的朊病毒构型。因此，人们期望能够找到一种适合的可用于使存在于肉毒毒素药物组合物中的肉毒毒素稳定的赋形剂。优选地，所述肉毒毒素稳定剂不是来源于动物(即哺乳动物)源的蛋白质。肉毒毒素梭状芽孢杆菌属("M"/V/w/z7)根据形态和功能分类包括有127个以上的菌种。革兰氏阳性厌氧菌肉毒梭菌(67ay"/V/w/z/^^//77z/yz/)产生强力的多肽神经毒素——肉毒毒素，它引起人或动物的神经性麻痹疾病，称为肉毒中毒。肉毒梭菌及其芽孢通常存在于土壤中，并且该细菌能生长在家庭罐头工厂未适当消毒和封口的食物容器内，这是许多肉毒中毒病例的原因。肉毒中毒现象通常出现在食用肉毒梭菌培养物或芽孢污染的食物后18到36小时。肉毒毒素能毫无削弱地明显穿过肠道壁并攻击外周运动神经元。肉毒毒素中毒的症状逐渐从行走、吞咽、说话困难发展到呼吸肌麻痹和死亡。A型肉毒毒素是人类所知最致命的天然生物毒素。A型肉毒毒素(纯化的神经毒素复合物)对小鼠的LDso约是50皮克。有趣的是，在摩尔单位基础上，A型肉毒毒素的致死力比白喉强18亿倍，比氰化钠强6亿倍，比眼镜蛇毒素强约3000万倍，比霍乱强约1200万倍。Singh，Cr/〃ca/J577ec"Aa"er/a//Vofe//77bu./751，NaturalToxinsII的63至84页(第四章)，B.R.Singhetal.主编，PlenumPress,NewYork(1976)(其中才吏正了所称的A型肉毒毒素的LD5。为0.3ng等于1U的说法，因为实际上1U约等于0.05ngBOTOX)。肉毒毒素一个单位(U)的定义是腹膜内注射每只重18到20克的雌性SwissWebster小鼠得到的LD5。。也就是说，一单位的肉毒毒素是杀死一组雌性SwissWebster小鼠中的50%所用的肉毒毒素的量。七种通常在免疫学上不同的肉毒神经毒素已经被鉴定，它们分别是血清型为A、B、d、D、E、F和G的肉毒神经毒素，每种都通过与类型特异性抗体的中和来辨别。肉毒毒素的不同血清型在感染的动物种类和所引起的麻痹的严重程度和持续时间方面有所不同。例如，已经证实，通过用在大鼠中产生麻痹的速率测得，A型肉毒毒素比B型肉毒毒素强500倍。另外，B型肉毒毒素已经被证实在剂量为480U/kg时对灵长类动物是无毒的，而这个剂量是A型肉毒毒素在灵长类动物中的LDs。的12倍。显然，肉毒毒素以高亲和力与胆碱能运动神经元结合，被转移至神经元并阻断乙酰胆碱的突触前释放。肉毒毒素在临床上已用于治疗以骨骼肌机能亢进为特征的神经肌肉障碍。A型肉毒毒素在1989年被美国食品药品管理局批准治疗十二岁以上患者的自发性睑痉挛、斜视和偏侧面肌痉挛。外周注射(即肌内或皮下注射)A型肉毒毒素的临床效果通常在注射一星期内可观察到，且通常在注射后几小时内可观察到。单次肌内注射A型肉毒毒素引起的典型的症状緩解(即弛緩的肌肉麻痹)的持续时间可为约三个月至约六个月。尽管所有的肉毒毒素血清型在神经肌肉接头处明显抑制神经递质乙酰胆碱的释放，但它们是通过影响不同的神经分泌蛋白和/或在不同的位点裂解这些蛋白而实现的。肉毒毒素A是一种锌内肽酶，它可以特异性地水解细胞内嚢泡相关蛋白SNAP-25的肽键。E型肉毒毒素也裂解该25千道尔顿(kD)的突触体相关蛋白(SNAP-25)，但是与A型肉毒毒素相比，它靶向该蛋白内的不同的氨基酸序列。B、D、F和G型肉毒毒素作用于嚢泡相关蛋白(VAMP,也叫突触小泡蛋白)，不同的血清型裂解该蛋白的不同位点。最后，已经表明d型肉毒毒素裂解突触融合蛋白和SNAP-25。这些作用机制的不同可能影响不同的肉毒毒素血清型的相对效能和/或作用持续时间。无论何种血清型，毒素中毒的分子机制似乎是相似的并且包括至少三个步骤或阶段。在这个过程的第一步中，毒素通过重链即H链与细胞表面受体间的特异性相互作用与靶神经元的突触前膜结合；对每种血清型的肉毒毒素以及对破伤风毒素来说，该受体被认为是不同的。H链的羧基末端区段即Hc似乎在毒素对细胞表面的靶向作用中很重要。在第二步中，毒素穿过中毒细胞的质膜。首先细胞通过受体介导的内吞作用将毒素吞噬并形成含有该毒素的内含体。然后毒素离开内含体，进入细胞的细胞质。这最后一步被认为是通过H链的氨基末端区段即Hjv介导的，Hn在pH约5.5或更低时引发毒素的构象变化。已知内含体具有能降低内含体内pH的质子泵。构象的变化暴露了毒素中的疏水残基，这就使毒素得以插入内含体膜中。然后毒素通过内含体膜转移至细胞质中。肉毒毒素活性机制的最后一步似乎参与还原连接H链和L链的二硫键。肉毒毒素和破伤风毒素的整个毒性都包含在全毒素的L链上；1^链是一种锌(211++)内肽酶，它能够选择性地裂解蛋白，这些蛋白对于识别含有神经递质的嚢泡，将其停靠在质膜的细胞质表面，以及将嚢泡与质膜融合都是必要的。破伤风神经毒素和B、D、F、G型肉毒毒素引起一种突触体膜蛋白，即突触小泡蛋白(也叫嚢泡相关膜蛋白(VAMP))的降解。这些裂解作用中的任何一种都能除去大多存在于突触嚢泡的细胞质表面的VAMP。每种毒素特异地裂解不同的键。对于七种已知的肉毒毒素血清型来说，肉毒毒素蛋白分子的分子量大约为150kD。肉毒毒素以复合物形式由梭状芽孢杆菌释放，所述复合物包含150kD的肉毒毒素蛋白分子和与之结合的非毒素蛋白。因此，梭状芽孢杆菌产生900kD、500kD和300kD形式的A型肉毒毒素复合物。B和d型肉毒毒素明显是仅以500kD的复合物产生的。D型肉毒毒素是以300kD和500kD形式的复合物产生的。最后，E和F型肉毒毒素是仅以约300kD的复合物产生。这些复合物(即分子量大于约150kD)被认为含有非毒素血凝素蛋白和非毒素与无毒性非血凝素蛋白。这两种非毒素蛋白(它们与肉毒毒素分子一起构成有关的神经毒素复合物)可能起到为肉毒毒素分子防止变性而提供稳定性，并且保护毒素在被摄取时抵抗消化酸的作用。此外，也可能较大(比约150kD分子量大)的肉毒毒素复合物会减慢肉毒毒素从肌内注射肉毒毒素复合物的位点扩散速率。通过pH7.3时用血红细胞处理毒素复合物可将毒素复合物分解成毒素蛋白和血凝素蛋白。毒素蛋白在血凝素蛋白除去时非常不稳定。所有血清型的肉毒毒素最初都是由肉毒梭菌合成为非活性单链蛋白形式，这些蛋白须经蛋白酶裂解和切割形成神经活性形式。产生A和G血清型肉毒毒素的菌林具有内源性蛋白酶，因此A和G血清型可以从细菌培养物中主要以其活性形式回收。相反，d、D和E血清型肉毒毒素是由非蛋白水解菌林合成的，所以从培养物中回收时通常没有活性。B和F血清型可由蛋白水解菌林和非蛋白水解菌抹产生，因此可以以活性形式或者非活性形式回收。然而，即使是产生例如B血清型肉毒毒素的蛋白水解菌林，也只裂解所产生的毒素的一部分。此，已知的B型肉毒毒素比A型肉毒毒素效力明显要低，这很可能归因于例如B型肉毒毒素的任何制剂都有一定比例是非活性形式的。临床制剂中非活性肉毒毒素分子的存在增加了制剂的总蛋白栽量(proteinload)，而不增加临床功效，其中蛋白载量又与抗原性增加有关。另外已知，在同样的肌内注射剂量水平上，B型肉毒毒素的活性持续时间比A型肉毒毒素短，效力也较A型弱。体外研究已经表明肉毒毒素能抑制阳离子钾离子诱导的乙酰胆碱和去曱肾上腺素从脑干组织的原代细胞培养物中释放。另外，已报导肉毒毒素能抑制脊髓神经元原代培养物中的甘氨酸和谷氨酸的诱发释放，而且在脑突触小体制备物中肉毒毒素能抑制以下每一种神经递质的释放乙酰胆碱、多巴胺、去曱肾上腺素、CGRP和谷氨酸。高质量结晶A型肉毒毒素可由肉毒梭菌HallA林产生，其特征为>3xl07U/mg，A26。/A278小于0.60，凝胶电泳呈现出独特的条带样式。结晶A型肉毒毒素用已知的Schantz方法获得，如Shantz，E.J.:etal，Properi7e51a/7dwseoZ"^o/"w7i/7"历fdi/a/7^^^力e/"i^/cro6/a/7yewrofo1//751//7il/ecf/c//7e,MicrobiolRev.56:80-99(1992)戶斤述。通常，A型肉毒毒素复合物可从在合适的培养基中培养的A型肉毒梭菌的厌氧发酵中分离纯化。可以通过硫酸沉淀和超微过滤(ultramicrofiltration)浓缩收获粗毒素。可通过将酸性沉淀物溶解在氯化钧中实施纯化。毒素即可用冷乙醇沉淀。沉淀物可被溶解在磷酸钠緩冲液中并离心。干燥后可获得约900kD的结晶A型肉毒毒素复合物，它的特异性效力为3x107LD5。U/mg或者更高。这种已知的方法还可用来分离出非毒素蛋白以获得纯肉毒毒素，例如纯化的A型肉毒毒素，分子量约150kD，特异性效力为l-2x108LD5。U/mg或者更高；纯化的B型肉毒毒素，分子量约156kD,特异性效力为l-2x108LD5。U/mg或者更高；以及纯化的F型肉毒毒素，分子量约155kD，特异性效力为1-2xl07LDs。U/mg或者更高。肉毒毒素和肉毒毒素复合物可从例如ListBiologicalLaboratories,Inc.,Campbell,California^theCentreforAppliedMicrobiologyandResearch,PortonDown，U.K.;Wako(Osaka,Japan),以及SigmaChemicalsofStLouis,Missouri获得。市售的含有肉毒毒素的药物组合物包括BOTOX(A型肉毒毒素神经毒素与人血清白蛋白和氯化钠的复合物，由Allergan，Inc.,Irvine,Ca1ifornia以每瓶100单位的冻干粉末形式提供，使用前用0.9%氯化钠溶液复水)、Dysport(制剂中A型梭状肉毒杆菌毒素血细胞凝集素与人血清白蛋白和乳糖复合，由IpsenLimited,Berkshire,U.K.提供，为粉末，使用前用0.9%氯化钠溶液复水)和MyoBloc(—种可注射的溶液，包括B型肉毒毒素、人血清白蛋白、號多白酸4内以及氣4匕4内，pH纟々5.6，可由SolsticeNeurosciences，Inc.,SouthSanFrancisco,Ca1ifornia获得)。A型肉毒毒素在治疗多种临床疾病上的成功引起了人们对其它肉毒毒素血清型的兴趣。此外，纯的肉毒毒素已被用于治疗人类。例如，见KohlA.等，Co迈/7a"'so/o/",力ee/7"e"60&///7〃迈Zo7/z爿(^ofoz^^」y/t力t力e力/g力/y一i^r/Z7ef//jei/rc^ox2'/j(^T2〃7//zf力eex,e/7so/"fl7^7,or"yi76rep^銜5"c/e/e51/，MovDisord2000;15(Suppl3):165。因此，可以-使用纯的肉毒毒素制备药物组合物。已知A型肉毒毒素在pH4-6.8的稀释的水溶液中可溶。pH大于约7时，起稳定作用的非毒性蛋白从神经毒素上解离，导致毒性的緩'f曼丧失，尤其是当pH与温度升高时。SchantzE.J.等，户re/;ara〃0/7a/dc力aracfer/za6o/w///w/zfox//fjT7"3^尸0,力y/za/"e"历e77,(具体在第44-45页),Jankovic，J.等TherapywithBotulinumToxin，MarcelDekker,Inc(1994)的第三章。2002年7月31日授^又的欧洲专利EP1112082("Stable1iquidformulationsofbotuli画toxin，，)中要求保护一种稳定的液体药物肉毒毒素制剂，该制剂中含有緩冲剂(pH5-6)和肉毒毒素，其中该毒素制剂以液体形式在温度为0-10C时至少稳定一年，或者在温度为10-30C时至少稳定6个月。这种肉毒毒素药物制剂(它的一个实施方案由SolsticeNeurosciences,Inc.,SanDiego，California以商品名MyoBloc⑧或NeuroBloc⑧出售)以液体溶液的形式制备(不实施冻干法或真空干燥)，不需要在使用前复水。1996年4月30曰授权的名称为"PharmaceuticalCompositionofBotulinumNeurotoxinandMethodofPreparation"的美国专利5,512,547(Johnson等人)中要求保护一种纯的A型肉毒毒素制剂，该制剂中包括白蛋白和海藻糖，37'C下可稳定储存。1998年5月26日授权的美国专利5,756,468(Johnson等人)("Pharmaceutica1CompositionsofBotulinumToxinorBotulinumNeurotoxinandMethodofPreparation")要求保护一种冻干的肉毒毒素制剂，该肉毒毒素制剂包括硫代烷基、白蛋白和海藻糖，可在25'C至42'C之间稳定储存。1997年12月9曰授权的题为"PharmaceuticalCompositionContainingBotulinumBComplex"的美国专利5，696，077(Johnson等人)要求保护一种冷冻干燥的、不含氯化钠的B型肉毒毒素复合物制剂，它包括B型复合物和蛋白质赋形剂。GoodnoughM.C.等人的〃ozo尸6o"7/"〃2zzfor//7爿c^T//7g/yo/7力i7/zaZ7o/，ApplEnvironMicrobiol1992;58(10):3426-3428，以及Good画ghM.C.等人的Wec歸r7"OTe-J6c^w///a/fd///"<9//o『//7g/7o/7，AcsSymposiumSeries1994;567(-):193-203中公开的。中国专利申请CN1215084A中讨论了一种与动物来源的蛋白一明胶一起配制的不含白蛋白的A型肉毒毒素。美国专利No.6，087,327中也公开了一种A型和B型肉毒毒素与明胶一起配制的组合物。因此，这些制剂并不能消除传递源于动物蛋白的或伴随的感染要素的风险。已有报道BoNt/A已被用于多种临床情况，包括如下(1)每次肌内注射(多块肌肉)约75-125单位的B0T0X③、治疗颈部肌张力失常；(2)每次肌内注射5-10单位BOTOX③治疗眉间紋(额头皱紋)(向降眉间肌肌内注射5单位，以及向每块铍眉肌肌内注射10单位)；(3)脊柱内注射耻骨直肠肌约30-80单位的80丁0叉@治疗^更秘、；(4)通过每块肌肉大约1-5单位的801(^@肌内注射上眼睑的侧面睑板前眼轮匝肌和下眼睑侧面睑板前眼轮匝肌，治疗睑痉挛。(5)眼外肌肌内注射约1-5单位B0T0X⑧治疗斜视，注射用量根据待注射的肌肉的大小和所需的肌肉麻痹程度(即所需矫正的屈光度)而改变。(6)对如下五个不同的上肢屈肌进行8011(^@肌内注射治疗中风后的上肢肌痉挛购l'lAllergan,InC.,ofIrvine.California,商品名为BOTOX(a)跖深屈肌7.5U到30U(b)跖浅屈肌7.5U到30U(c)尺侧腕屈肌10U到40U(d)桡侧腕屈肌15U到60U(e)肱二头肌50U到200U。以上所示的五种肌肉每种都在同一疗程注射，所以通过肌内注射，在每个疗程患者上肢屈肌得到了90U到36OU的BOTOX。(7)颅骨膜注射(对称地注入眉间肌、额间肌和颞肌)25U的B0T0X⑧治疗偏头痛，当以在25U注射后三个月内偏头痛发生的频率、最大严重程度、所伴随的呕吐以及急性药物的使用情况等标准的下降来衡量时，已证实与运载体相比具有非常有益的偏头痛的预防治疗效果。据悉，A型肉毒毒素具有最长达12个月的效果0i/ro/7ea/7/.Aez/ro/d^r6(Supp4):Sill-S1150:1999),并且在某些情况下长达27个月。见r力e109:1344—1346:1999。然而通常Botox⑧肌内注射典型持续时间大约为3到4个月。A型肉毒毒素在治疗多种临床疾病上的成功，引起了人们对其它肉毒毒素血清型的兴趣。此外，纯的肉毒毒素已用于治疗人类。例如，见KohlA.等，6V/z7/7ar/510/7/"力ee/7"ecf6o/"i////z〃/z/for//j6y^w/^力f力e^/^"A/_r_/7wr//7e^//7ewro/"CLr//7("A7^^/J//7f力eex/f"e刀5"ord/^7for"/z6reF/.s/zmsc/efe^，MovDisord2000;15(Suppl3):165。因此，可以使用纯的肉毒毒素制备药物组合物。由于表面变性、加热和碱性环境的原因，肉毒毒素分子(约150kD)与诸如A型毒素复合物的肉毒毒素复合物(约300至900kD)也极易变性。灭活的毒素形成可能具有免疫原性的类毒素蛋白质。所得的抗体会使患者对毒素注射具有抵抗力。同多数酶一样，肉毒毒素(所述毒素为细胞内肽酶)的生物活性依赖于，或者至少部分依赖于其三维构象。因此，A型肉毒毒素经加热、各种化学物质的表面拉伸和表面干燥而失去毒性。此外已知，除非有合适的稳定剂存在，否则将通过已知的培养、发酵和纯化获得的毒素复合物稀释至很低的毒素浓度来用于制备药物组合物，会导致毒素的快速脱毒。将毫克量的毒素稀释到每毫升含纳克量的溶液中存在很大的困难，因为在如此强烈的稀释中特异的毒性会迅速损失。由于毒素可能在制成含毒素的药物组合物后数月或数年使用，因此毒素须用稳定剂稳定。至今唯一成功用于此目的的稳定剂是源于动物的人血清白蛋白和明胶。市售的含肉毒毒素的药物组合物是以商品名B0T0X⑧出售的(获自Allergan，Inc.，Irvine,California)。B0T0X⑧由纯4t的A型肉毒毒素复合物、人血清白蛋白和氯化钠组成，包装成灭菌的真空干燥的形式。A型肉毒毒素由生长于含N-Z胺和酵母提取物的培养基中的肉毒梭菌Hall林培养物制得。A型肉毒毒素复合物通过一系列酸沉淀从培养物溶液中纯化成一种结晶复合物，该结晶复合物由高分子量活性毒素蛋白和相关血凝素蛋白组成。该结晶复合物被重新溶解在含有盐水和白蛋白的溶液中，并在真空干燥前过滤除菌(0.2微米)。肌内注射前807(^@可用灭菌的不含防腐剂的盐水复水。每瓶B0T^T含有约100单位(U)的A型肉毒梭菌毒素复合物、0.5毫克人血清白蛋白和0.9毫克氯化钠，以无菌真空干燥且不含防腐剂的形式存在。使用不含防腐剂的灭菌生理盐水(0.9%氯化钠注射液)，通过在适当尺寸的注射器内汲取合适量的稀释剂，复水真空干燥的B0T0X。由于B0T0X⑧会因起泡或者类似地剧烈搅拌变性，所以应将稀释剂温和地注射小瓶内。出于无菌的考虑，最好应在801*0乂@复水后四小时内给药。在这四小时内复水的BOTOX⑧储存在约2。C到8'C的水箱中。复水的BOTOX是澄清无色的，且不含微粒物质。真空干燥的产品应储存在-5'C或低于-5。C的冷冻柜内。已有报道适合的代替人血清白蛋白作为肉毒毒素稳定剂的替代物可以是另一种蛋白质或低分子量(非蛋白质)的化合物。Carpender等人,//zfei"act/ons57a6i7/z//2g爿^f/f/yeswi^力ilrofe//7s"〃r//7g尸reeze-r力a^2'/7^"<2/^/尸reeze—Z^2./^"，InternationalSymposiumonBiologicalProductFreeze—DryingandFormulation,1990年10月24-26日；Karger(1992)，225-239。许多通常用作药物组合物中的载体和填充剂的物质已被证明不适于用作非蛋白赋形剂来使存在于药物组合物中的肉毒毒素稳定。例如，已发现二糖纤维二糖不适于用作肉毒毒素的稳定剂。因此，已知与仅含人血清白蛋白的A型肉毒毒素冻干后的毒性(>75/至>90%的恢复率)相比，使用纤维二糖与白蛋白和氯化钠一起作为赋形剂，会导致含有这些赋形剂的结晶A型肉毒毒素冻干后的毒性降低很多(10%的恢复率)。Goodnough等人，i7a6/7/za"0^///7"迈7bj//77]p7e爿"wr//7gZyo/力/7/zaf/'o/，App&Envir.Micro.58(10)3426-3428(1992)。此外，包括多糖的糖类通常是较差的蛋白质稳定剂。因此可知，如果蛋白制剂含有糖类(例如葡萄糖或葡萄糖的聚合物)或碳水化合物，则含有蛋白活性成分的药物组合物从本质上来说是不稳定的，因为已知由于葡萄糖和葡萄糖聚合物的还原性，蛋白质和葡萄糖可相互作用并进行已阐明的4每拉德反应(Maillardreaction)。在例如通过降低湿度或使用非还原性的糖以便阻止这种蛋白质-糖类反应方面已做出很多工作，但大部分是不成功的。重要的是，梅拉德反应的降解途径会导致蛋白活性成分在疗效上的不足。因此，含有蛋白和还原性糖类、碳水化合物或糖(例如葡萄糖聚合物)的药物制剂在本质上是不稳定的，并且不能在不严重损失活性成分蛋白质的所需生物活性的条件下长时间储存。分子量极高的多糖(淀粉)，例如羟乙基淀粉，曾被提议作为肉毒毒素的稳定剂存在于肉毒毒素药物组合物中。例如，见2005年4月27日授^又的欧洲专利EP1253932。值得注意的是，白蛋白或明胶在药物组合物中有效地作为蛋白活性成分的稳定剂起作用的一个原因在于作为蛋白质，这些稳定剂在药物组合物中不与蛋白质活性成分进行梅拉德反应。因此，人们希望在其他蛋白质中找到和寻找这类蛋白质赋形剂的替代物，用于使肉毒毒素药物组合物中的肉毒毒素稳定。肉毒毒素的特性及其形成合适的药物组合物的制剂限制、阻止了寻找含有的肉毒毒素的药物组合物中的蛋白质稳定剂替代物，并使其变得棘手。下面是这些特性中的四个例子。首先，肉毒毒素在用于添加入药物制剂中时是偏大的蛋白质(A型肉毒毒素复合物的分子量为900kD)，因此其本质上是脆弱且易发生变化的。相对于较小、较不复杂的蛋白质，毒素复合物的大小使其更脆弱且更易发生变化，因此，如果要维持毒素的稳定性，则会使得制剂和操作变得困难。因此，肉毒毒素稳定剂必须能够与毒素以这样的方式相互作用，即不使毒素分子变性、断裂或以其他方式去毒性，或导致毒素复合物中的非毒性蛋白质解离。其次，由于肉毒毒素是已知的最致命的生物物质，因此在配制含有肉毒毒素的药物组合物的所有步骤中都需要极好的安全性、精确性和准确性。因此，肉毒毒素的稳定剂本身不应是有毒的或难于处理的，以免加剧现有的配制含有肉毒毒素的药物组合物时需要的极苛刻的条件。第三，由于肉毒毒素是第一个被(FDA在1989年)批准的用于治疗人类疾病的注射用微生物毒素，因此，应开发并验证用于培养，批量生产、配制药物和使用肉毒毒素的专门步骤。重要的考虑因素是毒素的纯度和注射剂量。必须通过培养和纯化进行制备，这样肉毒毒素才不会暴露在任何可能污染终产物(即使是痕量的)并引起病人不良反应的物质中。这些限制要求在没有使用动物肉制品的简化培养基中培养，并且采用不涉及合成溶剂或树脂的方法纯化。使用酶、多种交换剂例如色谱柱中的交换剂和合成溶剂制备毒素会引入污染物，因此它们被排除在优选的配制步骤以外。另外，A型肉毒毒素在温度高于40。C时很容易变性，当在空气/液体界面处形成气泡时也会失去毒性，并在氮气或二氧化碳存在时变性。第四，使A型肉毒毒素稳定非常困难，因为A型肉毒毒素由约150kD的毒素分子与约750kD的非毒素蛋白质分子以非共价结合的形式组成。非毒素蛋白质分子被认为可保持毒性所依赖的二级和三级结构或有助于其稳定。适用于使非蛋白质或偏小的蛋白质稳定的方法或实验步骤并不适于用在使肉毒毒素复合物(例如900kD的A型肉毒毒素复合物)稳定中存在的固有问题。因此，虽然在pH3.5至6.8之间A型毒素与非毒素蛋白质非共价结合在一起，但在微碱性条件下(pH>7.1)，极易变化的毒素从毒素复合物中释放。如前文所提到的，纯的肉毒毒素(即150kD分子)已被提议作为药物组合物的活性成分。根据上面提出的肉毒毒素的独特性质和要求，找到一种用于替代含有肉毒毒素的药物组合物中的蛋白质稳定剂的合适的非蛋白质稳定剂的可能性几乎接近于零。本发明之前，已知只有来源于动物的蛋白质、人血清白蛋白和明胶作为存在于药物组合物中的肉毒毒素的合适稳定剂具有实用性。因此，已知白蛋白本身或与一种或多种附加物质(例如磷酸钠或拧檬酸钠)一起可以在A型肉毒毒素冻干后恢复较高的毒性。不幸的是，如前文中已提到的，作为一种混合的血制品，人血清白蛋白在用于药物组合物中时会(至少潜在地会)携带引发传染或疾病的因素。事实上，任何动物制品或蛋白质(例如人血清白蛋白或明胶)在注射入患者时都可能潜在地含有致热源或其他会引起不利反应的物质。因此，需要的是一种梭菌毒素药物组合物，其中的梭菌毒素(例如肉毒毒素)被一种非蛋白赋形剂稳定。
发明内容本发明满足了这种需求并提供了一种由非蛋白赋形剂稳定的肉毒毒素药物组合物。定义下面提到的用于本文中的词语或术语具有以下定义。"约"是指用其定义的项目、参数或术语包括所述的项目、参数或术语之上或之下增加或减少10%的范围。"给药(administration)"或"给药(toadminister)，，是指向受试者供给(即给予)药物组合物的步骤。本文中公开的药物组合物是通过例如肌内给药(i.m.)、真皮内给药、皮下给药、鞘内给药、腹膜内(i.p.)给药、局部(经皮)给药和植入(即緩释装置例如聚合植入物或微型渗透泵的植入)给药方式"局部给药"。"不含动物蛋白，，是指不存在来源于血液的、混合血液的(bloodpooled)和其他来源于动物的制品或化合物。"动物"是指哺乳动物(例如人类)、鸟类、爬行动物、鱼类、昆虫、蜘蛛或其他动物物种。"动物"排除了微生物，例如细菌。因此，本发明范围中的不含动物蛋白的药物组合物中可以含有梭菌神经毒素。例如，不含动物蛋白的药物组合物是指大体上不含、基本上不含或完全不含来源于血清的白蛋白、明胶和其他动物来源的蛋白质例如免疫球蛋白的药物组合物。不含动物蛋白的药物组合物的一个例子是包括肉毒毒素(作为活性成分)和适合的作为稳定剂或赋形剂的多糖的药物组合物或由上述两者组成的药物组合物。"肉毒毒素"是指由肉毒梭菌产生的神经毒素和由非梭菌菌种由重组的方式产生的肉毒毒素(或其重链或轻链)。本文中使用的短语"肉毒毒素"包括肉毒毒素血清型A、B、C、D、E、F和G。本文中使用的肉毒毒素还包括肉毒毒素复合物(即300、600和900kD的复合物)和纯化的肉毒毒素(即约150kD)。"纯化的肉毒毒素，，的定义是与包括形成肉毒毒素复合物的蛋白质在内的其他蛋白质相分离或大体相分离的肉毒毒素。纯化的肉毒毒素纯度可高于95%，优选高于99%。肉毒C2和C3细胞毒素不是神经毒素，被排除在本发明的范围之外。"梭菌神经毒素"是指由例如肉毒梭菌(C/oymV/咖60"///7M7)、酪酸梭杆菌(6"0^r/c"yz7)或巴氏梭菌(6Vo""V/咖^era〃/)之类的梭菌产生的或天然存在其中的神经毒素，以及由非梭菌菌种以重组的方式产生的梭菌神经毒素。"完全不含"(即术语"由......组成")是指在所使用的仪器和方法的检测范围内，物质不能被检测到或不能确定其存在。"基本不含"(或"基本由......组成")是指只能检测到痕量的物质。"修饰的肉毒毒素，，是指这样一种肉毒毒素，与天然的肉毒毒素相比，它的氨基酸中的至少一个缺失、被修饰或置换。此外，修饰的肉毒毒素可以是由重组的方式生产的神经毒素，或由重组的方式生产出的神经毒素的衍生物或片段。修饰的肉毒毒素保留了天然肉毒毒素的至少一种生物活性，例如，与肉毒毒素受体结合的能力，或是抑制从神经元中释放神经递质的能力。修饰的肉毒毒素的一个例子是这样一种肉毒毒素它具有来源于一种肉毒毒素血清型(例如血清型A)的轻链和来源于不同肉毒毒素血清型(例如血清型B)的重链。修饰的肉毒毒素的另一个例子是与神经递质(例如P物质)偶联的肉毒毒素。"药物组合物"是指一种制剂，其中的活性成分可以是梭菌神经毒素，例如肉毒毒素。词语"制剂"是指在药物组合物中除了梭菌神经毒素活性成分以外至少还有一种另外的成分。因此，药物组合物是适用于向受试者(例如病人)诊断或治疗给药(即通过肌内注射或皮下注射或通过插入补给物或植入物)的制剂。所述的药物组合物可以是如下形式冻干或真空干燥的状态；用盐水或水复水冻干或真空干燥的药物组合物后形成的溶液；或不需要复水的溶液。神经毒素活性成分可以是肉毒毒素血清型A、B、d、D、E、F或G中的一种或者是破伤风毒素，所有这些都可由梭菌天然产生。如所述的，药物组合物可以是液体或固体，例如真空干燥的固体。药物组合物的组成成分可以被包括在单一的组合物中(即除了任何所需的复水液体外，全部的组成成分在药物组合物的初始化合时就已存在)，或是作为两组分体系，例如用稀释剂(例如盐水)复水真空干燥的组合物，该稀释剂中含有不存在于药物组合物的原始化合过程中的成分。两组分体系提供的优点在于允许加入一些成分，这些成分不能与两组分体系的第一组分在足够长保质期内共存。例如，复水用的载体或稀释剂可含有防腐剂，它在使用期间内，例如在一星期的冷藏期内能提供足够的抑制微生物生长的保护，但它不存在于两年的冷冻期内，因为在此期间内它可能会使毒素降解。其他可能不能与梭菌毒素或其他成分长期共存的成分也可通过这种方式加入；即在即将使用的时候被加入第二载体(即复水液体)。"稳定剂"(或"主要稳定剂，，)是一种帮助保存或维持蛋白质(例如梭菌神经毒素，例如肉毒毒素)的生物结构(即三维构象)和/或生物活性的化学试剂。本文中使用的稳定剂是非蛋白质。主要稳定剂可以是一种合成的试剂，它不会在接受含有该主要稳定剂的组合物的受试者体内产生免疫原性应答(或产生一种减弱的免疫反应)。药物组合物中还可含有附加的稳定剂。这些附加的稳定剂或次要稳定剂可以单独使用或与主要稳定剂结合使用。次要稳定剂的例子包括但不限于非氧化的氨基酸衍生物(例如色氨酸衍生物，例如N-乙酰基-色氨酸("NAT"))、辛酸盐(即辛酸钠)、聚山梨醇酯(即P80)、氨基酸和例如锌离子的二价金属阳离子。药物组合物还可包括防腐剂，例如苯曱醇、苯曱酸、苯酚、对羟基苯曱酸酯和山梨酸。"使稳定(stabilizing)"、"使稳定(stabilizes)"或"稳定性(stabilization)"是指在使药物活性成分("PAI")稳定或向PAI提供稳定性的化合物的存在下，PAI保留了至少20%并最高达100%的生物活性(可通过体内LDs。或ED5。测量测得的效力或毒性评估)。在以下情况下，存在于复水的药物组合物或药物组合物水溶液中的肉毒毒素(在使PAI稳定或向PAI提供稳定性的化合物的存在下)具有生物活性肉毒毒素被加入药物组合物前所具有的效力或毒性的约20%以上且最高达约100%的效力或毒性，这些情况例如(l)从本体溶液或储存溶液制备系列稀释液时，或(2)当用盐水或水复水冻干的或真空干燥的含有肉毒毒素的药物组合物时，该药物组合物在约-2。C或-2'C以下储存了约6个月至4年，或(3)对于在约2'C至约8r下储存了6个月至4年的含有肉毒毒素的药物组合物的水溶液。"基本不含"是指以低于药物组合物重量的1%的水平存在。"治疗用制剂，，是指一种可用于治疗并由此减轻障碍或疾病，例如以外周肌肉的机能亢进(即痉挛状态)为特征的障碍或疾病的制剂。肉毒毒素可以是肉毒毒素复合物形式(即约300kD至约900kD的复合物形式，复合物的大小依赖于具体的肉毒毒素血清型)，或肉毒毒素可以是纯的或纯化的肉毒毒素形式(即约150kD的肉毒毒素分子形式)。本文中公开的药物组合物在复水或注射时的pH值介于约5至7.3之间。本发明的实施可使用含有A型肉毒毒素的组合物。在本发明其他的实施方案中，实施前述的方法时可4吏用含有B型肉毒毒素的组合物。在本发明另外的实施方案中，实施本发明时可使用含有多种肉毒毒素血清型例如选自肉毒毒素血清型A、B、d、D、E、F和G的肉毒毒素血清型的组合物。在本发明的某些实施方案中可使用纯化的肉毒毒素。在其他实施方案中可使用修饰的肉毒毒素。在本发明另外的实施方案中，前述的方法中使用的组合物可通过肌内方式向患者给药。在其他实施方案中，该组合物可通过皮下和/或鞘内给药。本发明包括一种药物组合物，该药物组合物包括(或由其组成或基本由其组成)肉毒毒素和聚乙烯吡咯烷酮。所述肉毒毒素是具有生物活性的肉毒毒素，并且所述肉毒毒素选自肉毒毒素A、B、C、D、E、F和G型。优选地，所述肉毒毒素为A型肉毒毒素。存在于药物组合物中的聚乙烯吡咯烷酮的功能就是使肉毒毒素稳定。本发明还包括一种药物组合物，该药物组合物包括(或由其组成或基本由其组成)肉毒毒素，以及每约IOO单位的肉毒毒素约5克至约20克的聚乙烯吡咯烷酮。本发明还包括一种药物组合物，该药物组合物包括(或由其组成或基本由其组成)肉毒毒素和聚乙烯吡咯烷酮，其中该肉毒毒素不是由蛋白质赋形剂稳定的，并且其中该肉毒毒素的效力至少为其理论最大效力的约40%。本发明还包括一种药物组合物，该药物组合物包括(或由其组成或基本由其组成)肉毒毒素和聚乙烯吡咯烷酮，其中该肉毒毒素不是由蛋白质赋形剂稳定的，并且其中该肉毒毒素的效力至少为其理论最大效力的约50%。本发明还包括一种药物组合物，该药物组合物包括(或由其组成或基本由其组成)肉毒毒素、聚乙烯吡咯烷酮和二糖，其中该肉毒毒素不是由蛋白质赋形剂稳定的，并且其中该肉毒毒素的效力至少为其理论最大效力的约40°/。。本发明还包括一种药物组合物，该药物组合物包括(或由其组成或基本由其组成)肉毒毒素、聚乙烯吡咯烷酮和二糖，其中该肉毒毒素不是由蛋白质赋形剂稳定的，并且其中该肉毒毒素的效力至少为其理论最大效力的约50%。本发明还包括一种药物组合物，该药物组合物包括(或由其组成或基本由其组成)肉毒毒素、聚乙烯吡咯烷酮和二糖，其中该肉毒毒素不是由蛋白质赋形剂稳定的，并且其中该肉毒毒素的效力至少为其理论最大效力的约60%。本发明还包括一种药物组合物，该药物组合物包括(或由其组成或基本由其组成)肉毒毒素、聚乙烯吡咯烷酮和二糖，其中该肉毒毒素不是由蛋白质赋形剂稳定的，并且其中该肉毒毒素的效力至少为其理论最大效力的约70%。本发明还包括一种药物组合物，该药物组合物包括(或由其组成或基本由其组成)肉毒毒素、聚乙烯吡咯烷酮和聚乙二醇，其中该肉毒毒素不是由蛋白质赋形剂稳定的，并且其中该肉毒毒素的效力至少为其理论最大效力的约40%。本发明还包括一种药物组合物，该药物组合物包括(或由其组成或基本由其组成)肉毒毒素，其中该肉毒毒素不是由蛋白质赋形剂稳定的；选自第一种单糖、第一种二糖、第一种三糖和由第一种单糖还原所得的第一种醇的化合物；以及选自聚乙二醇、第二种单糖、第二种二糖、第二种三糖、金属、第二种醇和氨基酸的化合物，其中所述第二种单糖、所述第二种二糖和所述第二种三糖分别不同于所述第一种单糖、所述第一种二糖和所述第一种三糖，其中该肉毒毒素的效力至少为其理论最大效力的约40%。本发明还包括一种药物组合物，该药物组合物包括(或由其组成或基本由其组成)肉毒毒素，其中该肉毒毒素不是由蛋白质赋形剂稳定的；聚乙二醇；以及选自单糖、二糖、三糖、金属、醇和氨基酸的化合物；其中该肉毒毒素的效力至少为其理论最大效力的约20°/。本发明还包括一种药物组合物，该药物组合物包括(或由其组成或基本由其组成)肉毒毒素，其中该肉毒毒素不是由蛋白质赋形剂稳定的；聚乙二醇；以及选自单糖、二糖、三糖、金属、醇和氨基酸的化合物；其中该肉毒毒素的效力至少为其理论最大效力的约30%。本发明还包括一种药物组合物，该药物组合物包括(或由其组成或基本由其组成)肉毒毒素，其中该肉毒毒素不是由蛋白质赋形剂稳定的；聚乙二醇；以及选自单糖、二糖、三糖、金属、醇和氨基酸的化合物；其中该肉毒毒素的效力至少为其理论最大效力的约40%。本发明还包括一种药物组合物，该药物组合物包括(或由其组成或基本由其组成)肉毒毒素，其中该肉毒毒素不是由蛋白质赋形剂稳定的；聚乙二醇；以及选自单糖、二糖、三糖、金属、醇和氨基酸的化合物；其中该肉毒毒素的效力至少为其理论最大效力的约50%。本发明还包括一种药物组合物，该药物组合物包括(或由其组成或基本由其组成)肉毒毒素，其中该肉毒毒素不是由蛋白质赋形剂稳定的；聚乙二醇；以及选自单糖、二糖、三糖、金属、醇和氨基酸的化合物；其中该肉毒毒素的效力至少为其理论最大效力的约60%。本发明还包括一种药物组合物，该药物组合物包括(或由其组成或基本由其组成)肉毒毒素，其中该肉毒毒素不是由蛋白质赋形剂稳定的；聚乙二醇；以及选自单糖、二糖、三糖、金属、醇和氨基酸的化合物；其中该肉毒毒素的效力至少为其理论最大效力的约70%。具体实施例方式本发明基于以下发现，即含有被稳定的梭菌毒素的梭菌毒素药物组合物可通过使用非蛋白赋形剂作为梭菌毒素的主要稳定剂制备。本发明人发现梭菌毒素药物组合物中的蛋白质赋形剂(例如白蛋白或明胶)的适合替代物可以是非蛋白化合物。本发明中使用的非蛋白赋形剂可通过以下方式赋予存在于药物组合物中的神经毒素活性成分例如肉毒毒素稳定性(1)降低肉毒毒素与表面(例如实验玻璃器皿、导管的表面)、复水药物组合物的药水瓶和用于注射药物组合物的注射器的内表面之间的粘着力(通常被称为"粘性")。肉毒毒素对表面的粘着力会导致肉毒毒素损失和剩余肉毒毒素的变性，两者都会降低存在于药物组合物中的肉毒毒素的毒性。(2)减少肉毒毒素的变性和/或肉毒毒素从存在于肉毒毒素复合物中的其他非毒素蛋白质上的解离，这种变性和/或解离活性的出现是由于存在于药物组合物(即冻干或真空干燥前)和复水的药物组合物中的肉毒毒素的低稀释度。(3)降低肉毒毒素在pH和浓度显著改变时的损失(即由于变性或与复合物中的非毒素蛋白质解离所致)，所述pH和浓度的显著改变会在药物组合物的制备、加工和复水时发生。由本文中公开的非蛋白稳定剂提供的三类肉毒毒素的稳定作用在药物组合物的注射前保存和维持了肉毒毒素的天然毒性。在本发明的某些实施方案中，本发明的药物组合物可包括多种肉毒毒素血清型。也就是说，该组合物可含有两种或多种不同的肉毒毒素血清型。例如，一种组合物可含有肉毒毒素血清型A和B。在另一实施方案中，一种组合物可包括肉毒毒素血清型A和E。使用肉毒毒素血清型的组合可以允许护理人员根据待治疗的状况定制方案以达到所需效果。在本发明附加的实施方案中，该组合物可包括修饰的肉毒毒素。修饰的肉毒毒素优选地抑制神经递质从神经元的释放，但可能比天然的肉毒毒素有更强或更弱的效力，或者可能比天然的肉毒毒素有更强或更弱的生物学作用。由于本发明的组合物可用于对动物进行相对长期的治疗，所以该组合物可以较纯的形式提供。在一个实施方案中，该组合物是药用级。在某些实施方案中，梭菌毒素的纯度高于95%。在附加的实施方案中，梭菌毒素的纯度高于99%。本发明还包括向稀释剂或制剂自身中加入防腐剂，以获得更长的储存期。优选的防腐剂为含苯曱醇的防腐盐水。本发明的药物组合物可使用常规的给药模式给药。在本发明的优选实施方案中，该组合物通过肌内注射或皮下注射给予受试者。在其他实施方案中，本发明的组合物可通过鞘内给药。此外，本发明的组合物可以和一种或多种止痛剂或麻醉剂一起给药。本发明组合物的最有效的给药方式和给药方案依赖于待治疗病症的类型、严重程度和病因，动物的健康状况及对治疗的响应情况，以及主治医生的判断。因此，应调整所述方法和组合物的剂量以适合个体受试者。通过举例的方式，而不是限制的方式，优选通过肌内方式给予本发明的组合物，以减少肌肉痉挛。本发明还包括一种含有肉毒毒素和胶原、用于治疗多种病症的药物组合物，其中肉毒毒素的作用是使肌肉麻痹，胶原的作用是提供一种皮肤填充物。含有其他肉毒毒素血清型的组合物可含有不同剂量的肉毒毒素。例如，组合物提供的B型肉毒毒素的剂量可大于组合物中含有的A型肉毒毒素的剂量。在本发明的一个实施方案中，B型肉毒毒素的给药量在约1U/kg至150U/kg之间。B型肉毒毒素的给药量还可最高达20，000U(如上文中所述的针对小鼠的单位)。在本发明的另一实施方案中，E型或F型肉毒毒素的给药量浓度约为0.1U/kg至150U/kg之间。此外，在含有多于一种类型的肉毒毒素的组合物中，所提供的每种类型肉毒毒素的剂量可比单一肉毒毒素血清型通常所使用中的剂量相对较少。那么肉毒毒素血清型的组合可提供适合程度和持续时长的麻痹作用，但不会增加神经毒素的扩散(例如，见美国专利No.6,087，327)。实施例如下的实施例提出了本发明的具体实施方案，但不是要限制本发明的范围。在以下的实施例中，使用公知的小鼠半数致死剂量测定法("MLD50"测定法)确定肉毒毒素的效力。根据情况的不同，"效力"可以指肉毒毒素恢复的效力或者肉毒毒素冻干前的效力。恢复的效力是复水效力、恢复效力和复水时效力的同义词。MLD50测定法提供了确定肉毒毒素效力的方法(以其小鼠半数致死剂量或"LD50，，衡量)。因此，一单位(U)的肉毒毒素被定义为腹膜内注射时杀死一组雌性SwissWeber小鼠的50°/。(即LD5)的肉毒毒素的量，这些小鼠在检测开始时每只重17-22克。MLD50测定法是测量复水的肉毒毒素或者复水的肉毒毒素制剂的效力的有效方法。每只小鼠保持仰卧姿势且头部向下倾斜，并向其右下腹部以约30度角的方向腹膜内注射几种肉毒毒素的系列稀释液(用生理盐水稀释)中的一种，注射时使用25至27号，3/8"至5/8"的针头。在接下来的72小时内记录每种稀释液引起的死亡率。至少应制备六种1.33剂量间隔的稀释液，并且通常每个剂量组使用十只动物(因此采用60只小鼠)。同时进行两种参照标准实验(采用另外60只小鼠)。配制稀释液，使得最浓的稀释液在被注射的小鼠中产生至少80%的死亡率，最稀的稀释液在被注射的小鼠中产生不高于20%的死亡率。至少应有四种稀释液落入死亡率的单调递减区间中。单调递减区间以不低于80%的死亡率开始。在四种或更多的单调递减的死亡率中，最大的两个死亡率和最小的两个死亡率必须是递减的(即不相等的)。在注射后三天的观察期内有50%小鼠死亡的稀释液被定义为含有1单位(1U)肉毒毒素的稀释液。已开发出优化的MLD50测定法，该测定法使用较少(五种而不是六种)的稀释液(1.15剂量间隔)，并且每种被测稀释液使用较少(六只而不是十只)的小鼠。实施例1含有人血清白蛋白的肉毒毒素药物组合物(现有技术)从肉毒梭菌Hall林的培养物中得到A型肉毒毒素复合物，所述的肉毒梭菌Hall抹生长在含有N-Z胺和酵母提取物的培养基中。A型肉毒复合物经一系列酸沉淀从培养物溶液中纯化成结晶型复合物，该复合物由高分子量的活性毒素蛋白和结合的血凝素蛋白组成。然后将该结晶型复合物在含有盐水和白蛋白的溶液中复水，并在真空干燥前过滤除菌(0.2微米)。注射前将真空干燥的组合物用无菌、无防腐剂的盐水复水。每瓶真空干燥的组合物含有约IOO单位(U)的A型肉毒梭菌毒素复合物、0.5毫克人血清白蛋白和0.9毫克氯化钠，为无菌真空干燥形式，不含防腐剂。这种药物组合物以商品名B0TW^在市场上出售，每瓶IOO单位，注射前用盐水复水。实施例2非蛋白稳定的肉毒毒素制剂使用一种或多种不同的非蛋白稳定赋形剂进行实验来制备多种肉毒毒素制剂。所有制剂都以同样的方法化合、冻干、复水并测定效力，并在每种制剂中使用相同类型的肉毒毒素，所不同的是(expectthat)，每种制剂由一种或多种不同的非蛋白赋形剂制备，或者由存在于肉毒毒素制剂中的不同量的一种或多种非蛋白赋形剂制备。这些实验中制得的制剂中(单独或联合)使用的非蛋白赋形剂包括聚乙烯吡咯烷酮(也被称为聚维酮，例如Kollidon17)、各种二糖(例如乳糖和海藻糖)、三糖(例如棉子糖)、多糖(例如菊糖)、醇(例如通过还原单糖〔例如果糖〕所得的醇，或者甘露醇)、金属(例如锌)、氨基酸(例如甘氨酸)以及聚乙二醇(例如poloxamer188和/或PEG3350)。由于蛋白质是聚氨基酸，所以在本文提出的制剂中使用一种或多种单个的氨基酸不会向这些制剂中引入蛋白质赋形剂。该实施例中公开的制剂是通过如下步骤来制备的，首先向注射用灭菌水中加入指定量的一种或多种非蛋白赋形剂来形成溶液。然后向该溶液中加入100至200单位的A型肉毒毒素复合物(所述A型肉毒毒素复合物通过厌氧发酵肉毒梭菌Hall抹，随后纯化释放至和取自发酵培养基中的肉毒毒素来获得，例如，参见上述实施例1和SchantzE.J.等人，/ewrofd//7^/z/ed/c/zze,MicrobiolRev1992Mar;56(1):80—99)，由此形成肉毒毒素制剂，也可用同义词称为肉毒毒素药物组合物，或简称为制剂。所使用的肉毒毒素在冻干前的效力由小鼠LD50测定法确定，然后向溶液中加入肉毒毒素，并且为IOO单位至200单位之间。然后将该制剂冻干(或冷冻干燥或真空干燥)，并随后用生理盐水复水。存在于复水制剂中的肉毒毒素的恢复效力也由相同的小鼠LD50测定法确定。表1至表5中"恢复％"是指复水后的肉毒毒素的效力(因此也称为"恢复效力")，表示为冻干前的制剂中肉毒毒素效力的百分比。因此，例如，恢复％为60%时即表示复水后的肉毒毒素的效力占冻干前的肉毒毒素效力的6oy。。理论上恢复效力的最大值是i00。/。。恢复值％通过立即复水冻干后的制剂获得。表1至6给出了本实施例中进行的实验的结果，本实施例中的制剂如上述的方法制备。表l具有单一非蛋白赋形剂且无恢复效力的肉毒毒素制剂<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>赋形剂量(mg)恢复％1.Kollidon175482.薩don1710523.Kollidon1720394.乳酸10155-乳酸5035表3具有两种非蛋白赋形剂且无恢复效力的肉毒毒素制剂量l(mg)量2(rag)恢复%0.50.50500.50100500.50.50500.500.55010050500.0000050500.00000505500505055005010500.105105050.050505.50050500505055005010500.10510505005050550015001500.1500赋形剂l1.麵don172.Ko"idon173.Kollidon17—4.Kollidon175-Kollidon176.Kollidon177.Kollidon178.蔗糖19.蔗糖20-蔗糖21-蔗糖22.蔗糖23.蔗糖24.蔗糖25-蔗糖26.蔗||27.蔗糖28.ZnCI29.ZnCI30.ZnCIZnCIPEG3350蔗糖蔗糖ZnCIZnCIZnCI海藻糖海藻糖海藻糖甘氨酸甘氨酸甘氨酸ZnCIZnCIZnCI海藻糖海藻糖海藻糖甘氨酸甘氨酸甘氨酸醇醇醇醇、ir醇醇醇醇醇露露露露露露露露露露甘甘甘甘甘甘甘甘甘甘91111111112^酸酸酸糖糖糖糖a赋乳乳乳蔗蔗蔗蔗_5<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>23.蔗糖甘露醇50502424-甘露8|PEG335050502625.甘露醉PEG33505053026.甘露醇蔗糖505029Poloxamsr27.甘露醇188505033Poloxamer28.甘露醇18850、35Poloxamer29.甘露醇18855030PolOX3ITl6r30.蔗糖188505059Poloxamsr31.處糖1885054332.蔗糖Poloxamer1885505533.蔗糖PEG335050504434.蔗糖PEG33505054135.蔗糖PEG33505503536.Poloxamer18837.PEG335038.Poloxamer188的.Poloxamer18840.Poloxamer18841.Poloxamer18842.Poloxsmer18843.海藻糖44-海藻糖PEG3350PEG33505055504136表5示出使用肉毒毒素制剂的实验的结果，所述肉毒毒素制剂含有两种非蛋白赋形剂，具有或没有特定緩冲剂。在以下时间测量肉毒毒素的效力(l)冻干后立即复水("初始效力")，以及；(2)冻干后，在两种不同储存条件(-40。C或20°C)的一种条件下储存三个月后复水。表5的结果表明，除非用柠檬酸盐緩冲液配制，否则含有PVP非蛋白赋形剂的肉毒毒素药物组合物不具有显著的室温稳定性。本发明人发现即使在相同的pH值下，磷酸盐緩冲液也不能向这种制剂提供所需室温稳定性。表5含有两种非蛋白赋形剂的肉毒毒素制剂<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>表6示出使用肉毒毒素制剂的实验的结果，所述肉毒毒素制剂含有三种非蛋白赋形剂、具有或没有特定緩冲剂。肉毒毒素的效力在冻干后立即复水测定("初始效力")。表6的结果表明，肉毒毒素药物组合物可通过在同一制剂中使用三种非蛋白赋形剂来稳定，并且在制剂中使用柠檬酸盐緩冲剂改善初始效力。还制备了由其他三种不同的非蛋白赋形剂稳定的肉毒毒素药物组合物，并且恢复的效力很显著。表6含有三种非蛋白赋形剂的肉毒毒素制剂<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>10mM柠檬酸盐(pH5.5)由这些实验中得到的发现如下1.使用特定浓度的单一非蛋白赋形剂一聚乙烯吡咯烷酮(例如Kollidon17)—制备的肉毒毒素制剂未能显示出恢复的效力(见表1的1-4行)。2.使用不同的特定浓度的单一非蛋白赋形剂一聚乙烯吡咯烷酮(例如Kol1idon17)—制备的肉毒毒素制剂能显示出39%至52%的恢复效力(见表2的1-3行)。根据上述第1条，这一点是令人惊奇和意想不到的发现。3.使用两种不同的非蛋白赋形剂一其中一种非蛋白赋形剂是聚乙烯吡咯烷酮(例如Kollidon17)—制备的肉毒毒素制剂未能显示出恢复的效力(见表3的l-7行)。4.使用两种不同的非蛋白赋形剂一其中一种非蛋白赋形剂是聚乙烯吡咯烷酮(例如Kollidon17)—制备的肉毒毒素制剂能显示出高达65%的恢复效力(见表4的1-18行)。根据上述第l和第3条，这一点是令人惊奇和意想不到的发现。5.使用特定浓度的单一非蛋白赋形剂一二糖(例如乳糖)一制备的肉毒毒素制剂未能显示出恢复的效力(见表1的第5行)。6.使用不同的特定浓度的单一非蛋白赋形剂一二糖(例如乳糖)一制备的肉毒毒素制剂能显示出15%至35%的恢复效力(见表2的4-5行)。根据上述第5条，这一点是令人惊奇和意想不到的发现。7.使用两种不同的非蛋白赋形剂一其中一种非蛋白赋形剂是二糖(例如乳糖)一制备的肉毒毒素制剂未能显示出恢复的效力(见表3的1-3行)。8.使用两种不同的非蛋白赋形剂一其中一种非蛋白赋形剂是二糖(例如乳糖)一制备的肉毒毒素制剂能显示出高达65%的恢复效力(见表4的1-8行和19-22行)。根据上述第5和第7条，这一点是令人惊奇和意想不到的发现。9.使用单一非蛋白赋形剂一二糖(例如蔗糖)一制备的肉毒毒素制剂未能显示出恢复的效力(见表1的第6-10行)。10.使用两种不同的非蛋白赋形剂一其中一种非蛋白赋形剂是二糖(例如蔗糖)一制备的肉毒毒素制剂未能显示出恢复的效力(见表3的第4-8、11-12和19-27行)。11.使用两种不同的非蛋白赋形剂一其中一种非蛋白赋形剂是二糖(例如蔗糖)一制备的肉毒毒素制剂能显示出高达59%的恢复效力(见表4的9-17、20、23、26和30-354亍)。根据上述第9和10条，这一点是令人惊奇和意想不到的发现。12.使用单一的非蛋白赋形剂一氨基酸(例如甘氨酸)一制备的肉毒毒素制剂未能显示出恢复的效力(见表l的第ll-13行)。13.使用两种不同的非蛋白赋形剂一其中一种非蛋白赋形剂是氨基酸(例如甘氨酸)_制备的肉毒毒素制剂未能显示出恢复的效力(见表3的第19-21、28-30、38、42-44和46-48行)。14.使用不同特定浓度的两种不同非蛋白赋形剂一其中一种非蛋白赋形剂是氨基酸(例如甘氨酸)一制备的肉毒毒素制剂能显示出高达33%的恢复效力(见表4的第38-39行)。根据上述第12-13条，这一点是令人惊奇和意想不到的发现。15.使用单一的非蛋白赋形剂一金属(例如锌)一制备的肉毒毒素制剂未能显示出恢复的效力(见表l的第14-16行)。16.使用两种不同的非蛋白赋形剂一其中一种非蛋白赋形剂是金属(例如锌)_制备的肉毒毒素制剂未能显示出恢复的效力(见表3的第8-9、13-15、22-24和28-37行)。17.使用不同的特定浓度的两种不同的非蛋白赋形剂一其中一种非蛋白赋形剂是金属(例如锌)一制备的肉毒毒素制剂能显示出高达38。/。的恢复效力(见表4的第21和36-37行)。根据上述15-16条，这一点是令人惊奇和意想不到的发现。18.使用单一的非蛋白赋形剂一醇(例如甘露醇)一制备的肉毒毒素制剂未能显示出恢复的效力(见表l的第17-19行)。19.使用两种不同的非蛋白赋形剂一其中一种非蛋白赋形剂是醇(例如甘露醇)一制备的肉毒毒素制剂未能显示出恢复的效力(见表3的第9_18行)。20.使用不同的特定浓度的两种不同的非蛋白赋形剂一其中一种非蛋白赋形剂是醇(例如甘露醇)一制备的肉毒毒素制剂能显示出高达35%的恢复效力(见表4的第22-29行)。根据上述第17-18条，这一点是令人惊奇和意想不到的发现。21.使用单一的非蛋白赋形剂一二糖(例如海藻糖)一制备的肉毒毒素制剂未能显示出恢复的效力(见表l的第23-25行)。22.使用两种不同的非蛋白赋形剂一其中一种非蛋白赋形剂是二糖(例如海藻糖)_制备的肉毒毒素制剂未能显示出恢复的效力(见表3的第16-18、25-27、33-35和42-45行)。23.使用不同特定浓度的两种不同的非蛋白赋形剂一其中一种非蛋白赋形剂是二糖(例如海藻糖)一制备的肉毒毒素制剂能显示出高达75°/的恢复效力(见表4的第40-44行)。根据上述第21-22条，这一点是令人惊奇和意想不到的发现。24.使用单一的非蛋白赋形剂一聚乙二醇(例如PEG3350或poloxamer188)—制备的肉毒毒素制剂未能显示出恢复的效力(见表l的第29-30行)。25.使用两种不同的非蛋白赋形剂一其中一种非蛋白赋形剂是聚乙二醇(例如PEG3350或poloxamer188)—制备的肉毒毒素制剂未能显示出恢复的效力(见表3的第10、31-32、36-41和45-48行)。26.使用不同的特定浓度的两种不同的非蛋白赋形剂一其中一种非蛋白赋形剂是聚乙二醇(例如PEG3350或poloxamer188)—制备的肉毒毒素制剂能显示出高达75%的恢复效力(见表4的第18-19、24-25和27-44行)。才艮据上述的第24-25条，这一点是令人惊奇和意想不到的发现。27.当非蛋白稳定剂乳糖和聚乙烯吡咯烷酮("PVP")(即Kollidon17)用作存在于肉毒毒素药物组合物中的肉毒毒素的非蛋白稳定剂时，它们各自提供了显著的恢复效力(见表2)。28.当乳糖和PVP都被用作同一肉毒毒素药物组合物的非蛋白稳定剂时，与乳糖和PVP分别用作非蛋白稳定剂时观察到的恢复的效力相比，恢复的效力有所增加(例如，见表4第1-8行)。29.当将乳糖和/或PVP与一种或多种其他上述的的非蛋白赋形剂一起使用时，(存在于复水的肉毒毒素药物组合物中的肉毒毒素的)恢复的效力有所提高(分别见表4中第19-22行和表4中的第9-18行)。30.即使在这其中的每一种非蛋白赋形剂单独用作肉毒毒素药物组合物中的肉毒毒素的非蛋白稳定剂时不能获得恢复效力的情况下，赋形剂(作为存在于复水的肉毒毒素药物组合物中的肉毒毒素的非蛋白稳定剂时)的某些组合的使用也会提供显著的恢复效力，例如，比较(1)表1第1-4行以及表1第6-10行与表4第9-17行；以及(2)表1第23-25行以及表1第29行与表4第43-44行。31.恢复效力有时取决于存在于肉毒毒素药物组合物中的非蛋白稳定剂的浓度。32.加入緩冲剂可增加恢复效力和储存的稳定性。每种稳定剂产生这种效果的能力不同。緩冲剂的作用是获得最佳的pH，维持最佳的pH，以及在一些情况下(例如柠檬酸盐)防止氧化。从这些实验中得出的普遍结论包括以下观察结果(a)存在于肉毒毒素药物组合物中的肉毒毒素可通过将该组合物与两种或多种常见的非蛋白赋形剂一起配制而稳定(且显示出具有良好的恢复效力)。(b)在不存在任何其他非蛋白稳定剂的情况下，聚乙烯吡咯烷酮(例如K0llid0nl7)和二糖(例如乳糖)可作为肉毒毒素制剂中的非蛋白稳定剂(赋形剂)起作用。(c)使用一种或多种相同的非蛋白稳定剂时，恢复的效力可取决于肉毒毒素制剂中所使用的一种或多种非蛋白稳定剂的比例和/或浓度。(d)某些非蛋白稳定剂(例如聚乙烯吡咯烷酮〔例如Kollidon17〕和二糖〔例如乳糖〕)一起使用时，不仅可使肉毒毒素制剂中的肉毒毒素稳定，还可提供增强的稳定性，这可由复水制剂的更高的恢复效力确定。(e)普遍使用的药物赋形剂(例如聚乙烯吡咯烷酮、乳糖、蔗糖等)在用作稳定剂时不起作用，或以特定浓度使用时，仅仅作为非蛋白肉毒毒素制剂中的肉毒毒素的稳定剂。聚乙烯吡咯烷酮(例如Kollidon17)和二糖(例如乳糖)。(f)当许多赋形剂与聚乙烯吡咯烷酮(例如Kollidon17)或二糖(例如乳糖)结合时，它们起作用或者作为非蛋白肉毒毒素制剂中的肉毒毒素的更好稳定剂起作用。(g)虽然特定的PVP"Kollidon17"被用于所制备的多种肉毒毒素制剂中，但其他PVP也在本发明的范围之内。(h)虽然特定的poloxamer"poloxamer188"^皮用于所制备的多种肉毒毒素制剂中，但其他poloxamer也在本发明的范围之内。(i)已发现表面活性剂聚山梨醇酯(吐温)替代poloxamerl88使用，并具有相似的结果。可用于本发明范围内的肉毒毒素药物组合物的其他非蛋白赋形剂包括抗氧化剂，例如丁化羟基曱苯(BHT)和丁基化羟基苯曱醚(BHA)，以及氨基酸，例如半胱氨酸和曱硫氨酸。冻干的肉毒毒素制剂可用盐水、水或常规的稀释剂复水以在复水或者注射后影响性能。实施例3肉毒毒素药物组合物的用途一位48岁的男性被诊断患有肌肉痉挛病症，例如颈部肌力障碍(cervicaldystonia)。将约10—3U/kg至约35U/kg的含有乳糖和PVP的A型肉毒毒素药物组合物制剂通过肌内注射给患者。在1-7天内肌肉痉挛病症的症状得到緩解，并且症状的緩解可持续至少约2个月至约6个月。本文中公开的本发明药物组合物具有很多优点，包括以下1.制备得到的药物组合物不含有任何血制品例如白蛋白，因此不含有任何血制品的感染成分，例如朊病毒。2.该药物组合物具有与现有的药物组合物相当的或较之更好的毒素效力的稳定性和高的恢复％。3.降低的毒性，由肌内给药或静脉内给药评估。4.降低的抗原性。本文中引用了多篇出版物、专利和/或参考资料，其内容通过引用完整地纳入本i兌明书。虽然本发明详细地描述了某些优选方法，但是在本发明范围内的其他实施方案、形式和改进也是可行的。例如，各种稳定用多糖和氨基酸也在本发明的范围内。因此，以下斥又利要求的主旨和范围不应^皮限于对上述优选的实施方案的说明之中。权利要求1.一种药物组合物，包括(a)肉毒毒素，以及；(b)聚乙烯吡咯烷酮。2.权利要求1的药物组合物，其中该肉毒毒素是具有生物活性的肉毒毒素。3.权利要求l的药物组合物，其中该肉毒毒素选自A、B、C、D、E、F和G型肉毒毒素。4.权利要求l的药物组合物，其中该肉毒毒素是一种A型肉毒毒素。5.权利要求l的药物组合物，其中所述聚乙烯吡咯烷酮的功能是使肉毒毒素稳定。6.—种药物组合物，包括(a)肉毒毒素，以及；(b)对应于每约IOO单位的所述肉毒毒素有约5克至约20克聚乙烯P比咯烷酮。7.—种药物组合物，包括(a)肉毒毒素，其中该肉毒毒素未被蛋白质赋形剂稳定，以及；(b)聚乙烯吡咯烷酮，其中所述肉毒毒素的效力至少约为所述肉毒毒素理论最大效力的40%。8.权利要求7的药物组合物，其中该肉毒毒素是具有生物活性的肉毒毒素。9.权利要求7的药物组合物，其中该肉毒毒素选自A、B、C、D、E、F和G型肉毒毒素。10.权利要求7的药物组合物，其中该肉毒毒素是A型肉毒毒素。11.权利要求7的药物组合物，其中所述聚乙烯吡咯烷酮的功能是使肉毒毒素稳定。12.—种药物组合物，包括(a)肉毒毒素，其中该肉毒毒素未被蛋白质赋形剂稳定，以及；(b)聚乙烯吡咯烷酮，其中该肉毒毒素的效力至少约为该肉毒毒素理论最大效力的50%。13.—种药物组合物，包括(a)肉毒毒素，其中该肉毒毒素未被蛋白质赋形剂稳定，(b)聚乙烯吡咯烷酮，以及；(c)二糖，其中该肉毒毒素的效力至少约为该肉毒毒素理论最大效力的40%。14.权利要求13的药物组合物，其中该肉毒毒素选自A、B、C、D、E、F和G型肉毒毒素。15.权利要求13的药物组合物，其中该肉毒毒素是A型肉毒毒素。16.—种药物组合物，包括(a)肉毒毒素，其中该肉毒毒素未被蛋白质赋形剂稳定，(b)聚乙烯吡咯烷酮，以及；(c)二糖，其中该肉毒毒素的效力至少约为该肉毒毒素理论最大效力的50%。17.—种药物组合物，包括(a)肉毒毒素，其中该肉毒毒素未被蛋白质赋形剂稳定，(b)聚乙烯吡咯烷酮，以及；(c)二糖，其中该肉毒毒素的效力至少约为该肉毒毒素理论最大效力的60°/。。18.—种药物组合物，包括(a)肉毒毒素，其中该肉毒毒素未被蛋白质赋形剂稳定，(b)聚乙烯吡咯烷酮，以及；(c)二糖，其中该肉毒毒素的效力至少约为该肉毒毒素理论最大效力的70%。19.一种药物组合物，包括(a)肉毒毒素，其中该肉毒毒素未被蛋白质赋形剂稳定，(b)聚乙烯吡咯烷酮，以及；(c)聚乙二醇，其中该肉毒毒素的效力至少约为该肉毒毒素理论最大效力的40%。20.—种药物组合物，包括(a)肉毒毒素，其中该肉毒毒素未被蛋白质赋形剂稳定，(b)选自第一种单糖、第一种二糖、第一种三糖和由所述第一种单糖还原所得的第一种醇的化合物，以及；(c)选自聚乙二醇、第二种单糖、第二种二糖、第二种三糖、金属、第二种醇和氨基酸的化合物，其中所述第二种单糖、所述第二种二糖和所述第二种三糖分别不同于所述第一种单糖、所述第一种二糖和所述第一种三糖，其中该肉毒毒素的效力至少约为该肉毒毒素理论最大效力的40%。21.—种药物组合物，包括(a)肉毒毒素，其中该肉毒毒素未被蛋白质赋形剂稳定，(b)聚乙二醇，以及；(c)选自单糖、二糖、三糖、金属、醇和氨基酸的化合物，其中该肉毒毒素的效力至少约为该肉毒毒素理论最大效力的20%。22.—种药物组合物，包括(a)肉毒毒素，其中该肉毒毒素未被蛋白质赋形剂稳定，(b)聚乙二醇，以及；(c)选自单糖、二糖、三糖、金属、醇和氨基酸的化合物，其中该肉毒毒素的效力至少约为该肉毒毒素理论最大效力的30%。23.—种药物组合物，包括(a)肉毒毒素，其中该肉毒毒素未被蛋白质赋形剂稳定，(b)聚乙二醇，以及；(c)选自单糖、二糖、三糖、金属、醇和氨基酸的化合物，其中该肉毒毒素的效力至少约为该肉毒毒素理论最大效力的40%。24.—种药物组合物，包括(a)肉毒毒素，其中该肉毒毒素未被蛋白质赋形剂稳定，(b)聚乙二醇，以及；(c)选自单糖、二糖、三糖、金属、醇和氨基酸的化合物，其中该肉毒毒素的效力至少约为该肉毒毒素理论最大效力的50%。25.—种药物组合物，包括(a)肉毒毒素，其中该肉毒毒素未被蛋白质赋形剂稳定，(b)聚乙二醇，以及；(c)选自单糖、二糖、三糖、金属、醇和氨基酸的化合物，其中该肉毒毒素的效力至少约为该肉毒毒素理论最大效力的60%。26.—种药物组合物，包括(a)肉毒毒素，其中该肉毒毒素未被蛋白质赋形剂稳定，(b)聚乙二醇，以及；(c)选自单糖、二糖、三糖、金属、醇和氨基酸的化合物，其中该肉毒毒素的效力至少约为该肉毒毒素理论最大效力的70%。全文摘要一种梭菌毒素药物组合物，包括诸如肉毒毒素的梭菌毒素，其中存在于药物组合物中的梭菌毒素被非蛋白赋形剂稳定，所述的赋形剂例如聚乙烯吡咯烷酮、二糖、三糖、多糖、醇、金属、氨基酸、表面活性剂和/或聚乙二醇。文档编号A61K9/00GK101175478SQ200680016404公开日2008年5月7日申请日期2006年10月4日优先权日2005年10月6日发明者T·J·亨特申请人:阿勒根公司