专利名称：：胰岛素样生长因子特异性结合蛋白及其用途的制作方法胰岛素样生长因予特异性结合蛋白及其用途相关申请的交叉I用在某些实施方案中，特异性结合蛋白在异位表达IGF-1R的N1H3T3细胞中抑制IGF-I依赖性IGF-I受体磷酸化的ECso不超过15nM。在某些方面，特异性结合蛋白在异位表达IGF-1R的NIH3T3细胞中抑制IGF-I依赖性IGF-I受体磷酸化的EC5o不超过15nM、不超过10nM或不超过8nM。相比之下，术语"与……互补"在本文用于指互补序列与全部或部分参比多核苦酸序列同源。举例说明，核苷酸序列"TATAC，，对应于参比序列"TATAC，，，而与参比序列"GTATA"互补。\401^@品系小鼠的生产还论述并描绘于1990年1月12日申请的美国专利申请序号07/466,008、1990年11月8日申请的07/610,515、1992年7月24日申请的07/919,297、1992年7月30曰申请的07/922,649、1993年3月15曰申请的08/031,801、1993年8月27日申请的08/112,848、1994年4月28日申请的08/234,145、1995年1月20日申请的08/376,279、1995年4月27日申请的08/430,938、1995年6月5日申请的08/464,584、1995年6月5日申请的08/464,582、1995年6月5日申请的08/463,191、1995年6月5日申请的08/462,837、1995年6月5日申请的08/486,853、1995年6月5日申请的08/486,857、1995年6月5日申请的08/486,859、1995年6月5日申请的08/462,513、1996年10月2日申请的08/724,752、1996年12月3日申请的08/759,620、2001年11月30日申请的美国公开号2003/0093820以及美国专利第6,162,963、6,150,584、6,114,598、6,075,181和5,939,598号，以及日本专利号3068180B2、3068506B2和3068507B2。另参见1996年6月12日受让公开的欧洲专利号EP0463151Bl、1994年2月3曰公开的国际专利申"fr号WO94/02602、1996年10月31日公开的国际专利申请号WO96/34096、1998年6月II日公开的WO98/24893、2000年U月21曰/>开的WO00/76310。上述每个专利、申#参考文献的公开内^pi^在此引入作为参考."^:来说，融合杂交瘤产生的抗体为具有全人idU轻链的人IgG2重链。本文所迷抗体具有人IgG4重链以及IgG2重链。拔体还可以为其它人同种型，包才奮rgGi。抗体M过固相和溶液相技术检测时具有高余和力，通常Kd为约I0^M至约UT^M或以下。优选KD至少为I(T11M的抗体，以抑制IGF-LTI活性。本文所逸抗体可与药学上可接受的载体一起制备成混合物。该治疗组合物可静脉内给予，或者逸过鼻或肺给药，优逸为液M粉末气溶股(冻干的)。组合粉还可以根据需要胃肠外或皮下给药。当系统给予时，治疗性组合物应是无菌的、无热源的，并处于在pH、等渗性和稳定性方面适合的胃肠外可接受溶液中。这些条件是本领域^Mw员已知的。简而言之，通过将具有需要纯庋的本i^斤述化合物与药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂混合，制备所迷化合物的给药剂型，用于^f^存或给药。这些物质在所用剂量和浓度对接受者是无毒的，并包含緩冲剂，例如TRISHC1、磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐和其它有机酸盐；抗氧化剂，例如抗坏血酸；低分子量(约10个残基以下)肽，例如聚精氨酸；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸或精氨酸；单糖、二糖和其它糖，包括纤维素或其衍生物、葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，例如EDTA;糖醇，例如甘露糖醇或山梨糖醇；抗衡离子，例如钠，和/或非离子表面活性剂，例如吐温(TWEEN)、普流罗尼克(PLURONICS)或聚乙二醇。在某些实施方案中，抗IGF-I/II抗体与治疗剂(例如放射性同位素、药物组合物或毒素)连接。优选地，这些抗体可用于治疗疾病，这样的疾病可与表达IGF-I/II的细胞或过量表达IGF-I/II的细J&目关。例如，设想所述药物具有选自以下的药物特性抗有丝分裂、烷基化、抗代谢、抗血管生成、凋亡、生物碱、COX-2和抗生素药物及其组合。所迷药物可选自氮芥、乙烯亚胺4牙生物、g璜酸盐、亚硝基胍、三氮烯、寸酸类似物、蒽环类药物、紫杉烷(taxane)、COX-2抑制剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物、抗代^"药、抗生素、酶、表鬼臼毒素、铂配位络合物、长春花生物碱、取代的脲、甲_^肼衍生物、肾上WC^抑制剂、拮抗剂、内皮抑制素、秦素(taxol)、4^t碱、奥沙利错、多柔比星及其类似物，以及它们的《且合。0138]毒素的实例还包括多花白树毒蛋白(gelonin)、假牟胞窗外毒素(PE)、PE40、PE38、白喉毒素、蓖麻毒素、蓖麻毒素、相思豆毒素、a毒素、皂草毒素、核糖核酸酶(RNA酶)、DNA酶I、葡萄球菌肠毒素A、美洲商陆抗病毒蛋白、多花白树毒蛋白、假单胞菌内毒素以及其衍生物、组合和修饰物。和抗erbbl抗体西妥昔单抗[C225])、法尼基转移酶抑制剂、MEK抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂和丝氨^/苏氨酸激酶抑制剂，例如表皮生长因子家族的抑制剂(例如EGFR家族酪氨酸激酶抑制剂，例如iV-(3-氯-4-氟苯基)-7-曱氧基-6-(3-吗啉基丙氧基)喹唑啉-4-胺(吉非替尼、AZD1839)、AM>乙炔基苯基)-6,7-双(2-曱氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(埃罗替尼、OSI-774)和6-丙烯酰氨基-iV-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉基丙氧基)喹唑啉-4-胺(CI1033)),例如血小板衍生生长因子家族的抑制剂和例如肝细胞生长因子家族抑制剂；(v)抗血管生成药，例如抑制血管内皮生长因子作用的那些药药，(例如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗[AvastinTM],诸如在国际专利申请WO97/22596、WO97/30035、WO97/32856和WO98/13354中公开的化合物)，以及通过其它机制起作用的化合物(例如利诺胺(Iinomide)、整联蛋白avP3功能的抑制剂、血管生成抑制素和血管生成素(例如血管生成素1和血管生成素2)作用的4中制剂)；(vi)血管损伤剂，例如风车子抑碱A4(CombretastatinA4)和在国际专利申^貪WO99/02166、WO00/40529、WO00/41669、WO01/92224、WO02/04434和WO02/08213中公开的化合物；(vii)反义疗法，例如靶向上述靶的那些反义疗法，例如ISIS2503、为一种抗ras反义疗法；(viii)基因疗法，包括例如置换异常基西(例如异常p53或异常BRCAl或BRCA2)的方法，GDEPT(基因指导的酶前药疗法)，例如使用胞嘧咬脱氨酶、胸苷激酶或细菌硝基还原酶的方法，以及提高患者对化疗或放疗耐受性的方法，例如多药耐药性基因疗法；(ix)免疫疗法，包括例如提高患者肿瘤细胞免疫原性的离体(exvivo)法或体内(invivo)法，例如用细胞因子(例如白介素2、白介素4或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)转染，降低T细胞无反应性的方法，使用转染免疫细胞(例如细胞因子转染的树突细胞)的方法，使用细胞因子转染的肿瘤细胞系的方法和使用抗独特型抗体的方法；(x)细胞周期抑制剂，包括例如CDK抑制剂(例如黄酮吡多)和其它细胞周期关卡抑制剂(例如关卡激酶)；aurora激酶以及涉及有丝分裂和胞质分裂调节的其它激酶(例如有丝分裂驱动蛋白)的抑制剂；以及组蛋白脱乙酰酶抑制剂；(xi)内皮缩血管肽拮抗剂，包括内皮缩血管肽A拮抗剂、内皮缩血管肽B拮抗剂以及内皮缩血管肽A和B拮抗剂；例如ZD4054和ZD1611(WO9640681)、阿曲生坦和YM598;以及(xii)生物治疗性治疗方法，例如使用肽或蛋白质(例如抗体或可溶性外部受体结构域构建)的那些方法，所述肽或蛋白质隔离受体配体、阻断配体与受体结合或降^f氐受体信号转导(例如由于增强的受体降解或降低的表达水平)。通过颈推脱臼法处死免疫小鼠，由每组收集引流淋巴结并合并。通过在DMEM中研磨离解淋巴细胞，以由组织释放细胞，并将细胞悬浮在DMEM中。统计细胞数，将0.9mlDMEM/lxl()S个淋巴细胞加入细胞沉淀，以温和但完全地重悬浮细胞。使用100piCD90+磁珠/lxl()S个细胞，通过^f吏细胞与磁珠于4。C孵育15分钟标记细胞。将含达1()S个阳性细胞(或总计达2xl(^个细胞)的磁性标记细胞悬浮液加到LS+柱上，用DMEM洗涤该柱。收集全部流出液，作为CD90阴性流分(预计这些细胞中的大部分为B细胞)。0148通过将以上洗涤过的富集B细胞与购自ATCC的非分泌性骨髓瘤P3X63Ag8.653细胞(目录号CRL1580)以1:1比率混合进《亍融合(Kearney等，J.Immunol.123,1979,1548-1550)。通过以800xg离心使细胞混合物温和地沉淀出来。在完全取出上清液后，用2-4mL链霉蛋白酶溶液(CaIBiochem，曰录号53702;0.5mg/ml的PBS溶液)处理细胞不超过2分钟。然后，加入3-5mlFBS，以终止酶活性，使用电细胞融合溶液(ECFS，0.3M蔗糖，Sigma，目录号S7903，0.1mM乙酸镁，Sigma，目录号M2545，0.1mM乙酸铐，Sigma，目彖号C4705)将悬浮液调整至40ml总体积。离心后取出上清液，将细胞重悬浮在40mlECFS中。重复该洗涤步骤，细胞在ECFS中再重悬浮至浓度为2xl06个细胞/m1.排队条件电压50V，时间50秒。-IGF在水上预孵育30-60分钟。用胰蛋白酶收集稳^JJthIGF-IR的亚汇合NIH3T3小I^A纤维细胞(得自AstraZeneca),并以6xl06/ml重悬浮在冷的结^^爰沖液中，向该板加入25细胞，在冰上孵育2小时。用200(iL冷PBS洗涤板4次，过夜干燥。加入25liL/孔的闪烁体(SuperMix混合物，Wallac/PerkinElmer,目录号1200-439)，使用MicrobetaTrilux读板器(Wallac)读板。抑制百分率如下求出%抑制=([(结合的125I-IGF的平均总CPM)-(在抗体存在下结合的125I-IGF的平均CPM)]/[(结合的125I-IGF的平均总CPM)-(在过量对照中和抗体*存在下结合的125I-IGF的平均CPM)])xlOO总之，用IGF-I或IGF-II首次筛选由683个初始上清液选择出343个(lll个IgG2和232个IgG4，50.2%)。得到总共161个最终命中结果(初始系的23.6%),它们能够以50%抑制的总截取标准阻断IGF-I和IGF-II与IGF-IR结合。表4.抗IGF-I/II废弃上清液筛选汇总(50。/。截取值)<table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table>实施例5高抗原和有限抗原的ELISA10166为了测定在实施例4中选出的161个杂交瘤系中的相对亲和力以及每个系的上清液中的抗体浓度，进行高抗原(HA)和有限抗原(LA)ELISA测定。在HA定量测定中，高抗原浓度和孵育过夜限制了抗体亲和力的作用，允许定量每个样品中存在的抗原特异性抗体的相对量。在LA测定中的低抗原浓度限制抗体浓度的作用，产生基于其相对亲和力的抗体排列。高抗原定量测定0167!用相对大量的IGF-I或IGF-II抗原(R&DSystems,Inc.，Minneapolis,MN,目录号分别为291-Gl和292-G2)以500ng/ml(67nM)包被ELISA板。在1:50至1:12200的稀释范围内滴定含抗体的杂交瘤上清液。使用已知IGF特异性抗体(R&DSystems,Inc.,Minneapolis,MN，目录号分别为MAB291和MAB292)的对照限定测定的线性范围。然后使用线性范围内的数椐得到每个滴定样品中的IGF特异性抗体的相对浓度。有限抗，原测定斥企验683个对IGF-I和IGF-II结合阳性的废上清液抑制IGF与IGFBP-3结合的能力。对于IGF-I高于50%的抑制和对于IGF-II高于60%的抑制用作截取标准。使用这些截取值的筛选结果汇总见表6。表6.在筛选中鉴定的阳性命中结果的数目<table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table>使用无标记的表面等离子体共振(SPR)或Biacore检测抗体对抗原的亲和力。为此，使用常规胺偶联在CM5Biacore芯片上制备高密度山羊抗人抗体表面。所有的mAb都用含100|ng/mlBSA的HBS-P电泳缓冲液稀释至约20pg/ml。使用30秒接触时间以10pL/分钟将每个mAb捕获在独立面上，并洗涤5分钟，用于稳定mAb基线。于502nM胰岛素未观察到胰岛素与任何mAb结合。这些结果提示，IGF-MImAb与胰岛素没有明显的交叉反应性。实施例10抗体分区(binning)[0195进行表位分区，以确定哪些抗IGF-MI抗体会^皮此交叉竟争，并因此有可能结合IGF-I/II上的同一表位。分区过程描述于美国专利申请20030175760，还描述于Jia等，J.Immunol.Methods,(2004)288:91-98，这两个文献均整体在此引入作为参考。简单地讲，按照在Luminex网站提供的蛋白质偶联方案将Luminex珠与小鼠抗hulgG(Pharmingen弁555784)偶联。制备预偶联的珠，使用以下方法将其与未知一抗偶联，珠子避光保护。每个未知上清液均使用单独的管。需要的上清液体积使用下列公式计算(nX2+10)x50pl(其中n-样品总数)。在该测定中使用0.1ing/ml的浓度。温和涡旋珠子母液，并用上清液稀释至每孔50|ul中每种珠子有2500个的浓度，或者0.5xl()S个珠子/ml的浓度。免疫球蛋白链的可变(V)区由多个种系DNA区段编码，所述区段在B细胞个体发生过程中接入功能可变区(VHDJH或VKJK)中。详细研究了对IGF-I/II的抗体响应的分子和遗传多样性。这些测定揭示了抗IGF-I/II抗体特有的几个点。应当认识到，由每个杂交瘤收集的姊妹克隆间的氨基酸序列是相同的。例如，mAb7.159.2的重链和轻链序列与下表11和12所示的mAb7.159.1的序列相同。0204本发明抗体的重链CDR1具有如在表11中公开的序歹'J。在表11中公开的CDR1属于Kabat定义。或者，CDR1可使用替代定义进行定义，以便包含FR1序列的最后5个残基。例如，对于抗体7.159.1，FR1序列为QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS(SEQIDNO.:93),CDRl序列为GYTFTSYDIN(SEQIDNO.:94);对于抗体7.158.1，FR1序列为QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS(SEQIDNO.:95)，CDRl序列为GGSIRSSSYYWG(SEQIDNO.:96);对于抗体7.234.1，FR1序列为QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS(SEQID68NO.:97),CDR1序列为GGSINSSSNYWG(SEQIDNO.:98);对于抗体7.34.1，FRl序列为QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS(SEQIDNO.:99),CDRl序列为GGSISSYYWS(SEQIDNO.:100);对于抗体7.251.3,FRl序列为QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVS(SEQIDNO.:101),CDRl序列为GGSISSYYWS(SEQIDNO.:102)。总共筛选出32个抗体系，对每种抗原进行了2次或3次独立测定。最佳的10种抗体的结果汇总于下表14。73表14.NIH3T3/hlGF-IR细胞的IGF依赖性增殖的抑制汇总<table>tableseeoriginaldocumentpage74</column></row><table>*这些测定可在抗原限制条件下进行，获得了IGF-I和IGF-II的mAbKD。实施例14在BxPC3人胰腺胂瘤细胞中表达的hIGF-IR的IGF-I和IGF-II诱导磷酸化的抑制[0212IGF-I/II通过激活IGF-IR受体中的受体酪氨酸激酶活性发挥其增殖和抗凋亡功能。为了评价抗体抑制IGF诱导的IGF-IR磷酸化的能力，在以下测定中使用表达内源hIGF-IR的BxPC3人胰腺肺瘤细胞。如上所述，中和IGF抗体的其中一个标准是抑制IGF诱导增殖的能力。为了评价所述抗体抑制IGF诱导增殖的能力，在以下测定中使用表达内源hIGF-IR的BxPC3人胰腺肿瘤细胞。将BxPC3细胞以2000个细胞/孔的密度接种在96孔板中，并在常规生长培养基中过夜培养。第2天，弃去生长培养基，用无血清培养基温和洗涤各孔2次，加入100|LiL含有10pg/ml转铁蛋白和0.1%BSA的无血清培养基(测定培养基)，以使细胞饥饿。24小时后，弃去原培养基，用无血清培养基温和洗涤细胞1次，向细胞加入100pL测定培养基，一式二份或一式三份，该测定培养基中含有20ng/mlIGF,与多种抗体浓度于37。C预孵育30分钟。所述板孵育375天，用CellTiter-Glo试剂(Promega)定量测定增殖。如在表17中所示，通过ELISA测试了最佳的IO种抗体中的5种与小鼠或大鼠胰岛素的交叉反应性。ELISA表明，这些抗体与小鼠或大鼠胰岛素没有交叉反应性，与阴性对照抗体PK16.3.1相仿，与阳性对照抗大鼠胰岛素抗体相反。表17.与小鼠胰岛素的交叉反应性采用不同抗原的OD450抗体小鼠肢岛素大鼠胰岛素无抗原7.159.20.520.520.567.160.20.600.570.627.34.10.480.470.557.251.30.550.530.567.234.20.510.490.66血清1.281.231.34抗大鼠胰岛素2.523.060.10PK16.3.10.580.580.62实施例17在NIH3T3细胞中异位表达的人IGF-IR的小鼠IGF-I和IGF-II诱导磷酸化的抑制[0220进一步测试了单克隆抗体与小鼠IGF-I和IGF-II的交叉反应性，以便确定它们抑制IGF诱导的IGF-IR磷酸化的程度。该测定如前所述使用异位表达hIGF-IR受体的NIH3T3细胞进行。该测定的结果概述于表18。。将细胞悬浮在总接种体积0.1ml的PBS中。从NIH3T3细胞移植日开始，用mAb7.159.2以1.0mg/小鼠每周2次或用等体积的PBS溶媒(0.3ml)按照相同时间表给予两组动物(每组n=10只)。所有剂量都经腹膜内(i.p.)途径腹膜内给予。每天检测1次动物体重，肿瘤一经确认，就使用卡钳每周2次进行肿瘤检测。假定为卵形，由卡钳检测结果计算出所有可检测肺瘤的体积。结果汇总于图3。—名成年女性被诊断患有糖尿病两周一次静脉内注射mAb7.159.2治疗该患者轻。序列表0237对亚克隆的杂交瘤进行了测序，以在核苷酸和氨基酸水平上确定它们的可变重链基因和可变轻链基因的一级结构。列于表1的抗IGF-I和IGF-II的单克隆抗体可变区的核苷酸和多肽序列在序列表中提供。通过引用结合[0238本文引用的所有参考文献，包括专利、专利申请、论文、教科书等，以及其中引用的参考文献，就它们还没有被引入本文作为。在一年时间段内以每。结果，糖尿病症状减81参考的意义上，整体通过引用结合到本文中。等同实施方案[0239所撰写的本说明书被认为足以使本领域技术人员能够实现本发明。前面的描述和实施例详述了本发明的某些优选实施方案，并描述了本发明人提出的最佳方式。但是，应当认识到，所述内容无论会怎样详细地出现在正文中，本发明都可以多种方式付诸实施，本发明应以随附权利要求及其任何等同实施方案为准。权利要求1.一种分离的全人特异性结合蛋白，其优先结合胰岛素样生长因子II(IGF-II)，与胰岛素样生长因子I(IGF-I)有交叉反应性，并且中和IGF-I和IGF-II活性。2.权利要求1的特异性结合蛋白，其中所述结合蛋白绪合IGF-II的亲和力是IGF-I的至少2.5倍。3.权利要求L的特异性结合蛋白，其中所迷结合蛋白在异位表达IGF-1R的NIH3T3细胞中抑制IGF-I依赖性IGF-I受体磷酸化的EC50不超过15nM。4.权利要求I的特异性结^白，其中所述结合蛋白在异位表达IGF-1R的NIH3T3细胞中抑制IGF-II依赖性IGF-I受体磷酸化的EC50不超过5nM。5.权利要求1的特异性结合蛋白，其中所述结合蛋白以不超过25nM的ECso抑制表达重组hIGF-IR的NIH3T3细胞的IGF-II依赖性增殖达70。/。以上。6.权利要求1的特异性结合蛋白，其中所述结合蛋白以不超过40nM的ECso抑制表达重组hIGF-IR的NIH3T3细胞的IGF-I依赖性增殖达70。/。以上。7.权利要求1的特异性结合蛋白，其中所述结合蛋白竟争结合含有选自以下的可变重链序列的单克隆抗体SEQIDNO.:2、SEQIDNO.:6、SEQIDNO.:IO、SEQIDNO.:14和SEQIDNO.:18。8.权利要求7的特异性结合蛋白，其中所述单克隆抗体含有选自以下的可变轻链序列SEQIDNO.:4、SEQIDNO.:8、SEQIDNO.:12和SEQIDNO.:16。9.权利要求1-8中任一项的特异性结合蛋白，其中所述结合蛋白结合IGF-I的Kd低于4nM。10.权利要求1-8中任一项的特异性结合蛋白，其中所述结合蛋白结合IGF-I的KD低于650pM。11.权利要求1-8中任一项的特异性结合蛋白，其中所述结合蛋白结合IGF-II的Ko低于300pM。12.权利要求1-8中任一项的幹异性绪合蛋白，其中所述结^"白是全人单克隆抗体.13.权利要求1-8中任一项的特异性结合蛋白，其中所述结合蛋白是全人牟克隆抗体的结合片段。14.权利要求13的特异性结合蛋白，其中所述结合片段选自Fab、Fab，或F(ab，)2和Fv。15.权利要求1-8中任一项的特异性结^^蛋白，其中所述结合蛋白是单克隆抗体7.251J3(ATCC保藏号PTA-7422)。16.权利要求1-8中任一项的特异性结合蛋白，其中所述结合蛋白是单克隆抗体7.34.1(ATCC保藏号PTA-7423)。17.权利要求1-8中任一项的特异性结合蛋白，其中所述结合蛋白是单克隆抗体7.159.2(ATCC保藏号PTA-7424)。18.权利要求1-8中任一项的特异性结合蛋白，其中所述结合蛋白含有具有SEQIDNO.:6序列的重链多肽。19.权利要求1-8中任一项的特异性结合蛋白，其中所述结合蛋白含有具有SEQIDNO.:8序列的轻链多肽。20.权利要求1-8中任一项的特异性结合蛋白，其中所述结合蛋白含有具有SEQIDNO.:IO序列的重链多肽。21.权利要求1-8中任一项的特异性结合蛋白，其中所述结合蛋白含有具有SEQIDNO.:12序列的轻链多肽。22.权利要求1-8中任一项的特异性结合蛋白，其中所述结合蛋白含有具有SEQIDNO.:14序列的重链多肽。23.权利要求1-8中任一项的特异性结合蛋白，其中所述结合蛋白含有具有SEQIDNO.:16序列的轻链多肽。24.权利要求1-8中任一项的特异性结合蛋白，所述结合蛋白与药学上可接受的载体^制成混合物。25.—种核酸分子，所述核酸分子编码权利要求1的特异性结合蛋白。26.—种载体，所述载体包含权利要求25的核酸分子。27.—种宿主细胞，所迷宿主细胞包含权利要求26的载体。28.权利要求12的人单克隆抗体，其中当IGF-II或IGF-I蛋白结^^灸岛素生长因子结合蛋白时，所述^抗体不特异性结合所述蛋白。29.—种测定患者样品中的胰岛素样生长因子-II(IGF-II)和胰岛素样生长因子I(IGF-I)水平的方法，所述方法包括提供患者样品；使所述样品接触权利要求1的结合蛋白；和测定所述样品中的IGF-I和IGF-II水平。30.权利要求29的方法，其中所述患者样品是血液。31.权利要求1-8中任一项的特异性结合蛋白在制备用于治疗恶性肿瘤的药物中的用途。32.权利要求31的用途，其中所述结合蛋白是全人单克隆抗体。33.权利要求31的用途，其中所述恶性肿瘤选自黑素瘤、非小细胞肺癌、神经胶质瘤、肝细胞(肝)癌、甲状腺肿瘤、胃癌、前列腺癌、乳癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、成胶质细胞瘤、子宫内膜癌、肾癌、结肠癌、胰腺癌和鳞状细胞癌。34.权利要求32的用途，其中所述结合蛋白是mAb7.251.3(ATCC保藏号PTA-7422)或mAb7.34.1(ATCC保藏号PTA-7423)或mAb7.159.2(ATCC保藏号PTA画7424)。35.权利要求31的用途，其中所述药物和选自以下的第二种抗肺瘤药物联用抗体、化疗药和放射性药物。36.权利要求31的用途，其中所述药物和常规手术、骨髓干细胞移植或外周干细胞移植协同使用，或者所述药物在常规手术、骨髓干细胞移植或外周干细胞移植之后使用。37.权利要求1-8中任一项的特异性结合蛋白在制备用于治疗生长西子依赖性疾病的药物中的用途。38.权利要求37的用途，其中所迷结合蛋白是全人单克隆抗体。39.权利要求38的用途，其中所述抗体选自mAb7.251.3(ATCC保藏号PTA-7422)、mAb7.34.1(ATCC保藏号PTA-7423)和mAb7.159.2(ATCC保藏号PTA-7424)。40.权利要求3'7的用途，其中所述生长因子^U负性疾病选lT:骨质疏松症、糖尿病和心血管疾病。41.一种治疗哺乳动物的恶性胂瘤的方法，所述方法包括选择需要治疗恶性肿瘤的哺乳动物；和给予所述哺乳动物治疗有效剂量的权利要求1的特异性结合蛋白。42.权利要求41的方法，其中所述动物是人。43.权利要求41的方法，其中所述结合蛋白是全人单克隆抗体。44.权利要求41的方法，其中所述恶性肿瘤选自黑素瘤、非小细胞肺癌、神经胶质瘤、肝细胞(肝)癌、曱状腺肿瘤、胃癌、前列腺癌、乳癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、成胶质细胞瘤、子宫内膜癌、肾癌、结肠癌、"夷腺癌和鳞状细月包癌。45.权利要求41的方法，其中所述结合蛋白选自mAb7.251.3(ATCC保藏号PTA-7422)、mAb7.34.1(ATCC保藏号PTA-7423)和mAb7.159.2(ATCC保藏号PTA誦7424)。46.—种治疗哺乳动物的生长因子依赖性疾病的方法，所述方法包括选择需要治疗生长因子依赖性疾病的哺乳动物；和给予所述哺乳动物治疗有效剂量的权利要求1的特异性结合蛋白。47.权利要求46的方法，其中所述哺乳动物是人。48.权利要求46的方法，其中所述结合蛋白是全人单克隆抗体。49.权利要求46的方法，其中所述抗体选自mAb7.251.3(ATCC保藏号PTA-7422)、mAb7.34.1(ATCC保藏号PTA-7423)和mAb7.159.2(ATCC保藏号PTA-7424)。50.权利要求46的方法，其中所述生长因子依赖性疾病选自骨质3^^>症、糖尿病和心血管疾病。51.—种缀合物，所述缀^^含有权利要求12的抗体或^"结合片段和治疗剂。52.权利要求51的缀合物，其中所述治疗剂是毒素。53.权利要求51的缀合物，其中所述治疗剂是放射性同位素。54.权利要求51的缀合物，其中所述治疗剂是药物纽L合物。55.权利要求1-8中任一項的特异性结合蛋白，其中所述结合蛋白或其结合片段包含重链互补决定区1(CDR1)，其氨基酸序列为"SerTyrTyrTrpSer，，(SEQIDNO:21);重链互补决定区2(CDR2)，其氨基,列为"TyrPhePheTyrSerGlyTyrThrAsnTyrAsnProSerLeuLysSer"(SEQIDNO:22);重链互补决定区3(CDR3)，其氨基酸序列为"lieThrGlyThrThrLysGlyGlyMetAspVal"(SEQIDNO:23);轻链互补决定区l(CDRl)，其氨基酸序列为"ThrGlySerSerSerAsnlieGlyAlaGlyTyrAspValHis"(SEQIDNO:24);轻链互补决定区2(CDR2)，其氨基酸序列为"GlyAsnAsnAsnArgProSer"(SEQIDNO:25);和轻链互补决定区3(CDR3)，其氨基酸序列为"GinSerPheAspSerSerLeuSerGlySerVal"(SEQIDNO:26)。56.权利要求1-8中任一项的特异性结合蛋白，其中所述结合蛋白或其结合片段包含重链互补决定区1(CDR1)，其氨基酸序列为"SerTyrTyrTrpSer"(SEQIDNO:27);重链互补决定区2(CDR2)，其氨基睃字列为"TyrPhePheTyrSerGlyTyrThrAsnTyrAsnProSerLeuLysSer"(SEQIDNO:28);重链互补决定区3(CDR3)，其^J^酸序列为"lieThrGlyThrThrLysGlyGlyMetAspVal"(SEQIDNO:29);轻链互补决定区1(CDR1)，其#^*列为"ThrGtyArgSerSerAsnlieGlyAlaGlyTyrAspValHis"(SEQEDNO:30);轻链互补决定区2(CDR2)，其M^列为"G[yAsnSerAsnArgProSer"(SEQIDNO:31);和轻链互补决定区3(CDR3)，其M酸序列为"GinSerTyrAspSerSerLeuSerGlySerVal"(SEQIDNO:32)。57.权利要求1-8中任一项的特异性结合蛋白，其中所述绪合蛋白或其结合片段包含重链互补决定区1(CDR1)，其氨基,列为"SerTyrAsplieAsn"(SEQIDNO:33);重链互补决定区2(CDR2),其^J^酸序列为"TrpMetAsnProAsnSerGlyAsnThrGlyTyrAlaGinLysPheGinGly"(SEQIDNO:34);重链互补决定区3(CDR3),其氨基酸序列为"AspProTyrTyrTyrTyrTyrGlyMetAspVal"(SEQIDNO:35);轻链互补决定区l(CDRl)，其氨基酸序列为"SerGlySerSerSerAsnlieGluAsnAsnHisValSer"(SEQIDNO:36);轻链互补决定区2(CDR2)，其氨基酸序列为"AspAsnAsnLysArgProSer"(SEQIDNO:37);和轻链互补决定区3(CDR3)，其氨基酸序列为"GluThrTrpAspThrSerLeuSerAlaGlyArgVal"(SEQIDNO:38)。全文摘要描述了针对IGF-II但与IGF-I有交叉反应性的结合蛋白，例如抗体，以及这类抗体的用途。具体地说，公开了针对IGF-II但与IGF-I有交叉反应性的全人单克隆抗体。还公开了编码重链和轻链免疫球蛋白分子的核苷酸序列和包含重链和轻链免疫球蛋白分子的氨基酸序列，尤其是对应于跨越构架区和/或互补决定区(CDR)、特别是从FR1到FR4或从CDR1到CDR3的连续重链和轻链序列的序列。文档编号A61K39/395GK101495141SQ200680052595公开日2009年7月29日申请日期2006年12月8日优先权日2005年12月13日发明者D·W·唐格,G·加兹特-博恩斯坦,O·雷伯,S·A·卡特利奇,X·杨申请人:阿斯利康(瑞典)有限公司