专利名称：新型半胱氨酸蛋白酶抑制剂、其药物组合物及其治疗应用的制作方法
发明内容
本发明涉及半胱氨酸蛋白酶的新型抑制剂，其制备方法及其治疗应用。
背景技术：
蛋白酶可根据其底物特异性或催化机理进行分类。在肽水解机理的基础上，已知五种主要的蛋白酶类别丝氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、苏氨酸和金属蛋白酶。半胱氨酸蛋白酶特别包括去泛素化酶、胱天蛋白酶(caspases)、组织蛋白酶、钙蛋白酶以及病毒、细菌或寄生虫半胱氨酸蛋白酶。
去泛素化酶(de-ubiquitination enzymes)包括泛素特异性蛋白酶(USP)和泛素羧基水解酶(UCH)。概括地讲，泛素途径调节蛋白质降解并更具体而言涉及癌症、神经变性疾病例如阿尔茨海默氏病、帕金森病、炎症、病毒感染和潜伏(特别是单纯疱疹病毒-1、Epstein-Barr病毒、SARS冠状病毒)、或心血管疾病(Chem.Rev.1997，97，p.133-171；Chem.Rev.2002，102，p.4459-4488；J.Biochem.2003，134，p.9-18；J.Virology，2005，79(7)，p.4550-4551；Cardiovasc.Res.2004，61，p.11-21)。
已显示胱天蛋白酶参与细胞凋亡，并因此是肝炎、肝功能衰竭、炎症、心肌缺血和心力衰竭、肾衰竭、神经变性、耳聋、糖尿病、或中风中的靶标(J.Pharmacol Exp.Ther.，2004，308(3)，p.1191-1196，J.Cell.Physiol.，2004，200(2)，p.177-200；Kidney Int，2004，66(2)，p.500-506；Am.J.Pathol.，2004，165(2)，p.353-355；MiniRev.Chem.，2004，4(2)，p.153-165；Otol.Neurotol.，2004，25(4)，p.627-632；Ref.7，21，22，23，24，25)。
通常显示组织蛋白酶参与癌症和转移、炎症、免疫学/免疫调节(Eur.Respir.J.，2004，23(4)，p.620-628)和动脉硬化症(Ageing Res.Rev.2003，2(4)，p.407-418)。更具体而言，组织蛋白酶包括参与癌症及转移和关节炎的组织蛋白酶B和类组织蛋白酶B(cathepsin B-like)(Cancer Metastasis Rev.，2003，22(2-3)，p.271-286；Biol.Chem.，2003，384(6)，p.845-854和Biochem.Soc.Symp.，2003，70，p.263-276)，特别地参与癌症及转移的组织蛋白酶D(Clin.Exp.Metastasis，2004，21(2)，p.91-106)、在骨质疏松和关节炎中起作用的组织蛋白酶K(Int.J.Pharm.，2004，277(1-2)，p.73-79)、已显示在免疫学上的抗原呈递中起一定作用的组织蛋白酶S(Drug News Perspective，2004，17(6)，p.357-363)。
钙蛋白酶(calpains)一般在衰老(Ageing Res.Rev.2003，2(4)，p.407-418)，以及糖尿病(Mol.Cell.Biochem.，2004，261(1)，p.161-167)和特别是白内障(Trends Mol.Med.，2004，10(2)，p.78-84)中起作用。
已在鼻病毒、脊髓灰质炎病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、腺病毒、或SARS冠状病毒中识别出病毒半胱氨酸蛋白酶(Chem.Rev.1997，97，p.133-171；Chem.Rev.2002，102，p.4459-4488；J.Virology，2005，79(7)，p.4550-4551和Acta Microbiol.Immunol.Hung.，2003，50(1)，p.95-101)。
细菌半胱氨酸蛋白酶包括链球菌蛋白酶(streptopain)、葡萄球菌半胱氨酸蛋白酶、梭菌蛋白酶或牙龈卟啉菌蛋白酶(gingipains)；也显示酵母例如黄曲霉表达可构成毒力因子的半胱氨酸蛋白酶(Chem.Rev.1997，97，p.133-171)。
寄生虫半胱氨酸蛋白酶已于例如Molecular & Biochemical Parasitology(2002，120，p.1-21)和Chem.Rev.(2002，102，p.4459-4488)中综述。值得注意的是造成大多数主要寄生虫病的寄生虫，在其传染性、营养性或生殖性周期的某点或另一点使用其自身的半胱氨酸蛋白酶；所述疾病包括疟疾、查格斯氏病、非洲锥虫病、利什曼病、贾第鞭毛虫病(giardiasis)、滴虫病、阿米巴病、隐孢子虫病(crypto-sporidiasis)、弓型虫病(toxoplamiasis)、血吸虫病、片吸虫病、盘尾丝虫病(onchocercosis)、及其它由其他扁形动物(flat worm)或线虫(round worm)引发的传染病。
因此，找到新型的半胱氨酸蛋白酶抑制剂在宽范围的疾病和病理状态中具有显著的重要性。
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发明内容
根据第一个目的，本发明涉及式(I)的化合物
其中
适宜地为单键或双键； ----适宜地为不存在或单键；
是5元、6元或7元杂环，优选为包含1-5个杂原子的杂芳基，其任选地被一个或多个选自H、CN、Hal、Alk、OAlk、OH、NRCN、C(CN)＝C(OH)(OAlk)、SR、NRR′、C(O)NRR′、杂环、芳基(Aryle)、杂芳基(Heteroaryle)的取代基取代，其中Alk、芳基、杂芳基、杂环任选地被一个或多个Hal、NRR′、CN、OH、CF3、芳基、杂芳基、OAlk取代； 其中
和
通过T和X稠合在一起； T、U、V、W、X相同或不同并且可选自C、N、O、S。
Ru、Rv、Rw相同或不同并且可选自H、CN、＝O、Hal、Alk、OAlk、OH、全卤代烷基、NRCN、C(CN)＝C(OH)(OAlk)、SR、NRR′、C(O)NRR′、杂环、芳基、杂芳基、环烷基，其中Alk、芳基、杂芳基、杂环、环烷基任选地被一个或多个Hal、NRR′、CN、OH、CF3、芳基、杂芳基、OAlk或聚(氧亚烃基)(poly(alkylenoxy)取代，条件是Ru、Rv、Rw中的至少一个存在且不同于H。
R3、R4、R5、R6各自相同或不同并独立地选自H、OAlk、Alk、Hal、NRR′、CN、OH、OCF3、CF3、芳基、杂芳基； R和R′各自相同或不同并独立地选自H、Alk，其中Alk任选地被一个或多个Hal、NRR′、CN、OH、CF3、芳基、杂芳基取代； 或其药学上可接受的盐、水合物、或水合盐、或这些化合物的多晶形晶体结构或其光学异构体、外消旋体、非对映体或对映体，但不包括下列化合物 1-氨基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮；
其中Ph任选地被Cl、Br取代；
优选地，
包含2或3个杂原子；更优选地，包含2或3个N。
最优选的，
是
或
优选地，
是未取代的。
优选地，X、T、U、V、W选自C和N。
优选地，
是
或
更优选
或
其中Rv、Rw或Ru存在并不同于H。
优选地，Ru、Rv、Rw中的至少一个选自芳基、Alk、NRR′、Hal、-Alk芳基、-AlkOH、-AlkOAlk、环烷基、-CF3、-CH2-(OC2H4)2-CH3。
优选地，R3、R4、R5、R6各自相同或不同并独立地选自H、Hal、Alk、OAlk、OH、OCF3。
优选地，R和R′各自相同或不同并独立地选自H、Alk。
优选地，Rv、Rw是H或不存在。
优选的式(I)化合物是式(Ia)的那些化合物
其中R3-R6和Ru、Rv、Rw、T、U、V、W、X的定义如上，并且Y、Z相同或不同，独立地选自C或N。
更优选地，式(I)的化合物是式(Ib)的化合物
其中R3-R6和Ru、Rv、Rw、T、U、V、W、X的定义如上。
根据优选的方式 -Rv＝Rw＝H且Ru选自芳基、Alk、NRR′、Hal、-Alk芳基、-AlkOH、-AlkOAlk、环烷基、-CF3、-CH2-(OC2H4)2-CH3；和/或 -R4＝R5＝H且R3、R6独立地选自H、Hal、Alk、OAlk、OH、OCF3，更优选OAlk。
本发明的优选化合物选自 1-甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-氨基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-丙基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-丙基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-丁基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-丁基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-异丁基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-异丁基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-羟甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-羟甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-甲氧基甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-甲氧基甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-环丙基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-环丙基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-苄基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-苄基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-氯-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-溴-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-溴-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 6-(7)-氯-1-甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 7-氯-3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 2-甲基-2H-1，2，3，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 2-苄基-2H-1，2，3，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-异丙基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-异丙基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-三氟甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-三氟甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-[2-(2-甲氧基-乙氧基)-乙氧基甲基]-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 6，7-二甲氧基-1-甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 6，7-二甲氧基-3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-乙基-6，7-二甲氧基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-乙基-6，7-二甲氧基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 6，7-二甲氧基-1-丙基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 6，7-二甲氧基-3-丙基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-乙基-5，8-二甲氧基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-乙基-5，8-二甲氧基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 6，7-二羟基-1-甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 或其药学上可接受的盐、水合物、或水合盐、或这些化合物的多晶形晶体结构或其光学异构体、外消旋体、非对映体或对映体。
上文或下文中使用的 Alk表示烷基、烯基(alken)或炔基(alkyn)。
“烷基”指链中包含1-20个碳原子的脂肪族烃基，其可以是直链的或支链的。优选的烷基在链中包含1-12个碳原子。“支链的”指直链烷基链上附有一个或多个较低级的烷基例如甲基、乙基或丙基。示例性的烷基包括甲基、乙基、n-丙基、i-丙基、n-丁基、t-丁基、n-戊基、3-戊基、辛基、壬基、癸基。
“烯基”指链中包含2-15个碳原子的包含碳-碳双键的脂肪族烃基，其可以是直链的或支链的。优选的烯基在链中包含2-12个碳原子；更优选地，在链中包含大约2-4个碳原子。示例性的烯基包括乙烯基、丙烯基、n-丁烯基、i-丁烯基、3-甲基丁-2-烯基、n-戊烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基。
“炔基”指链中包含2-15个碳原子的包含碳-碳三键的脂肪族烃基，其可以是直链的或支链的。优选的炔基在链中包含2-12个碳原子；更优选地，在链中包含2-4个碳原子。示例性的炔基包括乙炔基、丙炔基、n-丁炔基、2-丁炔基、3-甲基丁炔基、n-戊炔基、庚炔基、辛炔基和癸炔基。
“卤素原子”指氟、氯、溴或碘原子；优选氟和氯原子。
“芳基”指6-14个碳原子、优选6-10个碳原子的芳香单环或多环烃环系统。示例性的芳基包括苯基或萘基。
本文中使用的术语“杂环”或“杂环的”指饱和、部分不饱和或不饱和的非芳香的稳定的3-14元、优选5-10元单环、双环或多环，其中环中至少一个原子是杂原子。通常，杂原子包括但不限于氧、氮、硫、硒、和磷原子。优选的杂原子是氧、氮和硫。
适合的杂环也公开于The Handbook of Chemistry and Physics，76thEdition，CRC Press，Inc.，1995-1996，p.2-25to2-26，其内容在此引入作为参考。
优选的非芳香杂环包括但不限于吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、氧杂环丙烷基(oxiranyl)、四氢呋喃基、二氧戊环基(dioxolanyl)、四氢吡喃基、二噁烷基(dioxanyl)、二氧戊环基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、吡喃基、咪唑啉基、吡咯啉基、吡唑啉基、噻唑烷基、四氢噻喃基、二噻烷基(dithianyl)、硫代吗啉基、二氢吡喃基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢吡啶基、二氢吡啶基、四氢嘧啶基(tetrahydropyrinidinyl)、二氢噻喃基、氮杂环庚烷基(azepanyl)、以及与苯基缩合得到的稠合系统。
本文中使用的术语“杂芳基”或芳香杂环指5-14、优选5-10元芳香杂单环、双环或多环。实例包括吡咯基、吡啶基、吡唑基、噻吩基、嘧啶基、吡嗪基、四唑基、吲哚基、喹啉基、嘌呤基、咪唑基、噻吩基、噻唑基、苯并噻唑基、呋喃基、苯并呋喃基、1，2，4-噻二唑基、异噻唑基、三唑基、四唑基、异喹啉基、苯并噻吩基、异苯并呋喃基、吡唑基、咔唑基、苯并咪唑基、异噁唑基、吡啶基-N-氧化物、以及与苯基缩合得到的稠合系统。
“烷基”、“环烷基”、“烯基”、“炔基”、“芳基”、“杂芳基”、“杂环”等也涉及相应的通过去掉两个氢原子而形成的“亚烷基”、“亚环烷基”、“亚烯基”、“亚炔基”、“亚芳基”、“亚杂芳基”、“亚杂环基”等。
本文中使用的术语“患者”指患有或可能患有被一种或多种本文中所述的疾病和状况的动物(例如对于饲养、陪伴或保存目的有价值的动物)或优选人或儿童。
本文中使用的“治疗有效的量”指有效预防、减轻、消除、治疗或控制本文中所述的疾病和状况的症状的本发明化合物的量。术语“控制”意指所有其中可能使本文中所述的疾病和状况的发展减慢、中断、抑制、或停止的过程，但不一定表示所有疾病和状况的症状的完全消除，并意指包括预防性治疗。
本文中使用的术语“药学上可接受的”指在合理医学判断范围内，适合与人类和动物组织接触而没有过度的毒性、刺激、过敏反应或其它成问题的并发症，与适当益处/风险比相称的那些化合物、物质、赋形剂、组合物或剂型。
本文中使用的“药学上可接受的盐”指所公开的化合物的衍生物，其中母体化合物通过制成其酸性或碱性盐而改性。药学上可接受的盐包括由例如无毒的无机酸或有机酸形成的母体化合物的常规无毒盐类或季铵盐。例如，所述常规无毒盐包括那些源自无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等的盐；以及由有机酸例如乙酸、丙酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、苯磺酸、葡萄糖醛酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、甲苯磺酸、草酸、富马酸、马来酸、乳酸等制备的盐。其它加成盐包括铵盐例如氨丁三醇、甲葡胺、epolamine等，金属盐例如钠、钾、钙、锌或镁。
本发明药学上可接受的盐可由包含碱性或酸性部分的母体化合物通过常规化学方法合成。通常，所述盐可以通过在水或有机溶剂或两者的混合物中使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量量的适合的碱或酸反应制备。通常，优选非水介质如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇、或乙腈。适合的盐的列表见于Remington′s Pharmaceutical Sciences，第17版，MackPublishing Company，Easton，PA，1985，p.1418，其内容在此引入作为参考。
包含几何和立体异构体的通式(I)的化合物也是本发明的一部分。
根据另一个的目的，本发明还涉及式(I)化合物的制备方法。
本发明的化合物和方法可以通过许多本领域技术人员公知的方法制备。所述化合物可以由技术人员例如通过应用或适用下面所述方法或其适当的变体而合成。对那些本领域技术人员来说，适当的变更和替代将是显而易见并公知的或易于从科学文献中获得的。
特别地，所述方法可见于R.C.Larock，Comprehensive OrganicTransformations，Wiley-VCH Publishers，1999。
应当理解，本发明的化合物可以包含一个或多个不对称取代的碳原子，并且可以光学活性或外消旋形式进行分离。因此，除非具体指明具体的立体化学或同分异构形式，否则其指结构的所有手性、非对映、外消旋形式、同分异构形式。如何制备和分离所述光学活性形式在本领域中是公知的。例如，立体异构体的混合物可以通过标准技术进行分离，所述标准技术包括但不限于外消旋体拆分、正、反相、和手性色谱法，优选成盐、重结晶等，或通过从手性原料手性合成或特意合成目标手性中心。
另外，本发明的方法可产生多种区域异构体(regioisomer)，其全部包括在本发明内。区域异构体通常通过色谱法分离。
本发明的化合物可通过多种合成路线进行制备。试剂和原料是可商购的，或易于由本领域普通技术人员通过公知的技术合成。除非另外指明，否则所有取代基都如前面所定义。
在以下描述的反应中，可能必需保护在最终产品中期望的反应性官能团例如羟基、氨基、亚氨基、硫基或羧基，以避免它们不期望地参与反应。可根据标准实践采用常规保护基，例如参见T.W.Greene和P.G.M.Wuts的Protective Groups in Organic Chemistry，第3版，John Wiley和Sons，1999；J.F.W.McOmie的Protective Groups in Organic Chemistry，Plenum Press，1973。
某些反应可以在碱存在下进行。对在此反应中所用的碱的性质没有特别限制，任何常规用于此类型反应的碱可同等地用在这里，条件是其对分子的其它部分没有副作用。适合的碱的实例包括氢氧化钠、碳酸钾、三乙胺、碱金属氢化物例如氢化钠和氢化钾；烷基锂化合物，例如甲基锂和丁基锂；以及碱金属烷氧化物，例如甲醇钠和乙醇钠。
通常，反应在适合的溶剂中进行。可使用多种溶剂，条件是其对反应或所涉及的试剂没有副作用。适合的溶剂的实例包括烃，其可以是芳香烃、脂族烃或脂环族烃例如已烷、环己烷、苯、甲苯和二甲苯；酰胺例如二甲基甲酰胺；醇例如乙醇和甲醇以及醚例如乙醚和四氢呋喃。
反应可以在宽的温度范围内进行。一般而言，发现在0℃-150℃(更优选约室温-100℃)的温度下便于进行反应。反应所需的时间也可以进行大范围变化，其取决于许多因素，特别是反应温度和试剂的性质。然而，只要反应在以上概括的优选条件下进行，则3小时-20小时的时间通常是足够的。
由此制备的化合物可以通过常规方法从反应混合物中回收。例如，可以通过从反应混合物中蒸馏掉溶剂而回收，或如果需要，从反应混合物中蒸馏掉溶剂后，将残留物倾入水中，随后用与水不溶混的有机溶剂萃取，并从萃取物中蒸馏掉溶剂而回收。此外，产品可以任选地进一步通过各种公知的技术如重结晶、再沉淀或各种色谱法技术特别是柱色谱或制备薄层色谱进行纯化。
本发明式(I)化合物的制备方法是本发明的另一个目的。
根据第一个方面，本发明式(I)的化合物可以由使式(II)和式(III)的相应化合物反应而获得
其中R3、R4、R5、R6、T、U、V、W、X、Ru、Rv、Rw如式(I)中定义。
通常，反应在有机质子溶剂例如醇(优选乙醇)中，在酸例如乙酸的存在下进行。
可选地和/或附加地，式(I)的化合物可以由式(I′)的相应化合物
其中Het1、T、U、V、W、X如权利要求1-7之一定义，并且R3′、R4′、R5′、R6′、Ru′、Rv′、Rw′中的至少一个是相应的R3、R4、R5、R6、Ru、Rv、Rw的前体基团，而其它与期望的R3、R4、R5、R6、Ru、Rv、Rw相似， 通过一个或多个使前体基团转化为期望的R3、R4、R5、R6、Ru、Rv或Rw基团的步骤，以及任选地分离式(I)化合物而获得。
根据本发明，术语官能团的“前体基团”指可以通过一个或多个反应，通过一种或多种适合的试剂而产生期望的官能的任何基团。所述反应包括去保护，以及通常的加成、取代或官能化反应。
式(I′)的化合物可由如上所述的式(II)和(III)的相应化合物获得。
以上反应可由技术人员通过应用或采用以下实施例中说明的方法进行。
此外，本发明的方法还可以包含额外的分离式(I)化合物的步骤。这可以由技术人员通过任何已知的传统方法，例如上述的回收方法进行。
起始产品(II)和(III)是可商购的或可以通过应用或适用任何已知方法或实施例中描述的那些方法获得。
合成也可以作为多元反应以一锅法(one pot)方式进行。
根据另一个的目的，本发明还涉及药物组合物，所述药物组合物包含如下定义的式(I)化合物
其中
适宜地为单键或双键； ------适宜地为不存在或单键；
是5元、6元或7元杂环，优选为包含1-5个杂原子的杂芳基，其任选地被一个或多个选自H、CN、Hal、Alk、OAlk、OH、NRCN、C(CN)＝C(OH)(OAlk)、SR、NRR′、C(O)NRR′、杂环、芳基、杂芳基的取代基取代，其中Alk、芳基、杂芳基、杂环任选地被一个或多个Hal、NRR′、CN、OH、CF3、芳基、杂芳基、OAlk取代； 其中
和
通过T和X稠合在一起； T、U、V、W、X相同或不同并且可选自C、N、O、S。
Ru、Rv、Rw相同或不同并且可选自H、CN、＝O、Hal、Alk、OAlk、OH、全卤代烷基、NRCN、C(CN)＝C(OH)(OAlk)、SR、NRR′、C(O)NRR′、杂环、芳基、杂芳基、环烷基，其中Alk、芳基、杂芳基、杂环、环烷基任选地被一个或多个Hal、NRR′、CN、OH、CF3、芳基、杂芳基、OAlk或聚(氧亚烃基)取代，条件是Ru、Rv、Rw中的至少一个存在且不同于H。
R3、R4、R5、R6各自相同或不同并独立地选自H、OAlk、Alk、Hal、NRR′、CN、OH、OCF3、CF3、芳基、杂芳基； R和R′各自相同或不同并独立地选自H、Alk，其中Alk任选地被一个或多个Hal、NRR′、CN、OH、CF3、芳基、杂芳基取代； 或其药学上可接受的盐、水合物、或水合盐、或这些化合物的多晶形晶体结构或其光学异构体、外消旋体、非对映体或对映体。
式(I)的优选实施方案如上述关于本发明化合物的定义。
根据本发明用于治疗应用的优选化合物选自 1-甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-氨基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-氨基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-丙基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-丙基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-丁基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-丁基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-异丁基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-异丁基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-羟甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-羟甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-甲氧基甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-甲氧基甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-环丙基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-环丙基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-苄基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-苄基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-氯-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-溴-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-溴-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 6-(7)-氯-1-甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 7-氯-3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 2-甲基-2H-1，2，3，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 2-苄基-2H-1，2，3，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-异丙基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-异丙基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-三氟甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-三氟甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-[2-(2-甲氧基-乙氧基)-乙氧基甲基]-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 6，7-二甲氧基-1-甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 6，7-二甲氧基-3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-乙基-6，7-二甲氧基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-乙基-6，7-二甲氧基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 6，7-二甲氧基-1-丙基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 6，7-二甲氧基-3-丙基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 1-乙基-5，8-二甲氧基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 3-乙基-5，8-二甲氧基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 6，7-二羟基-1-甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮 或其药学上可接受的盐、水合物、或水合盐、或这些化合物的多晶形晶体结构或其光学异构体、外消旋体、非对映体或对映体。
根据另一个目的，本发明涉及如上药物组合物中定义的式(I)化合物在制备用于抑制半胱氨酸蛋白酶的药物中的应用。
本发明的化合物可用于抑制有此需要的患者体内的半胱氨酸蛋白酶，特别是去泛素化酶(例如USPs和UCHs)、胱天蛋白酶、组织蛋白酶(特别是组织蛋白酶B、D、K、S等)、钙蛋白酶以及病毒、细菌或寄生虫半胱氨酸蛋白酶。
本发明的化合物可特别用于治疗和/或预防癌症和转移，更具体而言是前列腺癌和/或结肠癌、神经变性疾病例如阿尔茨海默氏病和帕金森病、耳聋、与衰老有关的病症、炎性病症、关节炎、骨质疏松、肝炎、肝衰竭、心肌缺血和心力衰竭、中风、动脉硬化、肾衰竭、糖尿病、白内障；单纯疱疹病毒-1、Epstein-Barr病毒、SARS冠状病毒、鼻病毒、脊髓灰质炎病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、腺病毒等引起的病毒性急性或潜伏性感染；由属于链球菌属(Streptococcus sp.)、葡萄球菌属(Staphylococcus sp.)、梭菌属(Clostidium sp.)、曲霉菌属(Aspergillus sp.)等属的病原体引起的细菌或真菌感染；由锥虫属(Trypanosoma sp.)、疟原虫属(Plasmodium sp.)、利什曼虫属(Leishmania sp.)、毛滴虫属(Trichomonas sp.)、内阿米巴属(Entamoebasp.)、贾第鞭毛虫属(Giardia sp.)、弓形虫属(Toxoplasma sp.)、隐孢子虫属(Cryptosporidium sp.)等属的物种引起的原生动物感染；由片吸虫属(Fasciolasp.)、血吸虫属(Schistosoma sp.)、盘尾丝虫属(Onchocerca sp.)、蛔虫属(Ascarissp.)、绦虫属(Taenia sp.)、线虫属(Caenorhabitis sp.)、弓蛔虫属(Toxocara sp.)、血矛线虫属(Haemonchus sp.)、钩虫属(Ancylostoma sp.)、鞭虫属(Trichurissp.)、旋毛虫属(Trichinella sp.)、类圆线虫属(Strongyloides sp.)、血丝虫属(Brugia sp.)等属的物种引起的扁形动物或线虫感染；以及免疫、免疫调节或抗原呈递病症。
本发明还涉及相应的治疗方法，所述方法包括向有此需要的患者给药本发明化合物以及药学上可接受的载体或赋形剂。
对那些需要治疗本文所述疾病和状况的对象的确定在本领域技术人员的能力和知识范围内。通过使用临床试验、身体检查、病历/家族史或生物学和诊断性试验，本领域中有经验的兽医或医生可容易地确定那些需要所述治疗的对象。
治疗有效的量可容易地由作为本领域技术人员的主治诊断医生通过使用常规技术并通过观察在类似情况下得到的结果而确定。在确定治疗有效量的过程中，许多因素被主治诊断医生考虑，所述因素包括但不限于对象的物种；其体积、年龄、和大体健康情况；所患具体疾病；患病程度或疾病的严重程度；个体对象的响应；给药的具体化合物；给药方式；给药制剂的生物利用度特性；选择的给药方案；伴随药物(concomitant medication)的应用；以及其它有关的情况。
为达到希望的生物效应所需的式(I)化合物的量将随多种因素变化，所述因素包括所采用化合物的化学特性(例如疏水性)、化合物的效力、疾病的种类、患者所属的物种、患者的疾病状态、给药途径、化合物通过所选择途径的生物利用度、所有支配给药的所需剂量、递送和方式的因素。
“药学地”或“药学上可接受的”指当适当地向动物或人给药时不产生有害、过敏或其它不良反应的分子实体(molecular entity)和组合物。
本文中使用的“药学上可接受的赋形剂”包括任何载体、稀释剂、佐剂(adjuvants)、或赋形剂(vehicles)，例如防腐剂或抗氧化剂、填充剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、助悬剂、溶剂、分散介质、包衣剂(coatings)、抗菌和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂(absorption delaying agent)等。所述用于药学活性物质的介质和物质的应用在本领域中是公知的。除非任何常规的介质或物质与活性成分不相容，否则其在治疗组合物中的应用是预期的。补充的活性成分也可以作为适合的治疗组合掺入所述组合物中。
在本发明的语境中，本文中使用的术语“治疗”(treating或treatment)指逆转(reverse)、减轻、抑制所述术语应用的病症或状况，或上述病症或状况的一种或多种症状的发展，或预防所述术语应用的病症或状况，或上述病症或状况的一种或多种症状。
“治疗有效的量”指本发明的化合物/药物有效预防或治疗需要抑制涉及其发病机理的活性半胱氨酸蛋白酶的病理状态的量。
根据本发明，术语“患者”、或“有此需要的患者”指患有或可能患有在其发病机理中涉及活性半胱氨酸蛋白酶的病理状态的动物或人。优选地，所述患者是人。
大体而言，本发明的化合物可以用于肠胃外给药的包含0.1-10重量/体积％化合物的生理缓冲水溶液的形式提供。典型的剂量范围是1μg/kg-0.1g/kg体重每日；优选的剂量范围是0.01mg/kg-10mg/kg体重每日或在儿童体内的等效剂量。给药的药物的优选剂量可能取决于变量如疾病或病症的类型和发展程度、具体患者的整体健康状态、所选择的化合物的相对生物学效力、化合物的制剂、给药途径(静脉内、肌肉内、或其它)、化合物通过所选择的递送途径的药物动力学性质、和给药速度(推注或连续输注)和时间安排(在给定的时间内的重复次数)。
本发明的化合物也能以单位剂量形式给药，其中术语“单位剂量”指能对患者给药，并可容易地进行加工和包装的单一剂量，保持作为物理和化学稳定的单位剂量，所述单位剂量包含活性物质本身或作为药学上可接受的组合物，如下所述。就此而言，通常的总日剂量范围是0.01-100mg/kg体重。作为通用的指导，用于人的单位剂量范围是1mg-3000mg每日。优选地，单位剂量范围是1-500mg、一天给药1-6次，甚至更优选10mg-500mg、一天一次。本文提供的化合物可通过与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合而配制为药物组合物。所述的单位剂量组合物可制成通过口服给药应用的形式，特别是片剂、简单胶囊剂(simple capsule)或软明胶(gel)胶囊剂的形式；或鼻内给药的形式，特别是粉剂、滴鼻剂、或气雾剂的形式；或皮肤给药的形式，例如，通常为软膏剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂或喷雾剂形式，或经由透皮贴剂。
组合物可方便地以单位剂形式给药并可以通过药物领域中公知的任何方法进行制备，例如，在RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy，第20th；Gennaro，A.R.，Ed.；Lippincott Williams & WilkinsPhiladelphia，PA，2000中描述的方法。
优选的制剂包括其中将本发明化合物配制用于口服或肠胃外给药的药物组合物。
对于口服，片剂、丸剂、散剂、胶囊剂、锭剂等可包含下列任何成分中的一种或多种或相似性质的化合物粘合剂例如微晶纤维素、或黄蓍胶；稀释剂例如淀粉或乳糖；崩解剂例如淀粉和纤维素衍生物；润滑剂例如硬脂酸镁；助流剂例如胶体二氧化硅；甜味剂例如蔗糖或糖精；或调味剂例如薄荷、或水杨酸甲酯。胶囊剂可以是通常由任选地与增塑剂混合的明胶混合物制成的硬胶囊或软胶囊，以及淀粉胶囊的形式。此外，剂量单位形式可包含各种其它改变剂量单位外形的物质，例如，糖衣、虫胶、或肠溶剂。其它口服剂型糖浆或酏剂(elixir)可包含甜味剂、防腐剂、调色剂(dyes)、着色剂、和调味剂。此外，活性物质可掺入快速溶出、释放经修饰的(modified-release)或缓释(sustained-release)的制剂和组合物中，其中所述缓释制剂优选两种形态(bimodal)的。优选的片剂包含任意组合的乳糖、玉米淀粉、硅酸镁、交联羧甲纤维素钠、聚维酮、硬脂酸镁、或滑石。
用于肠胃外给药的液体制剂包括无菌含水或非水溶液、混悬剂、和乳剂。液体组合物也可包含粘合剂、缓冲剂、防腐剂、螯合剂、甜味剂、调味剂和着色剂等。非水溶剂包括醇、丙二醇、聚乙二醇、植物油例如橄榄油、和有机酯例如油酸乙酯。含水载体包括醇和水的混合物、缓冲介质、和盐水。特别地，生物相容的、生物可降解的丙交酯聚合物、丙交酯/乙交酯共聚物、或聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物可用作赋形剂以控制活性物质的释放。静脉内赋形剂可包含流体和营养补充物(nutrient replenisher)、电解质补充物(electrolyte replenisher)，例如那些基于Ringer’s葡萄糖等的静脉内赋形剂。其它可能用于这些活性化合物的肠胃外递送系统包括乙烯-乙酸乙烯酯共聚物颗粒剂、渗透泵、可植入的输注系统、和脂质体。
给药的替代模式包括用于吸入的制剂，其包括例如干粉剂、气雾剂、或滴剂。它们可以是包含例如聚氧乙烯-9-月桂基醚、甘胆酸盐和脱氧胆酸盐的水溶液，或用于以滴鼻剂形式给药的油质溶液，或作为鼻内施用的凝胶剂。用于口腔给药的制剂包括，例如，锭剂(lozenges)或软锭剂(pastilles)，并且还可以包含调味的基质(base)，例如蔗糖或阿拉伯胶，以及其它赋形剂例如甘胆酸盐。适合于直肠给药的制剂优选作为单位剂量的栓剂存在，其包含固体基载体例如可可脂，并且可以包含水杨酸盐(酯)。用于皮肤局部施用的制剂优选软膏剂、乳膏剂、洗剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂、或油的形式。可使用的载体包括凡士林(petroleum jelly)、羊毛脂、聚乙二醇、醇、或其组合。适合透皮给药的制剂可以作为分离的贴剂存在，并且可以是溶解和/或分散在聚合物或粘合剂中的亲脂性乳剂或缓冲的水溶液。
实施例 本发明进一步由下列实施例中的描述进行说明，但不受其限制。
本发明的代表性化合物概括在下表中
实验 本发明的代表性化合物可根据下列方法合成 通用方法A五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮的合成
将取代的(1，2，4)-三唑-3，4-二胺(8.8mmol)和茚三酮(1.57g、8.8mmol)在EtOH(10ml)和AcOH(1.5ml)中的混合物回流2-16小时。在减压下除去溶剂并将残留物溶解在EtOAc中，用饱和K2CO3和盐水洗涤。将有机相用Na2SO4干燥、过滤并在减压下通过蒸发除去溶剂。将粗产物如下纯化硅胶快速色谱(甲苯/MeOH 95:5-8:2或CH2Cl2/EtOAc 9:1-1:1)用于区域异构体混合物的纯化，然后中性氧化铝(II级)快速色谱(CH2Cl2/EtOAc 7:3-CH2Cl2/MeOH 1:1+5％HCOOH或AcOH)用于区域异构体的分离。
1-甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1b/A) 根据通用方法A进行制备，收率13％，为黄色固体。
1H NMR(300MHz，DMSO d6)δ 8.23(d，1H)、8.02(m，2H)、7.89(ddd，1H)、2.72(s，3H)。ESI+MSC12H7N5O计算值237.22；实测值238.2(MH+)。
3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1b/B) 根据通用方法A进行制备，收率30％，为黄色固体。
1H NMR(300MHz，DMSO d6)δ 8.16(d，1H)、8.05-7.95(m，2H)、7.85(ddd，1H)、2.77(s，3H)。ESI+MSC12H7N5O计算值237.22；实测值238.2(MH+)。
氨基-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1c)的合成
将(1，2，4)-三唑-3，4，5-三胺(2.5g、21.9mmol)在1:1 AcOH/H2O(80ml)中的混合物加热到70℃。将茚三酮(3.9g、21.9mmol)溶解在1:1 AcOH/H2O(80ml)中，在50℃下加热，随后添加到三胺溶液中。反应在70℃下加热3小时，然后在室温下搅拌过夜。将混合物冷却到0℃并搅拌1小时。通过过滤收集沉淀，用冷水洗涤并在真空下干燥，产生3.9g的1c，其为区域异构体混合物(比例6:4、收率82％)。区域异构体按照通用方法A进行分离。
1-氨基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1c/A) 红色固体。1H NMR(300MHz，DMSO d6)δ 8.15(d，1H)、8.01-7.95(m，2H)、7.83(ddd，1H)、6.98(s，2H)。ESI+MSC11H6N6O计算值238.21；实测值239.1(MH+)。
3-氨基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1c/B) 褐色固体。1H NMR(300MHz，DMSO d6)δ 8.05-7.93(m，3H)、7.82(ddd，1H)、7.14(s，2H)。ESI+MSC11H6N6O计算值238.21；实测值239.1(MH+)。
通用方法B五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮的合成
二氨基三唑的制备按照Eur.J.Med.Chem.-Chim.Ther.1986，21,235中报导的方法进行。
将二氨基胍盐酸盐(1g，8mmol)在过量(10g)适合的羧酸中的混合物搅拌并在120-130℃下加热12-24小时。将溶液冷却到室温并添加37％ HCl(10ml)。将混合物回流2-3小时，随后在真空下浓缩至干燥。得到的粗品用Et2O洗涤(×3)，并不经进一步纯化而使用。
对于粗二氨基三唑和茚三酮间的缩合，参见通用方法A。
1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1d/A) 根据通用方法B进行制备，收率48％，为黄色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.21(d，1H)、8.00(d，1H)、7.90(ddd，1H)、7.77(ddd，1H)、3.21(q，2H)、1.49(t，3H)。ESI+MSC13H9N5O计算值251.25；实测值252.1(MH+)。
3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1d/B) 根据通用方法B进行制备，收率32％，为黄色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.12(d，1H)、8.02(d，1H)、7.88(ddd，1H)、7.75(ddd，1H)、3.25(q，2H)、1.53(t，3H)。ESI+MSC13H9N5O计算值251.25；实测值252.1(MH+)。
1-丙基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1e/A) 根据通用方法B进行制备，收率14％，为黄色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.18(d，1H)、7.97(d，1H)、7.87(ddd，1H)、7.75(ddd，1H)、3.12(dd，2H)、1.91(m，2H)、1.01(t，3H)。ESI+MSC14H11N5O计算值265.28；实测值266.2(MH+)。
3-丙基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1e/B) 根据通用方法B进行制备，收率12％，为黄色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.10(ddd，1H)、8.00(ddd，1H)、7.86(ddd，1H)、7.74(ddd，1H)、3.19(dd，2H)、1.96(m，2H)、1.06(t，3H)。ESI+MSC14H11N5O计算值265.28；实测值266.2(MH+)。
1-丁基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1f/A) 根据通用方法B进行制备，收率6％，为黄色固体。
1H NMR(300MHz，DMSO d6)δ 8.23(d，1H)、8.02(m，2H)、7.89(ddd，1H)、3.10(dd，2H)、1.81(m，2H)、1.42(m，2H)、0.94(t，3H)。ESI+MSC15H13N5O计算值279.30；实测值280.2(MH+)。
3-丁基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1f/B) 根据通用方法B进行制备，收率10％，为黄色固体。
1H NMR(300MHz，DMSO d6)δ 8.16(d，1H)、7.99(m，2H)、7.85(dd，1H)、3.16(dd，2H)、1.87(m，2H)、1.44(m，2H)、0.96(t，3H)。ESI+MSC15H13N5O计算值279.30；实测值280.3(MH+)。
1-异丁基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1g/A) 根据通用方法B进行制备，收率17％，为黄色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.20(d，1H)、7.99(d，1H)、7.89(ddd，1H)、7.76(ddd，1H)、3.06(d，2H)、2.34(m，1H)、1.00(d，6H)。ESI+MSC15H13N5O计算值279.30；实测值280.2(MH+)。
3-异丁基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1g/B) 根据通用方法B进行制备，收率12％，为黄色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.10(d，1H)、7.99(d，1H)、7.86(ddd，1H)、7.74(ddd，1H)、3.11(d，2H)、2.38(m，1H)、1.04(d，6H)。ESI+MSC15H13N5O计算值279.30；实测值280.2(MH+)。
1-羟甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1h/A) 根据通用方法B进行制备，收率10％，为黄色固体。
1H NMR(300MHz，DMSO d6)δ 8.24(d，1H)、8.02(m，2H)、7.90(ddd，1H)、5.85(t，1H)、4.92(d，2H)。ESI+MSC12H7N5O2计算值253.22；实测值254.1(MH+)。
3-羟甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1h/B) 根据通用方法B进行制备，收率1％，为褐色固体。
1H NMR(300MHz，DMSO d6)δ 8.15(d，1H)、8.06-7.96(m，2H)、7.86(ddd，1H)、5.84(t，1H)、4.98(d，2H)。ESI+MSC12H7N5O2计算值253.22；实测值254.2(MH+)。
1-甲氧基甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1i/A) 根据通用方法B进行制备，收率2％，为黄色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.18(ddd，1H)、7.96(ddd，1H)、7.87(ddd，1H)、7.75(ddd，1H)、4.92(s，2H)、3.42(s，3H)。ESI+MSC13H9N5O2计算值267.25；实测值268.1(MH+)。
3-甲氧基甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1i/B) 根据通用方法B进行制备，收率2％，为褐色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.13(d，1H)、8.01(d，1H)、7.87(ddd，1H)、7.76(ddd，1H)、5.02(s，2H)、5.49(s，3H)。ESI+MSC13H9N5O2计算值267.25；实测值268.1(MH+)。
1-环丙基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1j/A) 根据通用方法B进行制备，收率6％，为黄色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.25(dd，1H)、8.04(dd，1H)、7.93(ddd，1H)、7.80(ddd，1H)、2.51(m，1H)、1.44(m，2H)、1.26(m，2H)。ESI+MSC14H9N5O计算值263.26；实测值264.2(MH+)。
3-环丙基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1j/B) 根据通用方法B进行制备，收率4％，为黄色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.14(dd，1H)、8.05(dd，1H)、7.90(ddd，1H)、7.78(ddd，1H)、2.55(m，1H)、1.52(m，2H)、1.31(m，2H)。ESI+MSC14H9N5O计算值263.26；实测值264.1(MH+)。
1-苄基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1k/A) 根据通用方法B进行制备，收率12％，为亮黄色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.23(dd，1H)、8.03(dd，1H)、7.92(ddd，1H)、7.79(ddd，1H)、7.46(m，2H)、7.31(m，2H)、7.24(m，1H)、4.56(s，2H)。ESI+MSC18H11N5O计算值313.32；实测值314.2(MH+)。
3-苄基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1k/B) 根据通用方法B进行制备，收率6％，为黄色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.11(dd，1H)、8.04(dd，1H)、7.90(ddd，1H)、7.77(ddd，1H)、7.45(m，2H)、7.32(m，2H)、7.25(m，1H)、4.62(s，2H)。ESI+MSC18H11N5O计算值313.32；实测值314.1(MH+)。
1-异丙基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1l/A) 根据通用方法B进行制备，收率39％，为黄色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.19(d，1H)、7.99(d，1H)、7.89(ddd，1H)、7.76(ddd，1H)、3.62(m，1H)、1.51(d，6H)。ESI+MSC14H11N5O计算值265.28；实测值266.2(MH+)。
3-异丙基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1l/B) 根据通用方法B进行制备，收率10％，为黄褐色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.16(dd，1H)、8.07(dd，1H)、7.93(ddd，1H)、7.80(ddd，1H)、3.73(dq，1H)、1.62(d，6H)。ESI+MSC14H11N5O计算值265.28；实测值266.2(MH+)。
1-三氟甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1m/A) 根据通用方法B进行制备，收率21％，为黄色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.39(dd，1H)、8.12(dd，1H)、8.03(ddd，1H)、7.92(ddd，1H)。ESI+MSC12H4F3N5O计算值291.19；实测值292.3(MH+)。
3-三氟甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1m/B) 根据通用方法B进行制备，收率14％，为黄绿色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.25(dd，1H)、8.13(dd，1H)、7.99(ddd，1H)、7.88(ddd，1H)。ESI+MSC12H4F3N5O计算值291.19；实测值292.2(MH+)。
1-[2-(2-甲氧基-乙氧基)-乙氧基甲基]-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(1n/A) 根据通用方法B进行制备，(两步)收率14％，为黄色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.29(dd，1H)、8.07(dd，1H)、7.97(ddd，1H)、7.84(ddd，1H)、5.16(s，2H)、3.88(m，2H)、3.71(m，2H)、3.65(m，2H)、3.53(m，2H)、3.34(s，3H)。ESI+MSC17H17N5O4计算值355.36；实测值356.2(MH+)。
通用方法C卤代-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮的合成
在60℃下将胺1c的区域异构体混合物(400mg，1.68mmol)分批添加到叔丁基亚硝酸酯(300μl，2.52mmol)和卤化铜(II)(2.52mmol)的乙腈(8ml)溶液中。将混合物在80℃下加热2小时，随后冷却并蒸去溶剂。粗品通过快速色谱纯化(EtOAc/MeOH 99:1或CH2Cl2/丙酮95:5)。
1-氯-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(2a/A) 根据通用方法C进行制备，收率49％，为黄色固体，为单一区域异构体。1H NMR(300MHz，DMSO d6)δ 8.29(d，1H)、8.07(m，2H)、7.95(dd，1H)。ESI+MSC11H4ClN5O计算值257.64；实测值258.1(MH+)。
1-溴-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮和3-溴-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(2b) 根据通用方法C进行制备，收率69％，为黄色固体，为6:4区域异构体混合物。1H NMR(300MHz，DMSO d6)(异构体混合物)δ 8.28和8.23(d，1H)、8.10-7.86(m，3H)。ESI+MSC11H4BrN5O计算值302.09；实测值302.0(MH+)。
6-(7)-氯-甲基-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(3)的合成
在真空下将5-氯-1-二氢茚酮(0.97g，5.8mmol)和N-溴代琥珀酰亚胺(2.1g，11.6mmol)的DMSO(23ml)溶液在40℃下搅拌16小时，在80℃下搅拌4小时。添加盐水(25ml)并用CH2Cl2(4×25ml)萃取混合物。将收集的有机层用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。粗品不经进一步纯化而使用。
对于粗品二氨基三唑和茚三酮间的缩合，参见通用方法A。
6-(7)-氯-1-甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(3/A) 收率13％，黄色固体，1:1区域异构体混合物1H NMR(300MHz，CDCl3)(异构体的混合物)δ 8.19(d，1H)、7.96(d，1H)、7.74(dd，1H)、2.84(s，3H)、8.17(d，1H)、7.97(d，1H)、7.86(dd，1H)、2.83(s，3H)。ESI+MSC12H6ClN5O计算值271.67；实测值272.0(MH+)。
7-氯-3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(3/B) 收率3％，褐色固体1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 8.03(d，1H)、7.90(d，1H)、7.65(dd，1H)、2.79(s，3H)。ESI+MSC12H6ClN5O计算值271.67；实测值272.0(MH+)。
通用方法D2-烷基-2H-1，2，3，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮的合成
根据Chem.Heterocycl.Compd.1992，803中描述的方法，由二硫代草酰胺制备1-甲基-3，4-二氨基-1，2，5-三唑和1-苄基-3，4-二氨基-1，2，5-三唑。
对于粗品二氨基三唑和茚三酮间的缩合，参见通用方法A。粗产品通过硅胶快速色谱进行纯化(CH2Cl2/MeOH 95:5)。
2-甲基-2H-1，2，3，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(4a) 根据通用方法D进行制备，收率12％，为褐色固体。
1H NMR(300MHz，DMSO d6)δ 8.09(d，1H)、7.88(m，2H)、7.72(ddd，1H)、4.59(s，3H)。ESI+MSC12H7N5O计算值237.22；实测值238.1(MH+)。
2-苄基-2H-1，2，3，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(4b) 根据通用方法D进行制备，收率7％，为褐色固体。
1H NMR(300MHz，DMSO d6)δ 8.07(d，1H)、7.88(m，2H)、7.73(ddd，1H)、7.51-7.33(m，5H)、6.05(s，2H)。ESI+MSC18H11N5O计算值313.32；实测值314.1(MH+)。
通用方法E6，7-二甲氧基-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮的合成
在真空下将5，6-二甲氧基-1-二氢茚酮(2.23g，11.6mmol)和N-溴代琥珀酰亚胺(4.13g，23.2mmol)在DMSO(46ml)中的混合物在40℃下搅拌过夜并在80℃下搅拌5小时。添加水(46ml)并用CH2Cl2(1×10ml)萃取混合物。将水层用固体NaCl饱和，然后用CH2Cl2(3×80ml)萃取。将收集的第二次萃取的有机相用Na2SO4干燥，并蒸去溶剂。粗品不经进一步纯化而使用。
对于5，6-二甲氧基-1，2，3-茚三酮(indantrione)和取代的(1，2，4)-三唑-3，4-二胺盐酸盐间的缩合，按照通用方法B进行。
6，7-二甲氧基-1-甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(5a/A) 根据通用方法E进行制备，收率35％，为橙色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 7.55(s，1H)、7.40(s，1H)、4.10(s，3H)、4.03(s，3H)、2.78(s，3H)。ESI+MSC14H11N5O3计算值297.28；实测值298.3(MH+)。
6，7-二甲氧基-3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(5a/B) 根据通用方法E进行制备，收率15％，为红色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 7.42(s，1H)、7.41(s，1H)、4.11(s，3H)、4.03(s，3H)、2.82(s，3H)。ESI+MSC14H11N5O3计算值297.28；实测值298.3(MH+)。
1-乙基-6，7-二甲氧基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(5b/A) 根据通用方法E进行制备，收率27％(2步)，为橙黄色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 7.57(s，1H)、7.42(s，1H)、4.12(s，3H)、4.06(s，3H)、3.20(q，2H)、1.51(t，3H)。ESI+MSC15H13N5O3计算值311.30；实测值312.2(MH+)。
3-乙基-6，7-二甲氧基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(5b/B) 根据通用方法E进行制备，收率15％(2步)，为橙色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 7.44(s，1H)、7.42(s，1H)、4.15(s，3H)、4.06(S，3H)、3.24(q，2H)、1.54(t，3H)。ESI+MSC15H13N5O3计算值311.30；实测值312.2(MH+)。
6，7-二甲氧基-1-丙基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(5c/A)根据通用方法E进行制备，收率33％，为橙色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 7.56(s，1H)、7.41(s，1H)、4.11(s，3H)、4.05(s，3H)、3.14(dd，2H)、1.95(m，2H)、1.07(t，3H)。ESI+MSC16H15N5O3计算值325.33；实测值326.3(MH+)。
6，7-二甲氧基-3-丙基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(5c/B) 根据通用方法E进行制备，收率13％，为棕红色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 7.42(s，1H)、7.41(s，1H)、4.13(s，3H)、4.03(s，3H)、3.17(dd，2H)、1.98(m，2H)、1.09(t，3H)。ESI+MSC16H15N5O3计算值325.33；实测值326.3(MH+)。
乙基-5，8-二甲氧基-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮的合成
乙基-5，8-二甲氧基-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮的制备按照通用方法E中描述的方法进行，使用4，7-二甲氧基-1-二氢茚酮作为起始原料和相应的二氨基三唑。
1-乙基-5，8-二甲氧基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(6/A) 收率20％(2步)，橙红色固体。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ 7.37(d，1H)、7.24(d，1H)、4.06(s，3H)、4.03(s，3H)、3.21(q，2H)、1.50(t，3H)。ESI+MSC15H13N5O3计算值311.30；实测值312.3(MH+)。
3-乙基-5，8-二甲氧基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(6/B) 收率11％(2步)，红色固体。1H NMR(300MHz，DMSO d6)δ 7.33(d，1H)、7.18(d，1H)、4.02(s，3H)、3.99(s，3H)、3.23(q，2H)、1.51(t，3H)。ESI+MSC15H13N5O3计算值311.30；实测值312.5(MH+)。
6，7-二羟基-1-甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮(7)的合成
将1M的BBr3的CH2Cl2(0.96ml)溶液添加到6/A(97mg，0.32mmol)在CH2Cl2(3.2ml)中的混悬液中，并将混合物在室温下搅拌2小时。在减压下将溶剂蒸除，并用EtOH和CH2Cl2洗涤残余物。将粗品溶解在DMSO中，通过添加H2O沉淀出期望的产品。干燥后，回收7，收率79％(68mg)，为褐色固体。
1H NMR(300MHz，DMSO d6)δ 7.37(s，1H)、7.24(s，1H)、2.63(s，3H)。ESI+MSC12H7N5O3计算值269.22；实测值270.1(MH+)。
代表性的半胱氨酸蛋白酶 USP5活性试验 将USP5在USP缓冲液(50mM Tris HCl；0.5mM EDTA；5mM DTT；0.01％ Triton X-100；牛血清白蛋白0.05mg.ml-1 pH7.6)中稀释。在-20℃下将化合物储备液(100mM)在DMSO中贮存。化合物在下列最终浓度进行试验100μM；33.3μM；11.1μM；3.7μM；1.23μM；412nM；137nM；45.7nM；15.2nM；5nM。
在Black LJL 96孔板(HE微板；Molecular Devices；20μl最终反应体积)中进行反应，一式两份。用于USP5的底物浓度是400nM Ub-AMC(BostonBiochem)。酶(USP5)在特异性试验中的浓度是300pM。测定浓度，以在固定的底物浓度下在初始速率下进行特异性试验。将化合物用酶在25℃下预温育30分钟。通过向包含在试验缓冲液中稀释的酶(+/-化合物)的板中添加底物引发反应。将反应在37℃下温育60分钟。通过添加乙酸(最终100mM)将反应终止。在Pherastar Fluorescent Reader(BMG)上进行读数。λ发射380nm；λ激发＝460nm。将数据(平均值+/-标准偏差)作为对照(无化合物)％进行分析，使用GraphPad(Prism)将百分比相对化合物浓度的Log值进行绘图。将数据拟合成S形曲线(sigmodal)模型(可变斜率)。
USP7的克隆&纯化 通过胎盘mRNA的PCR扩增获得编码USP7的cDNA。通过PCR将USP7 cDNA亚克隆到杆状病毒表达载体中(pFastBac-HT；Invitrogen)。通过诱变PCR产生编码突变的USP7的cDNA。相应的蛋白在223残基将半胱氨酸编码成丙氨酸取代。通过测序完整的开放阅读框确认序列。编码USP7的杆状病毒穿梭载体(bacmids)随DH10bac转位产生。将相应的杆状病毒穿梭载体转染到昆虫细胞(Sf9)。从培养上清液回收病毒并扩增两次。将昆虫细胞(Sf9或High Five；Invitrogen)感染72小时。收集全细胞裂解物并在裂解缓冲液(Tris HCl 50mM pH7.6；0.75％ NP40；500mM NaCl；10％甘油；1mM DTT；10mM咪唑；蛋白酶抑制剂混合物(Cocktail)；AEBSF 20μg.ml-1；抑肽酶10μg.ml-1)中裂解。在金属亲合树脂(Talon Metal affinity resin；BDBiosciences)上亲合纯化蛋白质。结合物在洗涤缓冲液(50mM磷酸钠pH7.0；300mM NaCl；10mM咪唑；0.5％ Triton X-100；10％甘油)中充分洗涤，并从树脂洗脱到250mM包含咪唑的洗涤缓冲液中。将蛋白质在透析缓冲液(TrisHCl pH7.620mM；NaCl 200mM；DTT1mM；EDTA 1mM；10％甘油)中进行透析。蛋白质纯化在4-12％ NuPAGE(Invitrogen)上进行分析。
USP7活性试验 将USP7在USP缓冲液(50mM Tris HCl；0.5mM EDTA；5mM DTT；0.01％ Triton X-100；牛血清白蛋白0.05mg.ml-1 pH7.6)中稀释。在-20℃下将化合物储备液(100mM)在DMSO中贮存。化合物在下列最终浓度进行试验100μM；33.3μM；11.1μM；3.7μM；1.23μM；412nM；137nM；45.7nM；15.2nM；5nM。
在Black LJL 96孔板(HE微板；Molecular Devices；20μl最终反应体积)中进行反应，一式两份。用于USP7的底物浓度是400nM Ub-AMC(Chem.Biol.，2003，10，p.837-846)(Boston Biochem)。酶(USP7)在特异性试验中的浓度是152pM。测定浓度，以在固定的底物浓度下在初始速率下进行特异性试验。将化合物用酶在25℃下预温育30分钟。通过向包含在试验缓冲液中稀释的酶(+/-化合物)的板中添加底物引发反应。将反应在37℃下温育60分钟。通过添加乙酸(最终100mM)将反应终止。在Pherastar FluorescentReader(BMG)上进行读数。λ发射380nm；λ激发＝460nm。将数据(平均值+/-标准偏差)作为对照(无化合物)％进行分析，使用GraphPad(Prism)将百分比相对化合物浓度的Log值进行绘图。将数据拟合成S形曲线模型(可变斜率)。
USP8的克隆&纯化 通过由胎盘mRNA进行PCR扩增而获得编码USP8的cDNA。通过PCR将USP8 cDNA亚克隆到杆状病毒表达载体(pFastBac-HT；Invitrogen)。通过诱变PCR产生编码突变的USP8的cDNA。相应的蛋白在786残基将半胱氨酸编码成丙氨酸取代。序列通过完整的开放阅读框的测序进行确定。编码USP7的杆状病毒穿梭载体随DH10bac转位产生。将相应的杆状病毒穿梭载体转染到昆虫细胞(Sf9)。从培养上清液回收病毒并扩增两次。将昆虫细胞(Sf9或High Five；Invitrogen)感染72小时。收集全细胞裂解物并在裂解缓冲液(Tris HCl 50mM pH7.6；0.75％ NP40；500mM NaCl；10％甘油；1mM DTT；10mM咪唑；蛋白酶抑制剂混合物；AEBSF 20μg.ml-1；抑肽酶10μg.ml-1)中裂解。在金属亲合树脂(Talon Metal affinity resin；BD Biosciences)上亲合纯化蛋白质。结合物在洗涤缓冲液(50mM磷酸钠pH7.0；300mMNaCl；10mM咪唑；0.5％Triton X-100；10％甘油)中充分洗涤，并从树脂洗脱到250mM包含咪唑的洗涤缓冲液中。将蛋白质在透析缓冲液(Tris HCl pH7.620mM；NaCl 200mM；DTT 1mM；EDTA 1mM；10％甘油)中进行透析。蛋白质纯化在4-12％ NuPAGE(Invitrogen)上进行分析。
USP8活性试验 将USP8在USP缓冲液(50mM Tris HCl；0.5mM EDTA；5mM DTT；0.01％ Triton X-100；牛血清白蛋白0.05mg.ml-1 pH8.8)中稀释。在-20℃下将混合原料(100mM)在DMSO中贮存。化合物在下列最终浓度进行试验100μM；33.3μM；11.1μM；3.7μM；1.23μM；412nM；137nM；45.7nM；15.2nM；5nM。
在Black LJL 96孔板(HE微板；Molecular Devices；20μl最终反应体积)中进行反应，一式两份。用于USP8的底物浓度是400nM Ub-AMC(BostonBiochem)。酶(USP8)在特异性试验中的浓度是630pM。测定浓度，以在固定的底物浓度下在初始速率下进行特异性试验。将化合物用酶在25℃下预温育30分钟。通过向包含在试验缓冲液中稀释的酶(+/-化合物)的板中添加底物引发反应。将反应在37℃下温育60分钟。通过添加乙酸(最终100mM)将反应终止。在Pherastar Fluorescent Reader(BMG)上进行读数。λ发射380nm；λ激发＝460nm。将数据(平均值+/-标准偏差)作为对照(无化合物)％进行分析，使用GraphPad(Prism)将百分比相对化合物浓度的Log值进行绘图。将数据拟合成S形曲线模型(可变斜率)。
UCH-L3活性试验 将Uch-L3在USP缓冲液(50mM Tris HCl；0.5mM EDTA；5mM DTT；0.01％ Triton X-100；牛血清白蛋白0.05mg.ml-1 pH7.6)中稀释。在-20℃下将化合物原料(100mM)在DMSO中贮存。化合物在下列最终浓度进行试验100μM；33.3μM；11.1μM；3.7μM；1.23μM；412nM；137nM；45.7nM；15.2nM；5nM。
在Black LJL 96孔板(HE微板；Molecular Devices；20μl最终反应体积)中进行反应，一式两份。用于Uch-L3的底物浓度是400nM Ub-AMC(BostonBiochem)。酶(Uch-L3)在特异性试验中的浓度是13pM。测定浓度，以在固定的底物浓度下在初始速率下进行特异性试验。将化合物用酶在25℃下预温育30分钟。通过向包含在试验缓冲液中稀释的酶(+/-化合物)的板中添加底物引发反应。将反应在37℃下温育60分钟。通过添加乙酸(最终100mM)将反应终止。在Pherastar Fluorescent Reader(BMG)上进行读数。δ发射380nm；δ激发＝460nm。将数据(平均值+/-标准偏差)作为对照(无化合物)％进行分析，使用GraphPad(Prism)将百分比相对化合物浓度的Log值进行绘图。将数据拟合成S形曲线模型(可变斜率)。
SENP1的克隆&纯化 通过由胎盘mRNA进行PCR扩增获得编码SENP1的cDNA。通过PCR将SENP1cDNA亚克隆到细菌表达载体(pMAL-C2X；New EnglandBioLabs，Inc)。通过测序完整的开放阅读框确认序列。将pMAL-C2-SENP1转化到BL21细胞中，并在补充葡萄糖(2g.l-1)的LB-氨苄青霉素培养基中生长。用IPTG(0.5mM)诱导融合蛋白表达。收集细菌性细胞溶菌产物并在裂解缓冲液(Tris HCl 20mM pH7.4；1mM EDTA；200mM NaCl；0.5％ TritonX-100；10％甘油；蛋白酶抑制剂混合物)中裂解，随后进行超声波处理。在直链淀粉亲合树脂(New England BioLabs，Inc)上亲合纯化蛋白质。结合物在洗涤缓冲液(20mM Tris HCl pH7.4；200mM NaCl；1mM EDTA；0.5％ TritonX-100；10％甘油)中充分洗涤，并从树脂洗脱到10mM包含麦芽糖的洗涤缓冲液中。将蛋白质在透析缓冲液(Tris HCl pH7.6 20mM；NaCl 200mM；DTT1mM；EDTA 1mM；10％甘油)中进行透析。蛋白质纯化在4-12％ NuPAGE(Invitrogen)上进行分析。
SENP1活性试验 将MBP-SENP1在SENP1缓冲液(50mM Tris HCl；0.5mM EDTA；5mMDTT；0.01％ Triton X-100；牛血清白蛋白0.05mg.ml-1 pH7.6)中稀释。在-20℃下将化合物原料(100mM)在DMSO中贮存。化合物在下列最终浓度进行试验100μM；33.3μM；11.1μM；3.7μM；1.23μM；412nM；137nM；45.7nM；15.2nM；5nM。
在Black LJL 96孔板中(HE微板；Molecular Devices；20μl最终反应体积)进行反应，一式两份。用于SENP1的底物浓度是200nM SUMO-AMC(Chem.Biol.，2003，10，p.837-846)(Boston Biochem)。酶(SENP1)在特异性试验中的浓度是1.8nM。测定浓度，以在固定的底物浓度下在初始速率下进行特异性试验。将化合物用酶在25℃下预温育30分钟。通过向包含在试验缓冲液中稀释的酶(+/-化合物)的板中添加底物引发反应。将反应在37℃下温育60分钟。通过添加乙酸(最终100mM)将反应终止。在PherastarFluorescent Reader(BMG)上进行读数。λ发射380nm；λ激发＝460nm。将数据(平均值+/-标准偏差)作为对照(无化合物)％进行分析，使用GraphPad(Prism)将百分比相对化合物浓度的Log值进行绘图。将数据拟合成S形曲线模型(可变斜率)。
胱天蛋白酶3活性试验 将胱天蛋白酶3在胱天蛋白酶3缓冲液(100mM Hepes pH7.5；10％蔗糖；0.1％CHAPS)中稀释。在-20℃下将化合物原料(100mM)在DMSO中贮存。化合物在下列最终浓度进行试验100μM；33.3μM；11.1μM；3.7μM；1.23μM；412nM；137nM；45.7nM；15.2nM；5nM。在Black LJL 96孔板(HE微板；Molecular Devices；20μl最终反应体积)中进行反应，一式两份。用于胱天蛋白酶3特异性试验的底物浓度是500nM(Ac-DEVD-AMC；Promega)。酶(胱天蛋白酶3)在特异性试验中的浓度是3.2nM。测定浓度，以在固定的底物浓度下在初始速率下进行特异性试验。将化合物用酶在25℃下预温育30分钟。通过向包含在试验缓冲液中稀释的酶(+/-化合物)的板中添加底物引发反应。将反应在37℃下温育60分钟。通过添加乙酸(最终100mM)将反应终止。在Pherastar Fluorescent Reader(BMG)上进行读数。δ发射380nm；δ激发＝460nm。将数据(平均值+/-标准偏差)作为对照(无化合物)％进行分析，使用GraphPad(Prism)将百分比相对化合物浓度的Log值进行绘图。将数据拟合成S形曲线模型(可变斜率)。
组织蛋白酶B活性试验 将组织蛋白酶B在组织蛋白酶B缓冲液(20mM Tris HCl pH6.8；1mM EDTA；1mMDTT)中稀释。在-20℃下将化合物原料(100mM)在DMSO中贮存。化合物在下列最终浓度进行试验100μM；33.3μM；11.1μM；3.7μM；1.23μM；412nM；137nM；45.7nM；15.2nM；5nM。在Black LJL 96孔板(HE微板；Molecular Devices；20μl最终反应体积)中进行反应，一式两份。用于组织蛋白酶B特异性试验的底物浓度是36μM(z-RR-AMC；Calbiochem)。酶(组织蛋白酶B)在特异性试验中的浓度是3.6nM。测定浓度，以在固定的底物浓度下在初始速率条件下进行特异性试验。将化合物用酶在25℃下预温育30分钟。通过向包含在试验缓冲液中稀释的酶(+/-化合物)的板中添加底物引发反应。将反应在37℃下温育60分钟。通过添加乙酸(最终100mM)将反应终止。在Pherastar Fluorescent Reader(BMG)上进行读数。δ发射380nm；δ激发＝460nm。将数据(平均值+/-标准偏差)作为对照(无化合物)％进行分析，使用GraphPad(Prism)将百分比相对化合物浓度的Log值进行绘图。将数据拟合成S形曲线模型(可变斜率)。
细胞生存力(viability)和增殖方法 HCT116细胞生存力和增殖试验 由ATCC(American Type Culture Collection)获得HCT116结肠癌细胞，并将其保存在包含10％FBS、3mM谷氨酰胺和1％青霉素/链霉素的McCoy′s 5A培养基中。在37℃下，将细胞在包含5％CO2的湿润气氛中温育。
使用MTS技术，在96-孔培养板(CellTiter
Aqueous Non-RadioactiveCell Proliferation Assay，Promega)中按照厂商指示进行细胞生存力试验。MTS(3-(4，5-二甲基-噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑)是MTT-衍生的四唑，其在代谢活性细胞中被还原成可溶的渗入细胞中的甲
(cell-permeant formazan)。通过其在492nm处的吸光度测定的甲
的量与成活的代谢活性细胞数目成正比。
在每个孔中接种103个HCT116细胞。24小时后，改变培养基，并用下列浓度的各化合物将细胞处理3次10μM-3.33μM-1.11μM-370nM-123nM-41nM-14nM和5nM。将化合物在100％ DMSO中稀释，其最终作用于细胞的浓度保持在0.5％。
用化合物温育细胞72小时，然后通过添加MTS2小时试验其生存力。由96-孔培养板直接测量在492nm处的吸光度。使用S形曲线变化斜率拟合(Prism 4.0，Graphpad Softwares)计算各化合物的GI50(生长抑制50)浓度。数值表示3次独立试验的平均值。
PC3细胞生存力和增殖试验 由ATCC获得PC-3前列腺癌细胞，并将其保存在包含7％ FBS和1％青霉素/链霉素的F-12K培养基中。在37℃下，将细胞在包含5％ CO2的湿润气氛中温育。
使用MTS技术，在96-孔培养板(CellTiter
Aqueous Non-RadioactiveCell Proliferation Assay，Promega)中按照厂商指示试验细胞生存力。MTS(3-(4，5-二甲基-噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑)是MTT-衍生的四唑，其在代谢活性细胞中被还原成可溶的渗入细胞中的甲
。通过其在492nm处的吸光度测定的甲
(formazan)的量与成活的代谢活性细胞的数目成正比。
在每个孔中接种2 x 103个PC3细胞。24小时后，改变培养基，并用下列浓度的各化合物将细胞处理3次10μM-3.33μM-1.11μM-370nM-123nM-41nM-14nM和5nM。将化合物在100％ DMSO中稀释，其最终作用于细胞的浓度保持在0.5％。
用化合物温育细胞72小时，然后通过添加MTS 2小时试验其生存力。由96-孔培养板直接测量在492nm处的吸光度。使用S形曲线变化斜率拟合(Prism 4.0，Graphpad Softwares)计算各化合物的GI50(生长抑制50)浓度。数值表示3次独立试验的平均值。
结果 1.半胱氨酸蛋白酶活性的抑制 USP
UCH-L3
SENP1
胱天蛋白酶3
组织蛋白酶B
2.细胞生存力和增殖的抑制
PC3
权利要求
1.式(I)的化合物
其中
适宜地为单键或双键；
------适宜地为不存在或单键；
是5元、6元或7元杂环，优选包含1-5个杂原子的杂芳基，其任选地被一个或多个选自H、CN、Hal、Alk、OAlk、OH、NRCN、C(CN)＝C(OH)(OAlk)、SR、NRR′、C(O)NRR′、杂环、芳基、杂芳基的取代基取代，其中Alk、芳基、杂芳基、杂环任选地被一个或多个Hal、NRR′、CN、OH、CF3、芳基、杂芳基、OAlk取代；
其中
和
通过T和X稠合在一起；
T、U、V、W、X相同或不同并且可选自C、N、O、S；
Ru、Rv、Rw相同或不同并且可选自H、CN、＝O、Hal、Alk、OAlk、OH、全卤代烷基、NRCN、C(CN)＝C(OH)(OAlk)、SR、NRR′、C(O)NRR′、杂环、芳基、杂芳基、环烷基，其中Alk、芳基、杂芳基、杂环、环烷基任选地被一个或多个Hal、NRR′、CN、OH、CF3、芳基、杂芳基、OAlk或聚(氧亚烃基)取代，条件是Ru、Rv、Rw中的至少一个存在且不同于H；
R3、R4、R5、R6各自相同或不同并独立地选自H、OAlk、Alk、Hal、NRR′、CN、OH、OCF3、CF3、芳基、杂芳基；
R和R′各自相同或不同并独立地选自H、Alk，其中Alk任选地被一个或多个Hal、NRR′、CN、OH、CF3、芳基、杂芳基取代；
或其药学上可接受的盐、水合物、或水合盐、或这些化合物的多晶形晶体结构或其光学异构体、外消旋体、非对映体或对映体，
但不包括下列化合物
1-氨基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮；
其中Ph任选地被Cl、Br取代；
2.如权利要求1所述的式(I)化合物，其中T、U、V、W、X独立地为C或N。
3.如权利要求1或2之一所述的式(I)化合物，其中
包含2或3个杂原子。
4.如前述权利要求之一所述的式(I)化合物，其中Ru、Rv、Rw中的至少一个选自芳基、Alk、NRR′、Hal、-Alk芳基、-AlkOH、-AlkOAlk、环烷基、-CF3、-CH2-(OC2H4)2-CH3。
5.如前述权利要求之一所述的化合物，其中R3、R4、R5、R6各自相同或不同并独立地选自H、Hal、Alk、OAlk、OH、OCF3。
6.如前述权利要求之一所述的化合物，其中Rv、Rw独立地为H或不存在。
7.如前述权利要求之一所述的式(I)化合物，其中所述化合物如式(Ia)所示
其中R3-R6和Ru、Rv、Rw、T、U、V、W、X如前述权利要求之一中定义，Y、Z相同或不同，独立地选自C或N。
8.如前述权利要求之一所述的式(I)化合物，其中所述化合物如式(Ib)所示
其中R3-R6和Ru、Rv、Rw、T、U、V、W、X如前述权利要求之一中定义。
9.如前述权利要求之一所述的式(I)化合物，其中Rv＝Rw＝H，Ru选自芳基、Alk、NRR′、Hal、-Alk芳基、-AlkOH、-AlkOAlk、环烷基、-CF3、-CH2-(OC2H4)2-CH3。
10.如前述权利要求之一所述的式(I)化合物，其中R4＝R5＝H，R3、R6独立地选自H、Hal、Alk、OAlk、OH、OCF3。
11.如前述权利要求之一所述的化合物，所述化合物选自
1-甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-氨基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-丙基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-丙基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-丁基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-丁基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-异丁基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-异丁基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-羟甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-羟甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-甲氧基甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-甲氧基甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-环丙基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-环丙基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-苄基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-苄基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-氯-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-溴-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-溴-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
6-(7)-氯-1-甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
7-氯-3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
2-甲基-2H-1，2，3，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
2-苄基-2H-1，2，3，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-异丙基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-异丙基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-三氟甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-三氟甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-[2-(2-甲氧基-乙氧基)-乙氧基甲基]-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
6，7-二甲氧基-1-甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
6，7-二甲氧基-3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-乙基-6，7-二甲氧基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-乙基-6，7-二甲氧基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
6，7-二甲氧基-1-丙基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
6，7-二甲氧基-3-丙基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-乙基-5，8-二甲氧基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-乙基-5，8-二甲氧基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
6，7-二羟基-1-甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
或其药学上可接受的盐、水合物、或水合盐、或这些化合物的多晶形晶体结构或其光学异构体、外消旋体、非对映体或对映体。
12.制备如前述权利要求之一所述的式(I)化合物的方法，所述方法包括使式(I′)的相应化合物
其中Hetl、T、U、V、W、X如权利要求1-7之一中定义，并且其中R3′、R4′、R5′、R6′、Ru′、Rv′、Rw′中的至少一个是相应的R3、R4、R5、R6、Ru、Rv、Rw的前体基团，而其它与期望的R3、R4、R5、R6、Ru、Rv、Rw相似，
通过一个或多个使前体基团转化为期望的R3、R4、R5、R6、Ru、Rv或Rw基团的步骤进行反应的步骤，以及任选地分离式(I)化合物。
13.制备如前述权利要求之一所述的化合物的方法，所述方法包括使式(II)和式(III)的相应化合物反应的步骤
其中R3、R4、R5、R6、T、U、V、W、X、Ru、Rv、Rw如权利要求1-7之一中定义。
14.如权利要求13所述的方法，其中所述反应在酸存在下，在有机质子溶剂中进行。
15.药物组合物，所述药物组合物包含式(I)化合物以及药学上可接受的载体
其中
适宜地为单键或双键；
------适宜地为不存在或单键；
是5元、6元或7元杂环，优选包含1-5个杂原子的杂芳基，其任选地被一个或多个选自H、CN、Hal、Alk、OAlk、OH、NRCN、C(CN)＝C(OH)(OAlk)、SR、NRR′、C(O)NRR′、杂环、芳基、杂芳基的取代基取代，其中Alk、芳基、杂芳基、杂环任选地被一个或多个Hal、NRR′、CN、OH、CF3、芳基、杂芳基、OAlk取代；
其中
和
通过T和X稠合在一起；
T、U、V、W、X相同或不同并且可选自C、N、O、S。
Ru、Rv、Rw相同或不同并且可选自H、CN、＝O、Hal、Alk、OAlk、OH、全卤代烷基、NRCN、C(CN)＝C(OH)(OAlk)、SR、NRR′、C(O)NRR′、杂环、芳基、杂芳基、环烷基，其中Alk、芳基、杂芳基、杂环、环烷基任选地被一个或多个Hal、NRR′、CN、OH、CF3、芳基、杂芳基、OAlk或聚(氧亚烃基)取代，条件是Ru、Rv、Rw中的至少一个存在且不同于H。
R3、R4、R5、R6各自相同或不同并独立地选自H、OAlk、Alk、Hal、NRR′、CN、OH、OCF3、CF3、芳基、杂芳基；
R和R′各自相同或不同并独立地选自H、Alk，其中Alk任选地被一个或多个Hal、NRR′、CN、OH、CF3、芳基、杂芳基取代；
或其药学上可接受的盐、水合物、或水合盐、或这些化合物的多晶形晶体结构或其光学异构体、外消旋体、非对映体或对映体。
16.如权利要求15所述的药物组合物，其中式(I)如权利要求2-10之一中定义。
17.如权利要求15或16所述的药物组合物，其中所述式(I)化合物选自
1-甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-氨基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-氨基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-丙基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-丙基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-丁基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-丁基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-异丁基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-异丁基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-羟甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-羟甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-甲氧基甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-甲氧基甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-环丙基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-环丙基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-苄基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-苄基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-氯-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-溴-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-溴-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
6-(7)-氯-1-甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
7-氯-3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
2-甲基-2H-1，2，3，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
2-苄基-2H-1，2，3，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-异丙基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-异丙基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-三氟甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-三氟甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-[2-(2-甲氧基-乙氧基)-乙氧基甲基]-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
6，7-二甲氧基-1-甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
6，7-二甲氧基-3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-乙基-6，7-二甲氧基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-乙基-6，7-二甲氧基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
6，7-二甲氧基-1-丙基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
6，7-二甲氧基-3-丙基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
1-乙基-5，8-二甲氧基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
3-乙基-5，8-二甲氧基-1，2，3a，4，10-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
6，7-二羟基-1-甲基-2，3，4，10，10a-五氮杂-环戊二烯并[b]芴-9-酮
或其药学上可接受的盐、水合物、或水合盐、或这些化合物的多晶形晶体结构或其光学异构体、外消旋体、非对映体或对映体。
18.如权利要求15-17之一中定义的式(I)化合物在制备用于抑制一种或多种半胱氨酸蛋白酶的药物中的应用。
19.如权利要求18所述的应用，其中所述半胱氨酸蛋白酶属于一组或多组去泛素化酶、胱天蛋白酶、组织蛋白酶、钙蛋白酶以及病毒、细菌、真菌或寄生虫半胱氨酸蛋白酶。
20.如权利要求15-17之一中定义的式(I)化合物在制备用于治疗和/或预防癌症和转移、神经变性疾病例如阿尔茨海默氏病和帕金森病、炎症、心血管疾病和/或病毒感染和/或潜伏的药物中的应用，所述病毒特别是单纯疱疹病毒-1、Epstein-Barr病毒或SARS冠状病毒。
21.如权利要求20所述的应用，其中所述化合物抑制一种或多种去泛素化酶。
22.如权利要求15-17之一中定义的式(I)化合物在制备用于治疗和/或预防炎症、神经变性疾病，优选由中风引起的神经细胞损害、由急性或慢性感染性、局部缺血性或化学性肝损伤引起的肝损害和肝功能衰竭、由急性或慢性感染性、局部缺血性或化学性肾损伤引起的肾损害和肾衰竭、由急性或慢性感染性、局部缺血性或化学性心脏损伤引起的心脏损害和心力衰竭、由对胰岛的胰岛素β-细胞的急性或慢性自体免疫性、化学性、氧化性或代谢性损伤引起的糖尿病的药物中的应用。
23.如权利要求22所述的应用，其中所述化合物抑制一种或多种胱天蛋白酶。
24.如权利要求15-17之一中定义的式(I)化合物在制备用于治疗和/或预防癌症和转移、心血管疾病、免疫病症、骨和关节疾病、骨质疏松和关节炎的药物中的应用。
25.如权利要求24所述的应用，其中所述化合物抑制一种或多种组织蛋白酶。
26.如权利要求15-17之一中定义的式(I)化合物在制备用于治疗和/或预防衰老病症、迟发性糖尿病和白内障的药物中的应用。
27.如权利要求26所述的应用，其中所述化合物抑制一种或多种钙蛋白酶。
28.如权利要求15-17之一中定义的式(I)化合物在制备用于治疗和/或预防病毒感染和疾病的药物中的应用。
29.如权利要求28所述的应用，其中所述病毒感染和疾病选自甲型肝炎、丙型肝炎、SARS冠状病毒感染和疾病、鼻病毒感染和疾病、腺病毒感染和疾病、脊髓灰质炎。
30.如权利要求28或29的应用，其中所述化合物抑制一种或多种病毒半胱氨酸蛋白酶。
31.如权利要求15-17之一中定义的式(I)化合物在制备用于治疗和/或预防细菌感染和疾病的药物中的应用。
32.如权利要求31所述的应用，其中所述的细菌感染或疾病选自链球菌感染和疾病、由梭菌属的细菌引起的感染和疾病、葡萄球菌感染和疾病、龈炎和牙周病。
33.如权利要求31或32所述的应用，其中所述化合物抑制一种或多种细菌性半胱氨酸蛋白酶。
34.如权利要求31-33之一所述的应用，其中所述化合物抑制一种或多种选自链球菌蛋白酶、梭菌蛋白酶、葡萄球菌半胱氨酸蛋白酶、牙龈卟啉菌蛋白酶(gingipain)的细菌性半胱氨酸蛋白酶。
35.如权利要求15-17之一中定义的式(I)化合物在制备用于治疗和/或预防真菌感染和疾病的药物中的应用。
36.如权利要求34所述的应用，其中所述化合物抑制一种或多种真菌性半胱氨酸蛋白酶。
37.如权利要求15-17之一中定义的式(I)化合物在制备用于治疗和/或预防原生动物寄生虫感染和疾病的药物中的应用。
38.如权利要求37所述的应用，其中所述化合物抑制一种或多种来自原生动物寄生虫的半胱氨酸蛋白酶。
39.如权利要求15-17之一中定义的式(I)化合物在制备用于治疗和/或预防扁形动物寄生感染和疾病的药物中的应用。
40.如权利要求39所述的应用，其中所述化合物抑制一种或多种来自扁形动物寄生虫的半胱氨酸蛋白酶。
41.如权利要求15-17之一中定义的式(I)化合物在制备用于治疗和/或预防线虫寄生感染和疾病的药物中的应用。
42.如权利要求41所述的应用，其中所述化合物抑制一种或多种来自线虫寄生虫的半胱氨酸蛋白酶。
43.如权利要求20-42之一所述的应用，其中所述药物与一种或多种治疗组合应用，所述治疗选自抗癌治疗、神经病学治疗、溶血栓治疗、抗氧化剂治疗、抗感染、抗高血压治疗、利尿治疗、溶血栓治疗、免疫抑制治疗、心血管治疗、免疫调节治疗、抗炎治疗、抗病毒治疗、抗细菌治疗、抗真菌治疗、抗原生动物治疗、抗寄生治疗。
全文摘要
本发明涉及新型式(I)化合物，其制备方法及其治疗应用。
文档编号A61K31/53GK101365702SQ200680052498
公开日2009年2月11日 申请日期2006年12月5日 优先权日2005年12月8日
发明者P·格达特, G·布瓦西, C·博格-卡普拉, F·科兰德, L·达维耶, E·弗姆斯特克, X·雅克, J-C·兰, R·德朗索纳, I·皮莱托, S·维格南多 申请人:海布里詹尼克斯股份公司