专利名称：一种紫杉醇纳米粒子及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明属制药技术领域，特别是涉及一种紫杉醇纳米粒子及其制备方法和 应用。
背景技术：
紫杉醇(Paclitaxel， PTX)是由红豆杉属植物提取的一种具有抗癌活性的 二萜类化合物。作为目前最好的抗肿瘤药物之一，它在临床上己得到广泛应 用，特别是对乳腺癌、卵巢癌的治疗作用明显。但其水溶性极差，为了增加 其溶解性，便于临床给药，目前国内外紫杉醇制剂均采用同一配方，即在紫 杉醇乙醇注射剂中加入了一种表面活性剂一一聚氧乙基蓖麻油(Cremophor EL)。但是聚氧乙基蓖麻油能促进组胺释放，常引起严重的过敏反应以及产生 高敏性、神经毒性、肾毒性、心脏毒性等不良反应，给病人带来了极度的痛 苦。为了解决上述问题，研究不含聚氧乙基蓖麻油并能提高紫杉醇生物利用 度的其它液体制剂成为当前的热点，其中包括合成紫杉醇的易溶性前体药物 (Kahashi T. Tsukamolo H. Yamada H. el al Design and synthesis of a water-soluble taxol analogue: taxol-sialyl conjugate [J] Bioorg Med Chem Lett. 1998. 8: 113-116)以及脂质体(Crosasso P， Cemti M, Brisa P. etal Preparation, characterization and properties of stencally stabilized paclitaxel-contaiuiug liposomes [J] Controlled Release. 2000. 63: 19-30) 等。
壳聚糖(chitosan， CS)是甲壳素脱乙酰基的产物。它是一种氨基多糖，有 许多独特的物理、化学特性和生物功能。壳聚糖具有良好的生物黏附特性和 生物可降解性(蒋挺大.壳聚糖.北京化学工业出版社2001: 1 32)，可增
强穿透作用及酶抑制作用，因此被研制成为生物大分子药物的运送载体，以 增加药物在体内的有效浓度，提高疗效。而与其它种类的高分子药物载体相 比，壳聚糖不仅原料丰富，而且具有成本低、可生物降解、良好的生物相容 性和生物亲和性、无毒、易于化学改性等优点，本身还具有抗菌、止血、抑 制癌细胞转移等作用。
目前，国内外已有多篇文献报道壳聚糖衍生物作为紫杉醇药物载体的相 关研究，但事先都需要对壳聚糖进行功能性修饰。
发明内容
所要解决的技术问题
本发明所要解决的技术问题是提供一种紫杉醇纳米粒子及其制备方法和 应用，以克服现有的壳聚糖衍生物作为紫杉醇药物载体的相关技术事先都需 要对壳聚糖进行功能性修饰的缺陷。
技术方案
本发明的技术方案之一是提供一种紫杉醇纳米粒子，通过如下制备方法
获得
(1)将含有表面活性剂的紫杉醇的醇溶液置于室温条件下，随着醇溶剂的
挥发，制得紫杉醇纳米粒子；(2) 将紫杉醇纳米粒子溶解在壳聚糖溶液中作为水相，与油相混合后在 25-35°0的恒温下搅拌1 4小时，制备乳液；
(3) 用交联剂将壳聚糖包裹的紫杉醇纳米粒子从乳液中固化析出，用有机 溶剂洗涤粒子，真空干燥后即可获得载有紫杉醇的壳聚糖纳米粒子。
上述的紫杉醇纳米粒子的优选方案之一为，所述的载有紫杉醇的壳聚糖 纳米粒子中壳聚糖与紫杉醇的质量比为1:1-4:1。
上述的紫杉醇纳米粒子的优选方案之二为，所述的壳聚糖纳米粒子对紫 杉醇的包封率为70-80%,载药量为15-25wt%。
上述的紫杉醇纳米粒子的优选方案之三为，所述的壳聚糖、表面活性剂、 交联剂、油相的质量比为500-4000: 250-2000: 80-160、 160000-400000。
上述的紫杉醇纳米粒子的优选方案之四为，所述的交联剂为柠檬酸三钠， 所述的油相为液体石蜡，所述的洗涤粒子的有机溶剂为石油醚、异丙醇或者 两者的组合。
上述的紫杉醇纳米粒子的优选方案之五为，所述的醇溶液为乙醇溶液， 所述的壳聚糖溶液为壳聚糖的醋酸溶液。
本发明的技术方案之二是提供一种紫杉醇纳米粒子的制备方法，依次包
括如下步骤
(4) 将含有表面活性剂的紫杉醇的醇溶液置于室温条件下，随着醇溶剂的 挥发，制得紫杉醇纳米粒子；
(5) 将紫杉醇纳米粒子溶解在壳聚糖溶液中作为水相，与油相混合后在 25-35'C的恒温下搅拌1 4小时，制备乳液；
(6) 用交联剂将壳聚糖包裹的紫杉醇纳米粒子从乳液中固化析出，用有机
溶剂洗涤粒子，真空干燥后即可获得载有紫杉醇的壳聚糖纳米粒子。 上述的紫杉醇纳米粒子的制备方法的优选方案之一为，所述的载有紫杉
醇的壳聚糖纳米粒子中壳聚糖与紫杉醇的质量比为1:1-4:1。
上述的紫杉醇纳米粒子的制备方法的优选方案之二为，所述的壳聚糖纳
米粒子对紫杉醇的包封率为70-80%，载药量为15-25wt%。
本发明的技术方案之三是提供一种卵巢癌细胞的抑制剂，由权利要求1
所述的载有紫杉醇的壳聚糖纳米粒子和药学上可接受的载体组成。
本发明所制备的壳聚糖/紫杉醇载药纳米粒子可以简称为CS/PTX NPs。
有益效果
本发明采用生物降解材料壳聚糖制备包裹紫杉醇药物的纳米粒，也可避 免聚氧乙基蓖麻油引起的严重的过敏反应以及产生高敏性、神经毒性、肾毒 性、心脏毒性等不良反应问题，并且可利用纳米粒的耙向和缓控释作用，在 一定程度上提高药物的疗效，降低其自身的毒副反应。
本发明的载有紫杉醇的壳聚糖纳米粒子采用溶剂挥发一乳化交联法制 备，无须对壳聚糖进行任何化学修饰，直接可以将其作为紫杉醇药物的载体， 避免了繁琐和复杂的修饰步骤，操作过程方便，并降低了生产成本，利于推 广。且制备的载药钠米粒子为单分散的规则球体，粒径控制在80±30nm，无 团聚现象。
利用本发明的壳聚糖/紫杉醇载药纳米粒子对卵巢癌细胞进行细胞毒性实 验，结果表明所制备的载药纳米粒子对肿瘤细胞有显著的缓释促凋亡作用。
图1为CS/PTX NPs对卵巢癌细胞A2780细胞生长抑制趋势图。结果表 明载药纳米粒子能有效促进A2780细胞的凋亡，且细胞凋亡量随着培养时 间的延长而增大，证明制得的粒子具有一定的缓释作用；粒子浓度对细胞凋 亡有影响。培养时间相同时，粒子浓度越高，细胞凋亡量越大。
图2为PTX药物溶于乙醇的紫外吸收光谱图。227nm处的特征吸收峰为 PTX药物的最大吸收波长(Amax)。
图3为CS/PTX NPs溶于乙醇的紫外吸收光谱图。在227nm附近出现了 PTX的特征吸收峰，可知PTX被成功地包裹进CS中。
图4为CS/PTX NPs透射电镜图。图3表明，制成的CS/PTX NPs为球
型粒子，这些粒子分散均匀，且无团聚现象，粒径范围控制为80±30nm。
具体实施例方式
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，如纳 米材料技术手册，或按照制造厂商所建议的条件。 实施例1
采用溶剂挥发法和乳液交联法，用壳聚糖对紫杉醇纳米粒子进行包裹， 得到粒径大小约为80±30nm的球形粒子，具体实施方式
如下
(1 )将30mg紫杉醇0.5mL乙醇溶液滴加到50mL含50mg表面活性 剂十二垸基硫酸钠(SDS)的水中，在室温条件下，随着乙醇溶剂的挥发， 制得紫杉醇纳米粒子(PTXNPs);
(2) 将100mg壳聚糖、PTX NPs和0.5mL 0.5%稀醋酸溶液(质量比) 混合，加入到80mL液体石蜡中，在25'C条件下恒温搅拌4小时；
(3) 在混合液中加入0.5mL 2%柠檬酸三钠，反应30 min后固化析出粒 子；将所得到的粒子分别用石油醚和异丙醇洗涤，并将粒子真空干燥保存。
用紫外分光光谱仪(UV)、透射电子显微镜(TEM)等测试仪器进行粒子表 征。结果见图2、图3和图4。
实施例2
(1) 将50mg紫杉醇、0.5mL乙醇溶液滴加到50mL含50mg十二垸基 硫酸钠的水中，在室温条件下，随着乙醇溶剂的挥发，制得紫杉醇纳米粒子
(PTXNPs);
(2) 将100mg壳聚糖、PTX NPs、 2mL0.5。/。稀醋酸溶液(质量比)混 合，加入到70mL液体石蜡中，在35'C条件下恒温搅拌1小时；
(3) 在混合液中加入0.5mL2。/。柠檬酸三钠，反应30 min后固化析出粒 子；将所得到的粒子分别用石油醚和异丙醇洗涤，并将粒子真空干燥保存。
实施例3
将处于对数生长的卵巢癌细胞A2780分别调成1x104个/mL接种于96 孔培养板，每孔100|jL。分别加入三种不同浓度的壳聚糖载药纳米粒子(25ijg /mL、 2.5|jg/mL、 0.25|jg/mL)，每种浓度平行4孔。给予10%牛血清1640 培养液，毎孔加100ijL，分别培养24h、 48h、 72h和96h后，观察所制的粒 子对细胞的促凋亡作用效果。实验结果如图1所示。
权利要求
1.一种紫杉醇纳米粒子，通过如下制备方法获得(1)将含有表面活性剂的紫杉醇的醇溶液置于室温条件下，随着醇溶剂的挥发，制得紫杉醇纳米粒子；(2)将紫杉醇纳米粒子溶解在壳聚糖溶液中作为水相，与油相混合后在25-35℃的恒温下搅拌1～4小时，制备乳液；(3)用交联剂将壳聚糖包裹的紫杉醇纳米粒子从乳液中固化析出，用有机溶剂洗涤粒子，真空干燥后即可获得载有紫杉醇的壳聚糖纳米粒子。
2. 根据权利要求1所述的紫杉醇纳米粒子，其特征在于，所述的载有紫杉醇 的壳聚糖纳米粒子中壳聚糖与紫杉醇的质量比为1:1 -4:1 。
3. 根据权利要求1所述的紫杉醇纳米粒子，其特征在于，所述的壳聚糖纳米 粒子对紫杉醇的包封率为70-80%，载药量为15-25wt%。
4. 根据权利要求1所述的紫杉醇纳米粒子，其特征在于，所述的壳聚糖、表 面活性剂、交联剂、油相的质量比为500-4000: 250-2000: 80-160、 160000-400000。
5. 根据权利要求1或4所述的紫杉醇纳米粒子，其特征在于，所述的交联剂 为柠檬酸三钠，所述的油相为液体石蜡，所述的洗涤粒子的有机溶剂为石 油醚、异丙醇或者两者的组合。
6. 根据权利要求1所述的紫杉醇纳米粒子，其特征在于，所述的醇溶液为乙 醇溶液，所述的壳聚糖溶液为壳聚糖的醋酸溶液。
7. —种紫杉醇纳米粒子的制备方法，依次包括如下步骤(1)将含有表面活性剂的紫杉醇的醇溶液置于室温条件下，随着醇溶剂的 挥发，制得紫杉醇纳米粒子； (2) 将紫杉醇纳米粒子溶解在壳聚糖溶液中作为水相，与油相混合后在 25-35-C的恒温下搅拌1 4小时，制备乳液；(3) 用交联剂将壳聚糖包裹的紫杉醇纳米粒子从乳液中固化析出，用有机 溶剂洗漆粒子，真空干燥后即可获得载有紫杉醇的壳聚糖纳米粒子。
8. 根据权利要求1所述的紫杉醇纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述的 载有紫杉醇的壳聚糖纳米粒子中壳聚糖与紫杉醇的质量比为1:1-4:1。
9. 根据权利要求1所述的紫杉醇纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述的 壳聚糖纳米粒子对紫杉醇的包封率为70-80%，载药量为15-25wt%。
10. —种卵巢癌细胞的抑制剂，由权利要求1所述的载有紫杉醇的壳聚糖纳米 粒子和药学上可接受的载体组成。
全文摘要
本发明涉及一种紫杉醇纳米粒子，通过如下制备方法获得将含有表面活性剂的紫杉醇的醇溶液置于室温条件下，随着醇溶剂的挥发，制得紫杉醇纳米粒子；将紫杉醇纳米粒子溶解在壳聚糖溶液中作为水相，与油相混合后在25-35℃的恒温下搅拌1～4小时，制备乳液；用交联剂将壳聚糖包裹的紫杉醇纳米粒子从乳液中固化析出，用有机溶剂洗涤粒子，真空干燥后即可获得载有紫杉醇的壳聚糖纳米粒子。本方法无须对壳聚糖进行任何化学修饰，所制备的载药纳米粒子对肿瘤细胞有明显的缓释促凋亡作用。
文档编号A61K31/337GK101167716SQ20071004776
公开日2008年4月30日 申请日期2007年11月2日 优先权日2007年11月2日
发明者于永春, 朱怀仕, 芳 李, 李佳咛, 沈鹤柏, 童晓文, 马经纬 申请人:上海市第十人民医院