专利名称：：黄背木耳发酵产物,含该发酵产物的组合物及其制法的制作方法
技术领域：
：本发明涉及黄背木耳发酵产物的制备方法，属于生物发酵领域。技术背景黄背木耳^"Wc"/flWfl/Wy加'c/rfl(Mont)Sacl.是热带及亚热带地区主要食用菌之一，属于真菌门、担子菌纲、银耳目、木耳科、木耳属，外形呈菊花状。黄背木耳口感脆嫩，营养物质丰富，具有益智健脑、强壮、补血治血、滋阴润燥、养胃通便、清肺益气、镇静止痛等功效。黄背木耳多糖对机体免疫功能有调节作用，能有效对抗机体衰老，防癌抗癌。其中的植物胶质有较强的吸附能力，可将残留在人体消化系统内的杂质、废物排出体外。而丰富的纤维素能促进胃肠蠕动，促使肠道脂肪等排泄，减少食物中脂肪的吸收，从而起到防止肥胖和便秘的作用。经国家粮食贮备局成都粮食储藏科学研究所质量检测中心检测表明，黄背木耳子实体含粗蛋白6%、粗纤维素22.5%、不溶性膳食纤维46.9%，氨基酸总量达4.57%,检出人体必需的7种氨基酸。还含有丰富的微量元素，其中铁4.57mg/kg、镁93,52m^kg、锌0.78mg/kg。现有黄背木耳子实体总多糖含量为75.85175.48mg/g，氨基酸总量为2.57~6.75%。目前尚无采用乳酸菌与黄背木耳混合发酵的产物及制备方法的相关报道。
发明内容本发明所解决的第一个技术问题是提供一种黄背木耳发酵产物的制备方法。该方法是采用乳酸菌与黄背木耳混合发酵的制备方法，它包括如下步骤a、活化乳酸菌菌株，扩大培养，得乳酸菌菌种；b、取黄背木耳v4"r/c"/aWa/Vv加'c/rfl(Mont)Sac1.，粉碎，过筛；c、取步骤b粉碎所得黄背木耳粉末，按黄背木耳粉末lg、水2050ml计制备底物;d、取步骤c所得底物，在温度为40100。C时加热16小时，冷却反应物至50'C;e、取步骤a所得扩大培养的菌种，加入步骤d所得冷却后的反应物中，菌种接种量为反应物重量的515%，发酵2496小时，即得液态黄背木耳发酵产物。该制备方法还包括如下步骤，灭活取步骤e所得液态黄背木耳发酵产物，按体积比1:1加入水，灭活温度范围为60100°C，灭活时间至少20min;浓縮浓縮至原发酵液体积的1/51/4;醇沉加入乙醇使浓縮液的乙醇浓度为6585Xv/v;干燥静置，收集沉淀，干燥沉淀，即得固态黄背木耳发酵产物。本发明所解决的第二个技术问题是提供一种黄背木耳发酵产物，该发酵产物较黄背木耳子实体中的总多糖含量和氨基酸总量显著提高。其中，液态黄背木耳发酵产物干燥后其总多糖含量为89.23~189.84mg/g，氨基酸总量为4.99~8.79%;固态黄背木耳发酵产物总多糖含量为89.23~189.84mg/g，氨基酸总量为4.99~8.79%。本发明所解决的第三个技术问题是提供一种组合物，它是含有本发明黄背木耳发酵产物为活性成分，加入药学、食品或保健食品可接受的辅料、辅助性成分或添加剂制备而成的制剂。采用本发明制备方法制备黄背木耳发酵产物，方法简单，条件易于控制，可控性强，耗时少，成本低；制备而得的黄背木耳发酵产物在总多糖含量和氨基酸总量方面显著增加，总多糖含量增加约11%，氨基酸总量增加约50%。通过利用乳酸菌代谢过程中产生的某一个或一组酶对黄背木耳进行催化转化反应，不仅大大提高了原材料中总多糖物质的含量，使氨基酸总量增加，同时较黄背木耳子实体很大程度提高了营养价值和保健功效，所得产品完全安全、无毒。为公众提供了黄背木耳发酵产物及其制备方法。图l黄背木耳发酵产物制备流程图。具体实施方式本发明提供了黄背木耳发酵产物的制备方法，是采用乳酸菌与黄背木耳混合发酵的方法，它包括如下步骤-a、活化乳酸菌菌株，扩大培养，得乳酸菌菌种；b、取黄背木耳y4"/7'CM/flr/fl户o(v加'c/ifl(Moiit)Sac1.，粉碎，过筛；c、取步骤b粉碎所得黄背木耳粉末，按黄背木耳粉末lg、水2050ml计制备底物;d、取步骤c所得底物，在温度为40100'C时加热16小时，冷却反应物至50'C;e、取步骤a所得扩大培养的菌种，加入步骤d所得冷却后的反应物中，菌种接种量为反应物重量的515%，发酵2496小时，即得液态黄背木耳发酵产物。通过工艺条件筛选试验，进一步优选以下条件参数用于制备黄背木耳发酵产物步骤a所述的乳酸菌为嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、保加利亚乳杆菌、德氏乳杆菌、短乳杆菌中的至少一种；优选其中的嗜酸乳杆菌。步骤a所述的种子培养基活化时间为24小时。步骤b所述的黄背木耳粉碎粒度为可过40120目筛，优选步骤b所述的黄背木耳粉碎粒度为可过100目筛。步骤c所述的按黄背木耳粉末lg、水40ml计制备底物。步骤d所述的底物在80'C时加热2小时。步骤e所述的菌种接种量为反应物重量的10%,发酵72小时。本发明制备方法还包括如下步骤，灭活取步骤e所得液态黄背木耳发酵产物，按体积比1:1加入水，灭活温度范围为60100°C,灭活时间至少20min;浓縮浓縮至原发酵液体积的1/51/4;醇沉加入乙醇使浓縮液的乙醇浓度为6585%v/v，优选加入乙醇使浓縮液乙醇浓度为75%v/v;干燥静置，收集沉淀，干燥沉淀，即得固态黄背木耳发酵产物。本发明制备方法所得的黄背木耳发酵产物，其特征在于，液态黄背木耳发酵产物干燥后其总多糖含量为89.23~189.84mg/g，氨基酸总量为4.99~8.79%;固态黄背木耳发酵产物总多糖含量为89.23~189.84mg/g，氨基酸总量为4.99~8.79%。本发明组合物，它是含有本发明黄背木耳发酵产物为活性成分，加入药学、食品或保健食品可接受的辅料、辅助性成分或添加剂制备而成的制剂。可采用口服制剂，包括片剂、胶囊剂、散剂、丸剂或口服液等常规剂型。以下提供黄背木耳发酵产物的制备方法中工艺参数的筛选试验说明本发明制备方法的选择依据。试验材料原料、菌种、仪器设备及试剂等材料1、黄背木耳由德阳市食用菌专家大院提供。品种号781。2、菌种(1)嗜热链球菌5^卬tococc"s狄er附印W/"s购于中国普通微生物菌种保藏管理中心菌种编号1.2471;(2)嗜酸乳杆菌"Cto6flc///"Sa"Vto/J緒"S购于中国普通微生物菌种保藏管理中心菌种编号1.1854;(3)植物乳杆菌"Cto6flC///""/fl"tonM购于中国普通微生物菌种保藏管理中心菌种编号1.3;(4)保加利亚乳杆菌h加6鎖7/附6"/gflr/c"s购于中国工业微生物菌种保藏管理中心菌种编号6032;(5)德氏乳杆菌￡acto6fldW"srfe/6f"ecft购于中国工业微生物菌种保藏管理中心菌种编号6032;(6)短乳杆菌i^Cto6fl7/"S6wv/s购于中国工业微生物菌种保藏管理中心菌种编号6004。嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌菌种MRS培养基培养基(g/L):蛋白胨10，牛肉浸膏10，酵母膏10，葡萄糖5,柠檬酸二胺2，吐温801，磷酸氢二钾2,NaAC3H205，MgS047H200.2，MnS04H200.05，蒸馏水lOOOml，琼脂10-15，pH6.9士0.1，121'C灭菌15min。保加利亚乳杆菌、德氏乳杆菌菌种培养基培养基(g/L):牛肉膏5，酵母膏5，蛋白胨10，葡萄糖10，乳糖5，氯化钠5，琼脂20，pH6.8。短乳杆菌菌种培养基培养基(g/L):麦芽汁，酵母膏5，无菌碳酸钙6，琼脂1520。3、主要仪器隔水式电热恒温培养箱型号PYX-DHS-50X65-S，上海跃进医疗器械厂；分光光度计型号T6新世纪，北京普析通用仪器有限责任公司；直立型落地空气浴恒温振荡器型号HZQ-X100，钱江仪器设备厂；液体发酵系统泰兴(鼎星)生物有限公司。4、试剂苯酚、硫酸、蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏、葡萄糖、柠檬酸、MnS04，H20、吐温80、磷酸氢二钾、琼脂、牛血清白蛋白(BSA)、磷酸、无水乙醇等，均为市售产叩o菌落数的测定1、编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10—4、1(TS、10—6、l(T7、l(T8、10-9(稀释度)各3套。另取8支盛有4.5ml无菌水的试管，依次标上10"、10—2、l(T3、l(T4、10—5、106、107、108、109。2、倒平板灭菌后的固体培养基冷却至55~60°〇时，倒入已灭菌的平板中，约15ml/平皿。放入37'C培养箱中培养24h后，无杂菌者可使用。3、稀释无菌条件下，用移液器吸取0.5ml已充分混勾的发酵液(待测样品)，放至10"的试管中，此即为10倍稀释。将1(^试管置振荡器振荡，使菌液充分混匀。从10—1菌液中精确吸取0.5111至10-2试管中，此即为100倍稀释，……其余依次类推。4、涂布分别吸取经无菌条件下稀释后的发酵液各0.21111对号放入已写好稀释度的平皿中，用无菌玻璃棒将其在培养基表面轻轻涂布均匀，室温下静置培养510min后，将平板倒置于培养箱中，37'C条件下，培养24h。5、计数培养24h后，取出培养平板，算出同一稀释度三个平板上的菌落平均数，并按下列公式进行计算。每毫升中菌落形成单位(cfu)-同一稀释度三次重复的平均菌落数x稀释倍数xs发酵液中总多糖含量测定本实验采用苯酚4酸分光光度法在室温下测定不同发酵时间后，黄背木耳中发酵液中总多糖含量，以葡萄糖作为对照，测定波长为490nm。1、葡萄糖对照品贮备液的配制精密称取60'C干燥至恒重的分析纯葡萄糖标准品20mg，溶解并定容500ml则其浓度为40ug/ml。2、苯酚液的配制称取化学纯苯酚100g,置于烧瓶中，加入0.1g铝片、0.05g碳酸氢钠，加热蒸馏，收集180182'C馏分。称取重蒸苯酚6g，加入蒸馏水定容至100ml，置于棕色瓶中备用。3、实验条件的选择检测波长的确定_一取葡萄糖对照品溶液和样品溶液，分别经苯酚一硫酸试剂显色后，作全波长扫描测定，结果葡萄糖和样品透析液经显色后，均在490nm波长处有最大吸收峰。因此选定490nm为检测波长。4、标准曲线精密吸取葡萄糖标准贮备液0.2、0.3、0.4、0,5、0.6ml定容至lml，各加入苯酚液1.0ml，迅速滴加浓硫酸5.0ml，另以l.Oml水同上操作，作为空白液。20min后，于波长4卯nm处测其吸光度，分别为0.047、0.071、0.109、0.139、0.184，得回归方程为Y=142.32x+0.2137，R2=0.9939。式中Y为葡萄糖浓度，x为吸光度。氨基酸含量测定按GB/T5009.124-2003执行。菌种的活化及液体种子的培养取一4'C冰箱保存的乳酸菌菌种斜面，经种子培养基活化24h后，每一斜面菌种接五瓶300ml种子培养基(500mL锥形瓶)，37'C条件下，静置培养24h。对培养基中的乳酸菌进行平板记数，此时培养液中乳酸菌菌落数达10S个/ml。一、菌种筛选的试验研究1、实验方法1.1发酵用培养基的制备准确称取黄背木耳粗粉(50~60目)60g，加水2400ml，充分混匀。用量筒量取100ml置250ml锥形瓶中进行分装，U5'C条件下，灭菌30min。每种乳酸菌在菌落测定时设三次重复。1.2菌种的活化及液体种子的培养同前。1.3发酵培养将上述菌种液分别以10%(约3.0xl()8个/ml)接种量接入灭菌后的黄背木耳发酵培养基中，37'C条件下，连续培养96h。1.4菌落数的测定同前。1.5发酵液中总多糖含量测定同前。2、结果2.1不同发酵时间不同乳酸菌的菌落数变化表l不同发酵时间不同乳酸菌的菌落数(cfu)变化<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>由表1可以看出，嗜酸乳杆菌在发酵72h时，菌落数最高，每毫升中菌落数为3.0x103.2乳酸菌液体发酵黄背木耳的总多糖的变化表2不同乳酸菌发酵而得的本发明黄背木耳发酵产物的总多糖变化^总多糖含量(mg/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>由表2可以看出，嗜酸乳杆菌发酵而得的黄背木耳发酵产物，其总多糖含量增加最多，表明其对黄背木耳具有较强的生物转化作用。二、底物浓度、菌种接入量以及发酵时间的试验研究1、实验方法1.1发酵用培养基的制备准确称取黄背木耳粗粉(50~60目)200g、140g、100g、80g，按底物浓度(g/ml)为1:20、1:30、1:40、1:50分别加水定容，并充分混匀。用量筒量取100ml置250ml锥形瓶中进行分装，115'C条件下，灭菌30min。1.2菌种的活化及液体种子的培养同前。1.3发酵培养将上述种子液分别以5%、10%、15%(约3xl()S个/ml)接种量接入灭菌后的黄背木耳发酵培养基中，37'C条件下，连续培养96h。1.4菌落数的测定同前。1.5发酵液中总多糖含量测定同前。2、结果2.1嗜酸乳杆菌在不同底物浓度、细菌接种量及发酵时间条件下的生长与发酵特性的研究表3嗜酸乳杆菌在不同底物浓度、接种量及发酵时间下的菌落数<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>续表3<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>由表3可以看出，当黄背木耳底物浓度(g/ml)为1:40，嗜酸乳杆菌的接种量为15%时，嗜酸乳杆菌液体发酵黄背木耳72h后，嗜酸乳杆菌的菌落数最高。3.2嗜酸乳杆菌液体发酵黄背木耳总多糖含量的变化由表4可以看出，底物浓度(g/ml)为l:40时，接种量为10%和15%时，总多糖含量基本相当，分别为3.397mg/ml和3.402mg/ml。表4不同底物浓度、接种量及发酵时间条件下发酵液中总多糖含量<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>综上，从节约生产成本，利于工业化生产的角度出发，确定整个发酵过程中的最佳底物浓度(g/ml)为1:40，接种量为10%，发酵时间为72h。三、黄背木耳粉碎细度的试验研究1、实验方法1.1黄背木耳微粉的制备新鲜黄背木耳经两次清洗后，弃去其中杂质，70'C条件下进行烘干后，将黄背木耳粉碎，过20目、40目、60目、80目、100目、120目筛，备用o1.2发酵用培养基的制备根据实验对黄背木耳底物浓度的筛选，确定最佳底物浓度(g/ml)为1:40。准确称取20目、40目、60目、80目、100目、120目黄背木耳粉碎各15g，分别加水定容至600ml，充分混匀，用量筒量取100ml置250ml锥形瓶中进行分装，115'C条件下，灭菌30min。每个目数设计三次重复。1.3菌种的活化及液体种子的培养同前。1.4发酵培养将上述种子液分别以5%、10%、15%(约3Xl()S个/ml)接种量接入灭菌后的黄背木耳发酵培养基中，37'C条件下，连续培养96h。1.5菌落数的测定同前。1.6发酵液中总多糖含量测定同前。2、结果2.1黄背木耳细粉粒度对嗜酸乳杆菌菌落数的影响表5黄背木耳细粉粒度对嗜酸乳杆菌菌落数的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>由表5可见，当粉碎度达到120目时，菌落总数最多为3.9Xl()U个/ml。而细粉粒度为100目时，菌落总数略低于120目，为3，8Xl()H个/ml。2.2黄背木耳细粉粒度对发酵前后发酵液中总多糖含量的影响表6黄背木耳细粉粒度对发酵前后发酵液中总多糖含量的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>由表6可以看出，当细粉粒度达到120目时，发酵液中总多糖含量最高为3.428mg/ml，其增长率为9.25%;细粉粒度为100目时，发酵液中总多糖含量略低于120目时，为3.427mg/ml，其增长率为9.23%。综上，结合工业生产成本考虑，确定黄背木耳最佳细粉粒度为IOO目，更利于其后续产品的开发。四、黄背木耳蒸煮时间及温度的试验研究1、实验方法1.1黄背木耳微细粉的制备黄背木耳经两次清洗后，弃去其中杂质，在70'C条件下进行烘干，粉碎。根据对黄背木耳细粉粒度的试验筛选结果，黄背木耳微细粉过筛100目J备用o1.2发酵用培养基的制备准确称取黄背木耳微细粉180g，加水定容至7200ml，充分混匀，用量筒量取100ml置250ml锥形瓶中进行分装，在115'C条件下，灭菌30min。每一组合(蒸煮温度和蒸煮时间)设计三次重复。1.3菌种的活化及液体种子的培养同前。1.4发酵培养将上述种子液以15%(约3.0xl()S个/ml)接种量接入灭菌后的黄背木耳发酵培养基中，在37'C条件下，连续培养72h，检测发酵液中的菌落数和总多糖含且里o1.5菌落数的测定同前。1.6发酵液中总多糖含量测定同前。2、结果2.1蒸煮温度及时间对嗜酸乳杆菌菌落数的影响由表7可以看出，综合蒸煮温度与时间两个因素看，黄背木耳微细粉在8(TC条件下蒸煮2h时，最利于嗜酸乳杆菌增殖，其菌落数达到最高为3.5X10"个/ml。表7蒸煮温度及时间对嗜酸乳杆菌菌落数的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>3.2蒸煮温度及时间对发酵液中总多糖含量的影响表8蒸煮温度及时间对发酵液中总多糖含量的影响试验序号蒸煮温度rc)蒸煮时间(h)总多糖含量(mg/ml)1003.4624013.7434023.7544033.8354043.7564053.7674063.7686013.7796023.79106033.81116043.80126053.81136063.81148013.85158023.87168033.87178043.86188053.85198063.872010013.832110023.862210033.862310043.872410053.862510063.87由表8可以看出，在蒸煮温度达到8(TC，蒸煮2h时，发酵液中总多糖含量最高为3.461mg/ml。五、液体发酵生产工艺1、实验方法1.1黄背木耳微细粉的制备黄背木耳经两次清洗后，弃去其中杂质，在7(TC条件下进行烘干，粉碎，过筛100目，备用。1.2发酵用培养基的制备准确称取黄背木耳微细粉300g，加水定容至12000ml，充分混匀。1.3菌种的活化及液体种子的培养同前。1.4发酵培养根据试验设计安排，共在液体发酵系统中发酵培养4次。发酵罐(总容量为50L)的装液量为20L，待筛选的接种量为10%、15%，待筛选的转速为200rpm、250rpm。根据实验设计要求，共利用液体发酵罐发酵四次，发酵温度为37°C，pH值保持在7.0—7.5之间，连续发酵96h，并分别于发酵第24h、48h、72h、96h收样检测菌落数和总多糖含量。1.5菌落数的测定同前。1.6发酵液中总多糖含量测定同前。2结果2.1液体发酵系统中嗜酸乳杆菌生长特性的研究表9接种量、转速和发酵时间对菌落数的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>由表9可以看出，当转速为250rpm，发酵时间为72h，接种量为15%时，菌落总数达到最大为2.7X10"个/ml。当转速为250rpm，发酵时间为72h，接种量为10%时，菌落总数达到最大为2.6X1011个/ml。2.2接种量、转速和发酵时间对发酵液中总多糖含量的影响表io接种量、转速和发酵时间对发酵液中总多糖含量的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>由表10看出，当接种量为15%，转速为250rpm，发酵72h,发酵液中总多糖含量较发酵前增加11.37%，增加率达到最高。但是，当接种量为10%，转速为250rpm，发酵72h，总多糖含量也能增加达到11.34%，其增长率基本一致。综上，结合工业生产成本考虑，确定发酵转速为250rpm，接种量为10%。六、黄背木耳发酵液灭活工艺的试验研究1、实验方、法1.1发酵液的稀释按照发酵液与加水量体积比(v/v)为1:1。1.2灭活将稀释后的发酵液进行100'C灭活处理，灭活时间设计为10min、20min、30min、40min、50min、60min。1.3菌落数的测定同前。2结果2.1灭活时间对嗜酸乳杆菌菌落数的影响从表ll可以看出，高温(IOO'C)条件下灭活时间为30min时即可将发酵液中的嗜酸乳杆菌全部杀死。表11灭活时间对嗜酸乳杆菌菌落数的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>七、黄背木耳发酵液醇沉工艺的试验研究1、实验方法1.1醇沉将灭活后的发酵液浓缩为原体积的1/5，在浓缩液中加入适量的95%乙醇，使混合液的乙醇浓度分别为65%、75%、85%，常温下沉淀0.5h、lh、2h、3h、4h、6h、8h、12h、24h、28h，过滤，收集沉淀物，并回收乙醇。1.2干燥将沉淀平铺成厚度为l.Ocm的托盘上，在温度为80'C的电热鼓风干燥箱中进行烘干，并记录千重。1.3不同乙醇浓度醇沉后，发酵干粉中总多糖含量测定同前。2结果2.1乙醇终浓度对发酵干粉总多糖含量的影响表12乙醇终浓度对发酵干粉中总多糖含量的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>由表12可以看出，乙醇终浓度达到75%和85%时，发酵液中总多糖含量分别为3.015mg/ml和3.018mg/ml。2.2醇沉时间对发酵干粉总多糖含量的影响(乙醇终浓度为75V。时)由表13可以看出，以终浓度为75%的乙醇沉淀0.511时，发酵液中总多糖可得到最大程度的保留，其总多糖含量可达原发酵液的69.26%。表13醇沉时间对发酵液中总多糖含量的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>由表12和表13得出，醇沉最佳工艺为乙醇终浓度为75%，醇沉时间为0.511。通过对制备方法条件参数的筛选，最终确定实施例1的制备方法为最佳生产工艺，可以兼顾生产所得的发酵产物在氨基酸总量和总多糖含量等方面具有较高的水平，也可以减少耗能，降低成本。通过检测黄背木耳子实体与本发明黄背木耳发酵产物的氨基酸总量和总多糖含量，对比两者的平均含量，见表14，本发明黄背木耳发酵产物相比于黄背木耳子实体，其氨基酸总量增加约50%;总多糖含量增加约11。/。。表14黄背木耳子实体与本发明黄背木耳发酵产物的氨基酸总量和总多糖含量对比<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>采用本发明黄背木耳发酵产物为活性成分，或以其为主要原料，可按照常规制备方法可制备胶囊剂、片剂、口服液等常规口服制剂。实施例l本发明黄背木耳发酵产物(液体或固态)的制备a、活化嗜酸乳杆菌菌株24小时，扩大培养，得乳酸菌菌种；b、取黄背木耳v4"r/cw/flr/fl/Wj;加'cAfl(Mont)Sac1.，粉碎，过筛，至黄背木耳粉碎粒度为可过100目筛；c、取步骤b粉碎所得黄背木耳粉末，按黄背木耳粉末lg、水40ml计制备底物；d、取步骤c所得底物，在温度为80'C时加热2小时，冷却反应物至50'C;e、取步骤a所得扩大培养的菌种，加入步骤d所得冷却后的反应物中，菌种接种量为反应物重量的10%，发酵72小时，即得液态黄背木耳发酵产物；f、取步骤e所得液态黄背木耳发酵产物，按体积比l:l加入水，灭活温度范围为60100°C，灭活时间至少20min，浓缩至原发酵液体积的1/5;加入乙醇使浓縮液的乙醇浓度为75^v/v，静置，收集沉淀，烘干沉淀，即得固态黄背木耳发酵产物。实施例2本发明胶囊剂的制备原料固态黄背木耳发酵产物(由实施例l制备)100g、淀粉60g。制备方法将固态黄背木耳发酵产物与淀粉混合均匀后，用胶囊机装胶囊，共制成1000粒，得到每粒胶囊含固态黄背木耳发酵产物100mg的制剂。实施例3本发明片剂的制备原料固态黄背木耳发酵产物(由实施例1制备)100g、淀粉60g、乳糖30g、硬酯酸镁10g。制备方法将固态黄背木耳发酵产物、淀粉、乳糖混匀，常规方法制粒后，加入硬酯酸镁整粒，压片，共制成1000片，得到每片含固态黄背木耳发酵产物100mg的制剂。实施例4本发明口服液的制备取液态黄背木耳发酵产物(由实施例1制备)80000ml，稀释至20000ml，分装成2000支，相当于每支约含黄背木耳发酵产物总多糖108mg。权利要求1.黄背木耳发酵产物的制备方法，其特征在于，采用乳酸菌与黄背木耳发酵。2、根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，它包括如下步骤a、活化菌株，扩大培养，得乳酸菌菌种；b、取黄背木耳，粉碎，过筛；c、取步骤b粉碎所得黄背木耳粉末，按黄背木耳粉末lg、水2050ml计制备底物;d、取步骤c所得底物，在温度为40100'C时加热16小时，冷却反应物至50'C;e、取步骤a所得扩大培养的菌种，加入步骤d所得冷却后的反应物中，菌种接种量为反应物重量的515%,发酵2496小时，即得液态黄背木耳发酵产物。3、根据权利要求2所述的黄背木耳发酵产物的制备方法，其特征在于，步骤a所述的乳酸菌为嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、保加利亚乳杆菌、德氏乳杆菌、短乳杆菌中的至少一种；步骤a所述的活化时间为24小时；步骤b所述的黄背木耳粉碎粒度为可过20120目筛；步骤c所述的按黄背木耳粉末lg、水40ml计制备底物；步骤d所述的底物在80。C时加热2小时；步骤e所述的菌种接种量为反应物重量的10X，发酵72小时。4、根据权利要求3所述的黄背木耳发酵产物的制备方法，其特征在于，步骤a所述的乳酸菌嗜酸乳杆菌；步骤b所述的黄背木耳粉碎粒度为可过100目筛。5、根据权利要求2所述的黄背木耳发酵产物的制备方法，其特征在于，它还包括如下步骤灭活取步骤e所得液态黄背木耳发酵产物，按体积比1:1加入水，灭活温度范围为60100°C，灭活时间至少20min;浓縮浓縮至原发酵液体积的1/5~1/4;醇沉加入乙醇使浓縮液的乙醇浓度为6585^v/v;干燥静置，收集沉淀，干燥沉淀，即得固态黄背木耳发酵产物。6、根据权利要求5所述的黄背木耳发酵产物的制备方法，其特征在于，醇沉步骤中加入乙醇使浓縮液乙醇浓度为75%v/v。7、权利要求24任一项所述的制备方法所得的黄背木耳发酵产物，其特征在于，液态黄背木耳发酵产物干燥后其总多糖含量为89.23~189.84mg/g，氨基酸总量为4.99~8.79%。8、权利要求5或6所述的制备方法所得的黄背木耳发酵产物，其特征在于，固态黄背木耳发酵产物总多糖含量为89.23~189.84mg/g，氨基酸总量为4.99~8.79%。9、一种组合物，其特征在于，它是含有权利要求7或8任一项所述的黄背木耳发酵产物为活性成分，加入药学、食品或保健食品可接受的辅料、辅助性成分或添加剂制备而成的制剂。10、根据权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述制剂口服制剂；所述口服制剂为片剂、胶囊剂、散剂、丸剂或口服液。全文摘要本发明涉及黄背木耳发酵产物及其制备方法，属生物发酵领域。该制备方法步骤如下活化、扩大培养嗜酸乳杆菌菌株；粉碎黄背木耳；制备底物；蒸煮底物；接种后发酵即得液态黄背木耳发酵产物；取液态发酵产物，灭活、浓缩、醇沉、静置，收集沉淀，烘干沉淀即得黄背木耳发酵产物粉末。该方法简单，条件易于控制，可控性强，耗时少，成本低；制备而得的发酵产物在总多糖含量和氨基酸总量方面显著增加。文档编号A61K36/06GK101278947SQ20071004882公开日2008年10月8日申请日期2007年4月6日优先权日2007年4月6日发明者余梦瑶,叶利明,源清,霞罗,许晓燕,伟谭,费小凡,郑林用申请人:德阳市食用菌专家大院