神经降压肽降解酶的选择性抑制剂的制作方法

专利名称：：神经降压肽降解酶的选择性抑制剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及药学和有机化学领域，提供神经降压肽降解酶的选择性抑制剂、中间体、制剂和方法。
背景技术：
：由于锌金属蛋白酶代谢蛋白质和肽，它们涉及重要的生理功能，可以是各种病理的原因。在CNS中，某些锌内肽酶(24-11,24-15和24-16)涉及神经肽的退化或成熟。在心血管系统中，内皮素转化酶在调节动脉压中发挥着重要的作用。胶原酶、弹性酶、明胶酶和容基质蛋白酶是与老年疾病和癌转移酶发展有关的锌金属蛋白酶。在某些情况中，已经鉴定出这些金属蛋白酶与某些微生物(肉毒杆菌中毒和破伤风毒素、霍乱血凝素、绿脓假单胞菌、由于溶胶原细菌的牙周疾病)的毒性密切相关。金属蛋白酶抑制剂可以阻断人的很多肽(生长抑素、缓激肽原(bradykinine)、血管紧张素、神经降压肽、P物质、强啡肽、VIP)的降解，因此能够增强这些肽的作用。这些抑制剂的应用提供了与这些肽和内肽酶24-15和24-16对它们的降解有关的显著治疗应用(Barelli,1992；Vincent,1995)。近来的研究表明，内肽酶24-15与阿尔茨海默病和ras蛋白的成熟期有关，其中ras蛋白在很多形式的癌症的发展中是关键的蛋白质。应当注意的是，对于类似的产物即磷假肽酶，犬的试验表明，在非常低的浓度下，这些分子有效地抑制了神经降压肽的降解(Barelli,1994)。神经降压肽降解酶是内肽酶，属于包含锌的金属肽酶家族，具有灭活某些神经调节物质例如神经降压肽的性质，因此减小了它们的药理作用。已知某些二肽例如Pro-Ile能够抑制内肽酶24.16(Dauch,199Γ)。但是，这种抑制剂的Ki是90μΜ,由于它的溶解度使得它不能在体内使用，此外，该化合物在高达5mM的浓度下不能抑制内肽酶24.15。有文章(0rlowski，1998)描述了抑制内肽酶24.15的化合物，其&是16nM，虽然其在IyM下但也能抑制内肽酶24.16(Dauch，1991b)。不同的研究小组已经开发出了合成金属蛋白酶抑制剂的合理途径。这是基于这些酶的基本性质，即存在锌原子的活性位点参与肽键水解的催化。总的说来，该策略包括合成这些蛋白酶底物的肽类似物，其中肽键(C(O)=NH)被化学基团取代，该化学基团在一端与过渡态的肽键具有良好的结构上和电子相似性，在另一端能够与所述蛋白酶活性位点存在的锌原子强烈地相互作用。迄今为止，已经使用了磷酰胺(-P(O2H)-NH)、磷酸(-P(O2H)_0)或膦(_P(O2H)-CH2)基。这些抑制剂与过渡态底物的相似性一般使所述分子具有出人意料的亲和力。在FR-A-2654430中描述了将磷酰胺键引入到底物中，证明了这对于得到某些锌蛋白酶的有力抑制剂是非常有效的。但是，磷酰胺键的化学稳定性高度依赖于所述键周围的氨基酸序列，不幸的是，对于某些序列，磷酰胺键具有非常快的水解作用。已经描述了磷酸盐-型键的应用(Kaplan，1991)，使得能够在羧肽酶A的特定情况中得到迄今报道对酶最有效的合成抑制剂(抑制常数Ki=10_5M。)。在FR-A-2676059中描述了包含膦键的抑制剂，已经证明了其在细菌胶原酶的情况中是非常有效的。证明了N-[l-[3-[羟基-(2-苯基-乙基)膦基]-1-氧代丙基]-L-脯氨酰]-L-正亮氨酸(与本发明的一些化合物类似)是雷赛氏棒状杆菌(Corynebacteriumrathayii)胶原酶的有效抑制剂(Yiotakis，1994)。EP0565450描述了包含磷酰胺键的抑制剂，它对内肽酶24.15是非常有效的，但同时也是内肽酶24.16非常良好的抑制剂。在EP0725075中公开了结构上相关的肽衍生物，其中肽键被膦键取代。它们显示了是内肽酶24-15的选择性抑制剂，但对于其他锌肽酶例如内肽酶24-16没有活性。在WO98/03516中描述了其他结构相关的基于次磷酸盐的基质金属蛋白酶的抑制剂。因此，包含膦键的任何肽都是属于锌金属蛋白酶家族的不同蛋白酶可能的抑制齐U。但是，除了膦键与活性位点的锌原子的相互作用，肽的亲和力也取决于膦单元任一侧的氨基酸之间的相互作用和蛋白酶活性位点的不同亚位点。本发明的目的是开展出新的化合物，其是内肽酶24-15和24-16的有效和选择性的抑制剂。
发明内容发现了通式(1)的化合物是新的，并且是神经降压肽降解酶的选择性抑制剂。本发明涉及通式(1)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中-R1代表单环芳基、单环杂芳基、双环芳基或双环杂芳基，其中所述基团是任选取代的，-η是整数，当R1代表单环芳基或杂芳基时，值可以为3，4或5，当R1代表双环芳基或杂芳基时，值可以为1，2，3，4或5，-R2代表氢原子或(C1J烷基，或R2和R3与连接它们的原子一起可以形成可以包含硫原子的五或六元环，-R3代表氢原子、支链或无支链的(CV8)烷基或任选取代的苄基，-R4代表氢原子、支链或无支链的(CV8)烷基或任选取代的苄基，-R5代表氢、甲基、乙基、甲氧甲基或乙氧甲基，和以上物质任意的互变体、立体异构体、N-氧化物、同位素_标记的类似物，或药理学可接受的盐、水合物或溶剂化物。在一些实施方案中，本发明也涉及式⑴的化合物，其中=R1代表任选取代的苯基或萘基，R2代表氢原子或甲基，或者R2和R3与连接它们的原子一起可以形成可以包含硫原子的五元环，及n，R3,R4和R5具有上述给出的含义。其他实施方案提供了一种或多种式(1)的化合物，其中=R1代表苯基或萘基，R2代表氢原子，或R2和R3与连接它们的原子一起可以形成可以包含硫原子的五元环，R3代表支链或无支链的(Cy)烷基，R4代表支链或无支链的(Cy)烷基，R5代表氢，η具有上述给出的含义。一个进一步的实施方案提供了下式的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>在另一个实施方案，本发明涉及式(2)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>其中-R1代表单环芳基、单环杂芳基、双环芳基或双环杂芳基，其中所述基团是任选取代的，-η是整数，当R1代表单环芳基或单环杂芳基时，值可以为3，4或5，当R1代表双环芳基或双环杂芳基时，值可以为1，2，3，4或5，条件是当η=4时，R1不是未取代的苯基。这些化合物可以用于合成通式(1)的化合物。本发明的化合物是新的，是神经降压肽降解酶的选择性抑制剂。更特别地该化合物抑制损坏神经肽神经降压肽的酶Thimet寡肽酶EC3.4.24.15和溶神经素EC3.4.24.16。当根据公开的方法(Dauch，1991a’b)试验时，该化合物在抑制上述酶中是有活性的，范围是5.0-9.0(pIC50值)。由于抑制这些酶的神经降压肽降解活性，内源性神经降压肽的水平将升高，导致在治疗神经降压肽水平被扰乱的疾病中具有有益效果，其中所述疾病是外周紊乱例如血压的调节和胃排空、神经紊乱例如帕金森病，和中枢神经系统紊乱例如焦虑、抑郁、精神病和其他精神障碍。本发明的其他实施方案包括但不限于治疗例如通过抑制神经降压肽降解酶的可治疗的疾病或病症的药物组合物，该组合物包含式(1)的化合物和药学可接受的载体；治疗通过抑制神经降压肽降解酶的可治疗的疾病或病症的方法，该方法包括给需要这样治疗的哺乳动物施用式(1)的化合物；治疗例如选自外周紊乱例如血压的调节和胃排空、神经紊乱例如帕金森病，和中枢神经系统紊乱例如焦虑、抑郁、精神病和其他精神障碍的疾病或病症的药物组合物；治疗选自在此所列的疾病或病症的方法，该方法包括给需要这样治疗的哺乳动物施用式(1)的化合物；抑制神经降压肽降解酶的药物组合物，该组合物包含式(1)的化合物和药学可接受的载体；抑制神经降压肽降解酶的方法，该方法包括给需要这样治疗的患者施用式(1)的化合物。抑制神经降压肽降解酶的方法，包括给需要的受试者施用有效量的式(1)的化合物；本发明也提供根据式(1)的化合物在制备药物中的应用。本发明进一步涉及联合疗法，其中将本发明的化合物或其药学可接受的盐，或包含本发明的化合物的药物组合物或制剂与另一种或多种治疗剂同时或连续或作为组合制剂施用，用于治疗一种或多种所列的疾病。这些其他的治疗剂可以在施用本发明的化合物之前、同时或之后施用。本发明也提供化合物，药物组合物，试剂盒和抑制神经降压肽降解酶的方法，该方法包括给需要这样治疗的患者施用式(1)的化合物。本发明的化合物具有神经降压肽降解酶抑制活性。用例如本文所述的或本领域已知的一种或多种分析法可以容易地证明本发明的化合物的抑制活性。本发明也提供制备本发明的化合物和在那些方法中使用的中间体的方法。如果需要，可以通过任何适当的分离或纯化方法进行本文所述的化合物和中间体的分离和纯化，这些方法例如是过滤、萃取、结晶、柱色谱、薄层色谱、厚层色谱、制备性低或高-压液相色谱或这些方法的组合。可以从制剂和实施例得到适当分离和隔离方法的具体例证。但是，当然也可以使用其他等同的分离或隔离方法。本发明的化合物可以包含一个或多个不对称中心，因此产生了外消旋体和外消旋混合物、单个对映体、非对映体混合物和个体非对映体。根据各种取代基的性质，该分子可以具有另外的不对称中心。每个这样的不对称中心将独立地产生两种旋光异构体。所有这些可能的旋光异构体和非对映体，作为混合物或作为纯净或部分纯净的化合物，都属于本发明。本发明包括这些化合物所有的异构体形式。式(1)显示的是这类化合物的结构，而未带有优选的立体化学。根据本领域已知的方法，通过适当的改变本文所述的方法学可以实现这些非对映体的独立的合成或它们色谱分离。通过晶体产物或其衍生的晶体中间体的X-射线衍射晶体分析法确定它们的绝对立体化学，必要时用包含已知绝对构型的不对称中心的试剂。该化合物的外消旋混合物可以通过本领域公知的方法分离成对映体个体，例如将化合物的外消旋混合物与对映体纯的化合物结合以形成非对映体混合物，然后通过标准方法例如分步结晶或色谱法分离非对映体个体。该结合通常包括用对映体纯的酸或碱例如(-)-二-对甲苯酰-D-酒石酸和/或(+)-二-对甲苯酰-L-酒石酸形成盐。然后通过附加的手性残基的分裂将非对映体衍生物转化为纯对映体。也可以通过色谱法用手性固定相(本领域公知的方法)直接分离该化合物的外消旋混合物。可替代地，可以通过立体选择合成，用旋光纯的起始物质或已知构型的试剂通过本领域公知方法获得化合物的任意对映体。式(1)化合物的顺式和反式异构体也属于本发明，这同样适用于式(1)化合物的互变体。这些化合物的一些晶体形式可以作为多形体存在它们也意欲属于本发明。此外，一些化合物可以与水形成溶剂化物(即，水合物)，或与常见的有机溶剂形成溶剂化物。这些溶剂化物也落在本发明的范围内。通过PET或SPECT可检测的同位素标记的式(1)的化合物也落在本发明的范围内。这同样适用于用[13C]-,[14C]-,[3H]-,[18F]-,[125I]-或其他同位素富集原子标记的式(1)的化合物，它们适合用于受体结合或代谢研究。本发明的化合物可以在神经系统功能、功能紊乱和疾病的生化研究中用作试剂或标准品。定义在本文所公开的化合物的描述中使用的一般性术语具有它们通常的含义。本文使用的术语烷基是指一价的饱和支链或直链的烃链。除非另有说明，这些链可以包含1到18个碳原子。这些烷基的代表是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲_丁基、叔_丁基、戊基、异戊基、新戊基、叔-戊基、己基、异己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基等等。当限制为“低级”时，烷基将会包含1到6个碳原子。相同的碳含量也适用于原术语“烷”，及衍生术语例如“烷氧基”。包含各种烃部分的碳含量可以用表示该部分中碳原子的最小和最大数字的首标来表示，即，首标Cx-Cy定义了所存在的包括整数“X”到整数“y”个碳原子的数目。例如“烷基(CV3)”是指甲基、乙基、正丙基或异丙基，“烷基(CV4)”是指“甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、2-丁基、异丁基或2-甲基-正丙基”。术语“烯基”是指具有一个或多个碳-碳双键的直链或支链烃基团，例如(C2_4)烯基代表例如乙烯基、丙烯基、丁烯基等。在“炔基”中，直链或支链烃原子团具有一个或多个碳-碳三键，例如(C2_4)炔基代表例如乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基等。除非另有说明，“烯基”和“炔基”链包含1到18个碳原子。术语“酰基”是指烷基(C1J羰基、芳基羰基或芳基-烷基(CV3)羰基。“芳基”包括单环或稠合双环芳香或杂芳香基，包括但不限于呋喃基、噻吩基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、咪唑并[2，l-b][1,3]噻唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1，3，5-三嗪基、苯基、吲唑基、吲哚基、吲嗪基、异吲哚基、苯并[b]呋喃基、1，2，3，4-四氢-萘基、1，2，3，4-四氢异喹啉基、茚满基、茚基、苯并[b]噻吩基、2，3-二氢-1，4-苯并二氧杂环己二烯-5-基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并[1，2，5]噻二唑基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、酞嗪基(phtalazinyl)、喹唑啉基、喹噁啉基、1，8_萘啶基、萘基、喋啶基或奧基。“卤”或“卤素”是指氯、氟、溴或碘；如在“杂烷基、杂芳基”等中“杂”是指包含一个或多个N、0或S原子。“杂烷基”包括在任何位置上具有杂原子的烷基，因此，包括N-结合、0-结合或S-结合的烷基。术语“取代”是指特定的基团或部分具有一个或多个取代基。当任意基团可以具有多个取代基，并且可以具有各种可能的取代基时，取代基是独立选择的，而无须是相同的。术语“未取代”是指特定的基团不具有取代基。关于取代基，术语“独立”是指当可能是一个以上的取代基时，它们可以是相同的或相互不同的。“任选取代的”是指一个基团可以或不可以进一步被一个或多个基团取代，其中所述基团选自Ci_8烷基、Ci_8烯基、Ci_8炔基、芳基、氟、氯、溴、羟基、Ci_8烷基氧、Ci_8烯基氧、芳基氧、酰氧基、氨基、(V8烷氨基、二烷基(Ci_8)氨基、芳氨基、硫代、CV8烷硫基、芳硫基、氰基、氧代、硝基、酰基、酰氨基、CV8烷酰氨基、二烷基(Ci_8)酰氨基、羧基，或者两个任选的取代基可以与和它们相连的碳原子一起形成包含0，1或2个选自氮、氧或硫的杂原子的5-或6-元芳香或非芳香环。任选的取代基本身可以具有另外的任选取代基。优选的任选取代基包括(V3烷基，例如甲基、乙基和三氟甲基、氟、氯、溴、羟基、CV3烷基氧例如甲氧基、乙氧基和三氟甲氧基、和氨基。本文使用的作为另一个基团一部分的术语“氧”、“硫”和“羰(carbo)基”分别是指氧原子、硫原子和羰基(C=0)，它们在两个基团之间作为连接子，例如羟基、氧烷基、硫烷基、羧烷基等等。本文单独或作为另一个基团一部分使用的术语“氨基”是指在末端或两个另外的基团之间作为连接子的氮原子，其中该基团可以是伯、仲或叔胺(分别是2个氢原子与氮原子结合，1个氢原子与氮原子结合及没有氢原子与氮原子结合)。为了提供更简明的描述，当也没有明确地提及时，术语“化合物”包括互变体、立体异构体、N-氧化物、同位素标记的类似物，或药理学可接受的盐、水合物或溶剂化物。上述化合物的N-氧化物属于本发明。叔胺可以或不产生N-氧化物代谢产物。N-氧化发生的程度可以从微量到接近定量转变之间而各异。N-氧化物可以比它们相应的叔胺更为有效，或有效性较差。同时可以通过化学方法在人体内将N-氧化物容易地不同程度地还原成它们相应的叔胺。一些N-氧化物经过接近定量地还原转化为相应的叔胺，在其他情况中，转化仅仅是微量的反应，甚至完全不会发生(Bickel，1969)。在体内代谢以提供生物活性剂(即，式(1)的化合物)的任意化合物是前药，该前药在本申请的范围和精神内。前药是治疗剂，本身是没有活性的，但是可以转化为一种或多种活性代谢物。因此，在本发明的治疗方法中，术语“施用”将包括用具体公开的化合物或没有具体公开但在患者施用后在体内转化为具体化合物治疗各种所述的病症。前药是药物分子的生物可逆的衍生物，用于克服母体药物分子实用的一些障碍。这些障碍包括但不限于，溶解性、渗透性、稳定性、循环前代谢和靶向局限性(Bundgaard，1985；King,1994；Stella,2004；Ettmayer，2004JaTVinGIl,2005)。前药，即当以任意已知途径施用于人体时代谢为具有式(1)化合物的化合物，属于本发明。特别地，它涉及具有伯和仲氨基或羟基的化合物。这些化合物可以与有机酸反应，得到具有式(1)的化合物，其中存在施用后易除去的附加基团，例如但不限于，脒、烯胺、曼尼西碱、羟基-亚甲基衍生物、0-(酰氧基亚甲氨基甲酸酯)衍生物、氨基甲酸酯、酯、酰胺或烯胺酮。“晶形”是指相同化合物的不同固体形态，例如多形体、溶剂化物和无定形形式。“多形体”是晶体结构，其中化合物可以以不同的晶体堆积排列结晶，它们都具有相同的元素组成。多形现象是一种经常发生的现象，会受到一些结晶条件例如温度、过饱和水平、杂质的存在、溶剂的极性、冷却速率的影响。不同的多形体通常具有不同的X-射线衍射图、固态NMR谱、红外或拉曼光谱、熔点、密度、硬度、晶体形态、光学和电学性质、稳定性和溶解度。重结晶溶剂、结晶速率、贮存温度和其他因素可以导致一种晶形占据优势。“溶剂化物”一般是一种包含化学计量或非化学计量的量的溶剂的晶形。通常，在结晶的过程中，一些化合物有在晶体固态中捕获固定摩尔比的溶剂分子的趋势，因此形成了溶剂化物。当溶剂化物是水时，就形成了“水合物”。式(1)的化合物及其药学可接受的盐可以以水合物或溶剂化物的形式存在，这些水合物和溶剂化物也包括在本发明中。其例子包括1/10水合物、1/4水合物、1/2水合物、单水合物、二盐酸1/2水合物、二盐酸二水合物、二盐酸3/2水合物等等。“无定形”形式是没有长程有序的非晶体物质，一般没有特征性的粉末χ-射线衍射图。Byrn(1995)和Martin(1995)已经对晶体形式进行了一般性的描述。为了进行更简要的描述，本文给出的一些定量表达并未用术语“约”进行限定。应当理解的是，不论是否明确地使用术语“约”，本文给出的每个量都是指实际给出的数值，同时也是指该给定数值的近似值，它是可以根据本领域普通技术人员合理推断的，包括根据该给定值的试验和/或测定条件的近似值。在本申请的说明书和权利要求中，词语“包含(comprise)”和该词的变形，例如“包含(comprising)”和“包含(comprises)”并不意欲排除其他的添加剂、组分、整体或步马聚ο尽管式(1)的化合物可以作为原料化学品施用，但优选它们作为“药物组合物”存在。根据进一步的方面，本发明提供一种药物组合物，包含式(1)的化合物，或其药学可接受的盐或溶剂化物，和一种或多种其药学可接受的载体，和任选的一种或多种其他的治疗齐U。从与该制剂的其他成分相容的意义上讲，该载体必须是“可接受的”，并且对于其接受者无害。本文使用的术语“组合物”包括包含预定量或比例的特定成分的产品，以及与特定量的特定成分混合而直接或间接产生的任意产品。相对于药物组合物，该术语包括包含一种或多种活性成分的产品和包含惰性成分的任选载体，以及任意由两种或多种成分组合、络合或聚集、或一种或多种成分离解、或一种或多种成分的其他类型的反应或相互作用而直接或间接产生的任意产品。一般地，制备药物组合物，通过均勻并直接将活性成分与液体载体或精细分开的固体载体或两者结合，然后如果必要，将该产品塑形为所需的制剂。该药物组合物包含足够的活性目标化合物以对疾病的发展或症状产生所需的作用。因此，本发明的药物组合物包括将本发明的化合物和药学可接受的载体混合制成的任何组合物。“药学可接受的”是指，载体、稀释剂或赋形剂必须与制剂的其他成分是相容的，并且对于其接受者无害。在本申请的全文中，术语“组合制剂”包含真正的组合，即式(1)的化合物和其他药物物理组合成一个制剂例如片剂或注射液，以及“各部分的试剂盒”，其包含在各自剂型中的式(1)的化合物和其他药物，以及使用说明书，任选地还有便于符合施用该组分化合物的其他物品，例如标签或图。含有真正的组合，所限定的药物疗法是同时的。“各部分的试剂盒”中的内含物可以同时或以不同时间间隔施用。治疗是相伴还是连续进行将取决于所使用的其他药物的性质，这些性质是例如作用的起始和持续时间、血浆水平、清除率等等，并且也取决于疾病、疾病的阶段和患者个体的特征。剂量。如本文所述，确定作为神经降压肽降解酶抑制剂的本发明的化合物的效力。根据给定式(1)化合物所测定的效力，我们可以评价理论上的最低有效剂量。当该化合物的浓度等于所测定的抑制常数的2倍时，该化合物可能占据了几乎100%的神经降压肽降解酶。通过将该浓度转换为化合物的mg/kg患者体重，我们可以得到理论上的最低有效剂量，推断理想的生物利用度。通过药代动力学、药效学和其他考虑，可以将施用的实际剂量改变为更高或更低的值。该活性成分通常的每日剂量可以在较宽的范围内变化，其取决于很多因素例如相关的适应症、施用途径、患者的年龄、体重和性别，并且所述因素是医生可以确定的。一般地，以单个或个体剂量施用于患者的每日总剂量可以是，例如每日0.001到10mg/kg体重，更常用地每日0.01到1，OOOmg的量的总活性成分。可以将该剂量以每日1到3次，或每一次按照所需的效力施用于需要治疗的患者，时间为至少2个月，更典型地至少6个月，或长期。本文使用的术语“治疗有效量”是指治疗通过施用本发明的组合物可治疗的疾病的治疗剂的量。该量是足以在组织系统、动物或人中显示可检测的治疗性或改善性应答的量。该作用可以包括例如，治疗本文所列的疾病。用于受试者精确的有效量将取决于患者的尺寸和健康，要治疗的疾病的性质和程度，治疗医生(研究者、兽医、医师或其他临床医生)的推荐量，和所选择施用的治疗剂或治疗剂的组合。因此，预先指定确切的有效量是没有用的。术语“药学可接受的盐”是指在合理的医学判断的范围内，适合用于与人和低级动物的组织接触而没有异常毒性、刺激、变应性应答等等的那些盐，并与合理的益处/风险比相称。药学可接受的盐是本领域公知的。当最终分离和纯化本发明的化合物时可以原位制备它们，或者分别通过将本发明的化合物与药学可接受的无毒性碱或酸，包括无机或有机碱或无机或有机酸反应来原位制备(Berge，1977)。“游离碱”形式可再生，通过将盐与碱或酸接触，并在常规物质中分离母体化合物。化合物的母体形式与不同盐形式在某些物理性质方面例如在极性溶剂中的溶解度是不同的，但是对于本发明的目的，在其它方面盐和母体形式的化合物是等效的。“络合物”是指本发明的化合物的络合物，例如式(1)与金属离子络合，其中至少一种金属离子是螯合或分离的。可以通过本领域公知的方法制备络合物(Dwyer,1964)。本文使用的术语“治疗”是指对哺乳动物例如人的疾病或病症的任意治疗，并包括(1)抑制疾病或病症，即，阻止其发展，(2)缓解疾病或病症，即，导致疾病退行，或(3)停止疾病的症状。术语“抑制”包括它一般接受的含义，包括阻止、防止、遏制、缓解、改善或减慢、停止或反转发展、严重度或所得到的症状。这样，当适当时，该方法包括医学治疗性和/或预防性施用。本文使用的术语“医学治疗，，意欲包括在人或其他哺乳动物的体内或体外进行的预防性、诊断性和治疗性方案。“哺乳动物”包括经济上重要的动物，例如牛、羊和猪类动物，特别是产肉的那些，以及家畜、运动动物、动物园的动物和人，优选是后者。本文使用的术语“受试者”是指动物，优选哺乳动物，最优选人，其是治疗、观测或试验的对象。缩写ACN乙腈AIBN2,2’-偶氮二-(2-甲基丙腈)API-ES大气压电离作用-电子喷雾CNS中枢神经系统CUR气帘气体(curtaingas)DCM二氯甲烷DIPEAN，N-二异丙基乙胺DMFN，N，-二甲基甲酰胺DMSO二甲亚砜EP入口电势ESI-MS电子喷雾电离质谱法EtOAc乙酸乙酯EtOH乙醇Et2O二乙醚Et3N三乙胺FMocΝ-α-(9-芴基甲基氧羰基)_FP聚焦电势g克h小时HATU2-(1Η-7-氮杂苯三唑-1-基)-l，l，3，3-四甲基-脲-六氟磷酸盐HBTU0-苯并三唑-N，N，N',N'-四甲基-脲-六氟磷酸盐HOAt1-羟基-7-氮杂苯并三唑(azabenzotriazole)HPLC高效液相色谱IS离子喷射电压LC液相色谱MeOH甲醇mg毫克min分钟ml毫升m.p.熔点c.q.熔化范围MS质谱法NEB喷雾气体NMPN-甲基吡咯烷酮PA石油醚PET正电子发射体层摄影术Rf保留因子(薄层色谱法)Rt保留时间(LC/MS)SPECT单光子发射计算机体层摄影术TEM温度TLC薄层色谱法TFA三氟乙酸VIP血管活性肠肽实施例1:分析方法除非另有说明，用BrukerARX400(1H:400MHz，13C100MHz)在300K下，在所指定的溶剂中确定核磁共振谱(1HNMR和13CNMR，APT)。在VarianInova500光谱仪上在11.74T下(1H为499.9MHz；13C为125.7MHz；19F为50.7Mhz，470.4MHz)操作，用5mmSW探针进行19FNMR和13CNMR试验。在得自CambridgeIsotopeLaboratoriesLtd的氘代氯仿或二氯甲烷中确定该谱。以四甲基硅烷(1HZ3C)或CCl3F(19F)低磁场的ppm给出化学位移O)。偶合常数J的单位是Hz。用标记‘q’(四重峰)，‘dq，(双四重峰)，‘t’(三重峰)，‘dt，(双三重峰)，‘bt，(宽三重峰)，‘d，(双峰)，‘dd，(双重双峰)，)，‘bd，(宽双峰)，‘S’(单峰)，‘bs’(宽单峰)和‘m’(多重峰)来标明NMR谱中的峰形。在将样品和D2O的微滴混合后鉴定NH和OH信号。急骤层析法是指使用指定的洗脱液和硅胶(Acros0.030-0.075mm或Merck硅胶600.040-0.063mm)纯化。柱色谱法硅胶60(0.063-0.200mm,Merck)。熔点是在BUchiB-545熔点装置上记录的。在MicromassQT0F-2仪器上，用MassLynx应用软件采集和重建数据来记录质谱。用准分子离子[M+H]+进行准确的质量测定。在无水氮气氛下进行涉及潮湿敏感性化合物或条件的所有反应。通过在硅石涂层的塑料板(Merck预涂层硅胶60F254)上使用薄层色谱法(TLC)并使用指定的洗脱液来检测反应。通过UV光(254nm)或I2来使斑显影。在使用前将二氯甲烷(五氧化磷和氢化钙)，四氢-呋喃(钠/二苯甲酮(金属)羰基化合物(ketyl))和石油醚(60-80)新鲜蒸馏。所有的其他商业可购的化学品不进一步纯化即可使用。在C18柱(Inertsil0DS-3，粒径3mm;4.6mm50mm)上进行分析性HPLC，使用下列的洗脱梯度在12分钟里为包含0.04%HCO2H的5%到95%CH3CN水溶液的线性梯度，然后在4分钟里以2.Oml分钟-1为包含0.04%HCO2H的95%CH3CN水溶液。在λ=254nm或225nm下检测产物。液相色谱法-质谱法(LC-MS)该LC-MS系统包括2Perkinelmer系列的200微量泵。将这些泵通过50μ1T型混合器(teemixer)互相连接，连接到Gilson215自动采样器上。该方法如下步骤总时间流速(μ1/分钟)Α(%)Β(%)00200095511.82000010022.52000010032.7200095543.02000955A=含0.025%HCOOH的100%水和IOmmolNH4HCOOpH=士3B=含0.025%HCOOH的100%ACN该自动采样器具有2μ1的注射环。将该自动采样器与含3μπι微粒的WatersAtlantisC1830*4.6mm柱连接。将该柱在指定的PerkinElmer系列200柱加热炉中在40°C下加热。将该柱与具有2.7μ1flowcel的PerkinElmer系列200UV计连接。波长设置为254nm。将该UV计与SciexAPI150EX质谱仪连接。该质谱仪具有下列参数扫描范围:150-900a.m.u.；极性正；扫描方式剖面；分辨率QlUNIT；步长0.10a.m.U.；每次扫描的时间0.500秒；NEB10；CUR10IS5200；TEM325；DF30；FP225和EP:10。将该光散射检测器与SciexAPI150连接。该光散射检测器是在50°C和3barN2下操作的SedereSedex55。通过G3powermac控制整个系统。化学稳定性的确定将化合物36和它的磷酰胺类似物phosphodi印ril(FR2654430，如其中所述合成)分别贮存在玻璃瓶中。以不同的时间间隔采样，并通过LC-MS分析。将样品溶解于DMSO(0.lmg/ml)中，并通过第一LC洗脱液(A)中以因子100稀释。在固定的时间点从制剂中采取100μ1的量。这些时间点是0，3，72和240小时。以正模式，用LC-MS上的ESI源测定所有的样品。洗脱液由水(H2O)，乙腈(ACN)，甲醇(MeOH)和醋酸铵(NH4Ac)构成。用两种不同的组合物将洗脱液混合到两个不同的瓶中。洗脱液A由H20/ACN/Me0H800/100/100+0.77g/lNH4Ac构成。洗脱液B由H20/ACN/Me0H100/800/100+0.77g/lNH4Ac构成。在泵中的梯度设为<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>柱Chroms印Guard柱SS10X2mm(CP28141)和Inertsil50DS-3100X3·0mm(CP22234)。柱温25°C注射孔板的温度25°C注射体积20μ1分流器(splitter)(后置柱)14运行时间9·50分钟。检测MS-MS=ESI(正/负)喷雾3.OkV碎裂电压(Fragmentor)70增益(gain)2.0停留700msec雾化器压力42psig干气温度325°C毛细管温度325°C实施例2合成的一般方面在方案1中概述了式(I)的化合物的合成。可以通过固相和溶液相化学来制备该化合物。下文描述了这两种途径的例子。氨基酸Xl和X2可以是天然存在的或化学合成的，具有D或L构型。与Wang树脂结合的氨基酸可以是购买的，或通过固相化学领域的技术人员公知的方法制备的。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>方案1在US4，594，199和4，602，092中已经描述了膦酸中间体的制备方法。特定合成方法的选择取决于本领域技术人员已知的各种因素，例如所使用试剂与官能团的相容性，固相物质的选择，使用保护基团的可能性，催化剂，活化和偶合试剂，在所制备的最终化合物中存在的最终结构特征。可以用本领域公知的标准方法得到药学可接受的盐，例如，将本发明的化合物与适当的酸例如无机酸或有机酸混合。实施例3:中间体的合成方案2中概述了中间体羧酸衍生物A的合成。路线1<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>3)NaOH方案23-苯基-丙基-膦酸(化合物A1；参见Karanewsky，1988)。向次磷酸(50衬％在水中，228mmol，23.6ml)的250ml乙醇溶液中加入商业可购的烯丙基苯(10ml，76.3mmol)和AIBN(2,2'-氮二(2-甲基丙腈)，lg)。将该混合物在氮气气氛下加热至回流6小时，然后加入另一部分的AIBN(lg)。随后将该混合物回流18小时。真空浓缩该溶液。将所得到的油冷却至0°C并加入400ml2NNaOH。用二乙醚(3X300ml)洗涤该溶液。用3NHC1酸化水层，用乙酸乙酯(3X300ml)萃取。用NaCl的饱和溶液(400ml)洗涤合并的有机层，在硫酸镁上干燥并真空浓缩，得到油状的化合物Al(10g，72%)。TLC(i_Pr0H/NH40H/H20，85/10/5，v/v/v,Rf0.25)o'HNMR(CDC13):10.5(s，1H，P-0H)；6.38(t)，7.74(t)(1H，PH)；7.1-7.3(m,5H，H-芳香族化合物(arom))；2.7(t,2H,CH2)；1.68-1.96(m，4H，2xCH2)。ESI-MS[M_H]183。3-[羟基-(3-苯基-丙基)_膦基(phosphinoyl)]-丙酸乙酯(化合物A2)。将3-苯基-丙基-膦酸(10g，54.6mmol)溶解于干燥二氯甲烷(200ml)中。向该冷却溶液中(0-5°C)缓慢加入(15分钟)三乙胺(17.lml,122.6mmol)，并在随后的30分钟里加入三甲基氯硅烷(15.6ml,122.6mmol)。继续搅拌90分钟，然后在15分钟里加入丙烯酸乙酯(7.7ml，60mmol)。在室温下将该混合物搅拌16小时。用1N盐酸(200ml)酸化该溶液。用二氯甲烷萃取水层，用水(2X200ml)洗涤合并的有机层，在WAF-过滤器上过滤，真空浓缩该滤液，得到油状的粗A2。通过急骤层析法(100%DCM到DCM/Me0H/NH40H，84/15/1,v/v/v)分离该混合物，得到油状的纯净化合物A2(13.5g,87%)。TLC(DCM/Me0H/NH40H，84/15/1，v/v/v,Rf0.15)oNMR(CDC13):9.5(s，1H，P—OH)；7.1-7.3(5H,H-arom)；4.1(q,2H,CH20)；2.5-2.7(t，4H，2xCH2)；1.68-2.l(m,6H,3xCH2)；1.2(t，3H，CH3)。3-[羟基-(3-苯基-丙基)_膦酰基]-丙酸(化合物A3)将3-[羟基-(3-苯基-丙基)-膦酰基]-丙酸乙酯(13.5g,47mmol)溶解于EtOH(300ml)中，并加入2NNa0H(65ml)。将该溶液搅拌70小时，随后真空浓缩。将所得到的油在冰浴中冷却，加入INHC1(150ml),并用Et0Ac(3X250ml)萃取该混合物。用NaCl的饱和溶液(400ml)洗涤合并的有机层，在硫酸镁上干燥并真空浓缩，得到白色固体状的化合物A3。将该固体在Et20(100ml)中搅拌并过滤。将所得到的白色粉末真空干燥，得到纯净的A3(8.92g，74%)。TLC(EtOAc/MeOH/AcOH，50/45/5，v/v/v,Rf0.25)。咕NMR(CDC13)9.3(s,1H,P—0H)；7.1—7.3(5H，H-arom)；2.64(t，2H，CH2)；2.5-2.6(m，2H，CH2)；1.6-2.l(m,6H,3xCH2)。ESI-MS[M_H]254.9。3-苯基-丁基-膦酸(化合物Bl)。如A1所述制备3-苯基-丁基-膦酸，得到油状的化合物Bl(9.3g，94%)。TLC(i-Pr0H/NH40H/H20,85/10/5,v/v/v,Rf0.3)。1HNMR(CDC13):10.0(s,1H,P-0H)；5.7(bt),8.4(bt)(1H,PH)；7.1—7.3(5H，H_芳香族化合物)；2.7(t，2H，CH2)；1.6-1.9(m，6H，3xCH2)。ESI-MS[M-H]196.903-[羟基-(3-苯基-丁基)_膦酰基]-丙酸乙酯.(化合物B2)。如A2所述制备3-[羟基-(3-苯基-丁基)_膦酰基]-丙酸乙酯，得到油状的纯化合物B2(12.6g，90%)。TLC(DCM/MeOH/NH4OH，84/15/l，v/v/v，RfO.2)。1H匪R(CDC13):8.5(bs，1H，P-0H)；7.0-7.3(5H，H-芳香族化合物);4.1(q，2H，CH20)；2.4-2.6(m,4H,2xCH2)；1.68-2.1(m，8H，4xCH2)；1.2(t，3H，CH3)。3-[羟基-(3-苯基-丁基)-膦酰基]-丙酸(化合物B3)。如A3所述制备3_[羟基-(3-苯基-丁基)-膦酰基]-丙酸，得到化合物B3(9g，79%)0TLC(Et0Ac/Me0H/Ac0H50/45/5,v/v/v,Rf0.3)。咕NMR(DMSO):7.1-7.3(5H，H_芳香族化合物)；2.64(t，2H，CH2)；2.32-2.4(m，2H，CH2)；1.5-1.85(m，8H，4xCH2)。ESIM-H268.9。2-萘基(nafthalen)-2_基-乙基亚膦酸(phosphonousacid)二乙酯(化合物CI)。根据W097/048409和EP0071544所述的方法进行该方法的第一步骤。向镁粉末(1.28g，53mm0l)的干Et20(3ml)混合物中加入一些碘晶体，将该混合物加热至回流。将2-(2_氯乙基)-萘(10.lg，53mmol)的50ml干Et20中置于滴液漏斗中。将该溶液缓慢加入到镁混悬液中，同时维持回流条件。继续回流3小时，然后在冰浴中冷却该混合物。在氮气气氛下过滤该混合物。在0°C的温度下，在90分钟和氮气气氛下将滤液加入到氯代亚膦酸二乙酯(7.6ml，53mmol)的Et20溶液中(50ml)。形成了白色浆体，在氮气层和室温下将该混合物再搅拌16小时。过滤该反应混合物，真空蒸发滤液，得到粗化合物CI(12g)，其无须进一步纯化即可用于下一步骤。(2-萘-2-基-乙基)_膦酸乙酯(化合物C2)。将粗Cl(12g)悬浮于水(8ml)和0.3ml的浓HC1中。由于放热反应，该反应混合物被加热。继续搅拌2小时，然后用Et0Ac(3X50ml)萃取该反应混合物。用NaCl的饱和溶液(2X90ml)洗涤合并的有机层，在硫酸镁上干燥并真空浓缩，得到油状的C2(10.9g)，其无须进一步纯化即可用于下一步骤。(2-萘-2-基-乙基)_膦酸(化合物C3)。将粗C2(10.9g)的2NNa0H(50ml)混悬液在室温下搅拌1小时。用Et20(3X40ml)洗涤该混合物，用浓HC1将水层酸化至pHl。用Et0Ac(3X50ml)萃取酸化的水层，并用NaCl的饱和溶液(2X90ml)洗涤合并的EtOAc层，在硫酸镁上干燥并真空浓缩，得到油状的化合物C3(5.3g，46%),其无须进一步纯化即可用于下一步骤。TLC(DCM/Me0H/NH40H,84/15/1,v/v/v,Rf0.1)。NMR(CDC13):11.0(bs，1H,P-OH)；5.8(bt)，8.5(bt)(1H,PH)；7.2-7.9(m,7H,H-芳香族化合物)；3.1(m,2H,CH2)；2.0-2.3(m，2H，CH2)。ESI-MS[M_H]218.9。3-[羟基-(2-萘-2-基-乙基)_膦酰基]丙酸乙酯(化合物C4)。将(2-萘-2-基-乙基)-膦酸(C3，5.3g,24mmol)溶解于干DCM(90ml)中，并在冰浴中冷却至0°C。向冷却的溶液中加入Et3N(7.5ml，54mmol)和三甲基氯硅烷(6.87ml,54mmol)中，将该混合物搅拌1小时，然后在15分钟里加入丙烯酸乙酯(3.4ml,26.6mmol)。将该混合物在室温下搅拌2小时。将该溶液在冰浴中冷却至0°C，并用1N盐酸(90ml)酸化。用二氯甲烷(3X70ml)萃取水层，并用水(2X100ml)洗涤合并的有机层，在WAF-过滤器上过滤，真空浓缩该滤液，得到油状的粗C4。通过急骤层析法(100%DCM到DCM/Me0H/NH40H，84/15/l，v/v/v)分离该混合物，得到油状的粗C4(8.lg,99%)0TLC(DCM/Me0H/NH40H,84/15/1,v/v/v,Rf0.15)oNMR(CDC13):7.9(bs，1H，P-OH)；7.1-7.7(7H，H_芳香族化合物)；3.9-4.0(q,2H，CH20)；3.0(m，2H，CH2)；2.5(m，2H，CH2)；1.8-2.0(m,4H,2xCH2)；1.1(t，3H，CH3)。3-[羟基-(2-萘-2-基-乙基)-膦酰基]丙酸(化合物C5)。将3-[羟基-(2-萘-2-基-乙基)-膦酰基]丙酸乙酯(C4，8.lg，25.3mmol)溶解于Et0H(160ml)中。向该溶液中加入2NNaOH(35ml)，并将该混合物在室温下搅拌3小时，随后真空浓缩。将所得到的油在冰浴中冷却，加入INHCl(80ml)，用Et0Ac/Me0H，3/l，v/v(3X150ml)萃取该混合物。用NaCl的饱和溶液(400ml)洗涤合并的有机层，在硫酸镁上干燥并真空浓缩，得到白色固体状的C5。将该固体在Et20(100ml)中搅拌并过滤。真空干燥所得到的白色固体，得到C5(5.97g,81%)。TLC(Et0Ac/Me0H/Ac0H，50/45/5，v/v/v,Rf0.25)。熔点165-167°C；匪R(DMS0):7.4-7.7(7H,H_芳香族化合物)；3.0(m，2H，CH2);2.5(m，2H，CH2)；1.8-2.l(m，4H，2xCH2)。2_(萘基(nafthalerO-l-基)_乙基亚膦酸二乙酯(化合物Dl)。按照与C1所述相同的方法制备化合物D1。粗Dl(14g)无须进一步纯化即可用于下一步骤。2-(萘-1-基)-乙基-膦酸乙酯(化合物D2)。按照与C2所述相同的方法制备化合物D2。分离出油状的化合物D2(13g)，其无须进一步纯化即可用于下一步骤。2_(萘-1-基)_乙基-膦酸(化合物D3)。按照与C3所述相同的方法制备化合物D3。分离出油状的化合物D3(7.lg)，其无须进一步纯化即可用于下一步骤。TLC(DCM/Me0H/NH40H,84/15/1,v/v/v,Rf0.1)。屯NMR(CDC13):9.5(bs，1H，P-0H)；6.5(bt),7.9(bt)(1H,PH)；7.3-8.0(7H,H-arom)；3.4(m,2H,CH2)；2.2-2.3(m,2H,CH2)。3-[羟基-(2-[萘-1-基]-乙基)-膦酰基]丙酸乙酯(化合物D4)。按照与C4所述相同的方法制备D4。分离出油状的化合物D4(8.lg,79%)；TLC(DCM/Me0H/NH40H,84/15/1,v/v/v,Rf0.15)。1HNMR(CDC13)7.1-7.9(8H,P—0H和H_芳香族化合物)；3.9-4.0(q,2H,18CH2O)；3.25(m，2H，CH2)；2.5(m,2H,CH2)；1.8-2.0(m,4H,2xCH2)；1·1(t，3H，CH3)。3-[羟基-(2-萘-1-基-乙基)_膦酰基]丙酸(化合物D5)。按照与化合物C5所述相同的方法制备D5。分离出白色固体状的化合物D5(6.6g)。TLC(EtOAc/MeOH/AcOH，50/45/5，ν/ν/ν,Rf0.3)。熔点136_139°C；IHNMR(DMSO):7.4-8.1(7H,H-芳香族化合物)；3.3(m，2H，CH2)；2.5(m,2H,CH2)；1.9-2.1(m，4H，2xCH2)。ESI-MS,[Μ_Η]290·9。(萘基(nafthalerO-l-基)_甲基亚膦酸二乙酯(化合物El)。按照与化合物Cl所述相同的方法制备E1。化合物El分离出油状的(llg)，其无须进一步纯化即可用于下一步骤。(萘-1-基-甲基)_膦酸乙酯(化合物E2)。按照与化合物C2所述相同的方法制备化合物E2。分离出油状的化合物E2(10.2g)，其无须进一步纯化即可用于下一步骤。(萘-1-基-甲基)_膦酸(化合物E3)。按照与C3所述相同的方法制备化合物E3。分离出油状的化合物E3(3.8g，37%)。TLC(DCM/Me0H/NH40H，84/15/1，ν/ν/ν,Rf0.1)。1ΗNMR(CDCl3):9·0(bs，1Η，Ρ-ΟΗ)；5.6(bt),8.4(bt)(ΙΗ,ΡΗ)；7.3-8.0(7Η,H-arom)；3.5-3.6(dd,2Η,P-CH2)。3-[羟基_(萘-1-基-甲基)_膦酰基]丙酸乙酯(化合物E4)。按照与C4所述相同的方法制备E4。分离出油状的化合物E4(6.6g,83%)；TLC(DCM/Me0H/NH40H,84/15/1,v/v/v,Rf0.15)。IH匪R(CDCl3):7·2—8.1(7Η,H-芳香族化合物)；6.7(bs，lH，Ρ—0Η)；4.0(q,2H,CH2O)；3.3-3.4(dd,2H,P-CH2)；2.4-2.5(m,2H,CH2)；1.7-1.9(m，2H，CH2)；1.l(t,3H，CH3)ο3-[羟基_(萘-1-基-甲基)_膦酰基]丙酸(E5)。按照与化合物C5所述相同的方法制备化合物E5。分离出白色固体状的化合物E5(5.3g，89%)。TLC(EtOAc/MeOH/AcOH,50/45/5,v/v/v,Rf0.3)。熔点187_1891;匪1(01^0)7.4-8.2(7H，H-芳香族化合物)；3.6(d，2H，P-CH2)；2.4(m,2H,CH2)；1.8-1.9(m，2H，CH2)。萘基(nafthalen)-2-基-甲基亚膦酸二乙酯(化合物Fl)。按照与化合物Cl所述相同的方法制备化合物F1。分离出油状的化合物FK10.Ig)，其无须进一步纯化即可用于下一步骤。(萘-2-基-甲基)_膦酸乙酯(化合物F2)。按照与化合物C2所述相同的方法制备F2。分离出油状的化合物F2(7.1)，其无须进一步纯化即可用于下一步骤。(萘-2-基-甲基)_膦酸(化合物F3)。按照与C3所述相同的方法制备F3。分离出油状的化合物F3(1.4g，根据萘(naftyl)次甲基溴的14%收率)，其无须进一步纯化即可用于下一步骤。TLC(DCM/Me0H/NH40H,84/15/1,v/v/v,Rf0.1)。IHNMR(CDCl3)8.7(bs,1H,Ρ-0Η)；5.6(bt)，8.4(bt)(1H,PH)；7.2-7.9(7H,H-arom)；3.2-3.3(dd,2H,P-CH2)。3-[羟基_(萘-2-基-甲基)_膦酰基]丙酸乙酯(化合物F4)。按照与C4所述相同的方法制备化合物F4。在急骤层析法后分离出油状的化合物F4(2.7g,70%)。TLC(DCM/Me0H/NH40H，84/15/1，v/v/v，RfO.2)。IHNMR(CDCl3):7·0(bs，1H，Ρ-0Η)；7.2-7.7(7H，H-芳香族化合物)；4.0(q,2H,CH2O)；3.0-3.1(dd,2H,P-CH2)；2.3-2.5(m,2H,CH2)；1.7-1.9(m,2H,CH2)；1.l(t，3H，CH3)。3-[羟基_(萘-2-基-甲基)_膦酰基]丙酸(F5)。按照与C5所述相同的方法制备F5。分离出白色固体状的化合物F5(2.Ig,88%)。TLC(Et0Ac/Me0H/Ac0H,50/45/5,v/v/v,Rf0.3)。熔点210°C;匪R(DMSO):7·4_7·8(7H，H-芳香族化合物)；3·2_3·3(d，2Η，CH2)；2.4(m，2H，CH2)；1·8(m，2Η，CH2)。途径A根据溶液相途径可以制备适当保护的二肽。该途径描述(I)-Pro-(I)-正亮氨酸叔丁酯，但是广泛地用于合成所公开的所有二肽。FMoc-(I)-Pro-(I)-正亮氨酸叔丁酯(化合物Gl)。向FMoc保护的I-脯氨酸(1.35g,4mmol)和叔丁酯保护的(I)正亮氨酸(0.75g4mmol)的NMP(IOml)混合物中加入HOAt(0.54g,4mmol)，HBTU(1.52g,4mmol)和DIPEA(0.87ml,5mmol)。该混合物在室温下搅拌16小时，然后用5%NaHC03(5ml)稀释，并用EtOAc(3X75ml)萃取。用NaCl的饱和溶液(IOOml)洗涤合并的有机层，在硫酸镁上干燥并真空浓缩，得到粗G1。通过快速柱色谱法纯化(EtOAc/PA，1/2,ν/ν)粗化合物Gl，得到白色固体状的纯净Gl(1.84g,91%)。TLC(EtOAc/PA,1/2，ν/ν,Rf0.25)。(I)-Pro-(I)_正亮氨酸叔丁酯(化合物G2)。向Gl(1.84g，3.64mmol)的THF(25ml)溶液中加入哌啶(1.45ml)。将反应混合物在室温下搅拌1小时，然后TLC分析表明，反应是完全的。将该混合物真空浓缩，通过硅胶柱色谱法(100%DCM到DCM/MeOH，9/1，ν/ν)纯化该残留物，得到油状的纯净化合物G2(1.0g，97%)。TLC(DCM/MeOH,9/1,ν/ν,Rf0.25)。途径B也可以根据固相途径制备适当保护的二肽。在该途径中，生长肽链的C-末端保护是固相物质，负载能力0.7mmol/g的Wang树脂。该途径是描述(I)-Pro-(I)-正亮氨酸，但是广泛地用于合成要求保护的所有二肽。FMoc-(I)-Pro-(I)_正亮氨酸Wang-树脂结合物。向FMoc保护的I-脯氨酸(1.35g,4mmol)和N-末端未保护、C-末端树脂结合的(I)正亮氨酸(1.4g的树脂，lmmol)的NMP(IOml)混合物中加入HOAt(0.54g,4mmol),HBTU(1.52g,4mmol)和DIPEA(0.87ml，5mmol)。将该混合物在室温下振荡2小时。过滤该混合物，用3XIOmlDMF,2XIOmlMeOH,2XIOmlDCM,2X10mlDMF洗涤该树脂。所得到的树脂在溴酚蓝试验中是阴性的，表明所有的胺转变为了酰胺。(I)-Pro-(I)-正亮氨酸Wang-树脂结合物.将FMoc-(I)-Pro-(I)-正亮氨酸Wang-树脂结合物(2g树脂)混入到哌啶的DMF(10ml，20%)溶液中。将该混合物混合10分钟，过滤该树脂，用DMF洗涤，将该反应重复一次。过滤该混合物，用3XIOmlDMF,2XIOmlMeOH,2XIOmlDCM,2X10mlDMF洗涤该树脂，其无须进一步纯化即可用于下一步骤。实施例4特定化合物的合成下文描述了特定化合物的合成，是意欲进一步更详细地说明本发明，因此并不是打算以任何方式限制本发明的范围。根据对说明书的思考和本文所公开的本发明的实践，本发明的其他实施方案对于本领域技术人员将是显而易见的。因此，应当认为说明书和实施例仅仅是示例性的。3-[羟基-(3-苯基-丁基)-膦酰基]-丙酰基)-2-氨基_(3-甲基-丁酰氨基)己酸(代码3-[羟基-(3-苯基-丁基)_磷酰基]_丙酰基)_⑴-Val-(I)-NLeu-ΟΗ]，化合物6)。向NH2-Val-NLeu-C(=0)-O-Wang树脂(300mg，0.25mmol)的NMP(5ml)混悬液中加入化合物B3(0.2g，0.75mmol，0.25M，在NMP中)。将该混合物在惰性氮气气氛下振荡。向该混合物中加入0.5MHATU的NMP(1.5ml，0.75mmol)和DIPEA(0.75mmol,0.13ml)溶液。将该混合物振荡过夜，然后过滤该混合物，用NMP(3X10ml)洗涤残留的树脂。在相同条件下将反应重复6小时，然后茚三酮分析表明，反应已经完成。过滤该混合物，用DCM(2X10ml),MeOH(2XIOml)，DMF(2X10ml),DCM(2X10ml),MeOH(2X10ml)，DMG(2X10ml),DCM(2XIOml)洗涤残留的树脂。向该树脂中加入TFA/DCM/水，70/25/5，ν/ν/ν的混合物，将该混合物在室温下振荡3小时。过滤该混合物，用水(3X30ml)蒸发滤液，得到白色固体状的化合物6。TLC(i-Pr0H/NH40H/H20,85/10/5,v/v/v,RfO.1)。HPLC纯度70%,Rt7.3分钟；质谱=ESI[M-H]481.1。2-[(1-{羟基-(2-萘-2-基-乙基)膦酰基}_丙酰基)_吡咯烷-羰基]-氨基]_己酸叔丁酯(代码2-[(1-{羟基-(2-萘-2-基-乙基)膦酰基}_丙酰基)-(I)-Pro-(I)-NLeu叔丁酯]，化合物36)向Pro-NLeu-O-叔丁酯(G2，0.45g,1.6mmol)和化合物C5(0.47g，1.6mmol)的干DCM(25ml)溶液中加入二环己基碳二亚胺(DCC，0.73g，3.5mmol)。将混合物在室温和氮气下搅拌16小时，然后TLC表明，反应已经完成(DCM/MeOH/NH4OH,84/15/1,v/v/v,Rf0.15)。过滤反应混合物并真空浓缩。通过硅胶柱色谱(DCM和DCM/Me0H/NH40H,84/15/1,v/v/v)纯化该混合物，得到油状的化合物36-叔丁酯(0.71g，80%)οTLC(DCM/Me0H/NH40H，84/15/1，v/v/v,Rf0·15)。2-[(1-{羟基-(2-萘-2-基-乙基)膦酰基}_丙酰基)_吡咯烷-羰基]-氨基]-己酸(代码2-[(1_{羟基-(2-萘-2-基-乙基)膦酰基}-丙酰基)-(I)-Pro-(I)-NLeu-OH])向化合物36-叔丁酯(0.69g,1.2mmol)的DCM(Ilml)溶液中加入TFA(8ml)，将该混合物在室温下搅拌16小时。用甲苯稀释该混合物，真空浓缩该混合物。用甲苯重复共蒸发两次，用can也重复两次，得到白色固体状的化合物36。将该化合物在Et2O中搅拌过夜，得到无定形化合物36(0.6g,97%)。TLC(i_Pr0H/NH40H/H20，85/10/5，v/v/v,Rf0.1)。1HNMR(CDCl3)7.0-7.8(9H,H-arom,P-OH,NH)；4.3-4.5(2xm,2H,CH-Pro,CH-NLeu)；3.4(m，2H，Pro-CH2)；3.0(m,2H,naf-CH2)；2.5(m，2H，C(=0)CH2)；1.6-2·1(m,10H，5xCH2)；1.3(m，4H，2xNLeu-CH2)；0.8(bt，3H，CH3-NLeu)。HPLC纯度91%，Rt7.6min；质谱:ESI[M-H]501.1。与上述的化合物6和36的合成类似，得到了化合物1-5，7-35和37_39(都列在下表中)。在标题“S”下，给出了特定的合成途径(如上所述的A或B)。表头HPLC下给出了纯度(％)及保留时间(Rt)。在下一栏(TLC)中给出了Rf-值，用硅胶60F254预涂层的Merck's板进行色谱法，用i_Pr0H/NH40H/H20，85/10/5，v/v/v作为洗脱液。在最后一栏中，“V”标记表明，所观测到的ESI-[M-H]-值与计算值相等或非常近似。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>在表中的化合物中，R2,R3和R4形成的所有氨基酸都是L-氨基酸。实施例5在动物实验中使用的制剂用于口服(ρ.ο.)施用向玻璃管中所需量(0.5-5mg)的固体化合物36中加入一些玻璃珠，将该固体通过涡旋研磨2分钟。在加入lmll%甲基纤维素的水溶液和2%(ν/ν)的泊洛沙姆(Poloxamer)188(LutrolF68)后，将该化合物通过涡旋悬浮10分钟。用几滴NaOH(0.1N)水溶液将pH调节至7。用超声波浴进一步悬浮混悬液中的剩余颗粒。用于腹膜内(i.p.)施用向玻璃管中所需量(0.5_15mg)的固体化合物36中加入一些玻璃珠，将该固体通过涡旋研磨2分钟。在加入Iml甲基纤维素和5%甘露醇的水溶液后，将该化合物通过涡旋悬浮10分钟。最后将PH调节至7。实施例6药理学实验结果本发明的化合物是损坏神经降压肽的甲拌磷寡肽酶(Thimetoligopeptidase)EC3.4.24.15和溶神经素(Neurolysine)EC3.4.24.16的选择性抑制剂。但根据公开的方法(Dauch,1991a'b)测定时，该化合物的pIC5(1值的范围是5.0-9.O。在下表中给出了代表性的数据。<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>实施例7稳定性数据将化合物36和它的磷酰胺类似物phosphodi印ril(FR2654430，如本文所述合成)分别贮存在玻璃瓶中。以不同的时间间隔采样，并通过LC-MS分析。<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>FR2654430中公开的类似物当计算相对稳定性时，假定该化合物在配制时完全溶解。因此，在开始时(0小时测定值)相对稳定性是100%。下列时间测定值是根据该值重新计算的。<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>化合物36在10天(240小时)里保持稳定，而phosphodi印ril逐渐降解。因此，甚至纯净形式的N-类似物也是不稳定的。由于磷酰胺键快速水解，该化合物的酶抑制活性在困难下才被确定。体内试验常常产生的阴性结果。实施例8药物制剂对于临床用途，可以将式(1)的化合物配制成药物组合物，其是本发明重要的和新的实施方案，因为它们包含该化合物，更特别地包含本文所公开的特定化合物。可以使用的药物组合物的类型包括但不限于，片剂、咀嚼片、胶囊(包括微囊)、溶液、非肠道溶液、软膏(乳膏和凝胶)、栓剂、混悬液和本文所公开或本领域技术人员根据说明书和本领域的一般知识显而易见的其他类型。该活性成分例如可以是在环糊精、它们的醚或它们的酯中的包合络合物的形式。该组合物可以用于口服、静脉内、皮下、气管、支气管、鼻内、肺、经皮、含月艮、直肠、非胃肠道或其他途径施用。该药物制剂包含至少一种式(1)的化合物与药学可接受的佐剂、稀释剂和/或载体混合。活性成分总量的适当范围是该制剂的约0.1%(w/w)到约95%(w/w)，适当地是0.5%到50%(w/w)，优选1%到25%(w/w)。可以借助于常用的方法将本发明的化合物制成适合施用的形式，包括使用辅助性物质例如液体或固体、粉末状成分，例如药学常用的液体或固体填充剂和膨胀剂、溶剂、乳化齐、润滑剂、调味剂、色素和/或缓冲物质。常用的辅助性物质包括碳酸镁、二氧化钛、乳糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇和其他糖类或糖醇、滑石、乳蛋白质、明胶、淀粉、支链淀粉、纤维素及其衍生物、动物和植物油例如鱼肝油、向日葵油、落花生油或芝麻油、聚乙二醇和溶齐U，例如灭菌水和单或多元醇例如甘油，以及崩解剂和润滑剂例如硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂富马酸钠和聚乙二醇蜡。然后将该混合物加工成颗粒或压制成片。用下列成分制备片剂成分_量(mg/片剂)化合物3610微晶纤维素200二氧化硅，发烟10硬脂酸_10总共230将各组分混合，并压制成片剂，每片重230mg。在混合制成制剂前，可以将活性成分与其他的非活性成分分别预混合。也可以在与非活性成分混合形成制剂前，将活性成分相互混合。可以用胶囊制备软明胶胶囊，其中胶囊包含本发明的活性成分、植物油、脂肪或其他适合软明胶胶囊的载体的混合物。硬明胶胶囊可以包含活性成分的颗粒。硬明胶胶囊也可以包含活性成分和固体粉末状的成分例如乳糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、马铃薯淀粉、玉米淀粉、支链淀粉、纤维素衍生物或明胶。可以制备直肠施用的剂量单元，包括(i)在栓剂的形式中，包含活性物质和中性脂肪基质的混合；(ii)在明胶直肠胶囊的形式中，包含活性物质和植物油、液状石腊或其他适合明胶直肠胶囊的载体的混合物；(iii)预先制成的微灌肠剂的形式；或(iv)仅在施用前在适当的溶剂中重新构建的干燥微灌肠剂。液体制剂可以制备成糖浆、酏剂、浓滴剂或混悬液，例如溶液或混悬液，包含活性成分和剩余组成物质，例如糖或糖醇和乙醇、水、甘油、丙二醇和聚乙二醇的混合物。如果需要，该液体制剂可以包含着色剂、调味剂、防腐剂、糖精和羧甲基纤维素或其他增稠剂。液体制剂也可以制备成干燥粉末的形式，在使用前用适当的溶剂重新构建。胃肠外施用的溶液可以制备成在药学可接受的溶剂中的本发明的制剂的溶液。这些溶液也可以包含稳定性成分、防腐剂和/或缓冲性成分。胃肠外施用的溶液可以制备成干制剂，在使用前用适当的溶剂重建。根据本发明还提供制剂和“各部分的试剂盒”，其包含填充本发明的药物组合物的一种或多种成分的一个或多个容器，用于在医学治疗中使用。与这些容器相关的是多种书写材料，例如使用说明或规定药品的制备、使用或出售的政府机构规定形式的注意事项，其中该注意事项反映了用于人或兽医学施用的制备、使用或出售的机构的批准。本发明的制剂在制备用于治疗需要或要求抑制神经降压肽降解酶的疾病的药物中的应用，和医学治疗法或包括给患有或对需要或要求抑制神经降压肽降解酶的疾病敏感的患者施用治疗有效总量的至少一种式(1)的化合物。通过实施例和非限制性地，给出了几种药物组合物，包含全身性使用或局部应用的优选活性化合物。可以用本发明的其他化合物或其组合替代(或替换)所述化合物。活性成分的浓度可以在本文讨论的广泛范围内各不相同。可以包括的各成分的量和类型是本领域公知的。参考书目Barelli,H.等人，Br.J.Pharmacol.，112，127，1994.Barelli,H.等A,"Potentinhibitionofendopeptidase24.16禾口endopeptidase24.15bythephosphornamidepeptideN-(phenylethylphosphonyl)-Gly-L-Pro-L-aminohexanoicacid",Biochem.J.，287(2)，621-625,1992.Berge,S.Μ."Pharmaceuticalsalts，，，J.PharmaceuticalScience,66,1-19(1977).Bickel,M.H.,“ThepharmacologyandBiochemistryofN-oxides，，，Pharmaco-loRicalReviews,21(4)，325-355，1969.Bundgaard,H.(主编)，‘‘DesignofProdrugs",Elsevier,1985.Byrn等人，PharmaceuticalResearch,12(7)，945—954，1995.Dauch,P.等Α"Specificinhibitionofendopeptidase24.16bydip印tides”，Eur.J.Biochem.，vol.202，pp.269—276，199ΓDauch,P.等人，"Fluorimetricassayoftheneurotensin-degradingmetallo-endopeptidase,endopeptidase24.16，，，Biochem.J.,280,1991,pp.421-426.1991bDwyer&Meilor,“ChelatingagentsandMetalChelates，，，AcademicPress,chapter7,1964.Ettmayer,P.等Α"Lessonslearnedfrommarketedandinvestigationalprodrugs，，，J.Med.Chem.，47，2393-2404，2004.Jarvinen,T.等人，‘‘DesignandPharmaceuticalapplicationsofprodrugs，，，pages733-796:S.C.Gad(主编)‘‘DrugDiscoveryHandbook",JohnWiley&SonsInc.,NewJersey,U.S.A.,2005.Kaplan等人，Biochemistry，30，8165—8170，1991.Karanewsky等人，J.Med.Chem.，31，204-212，1988.King,F.D.,(主编),page215,MedicinalChemistry:PrinciplesandPractice，，，1994，ISBN0-85186-494-5.Martin,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