专利名称：：甘草酸、甘草次酸或其盐或其衍生物温敏凝胶及其制法和应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及温敏凝胶及其制备方法和应用，更具体地涉及甘草酸或甘草次酸或其盐或其衍生物温敏凝胶及其制备和其医药用途。
背景技术：
：甘草的根和根茎含三萜皂甙甘草酸(Glycyr-rhizicacid)，即甘草甜素(Glycyrrhizin)，是甘草次酸(Glycyrrhetinicacid，Glycyrrheticacid)的二葡萄糖醛酸苷，化学结构及分子式如下H0H甘草酸分子式C42H62016。C00HH0'甘草次酸分子式C3GH4604甘草酸、甘草次酸，具有抗炎、抗溃疡等作用。我们的研究也发现，甘草酸、甘草次酸炎症性肠病(IBD)、风湿性关节炎、牙龈炎、牙周炎、口腔溃疡有明显疗效，但由于甘草酸、甘草次酸全身应用有醛固酮样副作用，影响了其临床应用。研究新制剂，改变给药途径，增强局部应用的效果是解决副作用、提高疗效的有效方法。目前，局部粘膜给药常用给药制剂为水剂和凝胶剂，但水剂因局部滞留时间过短，很难达到理想治疗效果，且药物浪费极大；而凝胶剂过于粘稠，使给药极为不便。温敏凝胶很好的弥补了这两种制剂的缺陷，因其在室温下呈液态，使给药方便，也因其在37'C体温下可变为凝胶态，可延长药物局部作用时间。
发明内容本发明就是针对上述问题提供一种甘草酸、甘草次酸或其盐或其衍生物温敏凝胶及其制法和应用，该温敏凝胶用作粘膜给药制剂及注射给药制剂，可治疗炎症性肠病、口腔炎症、口腔溃疡、眼部炎症、体腔内炎症，以方便临床应用，减少给药频率、提高病人顺应性；增强治疗效果、降低毒副作用。本发明提供的技术方案之一是甘草酸、甘草次酸或其盐或其衍生物温敏凝胶，包括10-40%泊洛沙姆、0.1-10%羧甲基壳聚糖、0.0001-10%甘草酸、甘草次酸、甘草酸盐、甘草次酸盐或甘草次酸的衍生物、水40-90.9%，以上百分比为重量百分比。所述甘草酸盐为甘草酸钾、甘草酸二钾、甘草酸三钾、甘草酸单钠、甘草酸二钠、甘草酸三钠、甘草酸单铵、甘草酸二铵、甘草酸三铵、甘草酸锌、甘草酸镁或甘草酸铝。所述甘草次酸盐为甘草次酸钾、甘草次酸二钾、甘草次酸三钾、甘草次酸钠、甘草次酸二钠、甘草次酸三钠、甘草次酸锌、甘草次酸镁、或甘草次酸铝。所述温敏凝胶pH值为5-12。本发明提供的技术方案之二是上述温敏凝胶的制备方法，按温敏凝胶含10-40%泊洛沙姆、0.1-10%羧甲基壳聚糖、0.0001-10%的药物、水40-90.9%的重量百分比例，将泊洛沙姆加水搅拌均匀，加入羧甲基壳聚糖，搅拌均匀，消泡后得凝胶，将药物加入凝胶，搅拌分散溶解，热压灭菌，灌装、密封得到温敏凝胶；所述药物为甘草酸、甘草次酸、甘草酸盐、甘草次酸盐或甘草次酸的衍生物。上述温敏凝胶在制备治疗炎症性肠病、口腔炎症、口腔溃疡、眼部炎症或体腔内炎症的药物中的应用。所述体腔内炎症，如关节炎症、颈椎炎症或腰椎炎症等。本发明以TNBS诱导大鼠结肠炎，灌肠给予甘草酸50mg/kg、甘草次酸甲酯lmg/kg温敏凝胶，一天一次，给药7天后，与不给药的模型组相比，对结肠损伤有明显的保护作用，血K+、血Na+无明显变化，表明甘草酸、甘草次酸甲酯温敏凝胶可用通过肠粘膜给药治疗炎症性肠病，且在治疗剂量下未见明显的不良反应。本发明以弗氏完全佐剂(AA)诱导大鼠关节炎模型，关节腔内给予甘草酸50mg/kg、甘草次酸甲酯lmg/kg温敏凝胶，一周一次，3周后，与不给药的模型组相比，能明显抑制大鼠足肿胀，延长热板镇痛潜伏期，表明本发明温敏凝胶可用于体腔内炎症的治疗。实验表明，本发明用作粘膜给药制剂及注射给药制剂，可治疗炎症性肠病、口腔炎症、口腔溃疡、眼部炎症、体腔内炎症，以方便临床应用，减少给药频率、提高病人顺应性；增强治疗效果、降低毒副作用。由于甘草酸和甘草次酸水溶性不太理想，尽管也可以制备成稳定的制剂，但工艺较复杂，因此，将其制备成盐，可增加水溶性，从而达到简化工艺的目的。在制备抗炎症性肠病药物中，先将甘草酸和甘草次酸分别制成溶于水的甘草酸盐和甘草次酸盐。本发明所述的甘草酸盐可以为甘草酸钾，分子式C42H61K016;甘草酸二钾，分子式C42H6GK2016;甘草酸三钾，分子式C42H59K3016;甘草酸单钠，分子式C42H61Na016;甘草酸二钠，分子式C42H6GNa2016;甘草酸三钠的分子式C42H59Na3016;甘草酸单铵，分子式C42H65N016;甘草酸二铵，分子式C42H68N2016;甘草酸三铵，分子式C42H7lN3016;甘草酸锌的分子式C42H6QZn016;甘草酸镁，分子式C42H6oMgO,6或甘草酸铝，分子式C42H59A1016。本发明所述甘草次酸盐可以为甘草次酸钾，分子式C:,。HK04;甘草次酸二钾，分子式C加H"KA;甘草次酸三钾的分子式C:,。HK:A;甘草次酸钠，分子式C掘我甘草次酸二钠，分子式C:i(ft2Na;A;甘草次酸三钠的分子式C:,。HNa:A;甘草次酸锌的分子式C3。H44Zn04;甘草次酸镁，分子式C:,。^Mg04或甘草次酸铝，分子式C:i。H43Al(V本发明所述干草次酸衍生物可以为甘草次酸甲酯，分子式d0"乙酰甘草次酸甲酯，分子式为(:3晶。05;11-脱氧甘草次酸，分子式为"晶803;11-脱氧甘草次酸-3-0琥珀酸半酯，分子式为(:3晶206;乙酰甘草次酸铝，分子式为C32H51A106。图1为甘草酸、甘草次酸衍生物一甘草次酸甲酯温敏凝胶对结肠炎大鼠结肠损伤的保护作用。A:正常组水溶液组；B:模型水溶液组；C:模型+0.5%甘草酸(50mg/kg)水溶液组；D:模型+0.01%甘草次酸甲酯(lmg/kg)水溶液组；E:模型+5%巴柳氮钠(500mg/kg)水溶液组；F:正常组温敏凝胶；G:模型温敏凝胶组；H:模型+0.5%甘草酸(50mg/kg)温敏凝胶组；I:模型+0.01%甘草次酸甲酯(lmg/kg)温凝胶组；J:模型+5%巴柳氮钠(500mg/kg)温敏凝胶组；图2为甘草酸、甘草次酸衍生物一甘草次酸甲酯温敏凝胶对关节炎大鼠关节损伤的保护作用。A:正常组；B:模型组；C:模型+5%甘草酸(5mg/kg)温敏凝胶组；D:模型+0.05%甘草次酸甲酯(0.05mg/kg)温敏凝胶组；E:模型+O.1%地塞米松(0.lmg/kg)温敏凝胶组。具体实施例方式实施例l:按0.5%的泊洛沙姆、10%的羧甲基壳聚糖、0.001%的甘草酸及余量水的重量百分比例，将泊洛沙姆加水搅拌均匀，加入羧甲基壳聚糖，搅拌均匀，消泡后，将甘草酸加入凝胶，搅拌分散溶解，热压灭菌，灌装、密封得到温敏凝胶。该凝胶的胶凝温度为35.5°C，胶凝时间5min。(pH7.4值)实施例2:按30%的泊洛沙姆、0.2%的羧甲基壳聚糖、8%的甘草酸钠及余量水的重量百分比例，将泊洛沙姆加水搅拌均匀，加入羧甲基壳聚糖，搅拌均匀，消泡后，将甘草酸钠加入凝胶，搅拌分散溶解，热压灭菌，灌装、密封得到温敏凝胶。该凝胶的胶凝温度为35'C，胶凝时间5min。(pH值8.0)实施例3:按20wt。/。的泊洛沙姆407、17wty。的泊洛沙姆188、2%的羧甲基壳聚糖、1%的甘草酸三铵及余量水的重量百分比例，将泊洛沙姆加水搅拌均匀，加入羧甲基壳聚糖，搅拌均匀，消泡后，将甘草酸三铵加入凝胶，搅拌分散溶解，热压灭菌，灌装、密封得到温敏凝胶。该凝胶的胶凝温度为32。C，胶凝时间lmin。(pH8.0值)实施例4:将甘草次酸代替实施例1中的甘草酸可以得到类似的结果。按照实施例2或3，将甘草酸钾、甘草酸二钾、甘草酸三钾、甘草酸二钠、甘草酸三钠、甘草酸单铵、甘草酸二铵、甘草酸锌、甘草酸镁、甘草酸铝、甘草次酸钾、甘草次酸二钾、甘草次酸三钾、甘草次酸钠、甘草次酸二钠、甘草次酸三钠、甘草次酸锌、甘草次酸镁、甘草次酸铝、甘草次酸甲酯、乙酰甘草次酸甲酯、11_脱氧甘草次酸、11_脱氧甘草次酸_3-O琥珀酸半酯、乙酰脱氧甘草次酸铝代替实施例2中的甘草次酸钠或实施例3中的甘草酸三铵可以得到类似实施例2或实施例3的结果。实施例5:中医药具有疗效好、特别是毒副作用小的特点，在治疗慢性、疑难疾病方面常能发挥重要作用。本实施例选择甘草酸、甘草次酸衍生物一甘草次酸甲酯制备温敏凝胶，作为抗炎症性疾病的药物，通过建立炎症性肠病、性关节炎的动物模型，观察给予甘草酸、甘草次酸甲酯温敏凝胶与普通制剂相比的治疗作用，旨在研制一种新的炎症性疾病治疗制剂。实验结果表明，采用温敏凝胶制剂给药，结肠炎治疗采用隔日一次、关节炎治疗采用一周一次均取得满意疗效，与普通制剂每日一次给药相比，无显著差异，表明温敏凝胶制剂具有降低给药频度、提高病人顺应性的作用，是一种用于治疗慢性炎症性疾病的良好制剂。在进行甘草酸、甘草次酸甲酯对结肠炎大鼠血钾、血钠影响的实验中发现，甘草酸、甘草次酸甲酯水溶液组，由于给药次数较多，出现高血钠、低血钾的趋势，但甘草酸、甘草次酸甲酯温敏凝胶在治疗过程中对血钾、血钠无明显影响，表明应用温敏凝胶制剂，在获得相似治疗效果的同时，安全性更可靠。在抗风湿性关节炎的实验中也再次证实，应用温敏凝胶实现一周一次腔内给药，仍能取得良好的治疗效果。材料与方法药品及试剂甘草酸由深圳资福药业提供、甘草次酸甲酯，自制；巴柳氮钠，由山西安特生物制药股份有限公司提供；MPO检测试剂盒，由南京建成生物工程研究所提供。动物健康成熟雄性SD大鼠，体重180220g，雌雄各半，由武汉大学实验动物中心提供，生产许可证号SCXK(鄂)2003-2004。鼠饲料，购于武汉大学实验动物中心。仪器TG328A型分析天平，紫外分光光度计，高速匀浆器等。实验方法动物分组与处理大鼠随机分组正常对照组，模型组，巴柳氮钠阳性药物对照组，甘草酸组，甘草次酸甲酯组。其中，甘草酸组，甘草次酸甲酯组分别灌肠给予甘草酸50mg/Kg、甘草次酸甲酯lmg/Kg、巴柳氮钠组灌肠给予巴柳氮钠500mg/Kg。将上述五组分为水溶液组及温敏凝胶组，水组每天给药一次，温敏凝胶组每二天给药一次。大鼠以50%TNBS乙醇溶液灌肠造模，第二天开始给药，于造模14天后，动物处死，冰上解剖，取全段结肠，称重，计算结肠脏器指数，进行结肠炎症(CMDI)评分。取结肠组织用PBS缓冲液制成5%的匀浆液，供检测MP0。检测指标结肠损伤指数(CMDI):取全段结肠，沿肠系膜剪开肠腔，肉眼观察腹腔粘连及结肠溃疡、充血情况，按表l结肠评分标准(CMDI)进行评分。髓过氧化物酶(MP0)准确称取组织重量，按重量体积比为1:19加入PBS缓冲匀浆液，高速匀桨后反复冻融，制成5%的肠匀浆液，Lowry法检测蛋白量。按MP0检测试剂盒严格操作。表l.结肠损伤指数(CMDI)评分标准<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>两项分数相加为总得分。血钾、血钠测定取血清测定血钾、血钠浓度。实验结果甘草酸、甘草次酸甲酯对炎症性肠病小鼠结肠脏器系数、损伤系数、MP0活性的影响可见甘草酸、甘草次酸甲酯能明显减轻炎症性肠病小鼠结肠水肿，与阳性对照药相比作用显著，温敏凝胶组与水溶液组相比，给药频度减少，疗效相似，结果见附图l及表2。表.2甘草酸、甘草次酸甲酯对炎症性肠病大鼠结肠脏器系数、炎症评分、M河活性的影响(x±s，n=8)组另u结肠系数(g/訓g)炎症评分(级别)MPO(U/mg.pro.)正常对照水溶液组0.73±0.030±00.37±0.11模型水溶液组1.75±0.35**9.25±0.25**1.33±0.51**50mg/kg甘草酸水溶液组1.15±0.3"3.5±0.31"0.51±0.11"lmg/kg甘草次酸甲酯水溶液组0.90士0.31"2.75±0.78"0.48±0.15"500mg/kg巴柳氮钠水溶液组0.90±0.3"2.75±0.71"0.55±0.13"正常对照温敏凝胶组0.73±0.030±00.38±0.15模型温敏凝胶组1.50±0.25**7.50±0.40**1.05±0.33**50mg/kg甘草酸温敏凝胶组0.80±0.3"1.25±0.10"0.39±0.21"lmg/kg甘草次酸甲酯温敏凝胶组0.95±0.11"2.25±0.20"0.45±0.12"500mg/kg巴柳氮钠温敏凝胶组0.97±0.21"3.75±0.71"0.65±0.13"与正常组相比料P〈0.01;与模型组相比"P〈0.013.甘草酸、甘草次酸甲酯对结肠炎大鼠血钾、血钠的影响可见甘草酸、甘草次酸甲酯水溶液组，由于给药次数较多，出现高血钠、低血钾的趋势，但甘草酸、甘草次酸甲酯温敏凝胶在治疗过程中对血钾、血钠无明显影响，结果见表3。表明应用温敏凝胶制剂，在获得相似治疗效果的同时，安全性更可靠。表.3甘草酸、甘草次酸甲酯对结肠炎大鼠血钾、血钠的影响了x土s，n=8)8组别血钾(mmol/L)血钠(mmol/L)正常对照水溶液组5.46±0.8532.1±6.33模型水溶液组5.66±1.0531.5±3.5450mg/kg甘草酸水溶液组4.78±1.7237.1±8.05lmg/kg甘草次酸甲酯水溶液组5.09±3.0136.8±8.76500mg/kg巴柳氮钠水溶液组5.43±1.2431.5±6.00正常对照温敏凝胶组5.73±1.2333.3±6.35模型温敏凝胶组5.22±2.3530.9±5.4150mg/kg甘草酸温敏凝胶组5.91±2.1332.1±4.29lmg/kg甘草次酸甲酯温敏凝胶组6.19±3.0129.8±4.47500mg/kg巴柳氮钠温敏凝5.80±1.5436.2±5.17胶组实验结论甘草酸、甘草次酸甲酯温敏凝胶能有效保护炎症性肠病大鼠结肠损伤，疗效显著，相对于水溶液制剂，副作用低。实施例6:本实施例选择甘草酸、甘草次酸甲酯温敏凝胶局部注射作为抗风湿性关节炎的药物，通过建立关节炎的动物模型，探讨甘草酸、甘草次酸甲酯温敏凝胶对关节炎的影响，旨在选择一种疗效确切、毒性小的抗关节炎药物。材料与方法药品及试剂甘草酸、甘草次酸甲酯，由深圳资福药业提供；地塞米松注射剂由天津天药药业有限公司提供。动物健康成熟大鼠，体重180220g，雌雄各半，由武汉大学实验动物中心提供，生产许可证号SCXK(鄂)2003-2004。饲料，购于武汉大学实验动物中心。实验方法动物分组与处理大鼠随机分组正常对照组、模型组、甘草酸组，甘草次酸甲酯组、地塞米松阳性药物对照组。以弗氏完全佐剂造模，于造模后第12天给药，甘草酸组，甘草次酸甲酯组，分别关节腔内注射给予甘草酸5mg/Kg、甘草次酸甲酯0.05mg/Kg、地塞米松0.lmg/kg(给药体积0.01mg/100g)，一周一次，连续三周。检测指标足肿胀测量造模前的左右足体积，并测量造模后，给药21天的左右足体积，将造模后足体积减造模前的足体积，除正常组造模前后足体积足肿胀率%=[(给药组造模后足体积-给药组造模后足体积)-(给药组造模后足体积-给药组造模后足体积)]/(给药组造模后足体积-给药组造模后足体积)X100%热板疼痛痛阈值调节铁板，恒温在50士0.5'C，放入大鼠，记录其从放入铁板至出现舔后足所需时间，作为该鼠的痛阈值。实验结果1.甘草酸、甘草次酸甲酯对关节炎大鼠关节的保护作用由附图2可见，甘草酸、甘草次酸甲酯温敏凝胶腔内注射，可明显改善关节炎大鼠关节的变形程度。2.甘草酸、甘草次酸甲酯对关节炎大鼠足肿胀及热板疼痛潜伏期的影响可见甘草酸、甘草次酸甲酯能明显减轻减轻关节炎大鼠的足肿胀，延长热板疼痛潜伏期，与阳性对照药相比作用显著，表明甘草酸、甘草次酸甲酯温敏凝胶对关节炎的抗炎、镇痛作用明显，结果见表4。表.4甘草酸、甘草次酸甲酯对关节炎大鼠足肿胀及疼痛潜伏期的影响"(x土s，n=8)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>与正常组相比料P〈0.01;与模型组相比"P〈0.0权利要求1.一种甘草酸、甘草次酸或其盐或其衍生物温敏凝胶，包括0.1-40％泊洛沙姆、0.1-10％羧甲基壳聚糖、0.0001-10％甘草酸、甘草次酸、甘草酸盐、甘草次酸盐或甘草次酸的衍生物、水40-99.9999％，以上百分比为重量百分比。2.按照权利要求1所述的温敏凝胶，其特征在于甘草酸盐为甘草酸钾、甘草酸二钾、甘草酸三钾、甘草酸单钠、甘草酸二钠、甘草酸三钠、甘草酸单铵、甘草酸二铵、甘草酸三铵、甘草酸锌、甘草酸镁或甘草酸铝63.按照权利要求1所述的温敏凝胶，其特征在于甘草次酸盐为甘草次酸钾、甘草次酸二钾、甘草次酸三钾、甘草次酸钠、甘草次酸二钠、甘草次酸三钠、甘草次酸锌、甘草次酸镁、或甘草次酸铝。4.按照权利要求1所述的温敏凝胶，其特征在于甘草次酸衍生物为甘草次酸甲酯、乙酰甘草次酸甲酯、11-脱氧甘草次酸、ll-脱氧甘草次酸-3-0琥珀酸半酯或乙酰甘草次酸铝。5.按照权利要求1或2或3或4所述的温敏凝胶，其特征在于温敏凝胶pH值为5-12。6.权利要求1或2或3或4所述温敏凝胶的制法，其特征在于按温敏凝胶含10-40%泊洛沙姆、0.1-10%羧甲基壳聚糖、0.0001-10%的药物、水40-90.9%的重量百分比例，将泊洛沙姆加水搅拌均匀，加入羧甲基壳聚糖，搅拌均匀，消泡后得凝胶，将药物加入凝胶，搅拌分散溶解，热压灭菌，灌装、密封得到温敏凝胶；所述药物为甘草酸、甘草次酸、甘草酸盐、甘草次酸盐或甘草次酸的衍生物。7.权利要求1或2或3或4所述的温敏凝胶在制备治疗炎症性肠病、口腔炎症、口腔溃疡、眼部炎症或体腔内炎症的药物中的应用。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于所述体腔内炎症为关节炎症、颈椎炎症或腰椎炎症。全文摘要本发明涉及甘草酸、甘草次酸或其盐或其衍生物温敏凝胶，包括10-40％泊洛沙姆、0.1-10％羧甲基壳聚糖、0.0001-10％甘草酸、甘草次酸、甘草酸盐、甘草次酸盐或甘草次酸的衍生物、水40-90.9％。其制备方法为将泊洛沙姆加水搅拌均匀，加入羧甲基壳聚糖，搅拌均匀，消泡后，将药物加入凝胶，搅拌分散溶解，热压灭菌，灌装、密封得到温敏凝胶；所述药物为甘草酸、甘草次酸、甘草酸盐、甘草次酸盐或甘草次酸的衍生物。本发明可用于治疗炎症性肠病、口腔炎症、口腔溃疡、眼部炎症或体腔内炎症等。本发明用作粘膜给药制剂及注射给药制剂，可治疗炎症性肠病、口腔炎症、口腔溃疡、眼部炎症、体腔内炎症，以方便临床应用，减少给药频率、提高病人顺应性；增强治疗效果、降低毒副作用。文档编号A61P1/00GK101292952SQ20081004799公开日2008年10月29日申请日期2008年6月12日优先权日2008年6月12日发明者虹丁,竹陈申请人:武汉华纳生物工程有限公司