专利名称：桑葚中生物类总黄酮的提取方法
技术领域：
本发明涉及桑葚中生物类总黄酮的提取方法。
技术背景桑葚中生物类总黄酮主要为芦丁、槲皮素、花青素等黄酮类化合物，卢丁 与乌发成分有关，能使头发变的黑而亮泽。花青素等黄酮类化合物作为一种强 有力的抗氧化剂，它能够保护人体免受一种叫做自由基的有害物质的损伤。有 助于预防多种与自由基有关的疾病，包括癌症、心脏病、过早衰老和关节炎， 花青素还能够增强血管弹性，改善循环系统和增进皮肤的光滑度，抑制炎症和 过敏，改善关节的柔韧性。大量研究表明槲皮素具有扩张血管降血压、防治冠 心病、减轻心肌肥厚、抑制血管平滑肌细胞增生肥大、抗血栓形成等多种心血 管保护作用。到目前为止，从桑葚中提取生物类总黄酮的研究还没有报导，基 于以上原因，本发明对桑葚生物类总黄酮的提取方法进行了详细研究。 发明内容本发明的目的是提供一种操作简便、安全可靠、无污染且能工业化生产的 桑葚生物类总黄酮提取方法。本发明的提取方法包括如下步骤(1) 将桑葚原料用压榨机压榨，用石油醚回流提取，静置，去除石油醚部分；(2) 将上述剩余部分用50%~80%的乙醇回流提取，合并提取液，静置，过滤， 滤液在负压0.7-1.0压下减压回收乙醇，浓縮得提取液；(3) 浓縮液用酸调节pH值到微酸性；(4) 加入无机盐使溶液的无机盐含量为3%左右；(5) 上样液过非极性大孔树脂或弱极性大孔树脂柱层析，控制温度在5(TC左 右，上样液进行吸附；(6) 先用去离子水淋洗柱体积，再用50%~80%乙醇淋洗柱体积，进行解吸附， 适当控制温度，淋洗液在负压0.7-1.0压下回收乙醇，干燥即得产品。步骤(1)所述的桑葚为黑桑葚、药桑葚或红桑葚，石油醚为(60°C~90°C)， 提取时间为45min左右。步骤(2)所述的乙醇浓度为50%~80%，提取时间为1~2个小时，温度控 制在60。C 80。C，料液比为l: 10~1: 20。步骤(3)所述的pH值为3 5,此酸性范围内，大孔吸附树脂对桑葚生物类总黄酮的吸附率高。步骤(4)所述的无机盐是氯化钠。无机盐可以提高大孔树脂的吸附率。 步骤(5)所述的非极性大孔树脂或中性大孔树脂是D101， D-101-I， DM130,DM301中的任一种。大孔吸附树脂装3/4柱高。吸附时流速为每小时1~3倍树脂体积。步骤(6)所述的去离子水淋洗1~3个柱体积，解吸时温度也控制在50'C左 右。解吸附的流速为每小时2 4倍树脂体积。本发明以桑葚为原料，提取桑葚中生物类总黄酮的方法简单易行，安全可 靠，且在提取过程中没有使用任何有毒溶剂，不污染环境，提取出的生物类总 黄酮含量接近50%，便于工业化生产，同时也适于小型企业的生产。发明中使 用的分离纯化材料为大孔吸附树脂，它具有很好的吸附性能，不溶于酸、碱及 有机溶媒，对有机物选择性较好，并且易于洗脱再生，可多次重复利用，已广 泛用于天然产物化学的分离纯化与富集。提取出的生物类总黄酮可以作为原料 广泛运用于保健食品、保健酒类、化妆品等行业屮。
具体实施方式
下面对本发明的最佳实施列做了详细说明。该实施列只是为了说明本发明， 本发明并不局限在所列举的实施列中。 实施列h挑选出优质黑桑葚，称取100g黑桑葚，用水果压搾机压榨得到桑葚液渣， 用石油醚溶液(60°C~90°C) 300ml回流提取，温度保持在4(TC,回流45min， 静置，去石油醚部分；剩余部分用759G乙醇溶液500ml，回流提取2小时，水浴 温度为保持在75T:，静置，过滤，滤液经旋转蒸发器减压(负压0.9大气压， 温度50°C)浓縮得乙醇提取物；用盐酸调节pH值为4.0;加入Nacl使含量为 3%;浓縮液上柱分离纯化，其柱高为30cm,柱径为3cm，填充料为D101大孔 吸附树脂，调料高度为3/4柱高，使柱温保持在5(TC左右，浓縮液以每小时150ml 的流速通过体积为120ml的大孔吸附树脂层析柱，吸附完成后，先用去离子水 淋洗2个柱体积，去除杂质，再用60%乙醇水溶液400ml体积进行解吸附，流 速为每小时300ml，收集淋洗液，经旋转蒸发器减压(负压0.9大气压，温度50 "C)浓縮，真空干燥得到产物，经紫外分光光度计测定总黄酮含量为48.3%。 实施列2:挑选出优质黑桑葚，称取200g黑桑葚，用水果压搾机压榨得到桑葚液渣，用石油醚溶液(60'C 卯'C) 500ml回流提取，温度保持在4(TC，回流45min， 静置，去石油醚部分；剩余部分用7596乙醇溶液900ml，回流提取2小时，水浴 温度为保持在75'C,静置，过滤，滤液经旋转蒸发器减压(负压0.9大气压， 温度50°C)浓縮得乙醇提取物；用盐酸调节pH值为4.0;加入Nacl使含量为 3%;浓縮液上柱分离纯化，其柱高为30cm，柱径为3cm,填充料为DM301大 孔吸附树脂，调料高度为3/4柱高，使柱温保持在5(TC左右，浓縮液以每小时 150ml的流速通过体积为120ml的大孔吸附树脂层析柱，吸附完成后，先用去离 子水淋洗2个柱体积，去除杂质，再用80。/。乙醇水溶液600ml体积进行解吸附， 流速为每小时300ml，收集淋洗液，经旋转蒸发器减压(负压0.9大气压，温度 50。C)浓縮，真空干燥得到产物，经紫外分光光度计测定总黄酮含量为42.6%。 实施列3:挑选出优质黑桑葚，称取100g黑桑葚，用水果压搾机压搾得到桑葚液渣， 用石油醚溶液(60°C~90°C) 300ml回流提取，温度保持在40。C，回流45min， 静置，去石油醚部分；剩余部分用759&乙醇溶液500ml，回流提取2小时，水浴 温度为保持在75'C，静置，过滤，滤液经旋转蒸发器减压(负压0.9大气压， 温度50°C)浓縮得乙醇提取物；用盐酸调节pH值为4.0;加入Nacl使含量为 3%;浓縮液上柱分离纯化，其柱高为30cm，柱径为3cm，填充料为D-101-I大 孔吸附树脂，调料高度为3/4柱高，使柱温保持在5(TC左右，浓縮液以每小时 150ml的流速通过体积为120ml的大孔吸附树脂层析柱，吸附完成后，先用去离 子水淋洗2个柱体积，去除杂质，再用50。/。乙醇水溶液400ml体积进行解吸附， 流速为每小时300ml，收集淋洗液，经旋转蒸发器减压(负压0.9大气压，温度 5(TC)浓縮，真空干燥得到产物，经紫外分光光度计测定总黄酮含量为45.2%。
权利要求
1.一种桑葚中生物类总黄酮的提取方法，其特征是包括以下步骤(1)将桑葚原料用压榨机压榨，压榨后的液渣用石油醚回流提取，静置，去除石油醚部分；(2)将上述剩余部分用乙醇回流提取，合并提取液，静置，过滤，滤液在负压0.7～1.0大气压下减压回收乙醇，浓缩得提取液(3)浓缩液用酸调节pH值到微酸性；(4)加入无机盐使溶液的无机盐含量为3％左右；(5)上样液过非极性大孔吸附树脂或弱极性大孔吸附树脂柱层析，控制温度在50℃左右，上样液进行吸附；(6)先用去离子水淋洗柱体积，再用50％～80％的乙醇水溶液淋洗柱体积，进行解吸附，适当控制温度，淋洗液在负压0.7～1.0大气压下回收乙醇，真空干燥即得产品。
2. 如权利要求1所述的一种桑葚中总黄酮的提取方法，其特征是步骤(1)所述 的桑葚为黑桑葚、药桑葚或红桑葚，石油醚为(60。C 9(TC)，提取时间为45min 左右。
3. 如权利要求1所述的一种桑葚中总黄酮的提取方法，其特征是步骤(2)所述 的乙醇浓度为50%~80%，提取时间为1 2个小时，温度控制在6(TC 80。C， 料液比为1: 10~1: 20。
4. 如权利要求1所述的一种桑葚中总黄酮的提取方法，其特征是步骤(3)所述 的pH值为3~5。
5. 如权利要求1所述的一种桑葚中总黄酮的提取方法，其特征是步骤(4)所述 的无机盐是氯化钠。
6. 如权利要求1所述的一种桑葚中总黄酮的提取方法，其特征是步骤(5)所述 的非极性大孔树脂或中性大孔树脂是DIOI， D-101-I， DM130， DM301中的任一种。
7. 如权利要求1所述的一种桑葚中总黄酮的提取方法，其特征是步骤(5)所述 的大孔树脂装3/4柱高。
8. 如权利要求1所述的一种桑葚中总黄酮的提取方法，其特征是步骤(5)所述 的吸附流速为每小时1~3倍树脂体积。
9. 如权利要求1所述的一种桑葚中总黄酮的提取方法，其特征是步骤(6)所述 的去离子水淋洗1~3个柱体积，解吸时温度也控制在50'C左右。
10.如权利要求1所述的一种桑葚中总黄酮的提取方法，其特征是步骤(6)所述 的解吸附的流速为每小时2~4倍树脂体积。
全文摘要
本发明涉及从桑葚中提取生物类总黄酮的方法。包括以下步骤将桑葚原料用压榨机压榨，用石油醚提取，静置，去除石油醚部分；将上述剩余部分用乙醇回流提取，提取液过滤，滤液经减压回收乙醇得浓缩液；浓缩液用酸调节pH值到微酸性；加入无机盐使其含量为3％左右；上样液过非极性大孔吸附树脂柱层析进行吸附；先用去离子水淋洗柱体积，再用乙醇淋洗大孔树脂，进行解吸附，淋洗液经减压回收乙醇，真空干燥即得产品。该产品含有芦丁，槲皮素，花青素等生物类总黄酮，这些保健因子具有抗癌、抗氧化性等作用，可广泛运用于保健食品、化妆品等行业。本发明方法简单易行，在提取过程中没有使用任何有毒溶剂，不污染环境，便于工业化生产。
文档编号A61P9/00GK101590110SQ200810062099
公开日2009年12月2日 申请日期2008年5月29日 优先权日2008年5月29日
发明者刘士旺, 沈智翔, 郭才康, 诚 鞠 申请人:沈智翔