薯蓣皂苷的提取方法及其制剂与用途的制作方法

专利名称：：薯蓣皂苷的提取方法及其制剂与用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种从中药盾叶薯蓣的提取薯蓣皂苷的工艺方法，药物制剂及其制备方法，以及其在制备防治心血管病药物中的应用，属于中药领域。
背景技术：
：盾叶薯蓣(RhizoraaDioscoreaeZingiberensis)为薯蓣科植物盾叶薯蓣(拉丁名DioscoreaZingiberensisC.H.Wright)的根茎，盾叶薯蓣具有活血舒筋、消食利水等作用，且含有丰富的甾体皂苷。薯蓣皂苷是从药用盾叶薯蕷、植物穿山龙等中提取获得，具有化学结构明确、口服吸收利用度高等特点。在现有技术中，从盾叶薯蓣中提取薯蓣皂苷的方法有很多，大部分都是采用传统的水提醇沉的方法，或者如CN02146284.4，采用乙醇回流提取的方法，但是大部分这样的方法存在杂质过多的问题由于天然植物提取液除了含有提取成分外，还含有淀粉、蛋白质、果胶、树胶、树脂、黏液质等，这些成分的存在往往使提取液呈混悬状态，并影响提取液的滤过速度，为此要实施除杂，常用的方法有离心法、澄清剂法、醇沉法、大孔树脂吸附法、离子交换法、微孑L滤膜滤过法及超滤法等等。这严重影响了提取成分的煎出和最终产物的纯度，为解决这个问题往往需要实施复杂的除杂过程，增加了中间步骤，加重了生产者的负担，并且影响含有薯蓣皂苷药剂的质量控制。近年来，国内外一些研究者采用单一酶制剂对薯蓣原料进行酶处理后结合酸水解进行研究，结果能够使药材中更多的薯蓣皂苷提取出来，但是酶催化反应的专一性较强，同时药材中薯蓣皂苷结合的糖的种类和结构比较复杂，并且还被一些果胶，蛋白质和植物纤维等杂质紧密包裹，因此采用单一的酶进行反应的效果不佳，从而限制了薯蓣皂苷收率的提高。另外，如专利CN02146284.2、CN02146284.4和CN200510016775.9公开了利用极性大孔树脂生产薯蓣皂苷(Dioscin)的方法，但是没有具体公开其中薯蓣皂苷的含量。这种树脂存在对薯蓣皂苷的吸附量小、解吸率低及制得的薯蓣皂苷的含量低的缺点。其中大孔吸附树脂是由苯乙烯、a-甲基丙烯酸甲酯、丙腈等为原料加入一定量致孔剂二乙烯苯聚合而成的球状颗粒，直径一般在0.3-1.25nm之间。现已广泛应用提取纯化天然植物中的活性成分，如皂苷、黄铜等。根据大孔树脂结构不带或带有不同极性的功能基以及树脂的表面性质，通常将大孔树脂分为非极性、弱极性和中极性等类型。目前大部分都是利用极性较强的大孔树脂生产，所以的吸附量小。并且现有技术薯蓣皂苷的包衣片在实际应用中存在的不足是，(1)片芯药物溶出速度慢，药物显效慢；(2)容易吸湿，影响药物的稳定性和贮存期；(3)包衣色泽不稳定，容易被氧化而影响了药物的性状；(4)包衣分散都不均一，遮盖度差导致药物气味散发流失，影响了药物的治疗效果。
发明内容本发明的目的是针对上述现有技术存在的缺陷和不足，提供了一种可以从中药盾叶薯蓣中提取杂质少，性能稳定，纯度高的薯蓣皂苷的方法。本发明的另一目的是提供一种薯蓣皂苷制剂的制备方法。本发明的进一步的目的是提供上述薯蓣皂苷和薯蓣皂苷制剂在在制备防治心血管疾病药物中的应用。本发明通过下述技术方案予以实施从盾叶薯蓣中提取薯蓣皂苷的方法，包括以下步骤1)取干燥的盾叶薯蓣粉末，加一定量水，搅拌均匀后加入先用20-6(TC水将所需多功能精练酶DMA溶解，然后加冷水调节水量，加入所需要的双氧水和洗涤剂，搅拌均匀，升温至60-1(KTC保温30min-1.5小时后得到盾叶薯蓣粗液；2)将盾叶薯蓣粗液加6-15倍量水或10%-30%乙醇，加热回流提取2-4次，每次1-3h，过滤，合并提取液，浓縮至0.25-2.0g生药/ml;过滤或离心后通过填充有弱极性大孔树脂的层析柱，提取液按薯蓣皂苷含量与干树脂的比例为1:5-10，上柱流速l-4BV/h，树脂径高比为1:3-1:9;用水洗涤树脂3-8BV，洗脱流速为2-4BV，水洗脱液弃去；用含30-95%含水乙醇洗脱，流速为2-4BV，收集乙醇洗脱液；乙醇洗脱液减压浓縮至相对密度为1.1-1.25，减压或喷雾干燥，得薯蓣皂苷。其中离心的转速为4000-16000转/分钟。弱极性大孔树脂优选为聚苯乙烯型弱极性大孔树脂。本发明所述的薯蓣皂苷提取物可以是制备任何一种药剂学上所说的制剂。所述的薯蓣皂苷提取物制成糖衣片剂、糖浆、口服液、滴剂或胶囊剂。根据本发明的一个方面，薯蓣皂苷糖衣片的制备方法为(1)取薯蓣皂苷100-200份，粉碎，加入硫酸钙1-20份、羧甲淀粉钠20-60份，混合均匀，用95%乙醇湿润，继续转动15秒-30分钟，制备成湿颗粒；(2)将湿颗粒经10-40目过筛；(3)过筛后的颗粒在20-80。C干燥；(4)干燥后的颗粒经压片机压制成型，包糖衣，即得。更优选的所述的薯蓣皂苷糖衣片的制备方法为(1)取薯蓣皂苷160份，粉碎，加入硫酸钙10份、羧甲淀粉钠40份，混合均匀，用95%乙醇湿润，继续转动10分钟，制备成湿颗粒；(2)将湿颗粒经14目不锈钢筛制粒，(3)过筛后的颗粒在50'C干燥，(4)干燥后的颗粒经压片机压制成型，包糖衣，即得。根据本发明的另一个方面，薯蕷皂苷制剂在制备心血管病药物中的应用。心血管病包括冠心病、心肌梗塞、心绞、脑血栓等疾病。其中，弱极性大孔树脂为含酯基的吸附树脂，其表面兼有疏水和亲水两部分，既可由极性溶剂中吸附非极性物质，又可由非极性溶液中吸附极性物质，因而应用范围更为广泛。本发明的积极进步效果在于酶法除杂是分离精制的新方法，此方法是根据天然物提取液中杂质的种类、性质，有针对性地采用相应的酶，将这些杂质分解或除去，以改善液体产品的澄清度，提高产品的稳定性。由于酶反应具有高度的专一性，决定了酶解方法除杂的高效性。多功能精练酶DMA是由多种对纤维素等杂质有专一分解作用的酶和一些化学助剂组成，具有高效的生物催化特性，包括淀粉酶、果胶酶、脂肪酶、蛋白酶、纤维素酶复合组成，这些都是属于水解酶，在它们的共同作用下，能够有效除去盾叶薯蓣粉末中的各种杂质，初步提高。本发明在用乙醇提取前即采用的多功能精练酶DMA进行酶解，将薯蓣等根茎类植物中的植物纤维、果胶、淀粉等非药物成分除去，大大提高薯蓣粗液的纯度，然后利用弱极性大孔树脂对薯蓣皂苷的吸附量大的特点，被解吸完全，所得总皂苷的含量高，提取方法损失小、工艺简单、不使用毒性有机溶剂，比传统醇提法提出的薯蓣皂苷纯度高，含量大，一次性投资成本低、易于工业化大生产。本发明的提取方法本发明的产品粒径在80-500nm之间，使现有薯蓣皂苷对光和热具有更佳的稳定性。而且本发明的提取物薯蓣皂苷糖衣片优点为(l)片芯采用多种方法的提取工艺，大大提高了片芯药物的有效成分，临床应用过程中大大提高了药物的溶出度，使药物显效更快。(2)由于采用新的薄膜衣的成膜工艺，成膜效果好，可有效防止潮湿空气中水分的渗透，增加了药物的稳定性。(3)采用新的薄膜材料配方，增强了抗氧化褪色能力，保持了片剂外观色彩鲜艳，稳定了药物形状。(4)由于成膜材料的优化，成膜材料易于雾化，分散均一，成膜快，遮盖好，可有效掩盖中药的不良气味，利于服用。(5)由于片芯有效成分高，衣层薄柔韧牢固光滑，片重大大减少，更加有利于运输和贮存。图1为试验组和对照组对冠心病两组血脂分型疗效比较柱状图；图2为试验组和对照组对冠心病两组各项中医主症改善情况比较柱状图；图3为试验组和对照组对冠心病两组血脂水平改善情况比较柱状图；图4为试验组和对照组对冠心病两组各实验室安全性指标检测结果柱状图；图5为试验组和对照组对治疗心绞痛两组单项中医症状疗效比较柱状图；图6为试验组和对照组对治疗心绞痛两组血液流变学指标变化情况比较柱状图；图7为试验组和对照组对治疗心绞痛两组各实验室安全性指标检测结果柱状图。具体实施方式本发明针对现有工艺缺陷进行了改进，首先在盾叶薯蓣原药材粉末中加入多功能精练酶DMA酶解去除大部分粗杂质，再通过弱极性大孔树脂来制备薯蓣皂苷提取物。其中薯蓣皂苷含量60%_90°/。重量，通过与现有两种树脂的工艺参数进行比较，结果显示弱极性大孔树脂对薯蓣皂苷吸附量明显优于非极性大孔树脂D101及HPD100，解吸率及获得的薯蓣皂苷吸附量也明显高于利用非极性大孔树脂D101及HPD100制得的产品。本发明还同时提供了所制备的薯蓣皂苷提取物治疗冠心病以及心血管病的药效学数据。所制备的薯蓣皂苷提取物，薯蓣皂苷含量不低于60%重量，优选60%-90%重量，更优选60%-70%重量。弱极性大孔树脂AB-8与非极性D101及HPD100型大孔树脂对薯蓣皂苷吸附量、解吸率及所得皂苷含量的比较树脂各5克，用水洗至无醇味，减压抽干，精密称定，置于250ml具磨塞口的三角瓶中，各加入前期制备的样品液150ml，25t:恒温振荡24h,分别取吸附前后的药液，测定皂苷含量，计算树脂比吸附量(mg/g干树脂)。比吸附量mg.g—1干树脂)=(吸附前皂苷量-吸附后皂苷量)/树脂干重。分别将上述饱和吸附的树脂滤出，用30ml水洗，洗干表面水分后，加入7(m乙醇50ml解吸(25。C恒温振荡24h)，取解吸后溶液测定，计算乙醇对各树脂的解吸率。解吸率=(解吸液中皂苷量/饱和吸附量)X100%。将解吸液浓縮、减压干燥得皂苷。计算皂苷的含量。结果如表l。表l不同类型树脂对薯蓣皂苷的吸附量、解吸率及皂苷含量的比较<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>结果显示，利用弱极性大孔树脂AB-8制备皂苷，不仅吸附量大，而且解吸率高，所得产品含量高。实施例1多功能精练酶DMA酶解和弱极性大孔树脂提取法(简称复合提取法)与酶解法制备薯蓣皂苷的比较实验实验l:取干燥的盾叶薯蓣粉末25g，加定量水于三口烧瓶中，搅拌均匀后在温度5(TC下加入0.1%的纤维素酶和果胶酶复合酶制剂处理12h，然后加入一定量的浓貼04配成2mol/L的水解液于IO(TC进行水解4h,滤过，滤渣用10%NaOH溶液洗涤至中性，干燥，研磨得到粉末提取物。提取物用索氏提取器回流提取8h后，用旋转蒸发器浓縮提取液并将产物结晶，最后在80-10(TC真空干燥箱中干燥得到薯蓣皂苷，对所得产品进行收率和熔点的测定实验2:取干燥的盾叶薯蓣粉末25g，加定量水于三口烧瓶中，搅拌均匀后在温度5(TC下加入0.1%的多功能精练酶DMA处理12h，然后加冷水调节水量，加入所需要的双氧水和洗涤剂，搅拌均匀，将获得提取物加6倍量水，加热回流提取2次，每次lh，过滤，合并提取液，浓縮至0.25g生药/ml;过滤后通过AB-8型大孔树脂，提取液按薯蓣皂苷含量计与干树脂的比例为1:5，上柱流速lBV/h，树脂径高为l:3;用水洗涤树脂3BV，洗脱流速为2BV/h，水洗脱液弃去；用含30%含水乙醇洗脱8BV，流速为2BV/h，收集乙醇洗脱液；乙醇洗脱液减压浓縮至相对密度为l.l，减压干燥，得薯蓣皂苷.表2两种提取薯蓣皂苷的方法比较<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>由表2可以看出，两种提取方法中，复合提取法所得产品的收率高，能够将薯蓣中近99%的薯蓣皂苷提取出来，并且该方法所得产品的熔点较高，熔距较短，产品纯度高，符合优极品的标准。实施例2取干燥的盾叶薯蓣粉末2kg,，加一定量水，搅拌均匀后，加入用3(TC水溶解的多功能精练酶DMA30g/L，然后加冷水调节水量，加入所需要的8g/L双氧水和洗涤剂，搅拌均匀，升温至7(TC保温50min后得到提取物；将获得提取物加6倍量水，加热回流提取2次，每次lh，过滤，合并提取液，浓縮至0.25g生药/ml;过滤后通过AB-8型大孔树脂，提取液按薯蓣皂苷含量计与干树脂的比例为1:5，上柱流速lBV/h，树脂径高为1:3;用水洗涤树脂犯V，洗脱流速为2BV/h，水洗脱液弃去；用含30y。含水乙醇洗脱8BV，流速为2BV/h，收集乙醇洗脱液；乙醇洗脱液减压浓縮至相对密度为1.1，减压干燥，得薯蓣皂苷浸膏。测得薯蓣皂苷含量为65%(香草醛-冰醋酸，高氯酸显色；UV法；)将浸膏在4(TC下干燥，将干燥后的干浸膏粉碎装入明胶硬胶囊壳，可得药物胶囊。实施例3取干燥的盾叶薯蓣粉末lkg,，加一定量水，搅拌均匀后，加入用6(TC水溶解的多功能精练酶DMA15g/L，然后加冷水调节水量，加入所需要的10g/L双氧水和洗涤剂，搅拌均匀，升温至80"C保温60min后得到提取物；将获得提取物加15倍量30%乙醇，加热回流提取4次，每次3h，过滤，合并提取液，浓縮至2.0g生药/ml;过滤后通过AB-8型大孔树脂，提取液按薯蓣皂苷含量计与干树脂的比例为1:10，上柱流速4BV/h，树脂径高为l:9;用水洗涤树脂8BV，洗脱流速为4BV/h，水洗脱液弃去；用含95%含水乙醇洗脱，流速为4BV/h，收集乙醇洗脱液；乙醇洗脱液减压浓縮至相对密度为1.25，减压干燥，得薯蓣皂苷浸膏。测得薯蓣皂苷含量为77%(香草醛-冰醋酸，高氯酸显色;UV法;)将浸膏在5(TC下干燥，将干燥后的干浸膏粉碎成细粉；加入乙醇作为黏合剂，加入淀粉作为填充剂，压制成颗粒剂。实施例4取干燥的盾叶薯蓣粉末5kg，，加一定量水，搅拌均匀后，加入用2(TC水溶解的多功能精练酶DMA10g/L，然后加冷水调节水量，加入所需要的5g/L双氧水和洗涤剂，搅拌均匀，升温至6(TC保温30min后得到提取物；将获得提取物加8倍量水，加热回流提取2次，每次lh，过滤，合并提取液，浓縮至l.Og生药/ml;离心(4000转/分钟)后通过AB-8型大孔树脂，药液按薯蓣皂苷含量计与干树脂的比例为1:5，上柱流速2BV/h，树脂径高为l:5;用水洗涤树脂3BV，洗脱流速为4BV/h，水洗脱液弃去；用含70%含水乙醇洗脱3BV，流速为2BV/h，收集乙醇洗脱液；乙醇洗脱液减压浓縮至相对密度为1.1(5(TC热测)，减压干燥，得薯蓣皂苷。测得薯蓣皂苷含量为72%(香草醛-冰醋酸，高氯酸显色；UV法；)实施例5取干燥的盾叶薯蓣粉末5kg,，加一定量水，搅拌均匀后，加入用4(TC水溶解的多功能精练酶DMA18g/L，然后加冷水调节水量，加入所需要的6g/L双氧水和洗涤剂，搅拌均匀，升温至10(TC保温1.5h后得到提取物；将获得提取物加10倍量10%乙醇，加热回流提取2次，每次1.5h，过滤，合并提取液，浓縮至0.5g生药/ml;过滤后通过D201型大孔树脂，药液按薯蓣皂苷含量计与干树脂的比例为1:9，上柱流速3BV/h，树脂径高为1:7;用水洗涤树脂5BV，洗脱流速为4BV/h，水洗脱液弃去；用含30%含水乙醇洗脱IOBV，流速为4BV/h，收集乙醇洗脱液；乙醇洗脱液减压浓縮至相对密度为1.25(50匸热测)，减压干燥，得薯蓣皂苷浸膏。测得薯蓣皂苷含量为66%(香草醛-冰醋酸，高氯酸显色；UV法；)将浸膏在5(TC下干燥，将干燥后的干浸膏粉碎成细粉；加入辅料制成颗粒，并干燥，喷入润湿辅料，压制成片剂。实施例6取干燥的盾叶薯蓣粉末5kg,，加一定量水，搅拌均匀后，加入用55'C水溶解的多功能精练酶DMA18g/L，然后加冷水调节水量，加入所需要的6g/L双氧水和洗涤剂，搅拌均匀，升温至75'C保温1.2h后得到提取物；将获得提取物加15倍量水，加热回流提取2次，每次lh,过滤，合并提取液，浓縮至0.25g生药/ml;离心(8000转/分钟)后通过HPD450型大孔树脂，药液按薯蓣皂苷含量计与干树脂的比例为1:6，上柱流速4BV/h，树脂径高为1:9;用水洗涤树脂2BV，洗脱流速为3BV/h，水洗脱液弃去；用含50%含水乙醇洗脱5BV，流速为3BV/h，收集乙醇洗脱液；乙醇洗脱液减压浓縮至相对密度为1.2(5(TC热测)，减压干燥，得薯蕷皂苷。测得薯蓣皂苷含量为70%(香草醛-冰醋酸，高氯酸显色；UV法；)实施例7取干燥的盾叶薯蓣粉末5kg,，加一定量水，搅拌均匀后，加入用55'C水溶解的多功能精练酶DMA18g/L，然后加冷水调节水量，加入所需要的6g/L双氧水和洗漆剂，搅拌均匀，升温至75'C保温1.2h后得到提取物；将获得提取物加5倍量水浸泡后煎煮2小时，滤过，滤渣再加入水3倍量煎煮2次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓縮(7080°C，-0.08MPa)至相对密度1.16(5060°C)的清膏；清膏加3倍量80%乙醇回流提取2次，每次l小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇并浓縮(607(TC，-0.08MPa)至相对密度l.16(506(TC)的清膏；清膏加10倍量95°/。乙醇，静置24小时，滤过，上清液回收乙醇，沉淀物减压干燥(7080°C，-0.08MPa)，粉碎、检验、即得。实施例8糖衣片剂的制备方法，包括以下步骤(1)取实施例6中薯蓣皂苷160g，粉碎，加入硫酸钙10g、羧甲淀粉钠20g，混合均匀，用95%乙醇湿润，14目不锈钢筛制粒，(2)将湿颗粒经14目过筛；(3)过筛后的颗粒在5(TC干燥；(4)干燥后的颗粒外加硬脂酸镁3g、滑石粉7g，混和均匀，压制成片，包糖衣，即得。实施例9糖衣片剂的制备方法，包括以下步骤-(1)取取实施例6中薯蓣皂苷100g，粉碎，加入硫酸钙2g、羧甲淀粉钠40g，混合均匀，用95%乙醇湿润，14目不锈钢筛制粒，(2)将湿颗粒经IO目过筛；(3)过筛后的颗粒在2(TC干燥；(4)干燥后的颗粒外加硬脂酸镁3g、滑石粉7g，混和均匀，压制成片，包糖衣，即得。实施例10糖衣片剂的制备方法，包括以下步骤(1)取取实施例6中薯蓣皂苷200g，粉碎，加入硫酸钙20g、羧甲淀粉钠60g，混合均匀，用95%乙醇湿润，14目不锈钢筛制粒，(2)将湿颗粒经20目过筛；(3)过筛后的颗粒在80'C干燥；(4)干燥后的颗粒外加硬脂酸镁3g、滑石粉7g，混和均匀，压制成片，包糖衣，即得。效果实施例l薯蓣皂苷糖衣片对冠心病薯蓣皂苷糖衣治疗冠心病效果较好，由于用于治疗，本发明深入研究薯蓣皂苷疗效。1、受试者的选择和退出(一)诊断标准1.西医诊断标准按照1997年中华心血管病杂志编辑委员会血脂异常防治对策专题组《血脂异常防治建议》标准制定。1.1血脂检查在正常饮食情况下，检测禁食1214小时后的血脂水平，在判断是否存在高脂血症时必须具有12周内至少2次血标本检测记录。1.2意义判断血清TC5.20mraol/L(200mg/dl)以下合适范围5.235.69mmol/L(201219mg/dl)边缘升高5.72mmol/L(220mg/dl)以上升高血清LDL—C3.12画ol/L(120mg/dl)以下合适范围3.15~3.61mmol/L(121139mg/dl)边缘升高3.64mraol/L(140mg/dl)以上升高血清HDL—C1.04mmol/L(40mg/dl)以下合适范围0.91mmol/L(35mg/dl)以下减低血清TGL70mmol/L(150mg/dl)以下合适范围1.70mmol/L(150mg/dl)以上升高1.3高脂血症的分类A.临床分类①高胆固醇血症血清TC水平增高。②混合型高脂血症血清TC与TG水平均增高。③高甘油三酯血症血清TG水平增高。④低高密度脂蛋白血症血清HDL一C水平减低。B.病因分类①原发性高脂血症。②继发性高脂血症常见的病因为糖尿病、甲状腺功能低下、肾病综合征、通风、急性或慢性肝胆疾病等。2、试验方法(一)试验设计本试验方案采用随机、双盲、阳性对照、多中心临床试验设计方法。整个过程由山东中医药大学附属医院、山东省济南市中医医院、山东省济南市第三人民医院3所医院协同完成。(二)试验药品的名称和来源盾叶冠心宁片，江苏黄河药业股份有限公司提供，批号20040908。安慰片剂，江苏黄河药业股份有限公司提供，批号20040901。脂必妥片，成都地奥九泓制药厂提供，批号041002。所有试验用药均检验合格。(三)服药方法试验组盾叶冠心宁片，2片/次，3次/日，温开水送服。对照组早晚，脂必妥片，2片/次+午，安慰剂片，2片/次。温开水送服。(四)合并用药规定1.试验期间，不得使用及治疗本病的中西药物和治疗方法。2.合并其他疾病必须继续服用的其他药物和治疗方法，必须在合并用药表中详细记录。(五)疗程8周一个疗程。3、实验结果一、疗效分析(一)血脂总疗效两组血脂总疗效比较见表3:表3两组血脂总疗效比较<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>两组血脂总疗效比较，差异无显著性意义，而且试验组比对照组总有效率更高。(二)血脂分型疗效两组血脂分型疗效比较见表4:表4两组血脂分型疗效比较<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>两组血脂分型疗效比较，差异均无显著性意义，如图1所示，TC增高类型中，试验组59例数的临床控制、显效、有效和总有效率的数值比对照组15例数试验组更高，疗效更好，同理TG增高和混合型中，试验组60，试验组59相比对照组21和对照组24效果更好。(三)中医证候疗效两组中医证候疗效比较见表5:表5两组中医证候疗效比较<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>两组中医证候疗效比较，差异无显著性意义，而且试验组比对照组总有效率更高。(四)各项中医主症改善情况两组各项中医主症改善情况比较见表6:表6两组各项中医主症改善情况比较疗前疗后组内比较组间比较<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>两组各中医主症的改善情况比较:各主要症状治疗前后组内比较差异均有非常显著性意义(P<0.01);疗后组间比较除走窜疼痛两组差异具有显著性意义外(P<0.05)，胸胁胀闷和心前区剌痛组间比较差异均无显著性意义(P>0.05)。如图2所示，胸胁胀闷类型中，疗效后试验组的变化差异大于对照组，同样从图中看出走窜疼痛和心前区刺痛的试验组变化差异均大于对照组，这也表明试验组对它们更加有效。(五)中医症状平均积分改善情况两组中医症状平均积分改善情况比较见表7:表7两组中医症状平均积分改善情况比较(J±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>治疗前后组内比较两组治疗前后自身比较差异均有非常显著性意义。治疗后组间比较两组治疗后组间比较差异无显著性意义。(六)血脂水平改善情况两组血脂水平改善情况比较见表8:表8两组血脂水平改善情况比较(J±SD,mmol/L)组内比较<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>组间比较tP1.862>0.05TGHDLLDLVLDL对照组606.67±0.955.46±1.091.21±1.058.926<0.01试验组1783.35±0.952.01±0.911.34±0.6210.406<0.01对照组603.51±1.182.30±0.971.21±1.088.679<0.01试验组1781.33±0.321.38±0.340.05±0.102.021>0.05对照组601.29±0.301.45±0.370.16±0.245.164<0.01试验组1783.30±1.352.66±0.990.64±0.244.362<0.01对照组603.19±1.312.77±0.970.42土1.063.069<0.05试验组1781.22±0.650.82±0.720.40±0.203.335<0.05对照组601.31±0.750.95±0.600.36±0.703.984<0.053.014<0.052.035>0.051.567〉0.050.881〉0.05治疗前后组内比较试验组HDL自身比较差异无显著性意义，其余指标自身比较差异均有显著或非常显著性意义。治疗后组间比较TG疗后组间比较差异具有显著性意义，其余指标组间比较差异均无显著性意义。如图3所示，从治疗疗效前后差值进行比较，TC、TG、HDL、LDL和VLDL的对照组数值均大于对照组，而且变化差异也小，所以疗效更好。(七)载脂蛋白水平改善情况两组载脂蛋白水平改善情况比较见表9:表9两组载脂蛋白水平改善情况比较(X土SD，mmol/L)项目组别例数疗前疗后差值组内比较tP组间比较tPApo-A试验组1781.25±0.201.15±0.220.1±0.133.078>0.052.594<0.05对照组601.26±0.211.33±0.180.07±0.143.873<0.01Apo-B试验组1781.10±0.260.86±0.210.24±0.276.918<0.010.891〉0.05对照组601.08±0.290.94±0.260.14土0.323.389<0.05治疗前后组内比较试验组载脂蛋白A(Apo-A)自身比较差异无显著性意义，其余指标自身比较差异均有非常显著性意义。治疗后组间比较载脂蛋白A(Apo-A)疗后组间比较差异具有显著性意义；载脂蛋白B(Apo-B)疗后组间比较差异无显著性意义。二、安全性分析(一)实验室安全性指标检测结果分析两组各实验室安全性指标检测结果分析见表10:表10两组各实验室安全性指标检测结果治疗前治疗后治疗前/治疗后检测例数异常例数检测例数异常例数正常转异常例数异常加重例数试验组1791179000血常规对照组60360200试验组1793179100尿常规对照组60160100试验组1520156000便常规对照组51049000试验组17931179200心电图对照组6013601300试验组1796179100ALT对照组60660400试验组1790178000BUN对照组60060000试验组1790179000Cr对照组60060000实验室安全性指标检测结果显示:试验组和对照纟日均未见疗前正常而疗后异常指标或疗前异常而疗后异常加重指标。疗前试验组有31例、对照组有13例心电图异常者，大多为45岁以上的中、老年人，追问病史，大都有动脉硬化、冠心病史，未见有明显的心功能不全。疗后该患者群心电图检査仍未异常，但未见异常情况加重。疗前试验组有6例、对照组有2例ALT升高，研究者判断为高脂血症病程长，合并脂肪肝所致。治疗后随着血脂的下降，试验组对照组各有l例患者的ALT降至正常。如图4所示，从血常规、尿常规、便常规、心电图、ALT、BUN和Cr的治疗前后异常例数变化来看，试验组改善异常显著好于对照组，所以试验组疗效更好。4、结论通过对240例高脂血症(气滞血瘀证)患者的临床观察表明盾叶冠心宁片治疗高脂血症(气滞血瘀证)安全有效，并且相比较现有技术中比较佳治疗冠心病的药物制剂疗效更好。效果实施例2薯蓣皂苷糖衣片对治疗冠心病心绞痛薯蓣皂苷治疗冠心病效果较好，由于用于治疗，本发明深入研究薯蓣皂苷脂质体透过的过程，对了解脂质体的靶向治疗的特点有重要意义。1、病例选择标准(一)诊断标准1.西医诊断标准(参照国际心脏病学会和协会及世界卫生组织临床命名标准化联合专题组报告《缺血性心脏病的命名及诊断标准》制定)(1)诊断标准①劳累性心绞痛劳累性心绞痛的特征是由于运动或其他增加心肌需氧量的情况下所诱发的短暂胸痛发作，休息或含服硝酸甘油后，疼痛常可迅速消失。可分为三类初发型劳累性心绞痛病程在一个月以内。稳定型劳累性心绞痛病程稳定在一个月以上。恶化型劳累性心绞痛同等程度劳累所诱发的次数、严重程度及持续时间突然加重。②自发性心绞痛自发性心绞痛的特征是胸痛发作与心肌需氧量的增加无明显关系。与劳累性心绞痛相比，这种疼痛一般持续时间较长，程度较重，且不为硝酸甘油缓解。本型未见酶变化，心电图常出现某些暂时性的ST段压低或T波改变。自发性心绞痛可单独发生或与劳累性心绞痛合并存在。自发性心绞痛患者的疼痛发作频率、持续时间及疼痛程度可有不同的临床表现，有时患者可有持续较长的胸痛发作，类似心肌梗塞，但没有心电图及酶的特征性变化。某些自发性心绞痛患者在发作时出现短暂性的S—T段抬高，常称为变异性心绞痛。但在心肌梗塞早期记录到这一心电形时，不能应用这一名称。初发型劳累性心绞痛、恶化型劳累性心绞痛及自发性心绞痛常统称为"不稳定性心绞痛"。(2)分度、分级诊断标准(参照1979年9月全国中西医结合防治冠心病心绞痛、心律失常研究座谈会修订的标准制定)①劳力型心绞痛I级较日常活动重的体力活动引起心绞痛，日常活动无症状，如平地小跑，快速或持重物上三楼、上陡坡等引起心绞痛。II级日常体力活动引起心绞痛，日常活动稍受限制。如在正常条件下常速步行3—4站(3—4华里)、上三楼、上坡引起心绞痛。III级较日常活动轻的体力活动引起心绞痛，日常活动明显受限。如在正常条件下常速步行1一2站(l一2华里)、上二楼、小坡引起心绞痛。IV级轻微体力活动(如在室内缓行)引起心绞痛，严重者休息时亦发生心绞痛。②非劳力性心绞痛轻度:有较典型心绞痛发作，每次持续数分钟，每周至少发作2-3次，或每日发作1-3次，但疼痛不重，有时需服硝酸甘油。中度每天有多次较典型心绞痛发作，每次持续时间数分钟到10分钟疼痛较重，一般需要含服硝酸甘油。重度每天有多次典型心绞痛发作，因而影响日常生活活动(例如大便、穿衣等)，每次发作持续时间较长，需多次口含硝酸甘油。2、试验方法(一)试验设计本试验方案采用随机、双盲、阳性对照、多中心临床试验设计方法。整个过程由山东中医药大学附属医院、山东省济南市中医医院、山东省济南市第三人民医院3所医院协同完成。(二)试验药品的名称和来源盾叶冠心宁片，江苏黄河药业股份有限公司提供，批号20040908。复方丹参片，黑龙江省铁力制药厂提供，批号20041002。所有试验用药均检验合格。(三)服药方法试验组盾叶冠心宁片，3片/次(相当于原标准生药服用量2片/次)，3次/日，温开水送服。对照组复方丹参片，3片/次，3次/日，温开水送服。(四)合并用药规定1.试验期间，不得使用及治疗本病的中西药物和治疗方法。2.合并其他疾病必须继续服用的其他药物和治疗方法，必须在合并用药表中详细记录。(五)疗程8周一个疗程。2、实验结果一、疗效分析(一)心绞痛疗效两组患者心绞痛疗效比较见表11:表11两组患者心绞痛疗效比较组别例数-显效有效无效加重总有效组间比较N%N%N%N%率(％)ZP试验组1786938.768145.512815.730084.270.955〉0.05对照组601931.673050.001118.330081.67两组心绞痛疗效比较，差异无显著性意义。(二)心电图疗效两组心电图疗效比较见表12:表12两组心电图疗效比较组别例数-显效有效无效加重总有效组间比较ZPN%N%N%N%率(％)试验组1784525.286234.837139.890060.110.587〉0.05对照组601321.672135.002643.330056.67两组心电图疗效比较，差异无显著性意义。(三)中医证候疗效两组中医证候疗效比较见表13:表13两组中医证候疗效比较<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>两组单项中医症状疗效比较见表14:表14两组单项中医症状疗效比较<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>两组各单项中医症状疗效比较，差异均无显著性意义，如图5所示，从治疗胸痛胸闷、胸胁胀满和心悸症状来看，试验组显效比例高于对照组，所以其对这些症状疗效更好。2.中医症状积分改善情况两组中医症状积分改善情况比较见表15:表15两组中医症状积分改善情况比较(又士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>两组中医症状积分改善情况，治疗前后组内比较两组均有非常显著性意义(P<0.01),疗后组间比较差异无显著性意义(P>0.05)。(五)硝酸甘油停减率两组硝酸甘油停减率比较见表16:表16两组硝酸甘油停减率比较组别疗前疗后服药例数停药不变停减率(%)组间比较ZP45112试验组17518(10.29)89.71(25.71)(64.00)1.247>0.05对照组5612(21.43)34(60.71)10(17.86)82.14两组硝酸甘油停减率比较，差异无显著性意义。(六)对心绞痛发作频率、持续时间的影响.又^L、纹浦仅1卞观平tf」彭啊两组心绞痛发作频率比较见表17:表17两组心绞痛发作频率比较(次/周)组别例数疗前(X土SD)疗后(X土SD)(又土SD)组内比较P差值组间比较tP试验组17810'62±5.19±1.315.43±2.1733.385<0.017.112.016>0.05对照组6010.84±5.83±2.055,01±2.6114.869<0.01___^_______两组心绞痛发作频率比较，治疗前后组内比较两组均有非常显著性意义(P<0.01)，疗后组间比较差异无显著性意义(P〉0.05)。2.对心绞痛持续时伺的影响两组心绞痛持续时间的比较见表18:表18两组心绞痛持续时间比较(min/次)疗前疗后差值组内比较差值组间比较组别例数(X士SD)(X土SD)(X土SD)tPtP试验组17810.83±5.166.01±2.084.82±3.0321.223<0.011.943〉0.05对照组6010.92±6.036.80±2.164.12±2.9610.782<0.01两组心绞痛持续时间情况比较，治疗前后组内比狡两组均有非常显著性意义(P〈0.01)，疗后组间比较差异无显著性意义(P〉0.05)。(七)血液流变学指标的影响两组血液流变学指标变化情况比较见表19:表19两组血液流变学指标变化情况比较<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>两组血液流变学变化情况比较治疗前后组内比较除血浆纤维蛋白原外，其余指标两组改善情况均有非常显著性意义(P<0.01);疗后组间比较各项指标组间差异均无显著性意义(P〉0.05)。如图6所示，从全血粘度高切值、全血粘度低切值、血浆比粘度、血浆纤维蛋白原和红细胞压积的数值来看，对照组在治疗前后的差值显著高于对照组，所以其疗效更好。(八)血脂指标的影响两组血脂指标变化情况比较见表20:表20两组血脂指标变化情况比较(mmol/L)<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>两组血脂指标变化情况比较治疗前后组内比较，除对照组血清总甘油三酯差异无显著性意义外，其余指标两组组内比较均有显著(P<0.05)或非常显著性意义(P<0.01);疗后组间比较两项指标差异均无显著性意义(P>0.05)。二、安全性分析(一)实验室安全性指标检测结果分析两组各实验室安全性指标检测结果分析见表21:表21两组各实验室安全性指标检测结果治疗前治疗后治疗前/治疗后项目组别检测异常检测异常异常转正常转异常加例数例数例数例数正常例数异常例数重例数试验组1807180'2500血常规对照组604603100试验组18081800800尿常规对照组602601100便常规试验组1460153000对照组42044000试验组1806180060.0■ALT对照组602602000试验组1800180000B函对照组60060000试验组18021800200Cr对照组602602000实验室安全性指标检测结果显示试验组和对照组均未见疗前正常而疗后异常指标或疗前异常而疗后异常加重指标。疗前试验组有6例、对照组有2例ALT升高，治疗后试验组有1例患者的ALT降至正常，其余仍偏高，但较治疗前无加重。研究者经追问病史判断为合并肝硬化、脂肪肝所致。如图7所示，从血常规、尿常规、便常规、ALT、BUN和Cr的治疗前后异常例数变化来看，试验组改善异常显著好丁-对照组，所以试验组疗效更好。3、结论通过对240例冠心病心绞痛(气滞血瘀证)患者的临床观察表明盾叶冠心宁片治疗冠心病心绞痛(气滞血瘀证)安全有效，并且相比较现有技术中比较佳治疗心绞痛的药物制剂疗效更好。权利要求1、一种从盾叶薯蓣中提取薯蓣皂苷的方法，其特征在于包括以下步骤1)取干燥的盾叶薯蓣粉末，加一定量水，搅拌均匀后，加入用20-60℃适量水溶解的多功能精练酶DMA10-30g/L，然后加冷水调节水量，加入所需要的5-10g/L双氧水和洗涤剂，搅拌均匀，升温至60-100℃保温30min-1.5小时后得到盾叶薯蓣粗液；2)将盾叶薯蓣粗液加6-15倍量水或10％-30％乙醇，加热回流提取2-4次，每次1-3h，过滤，合并提取液，浓缩至0.25-2.0g生药/ml；过滤或离心后通过填充有弱极性大孔树脂的层析柱，提取液按薯蓣皂苷含量与干树脂的比例为1∶5-10，上柱流速1-4BV/h，树脂径高比为1∶3-1∶9；用水洗涤树脂3-8BV，洗脱流速为2-4BV，水洗脱液弃去；用含30-95％含水乙醇洗脱，流速为2-4BV，收集乙醇洗脱液；乙醇洗脱液减压浓缩至相对密度为1.1-1.25，减压或喷雾干燥，得薯蓣皂苷。2、根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于所述的离心的转速为4000-16000转/分钟。3、根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于所述的弱极性大孔树脂为聚苯乙烯型弱极性大孔树脂。4、一种根据权利要求1至3任一项方法所提取的薯蓣皂苷，其特征在于所述的薯蓣皂苷可以制成任何一种药剂学上可实现的制剂。5、一种根据权利要求4所述的薯蕷皂苷，其特征在于所述的薯蓣皂苷可以制成糖衣片剂、糖浆、口服液、滴剂或胶囊剂。6、一种制备权利要求5所述的薯蓣皂苷糖衣片的方法，包括以下步骤1)取薯蓣皂苷100-200份，粉碎，加入硫酸钙1-20份、羧甲淀粉钠20-60份，混合均匀，用95%乙醇湿润，继续转动15秒-30分钟，制备成湿颗粒；2)将湿颗粒经10-40目过筛；3)过筛后的颗粒在20-8(TC干燥；4)干燥后的颗粒经压片机压制成型，包糖衣，即得。7、一种制备权利要求5所述的薯蓣皂苷糖衣片的方法，包括以下步骤1)取薯蓣皂苷160份，粉碎，加入硫酸钙10份、羧甲淀粉钠40份，混合均匀，用95%乙醇湿润，继续转动10分钟，制备成湿颗粒；2)将湿颗粒经14目不锈钢筛制粒；3)过筛后的颗粒在5(TC干燥；4)干燥后的颗粒经压片机压制成型，包糖衣，即得。8、一种利用权利要求5所述的薯蓣皂苷制剂在制备心血管病药物中的应用。全文摘要本发明涉及从中药盾叶薯蓣中提取薯蓣皂苷的方法和制剂，及其在制备防治心血管病药物中的应用。本发明的薯蓣皂苷的提取方法首先采用酶解除去粗杂质，再采用的弱极性大孔树脂来提取薯蓣皂苷。本发明方法可以显著提高盾叶薯蓣皂苷的纯度和提取率，降低生产成本。本发明所得薯蓣皂苷还可以制备成糖衣片剂、糖浆、口服液、滴剂或胶囊剂，与现有工艺相比具有更好的疗效，有利于运输和贮存。临床实验证明本发明薯蓣皂苷对冠心病、高脂血症等心血管疾病有显著疗效。文档编号A61K36/88GK101333241SQ200810108359公开日2008年12月31日申请日期2008年6月6日优先权日2008年6月6日发明者杰张,葛海涛申请人:江苏黄河药业股份有限公司