一类新型胰高血糖素样肽-1(glp-1)类似物及其应用的制作方法

专利名称：：一类新型胰高血糖素样肽-1(glp-1)类似物及其应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一类新型胰高血糖素样肽-l(GLP-l)类似物，及其微波促进固相合成方法，以及新型胰高血糖素样肽-l(GLP-l)类似物的应用。
背景技术：
：糖尿病尤其是2型糖尿病是继肿瘤、心血管疾病之后第三大严重威胁人类健康的慢性非传染性疾病。目前，全球约有2亿糖尿病患者，预计到2025年将增加至3亿。2007年，中国有4000万糖尿病患者，仅次于有4090万糖尿病人的印度居全球第二位，预计到2025年，我国糖尿病患者人数将突破6000万，其中2型糖尿病约占糖尿病患者总人数的90%以上。现有的一些口服降糖药物是目前治疗糖尿病的主要方法。主要有1.促胰岛素分泌的磺酰脲类降糖药(如格列美Jl/glimepiride)，其通过抑制p-细胞的钾通道，刺激胰岛素分泌。2.提高胰岛素敏感性的药物如PPARy激动剂或PPARy/a双重激动剂噻唑烷二酮类药物(如罗格列酮/rosiglitazone)，其可以通过促进外周组织摄取葡萄糖，对于提高胰岛素敏感性、调节脂肪代谢和保护胰岛P-细胞有积极意义。3.通过减少肝脏葡萄糖输出控制血糖的双胍类药物等。但由于糖尿病病因的复杂性，虽然这些口服降糖药物的疗效确切，可也存在很多不足。1.磺酰脲类降糖药物治疗2型糖尿病的药理机制为非葡萄糖依赖，容易造成低血糖；而且由于磺酰脲类药物是通过阻断胰岛P-细胞上的钾通道，促进胰岛素分泌，这易引起胰岛p-细胞的进一步损伤。2.噻唑垸二酮类药物可能引起体重增加和周围性水肿并诱发心力衰竭。3.双胍类降糖药如二甲双胍有时会出现剂量相关的胃肠道副作用，且肝、肾功能障碍者还有发生乳酸酸中毒的危险。此外，以上口服糖尿病药物在治疗2型糖尿病症中其最大的不足是无法逆转糖尿病的病因，即"治标不知本"，对于胰岛P-细胞的生长、分化、增殖无明显作用。4.目前，治疗2型糖尿病最有效的方法是注射胰岛素。但是使用胰岛宗会出现低血搪的危险。受到剂量大小、注射部位、注射途径、个体差异或注射后未进食等因素的影响，如果使用胰岛素稍有不慎，就会出现严重的低血糖副作用。因此寻找能够安全的降血糖同时可以逆转糖尿病病因的药物是目前糖尿病药物研究的当务之急。胰高血糖素样肽-l(GLP-l)是一种葡萄糖依赖性肠降血糖多肽激素，GLP-1刺激胰岛素分泌而不出现低血糖，这种葡萄糖依赖性的促胰岛素分泌特性，避免了糖尿病治疗中常存在的产生低血糖症的危险，这些生理功能使开发GLP-l作为一种2型糖尿病治疗药物具有广阔的前景。胰高血糖素样肽-l(GLP-l)主要由末端空肠、回肠和结肠的L细胞所分泌的葡萄糖依赖性肠降血糖多肽激素，在体内有多种存在形式，GLP-1(736)-NH2是人体内GLP-1主要的天然形式，约占80%;GLP-1(7~36)-NH2,氨基酸序列是HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-NH2。GLP-1通过作用于胰岛"-细胞膜上的受体GLP-1受体(GLP-1R)，促进胰岛素的分泌。GLP-1R在胰腺,-细胞膜上高度表达，是由463个氨基酸组成,属于七次跨膜的G-蛋白偶联受体家族，与GLP-1高度特异性结合。GLP-l与其受体结合后可以增加胰岛细胞腺苷酸环化酶的活性，刺激细胞内的第二信使cAMP的增力Q，导致细胞膜K+通道关闭.细胞去极化,诱发电压依赖性的Ca"通道开放，细胞外012+内流.细胞衆Ca^浓度升高触发胰岛素的释放。此外cAMP水平升高，又激活cAMP依赖的蛋白激酶A和磷酸化酶,进而刺激尽细胞胰岛素基因的转录和翻译，刺激^细胞的增值和分化。胰高血糖素样肽-l(GLP-l)具有多种生物学效应。如下1、具有血糖依赖性的肠促胰岛素分泌作用；2、阻止胰腺/!-细胞退化，刺激》-细胞的增值和分化；3、诱导前胰岛素基因的转录，促进前胰岛素的生物合成；4、增加胰岛素的敏感性；5、增加生长抑素分泌，抑制胰高血糖素的产生(此作用也是血糖依赖性)；6、抑制胃酸分泌，延迟胃排空；7、通过作用于丘脑下部的中枢抑制食欲，降低食物摄取量等作用。GLP-1的N末端6个氨基酸为GLP-1与其受体结合部位，在体内，血浆中的DPPIV特异性识别并且切割GLP-1的N末端ffis7-Ala8二肽，其体内半衰期不足5分钟。His7-Alas残基丧失，不仅导致GLP-1完全丧失生物活性，其降解产物GLP-1(936)-NH2还对GLP-1受体具有抑制作用。是通过改变GLP-1的N端DPPIV酶解部位氨基酸Alas，可以以抑制其被DPPIV的水解作用。此外，天然GLP-1类似物Exendin-4是从美国西南部一种大毒蜥的唾液中分离的含39个氨基酸残基的多肽，它与哺乳动物的GLP-1大约有53%的同源性。研究发现Exendin-4与GLP-1有相似的生理功能，而且能抵抗DPPIV的降解，其体内有效作用时间约56h，目前己经美国在上市，而且研究表明Exendin4与GLP-l受体的亲和力比胰高血糖素样肽-1与GLP-1受体的亲和力更高，活性更好。Exendin-4与胰高血糖素样肽-1除了在DPPIV酶解位点Alas处不同外，其二级结构与胰高血糖素样肽-1也有不同之处。GLP-1从Thru到Glu2i，和从Gln23到Gly35为两条稳定的a螺旋二级结构，而Exendin4相应的序列的序列为一条稳定的a螺旋二级结构。这是因为GLP-1中Gly22为柔性结构，而Exendin-4相应的氨基酸为Glu，具有促螺旋作用。所以Exendin4比GLP-l更加稳定，这可能主要也是由于其二级结构的差别造成。多肽可以通过基因工程的方法或者化学合成的方法得到，1963年Merrifield创立并开发了固相合成多肽的方法。画相多肽合成一般有两种策略即Boc/Bzl正交保护固相合成策略和Fmoc/tBu正交保护固相合成策略，其中FmocABu正交保护固相合成策略则反应条件温和的多。当近年来微波技术运用于多肽的固相合成中后，使多肽的合成技术产生了一个飞跃。微波促进化学反应是由于其使极性分子在微波场中快速旋转，使得一些反应速率较常规加热方法快10到1000倍，而且产率大大提高。如何高效的合成长肽(大于30肽)在世界上仍然是一个挑战.而使用微波促进固相合成多肽，可以克服困难肽字，合成传统固相方注无法得到的多肽.而且合成时间大大缩短，且显荖提高多肽粗品纯度及收率，使得产品的纯化大大方便，只要经过一次制备型HPLC就能得到纯度较高的产品。因此，我们在GLP-1类似物的合成中采用此种方法快速高效的合成得至IJGLP-1系列类似物。
发明内容胰高血糖素样肽-l(GLP-l)是葡萄糖依赖性的促胰岛素分泌肠降血糖多肽激素，其有治疗糖尿病的优点突出，但是其生物半衰期短。本发明的目的是针对其易被二肽基肽酶IV(dipeptidylpeptidaseIV，DPPIV)及体内其它活性酶(如中性肽链内切酶neutralendopeptidase24.1l水解)的缺点，首先将其易被水解部位的氨基酸用其它氨基酸替换，以期望达到延长半衰期的效果；再在此基础上将GLP-1的柔性部位残基Gly22替换为具有促螺旋作用的氨基酸Glu，使GLP-l的柔性连接区的a螺旋程度增加，以进一步增加其降糖活性。合成了一类GLP-1衍生物。其特征在于其结构具有以下形式His-Xaa-Glu-GIy-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala陽Lys-Glu-Phe-Ile，Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:1)Xaa:Gly，Phe，Asp，Met,Ile，Thr，Ser，Val，Leu，Lys，Gu。本发明的优点在于1.提出的一种GLP-l类似物，将其易被水解部位的氨基酸用其它氨基酸替换，可以提高GLP-1的稳定性，延长作用时间。具有抗DPPIV等酶解作用，生物半率期较GLP-1原型长。2.将GLP-1的柔性部位残基Gly22替换为具有促螺旋作用Gki，使GLP-1的柔性连接区的a螺旋程度增加，将GLP-1的肽链主要中间部分的结构固定为一条稳定的a螺旋结构，其二级结构被改造为活性优势结构，提高了其与GLP-1受体的亲和能力，在GLP-1原型的基础上进一步提高了GLP-1的降糖活性。上文对本发明做了一般性描述，下面附图用于说明本发明的具体实施方案。其中图1显示的是GLP-1(7~36)-NH2与DPPIV温孵Oh和4h的HPLC分析谱图2显示的是改造后的Gly8-Glu22-GLP-(7~36)-NH2与DPPTV温孵Oh和4h的HPLC分析谱图。具体实施例方式在本说明书全文中采用以下縮写Et3N:三乙胺；NMM:N-甲基吗啉；D正A:N,N'-二异丙基乙胺；DMF:二甲基甲酰胺；DMSO:二甲亚砜；DCM:二氯甲烷；FmOC:N-9荷甲氧羰基；DIC:N，N'-二异丙基碳二亚胺；CDI:N，N'-羰基二咪唑；DMAP:4-二甲氨基吡啶；HOSU:N-羟基琥珀酰亚胺；EDC.HC1:l-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐；HATU:2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸酯；HBTU:苯并三氮唑-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸酯；HCTU:6-氯苯并三氮唑-U，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯；HOAT:1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑；HOBT:l-羟基-苯并三氮唑；PyBOP:六氟磷酸苯并三唑-l-基-氧基三吡咯烷基磷；HPLC:高效液相色谱；ESI-MS:电喷雾质谱；Gly:甘氨酸；Ser:丝氨酸；Ala:丙氨酸Thr:苏氨酸；Vd:缬氨酸；lie:异亮氨酸；Leu:亮氨酸；Tyr:酪氨酸；Phe:苯丙氨酸；His:组氨酸；Pro:脯氨酸；Asp:天门冬氨酸；Met:蛋氨酸；GU:谷氨酸；Trp:色氨酸Lys:赖氨酸；Arg:精氨酸。Asn:天冬酰胺；Gin:谷氨酰胺。'本发明是通过下列实施例来进行说明的，但这些实施例不做任何限制本发明的解释。实施例1Gy8-GI.u22-GLP-(7~36)-NH2(SEQ.IDNO:2)的微波促进固相合成(1)树脂的溶胀称取Fmoc-rinkamide-MBHAResin50mg(取代量0.4腿ol/g)，经7mLDCM溶胀30min，抽滤去DCM，再用10mLNMP溶胀30min，最后分别用NMP，DCM,NMP7mL冲洗干净。(2)微波促进Fmoc保护基的脱除将溶胀好的树脂放入反应器中，加入7mL含0.1MHOBT的25%哌啶/NMP(V/V)溶液，在微波反应器中反应1min，微波功率为15W,反应温度控制在5(TC以内，使用空气压缩机压縮空气冷却，反应结束后滤去溶液；再加入7mL含O.lMHOBT的259b哌啶/NMP(V/V)溶液在微波反应器中再反应4min，微波功率为25W，反应温度控制在5(TC，使用空气压縮机压缩空气冷却。反应结束后滤去溶液，用NMP洗涤干净。得到脱去初始连接的Fmoc保护基的树脂。(3)微波促进Fmoc-Arg(Pbf)-rinkamide-MBHAResin的合成将Fmoc陽Arg(Pbf)-OH(0.04翻ol)，HBTU(0.04mmol)，HOBT(0.04腿ol)禾卩DIPEA(0.08mmol)溶于10mLNMP中，再将此溶液加入上面的树脂中，在微波反应器中反应7min，微波功率为25W，反应温度控制在5(KC，使用空气压缩机压縮空气冷却。反应结束后滤除反应液，用DCM和NMP各7mL;'先涤树脂3次((4)偶合效率的检测用茚三酮法或者溴酚兰法定性检测树脂的偶合效率，显色反应为阴性即可进入下一个偶合循环。茚三酮法取少量树脂颗粒用乙醇洗涤，放入透明小瓶中加入5%茚三酮乙醇、KCN吡啶溶液(2ml0.001MKCN稀释于98ml吡啶中)、80%苯酚乙醇溶液各2滴，于IO(TC加热5分钟，如果树脂显蓝色即为阳性。溴酚兰法取少量树脂颗粒用二甲酰乙酰胺洗涤，放入透明小瓶中加入3滴1%的溴酚蓝二甲基乙酰胺溶液，常温下振摇3分钟，如果树脂显蓝色即为阳性。(5)肽链的延长按照GJy8-Glu22-GLP-(7~36)-NH2的序列，重复上述脱保护和偶合的步骤依次连接上相应的氨基酸，偶合微波促进反应时间520min不等。得到连有Gly8-Glu22-GLP-(7~36)-NH2的树脂。(6)树脂上多肽的裂解将上述得到的连有Glys-Gu22-GLP-(7~36)-NH2的树脂放入反应瓶中，各加入裂解剂RegeantK(TFA/苯甲硫醚/水/苯酚/EDT，82.5:5:5:5:2.5,V/V)10mL，先在0。C下振摇30min，再在常温F反应3h。反应结朿后抽滤，加少量TFA和DCM洗涤三次，合并滤液。将滤液加入大量的冰乙醚中析出白色絮状沉淀，冷冻离心得到目标多肽的粗品。最终得到Glys-Glu22-GLP-(7~36)-NH2粗品64.4mg，收率为95.9%。(7)Gly8-Glu22-GLP-(7~36)-NH2粗品的纯化将上面得到的Gly8-Gu22-GLP-(7~36)-NH2粗品，溶于少量的水中，用岛淳制备型反相HPLC纯化粗品。纯化中采用C18反相制备柱(340mmx28mm，5pm);流动相A:0.1%TFA/水(V/V)，流动相B:0.1免TFA/乙腈(V/V);流动相梯度流动相B20X65W，40min;流速为6m!7min;检测波长为214nm。收集的溶液冻干得纯品，最终得到纯品29.7mg。ESI-MSm/z:found[M+3H〗3+1119.5,[M+4H]4+840.0，[M+5H产680.0;calu[M+3H]3+1119.6，[M+4H]4+839.9，[M+5H]5+679.8。理论相对分子质量为3283.6,实际相对分子量为3355.7。实施例211根据实施例1所述的方法，根据相应的序列合成得到实施例228的多肽，通过电喷雾质谱(ESI-MS)确证各自的分子量。实施例2His-Phe-Gin-GW-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Va卜Ser-Ser-Tvr-Leu-G〗u-Glu-Gln墨Ala-Ala-Lvs-Glu-Phe-ne-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:3);理论相到分子质量为3445.8。ESI-MSm/z:found[M+3H]3+1149.4,[M+4H]4+862.4，fM+4H+K]5+697.6:calu[M+3H产1149.6,[M+4H]4+862.5，[M+4H+K]5+697.8。实施例3ffis-Asp-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ak-LYS-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:4);理论相对分子质量为3413.8。ESI-MSm/z:found[M+3H]3+1138.5,[M+4H]4+854.3，[M+5H产691.3;calu[M+3H13+1138.9，「M+4HJ4+854.4,[M+4H+K]5+691.4。实施例4His-M^-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:5);理论相对分子质量为3429.9。ES1-MSm/z:found[M+3H]3+1144.2,[M+4H]4+858.4，[M+3H+Na]4+864.0,[M+5H]5+687.0;calu[M+3H]3+1144.3，[M+4H]4+858.5,[M+3H+Na]4+864.0，[M+5H产687.0。实施例5His-Ik-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-IIe-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:6);理论相对分子质量为3411.8。ESI-MSm/z:found|M+3H]3+i138.2,[M+4HJ4+854.。，[M+5H]5+683.4;calu[M+3H3+U3&3，fM+4Hj"854.0，[M+5H]5+683.4。实施例6His-Thr-Glu-Glv-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala陽Lvs-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:7);理论相对分子质量为3399.8。ESI-MSm/z:found[M+3H]3+1134.2,[M+4H]4+850.9，[M+5H]5+681.0;calu[M+3H产1134.3，[M+4H]4+850.9，[M+5H]5+681.0。实施例7His-Ser-Glu-Glv-Thr-Phe画Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tvr-Leu-Glu-Glu墨GIn-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe画ne-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-GIy-Arg-NH2(SEQ.IDNO:8);理论相对分子质量为3385.7。ESI-MSm/z:found[M+3H]3+1129.7,[M+4H]4+847.6，[M+5H]5+678.5;calu[M+3H3+1129.6,[M+4H]4+847.4，[M+5H]5+678.3。实施例8His-巡-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lys-GIu-Phe-Ile-A!a-Trp-Leu-Va'-Lys-Gy-Arg-NH:(SEQ.IDNO:9):论*对分-丁'质量为？397.8,ESI-Mm/z:found[M+3H13—1133.5'〖M+4H14+850.5，[M+5H]5+680.5;calu[M+3HJ3+1133.6,|M+4H]4+850.4,[M+5H]5+680.6。实施例9His-Leu-Glu-Glv-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tvr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-11e-A]a-Trp-Leu-Val-Lys-Giy-Arg-NH2(SEQ.IDNO:10);理论相对分子质量为3411.8。ESI-MSm/z:found[M+3H]3+1138.3，[M+4H]4+853.9，[M+5H]5+683.5;calu[M+3H]3+1138.3，[M+4H]4+853.9,[M+5H]5+683.4。实施例10ffis-Lys-GIu-Glv-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-TYr-Leu-Glu-GIu匿Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe墨De-Aa-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:11);理论相对分子质量为3426.8。ESI-MSm/z:found[M+3H]3+1143.2,[M+4H]4+857.7，[M+5H]5+686.3;calu[M+3H]3+1143.3，[M+4H]4+857.7，[M+5Hj5+686.4。实施例11His-Glu-Glu-Glv-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tvr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-IIe-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-G]y-Arg-NH2(SEQ.IDNO:12);理论相对分子质量为3427.8。ESI-MSm/z:found[M+3H〗3+1143.6,[M+4H]4+857.9，[M+5H]5+686.6;calufM+3H]3+1143.6,[M+4H]4+857.9，LM+5H产686.6。实施例12GLP-1及其类似物对DPPIV的稳定性实验经过纯化后的GLP-1或其类似物5nmol和5mU的DPPIV在200浓度为50mM的Tris-HCL缓冲溶液中，37。C温孵4h，pH7.4。最后加入10|aL20%的乙腈/水溶液终止反应。分别取0h,4h点的温孵溶液，离心，取上清液，进HPLC分析；柱尾收集降解产物GLP-1(9~36)-NH2。分析采用C18反相柱(150mrnx4.6mm，5jam);流动相A:0.1%TFA/7夂(V/V)，流动相B:0.1免TFA/乙腈(V/V);流动相梯度流动相B10免45免，22min;流速为1mL/min;柱温为40°C;检测波长为214nm。如图l，图2所示，结果显示未经改造的天然GLP-1在与DPPIV温孵4h后，基本上皆被水解为无活性的GLP-1(936)-NH2，完整的肽链小于10%。而改造后的GLP-1类似物与DPPIV温孵4h后基本上都仍保持原型，未见有降解，完整的肽链大于90%。结果表明通过对GLP-1易被DPPIV水解的部位改造，可以使GLP-1类似物抵抗DPPIV的酶解作用，从而能保持肽链的完整性。实施例13GLP-1及其类似物体内降糖活性实验取10周龄雄性昆明小鼠(体重1822g)，随机分组，每组6只。只给饮水，禁食过夜。一组按照小鼠体重每千克腹腔注射lSmmo〖的葡萄糖溶液〔浓度209fc.)和生理盐水其他组按照小鼠体重每千克腹腔注射18mmol的葡萄糖溶液和25nmol的GLP-1类似物溶液(10Hmol/L)。在0，15，30，45，60用血糖仪测定血糖值。如表1所示，在将其易被水解部位的氨基酸Ala8用其它氨基酸替换的基础上，将其柔性部位残基Gly22替换为具有促螺旋作用Glu，使GLP-1的柔性连接区的a螺旋程度增加，在GLP-1原型的基础上进一步提高了GLP-1的降糖活性，其中Glys-Glu22-GLP-(7~36)-NH2(SEQ.IDNO:12)是所有的GLP-1类似物中活性最好的一个。表1GLP-1及其类似物降血糖的效应<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><110>中国药科大学<120>—类新型胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物及其应用<丄60>12<170>Patentlnversion3.5<210>1<211>30<212二PRT<213>人工序列<220><221>合成构建体<222>(2)..(2)<223>第2位的Xaa是Gy，Phe，Asp,Met,He,Thr,Ser,Val,Leu，Lys，或Glu<400>1HisXaaGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGluGlu151015GinAlaAlaLysGluPhelieAlaTipLeuValLysGlyArg202530<210>2<211>30<212>PRT<213>人工序列<400>2HisGlyGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGluGlu151015GinAlaAlaLysGluPhelieAlaTipLeuValLysGlyArg202530<210>3<211>30<二12>PRT<213>人工序列<400>3HisPheGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGluGlu151015GinAlaAlaLysGluPhelieAlaTrpLeuValLysGlyArg202530<210>4<211>30<212>PRT<213>人工序列<400>4HisAspGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGluGlu151015GinAlaAlaLysGluPhelieAlaTrpLeuValLysGlyArg202530<210>5<211>30<212>PRT<213>尺工序列<4()()>5HisMetGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGluGlu151015GinAlaAlaLysGluPhelieAlaTrpLeuValLysGlyArg202530<210>6<211>30<212>PRT<213>人工序列<400>6HislieGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGluGlu151015GinAlaAlaLysGluPhelieAlaTrpLeuValLysGlyArg202530<210>7<211>30<212>PRT<213〉人工序列<400>7HisThrGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGluGlu151015GinAlaAlaLysGluPhelieAlaTrpLeuValLysGlyArg202530<210>8<211>30<212>PRT<213>人工序列<400>8HisSerGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerLeuGluGlu151015GinAlaAlaLysGluPhelieAlaTipLeuValLysGlyArg202530<210>9<211>30<212>PRT<213>人工序列<400>9HisValGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGluGlu151015GinAlaAlaLysGluPhelieAlaTrpLeuValLysGlyArg202530<CKh>10<211>30<212>PRT<23>人工序列<4()0>10HisLeuGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGluGlu151015GinAlaAlaLysGluPhelieAlaTrpLeuValLysGlyArg202530<210>11<211>30<212>PRT<213>人工序列<400>11HisLysGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGluGlu151015GinAlaAlaLysGluPhelieAlaTrpLeuValLysGlyArg202530<210>12<211>30<212>PRT<213>人工序列<4()0>12HisGluGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGluGlu151015GinAlaAlaLysGluPhelieAlaTrpLeuValLysGlyArg202530权利要求1.一种含有式I(SEQ.IDNO1)结构的胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物，得到的胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物；其特征在于其结构具有以下形式His-Xaa-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO1)XaaGly，Phe，Asp，Met，Ile，Thr，Ser，Val，Leu，Lys，Glu。2.根据权利要求1所述的多肽，具有如下序列Hi,、-G!\-Giii-GJv-Thi--Phe層Thr-Ser層Asp-VaI-Ser-Ser-Tvr-Leu-Giu-Gk:-Glii-Ala-Ah-Lvs-Giu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Va]-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:2);His-Phe-Glu-G]v匿Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Va1-Ser-Ser-Tyr-Leu-GIu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lvs-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:3);His-Asp-Glu-Glv-Thr-Phe-Thr-Ser-As。-Val-Ser-Ser-Tvr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:4);His-MM-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-IIe-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:5);His-Iie-Glu-Gly-Thr匿Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:6);His-Thr-Glu-Glv-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-AIa-Ala-Lys匿Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:7);His-Ser-Glu-Glv-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lys-Gu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:8);His-Val-Glu-Glv-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp匿Val-Ser-Ser-Tyr陽Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lvs-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:9);ffis-Leu-Glu-GlY-Thr-Phe-Thr-Ser-AsD-Val-Ser-Ser-Tvr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala匿Ala-LYS-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:10);ffis-Lvs-Glu-Glv-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys匿Gly-Arg匿NH2(SEQ.IDNO:11);His-Glu-Glu-Glv-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tvr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:12);3.—种药物组合物，包括治疗有效量的权利要求1中所述的GLP-1类似物或者其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体或稀释剂。4.权利要求l中所述的GLP-1类似物或者其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体或稀释剂在制备用于治疗糖尿病的药物中的应用。全文摘要本发明涉及一类新型GLP-1类似物及其应用。通过对天然GLP-1的8，22氨基酸残基位点进行改造得到具有更稳定且降糖活性更强的GLP-1类似物；其化学合成是通过微波促进固相合成方法高效快速实现，粗品经制备级高效液相纯化，最后冻干得到GLP-1类似物。文档编号A61P3/00GK101337989SQ20081012464公开日2009年1月7日申请日期2008年8月28日优先权日2008年8月28日发明者倪帅键,周映红,周金培,张惠斌,迟玉石,海钱,黄文龙申请人:中国药科大学