抗血管生成的组合物及其使用方法

专利名称：抗血管生成的组合物及其使用方法
抗血管生成的组合物及其使用方法
背景技术：
血管生成(angiogenesis)和血管发生(vasculogenesis)涉及血管生长的过程。血管生成是 从现存毛细血管形成新血管的过程，而血管发生则涉及从内皮祖细胞衍生得到的血管的生 长。
血管生成和血管发生都涉及内皮细胞的增殖。内皮细胞排列成血管壁；毛细血管几乎全 部由内皮细胞组成。血管生成过程不仅涉及增加的内皮细胞增生，还包括一连串的其它事 件，包括内皮细胞的朊酶分泌，基底膜的降解，周围胞间质内的迁移，增生，定位，分化成 管状结构，以及新基底膜的合成。血管发生涉及间充质细胞补充和分化成为成血管细胞，然 后分化成为形成新生血管的内皮细胞。
血管生成和血管发生以及调节这些过程的因素，在胚胎发育，炎症，和伤口愈合中是很 重要的。不当的或病理性的血管生成涉及动脉粥样硬化斑的生长，糖尿病性视网膜病，退行 性黄斑病，晶状体后纤维增生，特发性肺纤维化，成人急性呼吸窘迫综合症，和哮喘。此 外，进行性肿瘤与新生血管形成相关，其提供了将营养物质输送至逐渐生长的肿瘤组织的机 制。
因此本领域中需要降低病理性血管生成的方法。 发明概述
本发明提供降低个体中血管生成的方法。该方法通常涉及给予个体有效量的丹参酮化合 物。该方法对于有效治疗与血管生成，特别是病理性血管生成相关或由其产生的病症是有用 的。本发明进一步提供治疗和血管生成相关或由其产生的病症的方法。
附图
简述
附图l描述15，16-二氢丹参酮对内皮细胞增生的抑制作用。定义
文中使用的"治疗"及类似术语，通常是指获得期望的药理学和/或生理学效果，例如， 血管生成和/或血管发生的降低。所述效果就完全或部分防止疾病或症状而言可以是预防性 的，和/或就部分或完全治愈疾病和/或治愈疾病的不良反应而言可以是治疗性的。文中使用 的"治疗"涵盖了哺乳动物，例如人，的疾病的任何治疗，包括(a)防止在可能患病但还没
有被诊断出患病的主体中出现的疾病或病症；(b)抑制疾病，例如，阻止它的发展；或(C)缓解 疾病，在诊断出患有疾病(例如，由于一种或多种疾病症状的存在)的个体中抑制疾病和缓 解疾病。在本发明的上下文中，血管生成和/或血管发生的降低被用来作为患有要经受降低血 管生成治疗的疾病或病症的要点。
"丹参酮化合物的治疗有效量"是指对促使达到预期治疗效果，例如期望的血管生成和/ 或血管发生的降低有效的丹参酮化合物的量。精确的预期治疗效果会根据要治疗的病症而变 化。
"分离的"是指化合物从所有或某些天然伴有它的成分中分离出。 文中可和"宿主"，"主体"，和"病人"交换使用的术语"个体"是指脊椎动物，例 如，哺乳动物，包括非人类灵长目，人类，畜牧哺乳动物(例如，母牛，猪，山羊，马，绵 羊，和其它有蹄类)，运动性动物(例如，马)，啮齿类动物(例如，小鼠，大鼠)，兔类 动物，和哺乳动物宠物(例如，猫，狗等)。
"基本纯的丹参酮化合物"是指己经从天然伴有它的成分中分离出的丹参酮化合物。例 如，当它按重量计至少60%，至少75%，至少80%，至少卯％，至少95%，或至少99%,而 不含有与其性质相关的天然存在的有机分子时，丹参酮化合物是基本纯的。基本纯的丹参酮 化合物能够通过，例如从自然资源提取，通过化学合成所述化合物，或通过纯化和化学修饰 相结合来获得。纯度可以通过任何适合的方法测定，例如，色谱法，质谱法，高效液相色谱 法，气相色谱/质谱分析法等。
文中使用的"丹参酮化合物"是指以下提供的通式I的任意丹参酮化合物，而15,16-二氢 丹参酮具有特殊重要性。术语"丹参酮化合物"还包括丹参酮化合物的代谢产物。
文中使用的化合物的"药学可接受的衍生物"包括其盐，酯，烯醇醚，烯醇酯，縮醛， 縮酮，原酸酯，半縮醛，半縮酮，酸，碱，溶剂化物，水合物或其前体药物。这样的衍生物可以由本领域技术人员使用已知的衍生方法来容易地制备。生产的化合物可给予动物或人而 基本没有毒性作用，其是药物活性成分或是前体药物。
文中使用的术语"低级烷基"是指C1-C8垸基，例如，Cl-C6烷基，Cl-C4烷基等，其可 以是直链或支链的，可以是饱和或不饱和的。
术语"环烷基"是指单、二或三环的饱和环，其是完全饱和或部分不饱和的。这样基团 的实例包括环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环庚基，金刚垸基，环辛基，顺式或反式萘 烷，二环[2.2.1谏-2-烯，环己烯-l-烯基，环戊-l-烯基，1,4-环辛二烯基等。本文具体指出的 "环垸基"，在一些实施方式中是C3,C4或C5-C6或C8环烷基。
文中使用的"低级链烯基"是指C1-C4烯基；而文中使用的"低级烷氧基"是指C1-C4烷 氧基。
文中使用的"垸氧基"是指直链或支链的、饱和或不饱和的氧烃链，包括例如甲氧基， 乙氧基，丙氧基，异丙氧基，丁氧基，和t-丁氧基。
文中使用的"卤代烷"是指其中所述基团上的一个，两个，三个或更多个(例如，所有 的)氢已被卤素取代的垸基或低级垸基。卤代垸的例子包括但不限于三氟甲基，氯甲基，2-氯乙基，2-溴乙基，和2-碘乙基。卤代烷还可以指卤垸基或全卤垸基(例如氟垸基；全氟垸 基)。
文中使用的术语"芳基"是指C3-C10环芳基，例如苯基，萘基等，包括取代的芳基，例 如甲苯基。
文中使用的"卤素"是指任意的卤素基团，例如氯，氟，溴，或碘。 此处使用的术语"羟垸基"是指C1-C4直链或支链的羟基取代的垸基，g卩，—CH2OH,— 等。
文中使用的术语"氨基垸基"是指C1-C4直链或支链的氨基取代的烷基，其中术语"氨 基"是指基团NR'R"，其中R'和R"独立地选自H或如上定义的低级烷基，例如-NH2， -NHCH3， -N(C恥等。
文中使用的术语"烷氧基"是指C1-C4氧取代的垸基，gp， —OCH3，文中使用的术语 "芳氧基"是指C3-C10氧取代的环芳基。
术语"亚烷基二氧基"是指以下通式的基团，—ORNO—, —ORNORN-,或-RNORNORN—，其中每个RN是独立的烷基。在本发明进一步描述之前，应该明白本发明并不限于所述的特定实施方式，当然也同样 可以变化。还应该清楚文中使用的术语仅仅是为了描述特定的实施方式，并不试图用来限制 本发明，而本发明的范围仅由所附的权利要求限定。
当提供的是数值范围时，应当理解，在所述范围的上限和下限之间的每个介入值(除非 上下文另有清楚规定外，均直到下限单位的十分之一为止)以及在所说范围内的任何其它提 到到或介入的值，都包括于发明中。这些较小范围的上限和下限可独立地包括在所述较小范 围中，并且也包括在发明中，但要考虑规定范围内任何明确排除的极限值。其中规定范围包 括极限的一端或两端，排除了那些所包括极限值的一端或两端的范围也包括在发明之内。
除非另外定义，文中使用的所有科技术语和所属技术领域的普通技术人员理解的常规含 义相同。尽管和文中所述相似或等价的任何方法或材料也可以在本发明的实践或试验中使 用，但优选的方法和材料是本文描述的。文中提及的所有公开文献均引入作为参考，参考其 公开和描述的有关方法和/或材料。
必须指出的是在文中和所附权利要求使用的单数形式"a," "an,"和"the"包括复数对 象，除非上下文另外清楚规定。因此，例如，有关"丹参酮化合物"，则包括大量这样的化 合物，而有关"丹参酮制剂"，则包括所属领域技术人员已知的一种或多种丹参酮制剂及其 等效物等。进一步指出的是权利要求可以以排除任何可选要素的方式来拟定。因而，这种陈 述试图用来作为与权利要求要素的列举相关的，例如"单独"，"唯一"之类专属术语使用 的前提基础，或作为"否定"限制的使用基础。
文中论述的公开文献只是由它们的
公开日期看先于本申请的申请日。但此处并不应当理 解为，凭借前面的发明就认为本发明没有可能先于这样的公开文献的资格。更进一步来说， 因所提供的
公开日期可能不同于实际
公开日，需要独立确认。
详细说明
本发明提供了降低个体中血管生成的方法。该方法总的来说包括给予个体有效量的丹参 酮化合物。该方法有效治疗与血管生成，特别是病理性血管生成相关或由其产生的病症。发 明进一步提供了治疗与血管生长相关或由其产生的病症的方法。
发明人已经注意到丹参酮化合物，15,16-二氢丹参酮(也称为"15，16-二氢丹参酮 I")，抑制内皮细胞增殖。这里显示的结果表明丹参酮化合物能有效治疗与病理性血管生成有关和/或由病理性血管生成产生的病症和紊乱，包括例如，癌转移，动脉粥样硬化，增生性 视网膜病，过度维管组织增生(例如随慢性关节炎所见)，牛皮癣，和血管畸形，如血管 瘤。
降低病理性血管生成的方法
技术领域：
本发明提供了降低个体血管生成的方法。该方法总的来说包括给予有需要的个体以有效 量的丹参酮化合物。在一些实施方式里，本发明方法包括给予含有分离、纯化的丹参酮化合 物的药物制剂。
丹参酮化合物
适合的丹参酮化合物包括式I化合物
其中
R1， R2， R3， R4， R5， R6， R7， R8，和R9独立选自H，低级烷基，羟基，低级烷氧 基，卤素，氨基，氨基垸基，硝基，杂芳基，芳基，OC(=0)R14, OC(=0)OR14，
OC(=0)N(R14)2， 0(CH2)mN(R14)2， C(=0)N(R14)2，和0(CH2)mCOOH，其中m是l-5和R14是H
或低级烷基。
或Ri和W—起形成共价键；
或R2和R3—起形成=2，其中Z选自O， S，和NH;
X1和X2独立选自—C(R15)(R16)—, O， S， NH， C=0， C=S， O.NH， SO，和S02， 其中R"和R16分别独立选自H，低级烷基，羟基，低级烷氧基，卣素，氨基，氨基垸基，硝 基，杂芳基，芳基，OC(=0)R17，OC(=0)OR17， OC(=0)N(R17)2 ，0(CH2)mN(R17)22 ， C(=0)N(R17)2，和0(CH2)mCOOH，其中m是l-5和R17是H或低级烷基。
或者X1和乂2—起形成~€=<:—；并且
X3选自0， S， NH，或(CH2)p，其中p是l-3 ;或其药学可接受的盐。
当化合物是二氢丹参酮时，化合物的结构式为:
其中
R1， R2， R3， R4， R5， R6， R7， R8，和R9分别独立选自H，低级烷基，羟基，低级烷 氧基，卤素，氨基，氨基垸基，硝基，杂芳基，芳基，OC(=0)R14， OC(=0)OR14， OC(=0)N(R14)2， 0(CH2)mN(R14)2， C(=0)N(R14)2，和0(CH2)mCOOH，其中m是l-5和R14是 H或低级垸基，同时R1， R2， R3， R4， R5， R6， R7， R8，和119独立选自H或低级烷基的化 合物是重点加以研究的；
Xi和x2分别独立选自CK)， OS， C=.NH， SO，和S02，重点研究的是0=0;和
X3选自0， S， NH，和(CH2)p，其中p是l-3，重点研究的是O,S或NH;
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方式里，所述化合物是下式的二氢丹参酮化合物
其中
R1， R2， R3， R4， R5， R6， R7， R8，和R9分别独立选自H，低级垸基，羟基，低级烷 氧基，卤素，氨基，氨基垸基，硝基，杂芳基，芳基，OC(=0)R14， OC(=0)OR14， OC(=0)N(R14)2， 0(CH2)mN(R14)2， C(=0)N(R14)2，和0(CH2)mCOOH，其中m是l-5和R14是H或低级烷基，而R1， R2， R3， R4， R5， R6， R7, R8，和R9独立选自H或低级烷基的化合 物是加以重点研究的；
Xi和XZ是C:0;以及
X3是。；
或其药学上可接受的盐。
许多式I化合物的合成例如在美国专利公开号2005/0250751;和Danheiser等人(1992) 7^rate*0"33:1149中有记载。式I的丹参酮化合物还可从天然存在的来源，例如，从 Sa/v/a附/〃/orr/n'zfl 5w"ge的根，分离获f导。
在一些实施方式里，适合的化合物是15,16-二氢丹参酮(也称为"二氢丹参酮I")，具 有如下结构
15，16-二氢丹参酮可从天然存在的化合物来源分离而得。可进行精制，例如使用Aoki等 人(1979)X"a/.所oc/ em. 95:575-578)中描述的方法进行。15,16-二氢丹参酮还可在体外化学合 成。15,16-二氢丹参酮的合成使用任何已知的方法进行，例如，Danheiser等人(1992) 7^ra/ze^owZe化33:1149中描述的方法。
也可以给予丹参酮化合物药学上可接受的盐。丹参酮化合物药学上可接受的盐是保留有 所期望的母体丹参酮化合物生物活性的、并且不带有不期望的毒副作用的盐。这样盐的例子 是和无机酸形成的酸加成盐，所述无机酸例如盐酸，氢溴酸，硫酸，磷酸，硝酸等等；以及 和有机酸形成的盐，所述有机酸例如醋酸，草酸，酒石酸，琥珀酸，马来酸，富马酸，葡萄 糖酸，枸橼酸，苹果酸，抗坏血酸，苯甲酸，鞣酸，棕榈酸，海藻酸，聚谷氨酸，萘磺酸， 甲磺酸，p-甲苯磺酸，萘二磺酸，聚半乳糖醛酸等；以及和元素阴离子形成的盐，所述元素 阴离子例如氯，溴，和碘。
有研究价值的盐的例子包括醋酸盐，己二酸盐，海藻酸盐，天冬氨酸盐，苯甲酸盐，苯 磺酸盐，硫酸氢盐，丁酸盐，柠檬酸盐，樟脑酸盐，樟脑磺酸盐，环戊烷丙酸盐，二葡糖酸盐，十二烷基硫酸盐，乙磺酸盐，延胡索酸盐，fluco庚酸盐，甘油磷酸盐，半硫酸盐，庚酸 盐，己酸盐，盐酸盐，氢溴酸盐，氢碘酸盐，2-羟基乙磺酸盐，乳酸盐，马来酸盐，甲磺酸 盐，2-萘磺酸盐，烟酸盐，草酸盐，棕榈酸盐，果胶酸盐，过硫酸盐，苯丙酸盐，苦味酸 盐，特戊酸盐，丙酸盐，琥珀酸盐，酒石酸盐，硫氰酸盐，甲苯磺酸盐和十一酸盐。盐的其 它实例包括丹参酮化合物的阴离子与适合的阳离子相结合的盐，所述阳离子例如Na+， NH4+，和NW/(其中W是d-4垸基)。
合适的丹参酮化合物可使用简单有效的方法来鉴定。丹参酮化合物降低血管生成的能力 可使用任何已知的方法在体外或体内评定，包括但不限于体外内皮细胞试验，基质胶试验， 圆盘血管生成系统，雏鸡胚胎绒毛膜尿囊膜试验等。
一些实施方式中，在本发明方法中给予个体的丹参酮化合物，例如，二氢丹参酮化合物 是经提纯的，例如丹参酮化合物为至少80%纯度，至少85%纯度，至少90%纯度，至少95% 纯度，至少98%纯度，或至少99%纯度。
适合治疗的病症
任何与病理性血管生成相关或由其产生的病症或疾病，或是由新生血管形成促使的病症 或疾病(例如，依赖于新生血管形成的肿瘤)，都可用丹参酮化合物来治疗。
治疗的病症或疾病(这里可指"血管生成相关性病症"或"血管生成伴随性病症")包 括但不限于，癌症；动脉粥样硬化；增殖性视网膜病，例如糖尿病视网膜病，年龄相关性黄 斑病(例如，年龄相关的黄斑退行性改变)，玻璃体视网膜病，晶状体后纤维组织增生症； 过度维管增生，如慢性关节炎；牛皮癣；和血管畸形，例如血管瘤等。
本方法对原发性实体瘤和转移性实体瘤，特别是转移性肿瘤，治疗有效，所述转移性肿 瘤包括癌，肉瘤，白血病，和淋巴瘤。特别有价值的是在血管生成部位发生的肿瘤的治疗。 在一些实施方式中，提供了用来降低癌细胞从实体瘤转移的方法。因此，所述方法对任何瘤 的治疗均有用，所述瘤包括但不限于乳腺癌，结肠癌，直肠癌，肺癌，咽癌，喉癌，食管 癌，胃癌，胰腺癌，肝癌，胆囊和胆管癌，小肠癌，尿道癌(包括肾癌，膀胱癌和膀胱上皮 癌)，女性生殖道癌(包括宫颈癌，子宫癌，和卵巢癌以及绒毛膜癌和妊娠性滋养层细胞疾 病)，男性生殖道癌(包括前列腺癌，精囊癌，睾丸和生殖细胞肿瘤)，内分泌腺癌(包括 甲状腺癌，肾上腺癌，和脑垂体癌)，和皮肤癌，以及血管瘤，黑素瘤，肉瘤(包括那些来自骨和软组织的肉瘤，如卡波济氏肉瘤)以及脑肿瘤，神经瘤，眼肿瘤，和脑膜瘤(包括星 细胞瘤，神经胶质瘤，成胶质细胞瘤，视网膜成神经细胞瘤，神经丘瘤，成神经细胞瘤，神 经鞘瘤和脑脊膜瘤)。所述方法对治疗来源于血液恶性肿瘤的实体瘤也有用，例如白血病
(也就是绿色瘤，浆细胞瘤和小半鞘翅瘤以及蕈样真菌瘤和表皮T-细胞淋巴瘤/白血病)， 以及在淋巴瘤(何杰金氏淋巴瘤和非何杰金氏淋巴瘤)的治疗中也是有用的。另外，所述本 方法降低上述肿瘤的转移是有用的，无论其是单独使用或者是与放射线疗法和/或其它化学治 疗剂联合使用。
使用本发明的方法进行治疗的其它病症和失调包括自身免疫疾病，例如类风湿性、免疫 性和退行性关节炎；各种眼部疾病，例如糖尿病性视网膜病，早产儿视网膜病，角膜移植片 排斥，晶状体后纤维组织增生症，新生血管性青光眼，虹膜潮红，与黄斑变性、缺氧、和感 染或外科手术有关的由于眼内血管生成导致的视网膜新生血管形成，以及其它异常的眼部新 生血管形成；皮肤疾病，例如牛皮癣；血管疾病，例如血管瘤，和动脉粥样硬化斑块内的毛
细血管增生；遗传性出血性毛细血管扩张症(Osier-Webber Syndrome);斑块新生血管形
成；毛细血管扩张；血友病关节炎；血管纤维瘤；和过度伤口粒化(瘢痕疙瘩)。 在体内降低病理性血管生成
本发明提供了一种降低哺乳动物血管生成的方法。该方法一般包括给予有需要的哺乳动 物以有效降低血管生成的量的丹参酮化合物。当和未治疗(例如，安慰剂治疗的)的对照组 相比时，有效量的丹参酮化合物降低血管生成至少约10%，至少约20%，至少约25%，至少 约30%,至少约35%，至少约40%，至少约45%，至少约50%，至少约55%，至少约60%， 至少约65%，至少约70%，至少约75%，或更多。
可使用任何已知方法测定血管生成是否降低。测定试剂(例如，丹参酮化合物)对血管 生成的作用的方法在所属领域是已知的，包括但不限于，对由血管生成因子浸渗的埋植物中 的新生血管形成的抑制；角膜或前眼腔中血管生长的抑制；体外内皮细胞增殖、迁移或管状 形成的抑制；雏鸡绒毛膜尿囊膜试验；大鼠颊囊试验；聚乙烯醇海棉平板试验。这样的方法 是所属领域中公知的，并且已经在许多公开文献中有所描述，例如包括Auerbach等人((1991) 户/2arwac. 77^.51:1-11)，及其中引用的参考文献。
本发明进一步提供了治疗和病理性血管生成相关的或由其导致的病症或病症的方法。在 和病理性血管生成相关的或由其导致的眼部病症的上下文中，根据本发明方法的病理性血管生成的降低对视力改善有效果，或至少保持视力，或降低视力丧失。在癌症治疗的上下文 中，根据本发明方法的病理性血管生成的降低对肿瘤转移降低有作用。可使用任何已知方法 来测定转移是否降低，例如，使用染料的成像法，计算机断层扫描(CT),和核磁共振成像 法(MRI)。在关节炎的上下文中，根据本发明方法的病理性血管生成的降低对与关节炎有 关疼痛(例如，关节痛)的降低，和/或关节肿胀的降低，和/或病人灵活性的增加，和/或关 节可动性的增加有作用。
在与血管发生相关的病症的治疗中，丹参酮化合物以每剂量约5吗一约1000mg给药，例 如，每剂量约5吗一约50昭，约50 ng—约100吗，约IOO吗一约500ixg，约5 OO吗一约lmg, 约lmg —约10mg,约10mg —约20mg，约20mg —约25mg，约25mg —约50mg，约50mg —约 75mg，约75mg —约100mg，约100mg —约125mg ，约125mg_约150mg,约150mg —约 175mg，约175mg —约200mg，约200mg_约225mg,约225mg—约250mg，约250mg —约 300mg，约300mg —约350mg，约350mg —约400mg，约400mg —约450mg，约450mg —约 500mg，约500mg—约750mg,或约750mg—约1000mg。
在一些实施方式中，每剂量的丹参酮化合物的量以每个体重单位为基础确定。例如，在 一些实施方式中，丹参酮化合物以约O.Ol mg/kg—约50 mg/kg的量给药，例如，每剂量约O.Ol mg/kg—约0.05 mg/kg，约0.05 mg/kg—约O.l mg/kg，约O.l mg/kg—约0.5 mg/kg,约0.5mg/kg 一约l mg/kg，约lmg/kg —约2mg/kg，约2mg/kg —约3 mg/kg，约3mg/kg —约5 mg/kg，约 5mg/kg —约7mg/kg，约7mg/kg —约10mg/kg，约10mg/kg —约15 mg/kg，约15mg/kg—约 20mg/kg，约20mg/kg—约25 mg/kg，约25mg/kg—约30 mg/kg，约30mg/kg—约40mg/kg，或 约40mg/kg—约50 mg/kg。
本领域的技术人员很容易理解剂量水平可由于特定化合物的功能、症状的严重程度和主 体对副作用的敏感性而变化。所给化合物的优选剂量由本领域技术人员通过多种方式容易地 确定。
在一些实施方式中，丹参酮化合物以多剂量给药。丹参酮化合物给药的频率可根据多种 因素中的任一种而变化，例如，症状的严重程度等。例如， 一些实施方式中，丹参酮化合物 每6个月给药1次，每3个月1次，每2个月1次，每6周1次，每月1次，每月2次，每月3次，每 隔l周l次(qow)，每周l次(qw)，每周2次(biw)，每周3次(tiw)，每周4次，每周5次，每周6次，每隔l天l次(qod)，每日l次(qd)，每日2次(qid)，或每日3次(tid)。 一些实施方式中，丹参酮化合物持续给药。
丹参酮化合物给药的持续期，例如给予丹参酮化合物的周期，可根据许多因素中的任一 种改变，例如患者的反应等。举例来说，丹参酮化合物可在约l天一约l周，约2周一约4周， 约1个月一约2个月，约2个月一约4个月，约4个月一约6个月，约6个月一约8个月，约8个月 一约1年，约1年一约2年，或约2年一约4年，或更长时间。 一些实施方式中，对个体以丹参 酮化合物终生给药。
在一些实施方式中，丹参酮化合物的给予是不连续的，例如，丹参酮化合物在第一阶段 以第一剂量频率给予；丹参酮化合物的给予暂停一段时间；然后丹参酮化合物在第二阶段以 第二剂量频率给予。在此期间，丹参酮化合物的暂停可根据各种因素变化，例如患者的反 应；并且通常从约1周一约6个月变化，例如，约1周一约2周，约2周一约4周，约1个月一约2 个月，约2个月一约4个月，或约4个月一约6个月，或更长。第一阶段给药和第二阶段可以相 同或不同；而第一剂量频率和第二剂量频率也可以相同或不同。
眼部病症
本发明提供治疗各种与血管生成相关的眼部病症的方法，例如糖尿病性视网膜病，与年 龄相关的黄斑退行性改变等。 一些实施方式中，本发明提供了治疗糖尿病性视网膜病的方 法。 一些实施方式中，本发明提供治疗与年龄相关的黄斑退行性改变(AMD)的方法，包括 新生血管性("湿性")AMD和干性AMD。 一些实施方式中，本发明提供治疗新生血管性AMD 的方法。所述方法一般包括给予有需要的个体(例如诊断为患有与血管生成关的眼部病症的 个体，如糖尿病性视网膜病，AMD等等)以含有丹参酮化合物的制剂。可以通过评估患者视 力来测定所提供的丹参酮化合物或者给定剂量的丹参酮化合物对治疗AMD是否有效。
一些实施方式中，丹参酮化合物的"有效量"是指这样的量，当给予单剂量或多剂量 时，产生至少5%,至少10%，至少15%，至少20%，至少25%，至少30%，至少40%，至 少50%，或更好的视力改善。在一些实施方式中，丹参酮化合物的"有效量"是指这样的 量，当给予单剂量或多剂量时，致使视力退化减缓，例如保持视力。 一些实施方式中，丹参 酮化合物的"有效量"是指这样的量，当给予单剂量或多剂量时，使得其在糖尿病早期治疗 视网膜病变图表上视敏度的损失少于15个字母，少于10个字母，或少于5个字母。 一些实施 方式中，丹参酮化合物的"有效量"是指这样的量，当给予单剂量或多剂量时，使得其在糖尿病早期治疗视网膜病变图表上视敏度的提高多于5个字母，多于10个字母，或多于15个字 母(例如，从约5个字母一约10个字母，约10个字母一约15个字母，或约15个字母一约20个 字母的提高)。
一些实施方式中，在与血管生成相关的眼部疾病，如糖尿病性视网膜病或AMD的治疗 中，丹参酮化合物通过注射(例如眼内(如玻璃体内)，皮下，或静脉注射)给药。其它适 合的给药途径包括局部(向眼部，例如使用滴眼剂)，结膜下，眼周，眼筋膜囊，眼球后 (后眼眶)给药，或通过离子渗透给药至眼部。 一些实施方式中，丹参酮化合物以口服给 药。
关节炎
本发明提供治疗关节炎的方法，例如类风湿性关节炎，骨关节炎，牛皮癣性关节炎等。 方法通常包括给予有需要的个体(例如已经被诊断为患有类风湿性关节炎，骨关节炎，牛皮 癣性关节炎等的个体)有效量的丹参酮化合物。
可以通过评估患者关节痛感、关节僵直(例如，患者灵活性)、关节肿胀等来测定所给 予的丹参酮化合物或者给定剂量的丹参酮化合物对于治疗关节炎是否有效。
一些实施方式中，丹参酮化合物的"有效量"是指这样的量，当给予单剂量或多剂量 时，和没有使用丹参酮化合物治疗的关节肿胀或关节疼痛水平相比，关节肿胀和/或关节疼痛 降低至少约10%，至少约20%，至少约30%，至少约40%，至少约50%，至少约60%，至少 约70%，至少约80%，或至少约90%，或更多。
在有关关节炎的上下文中，丹参酮化合物可通过多种给药途径中的任一种给药，包括例 如肌内、皮下、静脉给药等。在一些实施方式中，丹参酮全身给药。在其它的实施方式中， 丹参酮局部给药，例如在受关节炎侵袭的关节处或周围。在一些实施方式中，丹参酮化合物 口服给药。
实体瘤转移的抑制
本发明提供降低实体瘤的癌细胞转移的方法。方法一般包括给予有需要的个体(例如， 患有实体瘤的个体和面临实体瘤癌细胞转移风险或实体瘤癌细胞已经转移的个体)以有效量 的丹参酮化合物。可以通过多种成像技术中的任一种，例如MRI、 CT等来测定所给予的丹参酮化合物或者 给定剂量的丹参酮化合物对降低转移是否有效。
一些实施方式中，丹参酮化合物的"有效量"是指这样的量，当给予单剂量或多剂量 时，和没有使用丹参酮化合物治疗的转移水平相比，转移降低至少约10%,至少约20%，至 少约30%，至少约40%，至少约50%，至少约60%，至少约70%，至少约80%，或至少约 90%，或更多。 联合治疗
一些实施方式中，丹参酮化合物和一种或多种其它治疗剂联合给药，例如，癌症化疗
剂；VEGF拮抗剂；TNF拮抗剂；抗炎剂等。丹参酮化合物(或类似物，衍生物，或其药学
上可接受的盐)可单独给药，或与其它物质和/或疗法协同给药，取决于给药前后关系(也就 是，预期的最终效果，个体病症，和适应症)。"协同"是指试剂(例如，丹参酮化合物) 在其它物质或疗法之前、同时、或之后给药。 癌症治疗的联合疗法
一些实施方式中，丹参酮化合物作为标准癌症治疗的辅助治疗给药。标准癌症治疗包括 手术(例如癌组织的手术切除)，放疗，骨髓移植，化疗，生物反应修饰治疗，和前述疗法 的某些组合。
放疗包括但不限于从外部供应源(例如光束)释放的或通过植入小放射源释放的x-射线
或伽马射线。 癌症化疗试剂
化疗试剂是降低癌细胞增殖的非肽(即非蛋白质的)化合物，包括细胞毒素试剂和细胞 抑制试剂。化疗试剂的非限制实例包括垸基化剂，亚硝基脲，抗代谢物，抗肿瘤性抗生素， 植物(长春花)生物碱，和类固醇激素。
对降低细胞增殖起作用的试剂在本领域中是公知的并且广泛使用。这样的试剂包括烷基 化剂(例如氮芥类)，亚硝基脲，次乙亚胺衍生物，垸基磺酸盐，和三氮烯，包括但不限于
二氯甲基二乙胺，环磷酰胺(癌得星TM)，美法仑(L-溶肉瘤素)，卡氮芥(BCNU)，洛 莫司汀(CCNU)，司莫司汀(甲基-CCNU),链脲霉素，吡葡亚硝脲，脲嘧啶氮芥，氮芥， 异环磷酰胺，苯丁酸氮芥，哌泊溴烷，三亚乙基密胺，三亚乙基对硫磷胺，白消安，氮烯唑 胺，和替莫唑胺。抗代谢试剂包括叶酸类似物，嘧啶类似物，嘌呤类似物，和腺苷脱氨酶抑制剂，包括但 不限于阿糖胞苷(CYTOSAR-U)，胞嘧啶阿糖胞苷，氟尿嘧啶(5-FU) ， 5-氟脱氧尿苷 (FudR) ， 6-硫鸟嘌呤，6-巯基嘌呤(6-MP)，戊糖苷，5-氟尿嘧啶(5-FU)，氨甲蝶呤，10-炔丙基-5,8-亚甲基叶酸(PDDF, CB3717)， 5,8-亚甲基(dideaza)四氢叶酸(DDATHF)，甲酰 四氢叶酸，磷酸氟达拉滨，喷司他丁，和吉西他滨。
适合的天然产品及其衍生物(例如长春花属生物碱，抗肿瘤抗生素，酶，淋巴因子，和 表鬼臼毒素)包括但不限于Ara-C，紫杉醇(泰素⑧)，多西紫杉醇(泰索帝⑧)，脱氧柯福霉 素，丝裂霉素-C， L-门冬酰胺酶，硫唑嘌呤；布喹那；半边莲属生物碱，例如长春花新碱， 长春碱，长春瑞滨，长春花碱酰胺等；鬼臼毒素，例如依托泊苷，替尼泊苷等；抗生素，例 如蒽环类抗生素，盐酸柔红霉素(柔红霉素，红比霉素，正定霉素)，伊达比星，多柔比星， 表柔比星和吗啉代衍生物等；phenoxizone双环肽，例如更生霉素；碱性糖肽类，例如博来霉 素；蒽醌甙，例如普卡霉素(光辉霉素)；蒽二酮，例如米托蒽醌；azirinopyrrolo喷哚二 酮，例如丝裂霉素；大环免疫抑制剂，例如环孢霉素A， FK-506 (他克莫司，普乐可复)， 雷帕霉素等。
其它抗增殖细胞毒素试剂是诺维本，CPT-ll，阿那曲唑，来曲唑，卡培他滨，雷洛昔 芬，环磷酰胺，异环磷酰胺，和屈洛昔芬。
具有抗增殖活性的微管作用试剂也适合使用，包括但不限于通分异枸秋水仙碱 (allocolchicine) (NSC 406042)，软海绵素B(NSC 609395)，秋水仙碱(NSC 757)，秋水仙碱 衍生物(例如，NSC 33410)， dolstatin 10 (NSC 376128)，美登素(NSC 153858)，根霉素(NSC 332598)，紫杉醇(泰素1②)，泰素1⑧衍生物，多西紫杉醇(泰索帝②)，硫代秋水仙碱(NSC 361792)，三苯甲基cysterin，硫酸长春碱，硫酸长春新碱，天然和合成的埃博霉素，包括但 不限于埃博霉素A，埃博霉素B，前浙皮海绵内酯(discodermolide)，雌莫司汀，诺考达唑 等。
适合使用的激素调节因子和类固醇(包括合成的类似物)包括但不限于肾上腺皮质类固 醇，例如泼尼松，地塞米松等；雌激素和孕激素，例如己酸羟孕酮，醋酸甲羟孕酮，醋酸甲
地孕酮，雌二醇，氯米芬，他莫昔芬等；肾上腺皮质抑制剂，例如氨鲁米特；17a-炔雌醇；
己烯雌酚，睾酮，氟甲睾酮，屈他雄酮，睾内酪，甲泼尼龙，甲基睾酮，泼尼松龙，曲安西 龙，氯烯雌醚，羟孕酮，氨鲁米特，雌莫司汀，醋酸甲羟孕酮，醋酸亮丙瑞林，氟他米特(氟他胺)，托瑞米芬(法乐通)，和诺雷得。雌激素刺激增殖和分裂，因此结合雌激素受体的化 合物用来阻断该活性。皮质激素类可抑制T细胞增殖。
其它化疗剂包括金属复合物，例如顺钼(顺-DDP)，卡铂等；尿素类，例如羟基脲；和 卡比多巴，例如N-甲基肼；表叶毒素；拓扑异构酶抑制剂；丙卡巴肼；米托蒽醌；亚叶酸； 替加氟等。其它相关的抗增殖有益试剂包括免疫抑制剂，例如麦考酚酸，沙利度胺，酶酚酸
酯(desoxyspergualin) ， azasporine，来氟米特，咪唑立宾，氮杂螺烷(azaspirane) (SKF 10568》；易瑞沙②(ZD 1839， 4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基-6-(3-(4-吗啉基)丙氧基)喹唑啉) 等。
"紫杉烷"包括紫杉醇，以及任何活性紫杉烷衍生物或前体药物。"紫杉醇"(这里应
理解为包括类似物，制剂，和衍生物，例如，多西紫杉醇，泰素^，泰索帝tm (多西紫杉醇
制剂)，紫杉醇的10-去乙酰毛花甙丙类似物和紫杉醇的3W-去苯甲酰-3W-t-丁氧羰基类似 物)，可以利用本领域技术人员已知的技术容易地制备(还参见WO 94/07882， WO 94/07881, WO 94/07880， WO 94/07876， WO 93/23555， WO 93/10076;美国专利号.5,294,637; 5,283,253; 5,279,949; 5,274,137; 5,202,448; 5,200,534; 5,229,529;和EP 590,267)，或通过许多商业来源 获得，包括例如Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo.(来自rox^ 6wvz/o/z'a的T7402 ;或来自 ram ya朋a"em7's的T-1912)。
紫杉醇应被理解为不但是指普通的化学上可获得的紫杉醇形式，而且指类似物和衍生物 (例如，上述的泰索帝tm多西紫杉醇)和紫杉醇共轭物(例如，紫杉醇-PEG,紫杉醇-葡聚
糖，或紫杉醇-木糖)。
还包括在称为"紫杉垸"内的各种已知衍生物，包括亲水衍生物，和疏水衍生物。紫杉
烷衍生物包括但不限于国际专利申请号WO 99/18113中描述的半乳糖和甘露糖衍生物；WO 99/14209中描述的哌嗪和其它衍生物；WO 99/09021， WO 98/22451,和美国专利号5,869,680 中描述的紫杉垸衍生物；WO 98/28288中描述的6-硫代衍生物；美国专利号5，821，263中描述 的亚磺酰胺衍生物；美国专利号5,415,869中描述的紫杉酚衍生物。进一步包括紫杉醇的药物 前体，包括但不限于WO 98/58927; WO 98/13059;和美国专利号5,824,701中描述的那些紫 杉酚衍生物。
适合与本发明方法联合使用的生物反应调节剂包括但不限于(1)酪氨酸激酶(RTK)活 性抑制剂；(2)丝氨酸/苏氨酸激酶活性抑制剂；(3)与肿瘤相关的抗原拮抗剂，例如专门结合肿瘤抗原的抗体；(4)细胞凋亡受体激动剂；(5)白细胞介素-2;(6) IFN-(X; (7)
IFN-y(8)菌落刺激因子；和(9)血管生成抑制剂。
与vegf拮抗剂的联合治疗
在 一些实施方式中，丹参酮化合物和至少一种额外的抗血管生成因子联合治疗来给药。 例如，在和癌症相关的病理性血管生成的降低中，在涉及血管生成的眼部疾病(例如湿性 AMD)的治疗中，在关节炎的治疗中等，丹参酮化合物在一些实施方式中和至少一种额外的 抗血管生成因子联合治疗给药。适合的抗血管生成因子包括例如血管内皮生长因子 (VEGF)拮抗剂；TNP-470 (Yeh等人(2000) iVoc. Ato/. ^cad 97:12782);等等。
在一些实施方式中，丹参酮化合物和VEGF拮抗剂联合治疗来给药。适合的VEGF拮抗剂 包括但不限于VEGFR1酪氨酸激活酶活性抑制剂；VEGFR2酪氨酸激活酶活性抑制剂；VEGF 抗体；VEGF1抗体；VEGF2抗体；对VEGFR1或VEGFR2有特异性的核糖酶；对VEGFR1或 VEGFR2有特异性的反义核酸(antisense);对VEGFRl或VEGFR2有特异性的siRNA;可溶性
适合在本发明方法中使用的范例性非限制的VEGF拮抗剂包括但不限于美国专利号 6,469,032中公开的化合物(例如，3-[(2,3-二甲基吡咯-5-基)亚甲基]-2-吲哚酮，VEGFR-2的 依赖VEGF的磷酸化抑制齐IJ(已知为"SU5416";还参见Fong等人(1999) Owcw及"59:99-106); 3-[2，4-二甲基-5-(2-氧-1，2-二氢-吲哚-3-基亚甲基)-lH-吡咯-3-基]丙酸(已知为 "SU6668,，； VEGFR-2抑制齐U;参见例如，WO 99/61422;和Laird等人(2000) Ca"cer及仏 60:4152); ZD4190, VEGFR-1和VEGFR-2的抑制剂(参见例如Wedge等人(2000) Cawcer 60:970;和Wedge等人(2000) Ji/v.五jc; . Med祝o/.476:307-310); [N-(4-溴-2-氟苯基)-6-甲氧基-7-[(l-甲基哌锭—4-基)甲氧基]喹唑啉-4-胺](已知为"ZD6474"; Wedge等人(2002) O "cer 62:4645);如Hennequin等人((2002) ■/ Med Cte附.45(6):1300-12)中公开的4-苯胺基喹唑啉化 合物；贝伐单抗(AvastinTM), VEGF的单克隆抗体；ZM323881 (Whittles等人(2002) M'ctoczVcw/加'ow 9:513-522); PTK787/ZK22584, VEGFR-1和VEGFR-2的抑制剂CWood等人 (2000) Ca"cer60:2178-2189); Angiozyme ,抗-VEGFR-l核酶(Weng等人.(2001) Cwm 0"co/.3:141-146);可溶性VEGFR (参见例如Takayama等人(2000) Ca"cw 60:2169-2177; Mori等人(2000)7Tzer. 7:1027-1033;和Mahasreshti等人.(2001) C7/". Qwc^ 7:2057-2066); VEGFR-2的单克隆抗体(参见例如Prewett等人(1999) Ootcw 59:5209-5218;Witte等人(1998) Ca"cer Metostoy/s 17:155-161; Brekken等人(2000) Cawcer 60:5117-5124; Kunkel等人(2001) Owcer i 战61:6624-6628);美国专利号5,792,783, 5,834,504, 5,883,113， 5,883,116, 5,886,020, 6,225,335, 6,323,228,和6,469,032中任一者公开的化合物; 美国专利公开号20030181377中公开的可溶性VEGFR;美国专利公开号20030176487中公开 的化合物；美国专利公开号20030175271中公开的VEGFR的抗体；美国专利公开号 20030171378中公开的化合物等。 AMD治疗的联合疗法
在一些实施方式中，丹参酮化合物至少和适于治疗AMD的第二治疗剂联合给药。适于治 疗AMD的试剂(除丹参酮化合物以外的)包括但不限于如上所述的VEGF拮抗剂；用光动力 学治疗(PDT)的Visudyne②(维替泊芬)等。AMD的现行疗法可和用丹参酮化合物治疗联合 使用，所述化合物包括Macugen (哌加他尼钠)；用PDT的Visudyne②(维替泊芬)；Avastin 贝伐单抗；以及来尼株单抗(Lucentis)(兰尼单抗(ranibizumab))，结合VEGF-A的人工单 克隆抗体。
关节炎治疗的联合疗法
在一些实施方式中，丹参酮至少和适于治疗关节炎的第二治疗剂联合给药。适于治疗关 节炎的试剂(除丹参酮化合物以外的)包括但不限于肿瘤坏死因子-a (TNF-a)拮抗剂(例 如，可溶性TNFR ENBREL②依那西普；英夫利昔单抗(REMICADE②，Centocor);阿达木单抗 (HUMIRATM, Abb0tt));甲氨蝶呤；皮质甾类；疾病调节抗风湿药；非类固醇类抗炎试剂等。
ENBREL 是由连接人类IgGl的Fc部分的人类75千道尔顿(p75) TNFR的胞外配体结合 部分构成的二聚融合蛋白。ENBREL 的Fc成分含有CH2结构域，CH3结构域和绞链区，但 不含有IgGl的CHl结构域。ENBREL⑧在中国仓鼠卵巢(CHO)哺乳动物细胞表达系统中生产。 它含有934氨基酸以及大约150千道尔顿的表观分子量。见Smith等人(1990) &/e ce 248:1019-1023; Mohler等人(1993) /騰歸/. 151:1548-1561;美国专利号5,395,760;和美国专利号 5,605,690。
处^[^^￡ 是包括约25%鼠氨基酸序列和约75%人类氨基酸序列的嵌合单克隆抗-TNF-a抗体。REMICADE⑧包括与人类IgGl恒定区融合的鼠单克隆抗-TNF-a抗体的可变区。 见Elliott等人(1993)爿W/^z船i /2ewm. 36:1681-1690; Elliott等人(1994)丄a"cW 344:1105-1110;Baert等人(1999) Ga欲oewfero/ogy 116:22-28。 HUMIRATM是使用噬菌体显示技术鉴定出的人 类全长IgGl单克隆抗体。Piascik (2003) J爿附.P/wrw. 43:327-328。
制剂，剂量，给药途径
本发明提供了包含有效降低病理性血管生成之量的丹参酮化合物的制剂。提供与药学上 可接受的赋形剂配制的包括丹参酮化合物的组合物。在本领域中很多药学上可接受的赋形剂 都是已知的，在这里不需要详细讨论。药学上可接受的赋形剂在许多公开出版物中都有详细 描述，包括例如A. Gennaro (2000) "Remington: The Science and Practice of Pharmacy," 20th edition, Lippincott, Williams, & Wilkins; Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (1999) H.C. Ansel等人，eds.， 7th ed" Lippincott, Williams, & Wilkins;和Handbook of Pharmaceutical Excipients (2000) A.H. Kibbe等人，eds.， 3rd ed. Amer. Pharmaceutical Assoc。
药学上可接受的辅料，例如媒介物，佐剂，载体或稀释剂，可容易公开获得。此外，药 学上可接受的辅助物质，例如pH调节剂和缓冲剂，张力调节剂，稳定剂，湿润剂等，都可容 易公开获得。
适合的丹参酮化合物包括式I结构的那些化合物
其中
R1， R2， R3， R4， R5， R6， R7， R8，和R9分别独立选自H，低级烷基，羟基，低级烷 氧基，卤素，氨基，氨基烷基，硝基，杂芳基，芳基，OC(=0)R14， OC(=0)OR14， OC(=0)N(R14)2， 0(CH2)mN(R")2， C(=0)N(R14)2 ，和0(CH2)mCOOH，其中m是l-5以及R14
是H或低级烷基；
或Ri和W—起形成共价键；
或R2和R3—起形成二Z，其中Z选自O， S，禾口NH;X1和X2分别独立选自C(R")(R16)—， O， S, NH， C=0， C=S， C=NH， SO，和SCb，其 中R"和RM分别独立选自H，低级烷基，羟基，低级垸氧基，卤素，氨基，氨基烷基，硝 基，杂芳基，芳基，OC(=0)R17， OC(=0)OR17， OC(=0)N(RI7)2 ， 0(CH2)mN(R17)2 ， C(=0)N(R17)2，和0(CH2)mCOOH，其中m是l-5以及R17是H或低级垸基；
或X^卩X2—起形成-C二C—;
x3选自0，S,NH,和(CH2)p，其中p是l一3。
或其药学上可接受的盐。
适合的丹参酮化合物包括式I结构的那些化合物
其中
R1， R2， R3， R4， R5， R6， R7， R8，和R9分别独立选自H，低级垸基，羟基，低级烷 氧基，卤素，氨基，氨基烷基，硝基，杂芳基，芳基，OC(=0)R14， OC(=0)OR14， OC(=0)N(R14)2， 0(CH2)mN(R14)2， C(=0)N(R14)2，和0(CH2)mCOOH，其中m是l-5以及R14
是H或低级烷基；
或Ri和W—起形成共价键；
或r2和r3—起形成二Z，其中Z选自o， S，和NH; X1和XZ是CK);和
X3是。；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方式中，适合的化合物是15，16-二氢丹参酮，其具有如下结构
2在阅读本说明书的基础上，本领域的普通技术人员会明白，包含文中所述丹参酮化合物 的药物组合物可以以各种各样的制剂形式提供。更特别的，丹参酮化合物可以通过与适当 的、药学上可接受的载体或稀释剂结合配制成药物组合物，并且可配制成固体，半固体(例 如凝胶)，液体或气体形式的制剂，例如片剂，胶囊，粉剂，颗粒剂，软膏，溶液，栓剂， 注射剂，吸入剂和气雾剂。其中丹参酮化合物若是天然存在的化合物，药物组合物还可作为 草药制剂提供。
使用的丹参酮化合物制剂可根据需要治疗的病症或疾病，给药途径，要给药的丹参酮化 合物的量，以及本领域普通技术人员容易理解的其它变量而变化。 一般而言，正如下面将详 细讨论的，丹参酮化合物可全身或局部给药，并且丹参酮化合物的给药能够以不同方式完 成，包括但不限于口服，肠道外，静脉，动脉内，心包间，肌内，腹膜内，关节内，眼内， 局部，瘤内，癌旁，经真皮，经表皮，皮下，真皮内，肺内等途径给药。
当丹参酮化合物要被传送至眼部时(例如，用来治疗与年龄相关的黄斑退行性病变和与 病理性血管生成相关的其它眼部病症)，丹参酮化合物可通过注射(例如，眼内(例如玻璃 体内)，皮下，或静脉注射)给药。其它给药途径包括局部给药(向眼部，例如使用滴眼 剂)，结膜下，眼周，眼筋膜囊，眼球后(眼睚后)，或通过离子电渗疗法传送至眼部。
在药物剂型中，丹参酮化合物可以以其药学上可接受的盐的形式给予，或者它们还可以 单独使用或适当的联合使用，与其它药学活性化合物组合使用。以下方法和赋形剂仅仅是范 例性的，并不是对其加以限制。
丹参酮化合物可通过使它们溶解、悬浮或乳化于水性或非水性溶剂中配制成注射用制 剂，所述非水性溶剂例如植物油或其它类似油，合成的脂肪酸甘油酯，高级脂肪酸或丙二醇 的酯；如果需要的话，使用常规的添加剂，如增溶剂，等渗剂，悬浮剂，乳化剂，稳定剂和 防腐剂。适于局部，经表皮，和经真皮给药的制剂可通过使用适当的悬浮剂，增溶剂，增稠剂， 稳定剂，和防腐剂类似地制成。局部制剂还可提供持续给药15，16-二氢丹参酮或其它丹参酮 化合物的方式，例如通过引入到缓释颗粒或控释膜片中。
在一些实施方式中，活性试剂(例如，丹参酮化合物)通过持续传输系统传送。术语 "持续传输系统"在文中可和"控制传输系统"交换使用，并且包括与导管，注射装置等 组合的连续(例如控制的)传输装置(例如泵)，本领域已知许多种这样的装置。
机械或机电输液泵也可适于本发明使用。这样装置的实例包括例如在美国专利号 4,692,147; 4,360,019; 4,487,603; 4,360,019; 4,725,852; 5,820,589; 5,643,207; 6，198,966中描述的 那些装置等。 一般而言，活性试剂的传递可使用多种可再装满的泵系统中的任一种完成。泵 提供不变的控制时间。在一些实施方式中，试剂是药物不渗透容器中的液体制剂，然后以连 续方式传递至个体。
在一些实施方式中，药物传递系统是一种至少部分可植入的装置。可植入装置可使用本 领域熟知的方法和设备植入任何适合植入的位置。植入位置是药物传递装置在主体体内被引 进和定位的位置。植入位置包括但不仅仅限于真皮下，表皮下，肌内，或主体体内其它适合 的位置。因为药物传递装置在植入和去除上的便利，在一些实施方式中使用表皮下植入位 置。
本发明中适于使用的药物释放装置可以以多种操作方式中的任一种为基础。例如，药物 释放装置能够以扩散系统，对流系统，或易侵蚀系统(例如，基于侵蚀的系统)为基础。例 如，药物释放装置可以是电化泵，渗透泵，电渗透泵，蒸汽压泵，或渗透性爆裂基质 (osmotic bursting matrix)，例如，将药物引入到聚合物中，而随着该浸药聚合物材料(例 如，可生物降解的浸药聚合材料)的降解，该聚合物便提供药物制剂的释放。在其它实施方 式中，药物释放装置是以电扩散系统，电解泵，起泡泵，压电泵，水解泵等为基础。
以机械或电机输液泵为基础的药物释放装置也适合在本发明中使用。这样装置的实例包 括例如美国专利号4,692，147; 4,360,019; 4,487,603; 4,360,019; 4,725,852等中所描述的那些装 置。 一般说来，本发明的治疗方法可使用各种可再装满的、不可替换的泵系统中的任一种完 成。泵和其它对流系统通常由于它们随时间保持更一致的控制释放而优选选用。 一些实施方 式中使用渗透泵是由于它们更一致的控制释放和相对小的尺寸所结合的优点(参见例如PCT 公开申请号WO 97/27840和美国专利号5,985,305和5,728,396))。发明中适于使用的范例性渗透压驱动装置包括但不仅仅限于在美国专利号3,760,984; 3,845,770; 3,916,899; 3,923,426; 3,987,790; 3,995,631; 3,916,899; 4,016,880; 4,036,228; 4,111,202; 4,111,203; 4,203,440; 4,203,442; 4,210,139; 4,327,725; 4，627，850; 4,865,845; 5,057,318; 5,059,423; 5,112,614; 5,137,727; 5,234,692; 5,234,693; 5，728,396等中所描述的那些装置。
一些实施方式中，药物传递装置是可植入装置。药物传递装置可使用本领域熟知的方法 和装置在任何适合的植入的位置植入。如下文所记载的，植入位置是药物传递装置在主体体 内被引入和定位的位置。植入位置包括但不仅仅限于真皮下，表皮下，肌内，或主体体内其 它适合的位置。
一些实施方式中，活性试剂使用可植入药物递药系统来传送，例如可控制程序来提供试 剂给药的系统。范例性可控制程序的可植入系统包括可植入的输液泵。范例性的可植入输液 泵，或者和这样的泵有效连接的装置，例如在美国专利号4,350,155; 5,443,450; 5,814,019; 5,976,109; 6,017,328; 6,171,276; 6,241,704; 6，464，687; 6,475，180;和6，512,954中有所描述。能够 适用于本发明的更加典型的装置是自动定时给药泵(Synchromed infiision pump ) (Medtronic)。
丹参酮化合物还可以配制成生物相容性的凝胶，该凝胶可局部应用或植入(例如，提供 丹参酮化合物在内部治疗位置的持续释放)。为了使用凝胶递药而配制所期望化合物的适合 的凝胶和方法在本领域中是熟知的(参见例如美国专利号5,801,033; 5,827,937; 5,700,848;和 MATRIGEL )。
对于口服制剂，丹参酮化合物可单独使用或结合适当的添加剂制成片剂，粉剂，颗粒剂 或胶囊来使用，例如，结合常规的添加剂，如乳糖，甘露醇，玉米淀粉或马铃薯淀粉；结合 粘合剂，如微晶纤维素，纤维素衍生物，阿拉伯胶，玉米淀粉或明胶；结合崩解剂，如玉米 淀粉，马铃薯淀粉或羧甲基纤维素钠；结合润滑剂，如滑石粉或硬脂酸镁；以及如果需要的 话结合稀释剂，缓冲剂，润湿剂，防腐剂和调味剂。
丹参酮化合物可以以气雾剂经吸入给药利用。本发明化合物可以配制于增压可接受的推 进剂中，如二氯二氟甲烷，丙烷，氮等。
此外，丹参酮化合物可通过和多种基质混合制成栓剂，例如乳化基质或水溶性基质。本 发明化合物可由栓剂经直肠给药。栓剂可以包括赋形剂，如可可油，碳蜡和聚乙二醇，其在 体温下融解然而在室温下固化。可以提供用来口服或直肠给药的单位剂型，如糖浆剂，酏剂，和悬浮剂，其中每剂量单 位，例如一茶匙， 一汤匙，片或栓，含有预定量的包含一种或多种抑制剂的组合物。相似 地，用来注射或静脉给药的单位剂型可将丹参酮化合物配进组合物中，所述组合物如无菌 水、生理盐水或其它药学上可接受载体的溶液。
这里使用的术语单位剂型，是指适合作为人和/或动物主体使用的单一剂量的物理上离散 的单位，每单位含有按量计算足以产生预期的血管生成降低的预定量的丹参酮化合物，并结 合有药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂。本发明单位剂型的规格取决于应用的特定化合 物和要达到的效果，以及每一化合物在宿主体内相关的药效动力学。
药学上可接受的辅料，如赋形剂，佐剂，载体或稀释剂，可容易地公开获得。此外，药 学上可接受的辅助性物质，如pH调节剂和缓冲剂，张力调节剂，稳定剂，润湿剂等，也可容 易地公开获得。
一些实施方式中，丹参酮化合物和一种或多种如下讨论的另外的治疗剂联合治疗来给 药。典型的治疗剂包括用于治疗癌症，动脉粥样硬化，增殖性视网膜病，慢性关节炎，牛皮 癣，血管瘤等的治疗剂。 剂量，给药方案，和剂型
在本发明的上下文中，丹参酮化合物以足以使主体血管生成达到治疗性降低的量给予主 体，例如人，特别是在合理的期限内。其它考虑因素中，剂量将由所采用的具体丹参酮化合 物的效能，采用的制剂类型，和主体的情况，以及需要治疗的主题的体重来决定。剂量还会 由特定化合物给药可能伴随的任何不利副作用的存在，性质，和程度来决定。
决定降低血管生成的丹参酮化合物的有效量时，要考虑给药途径，释放系统(例如，丸 剂，凝胶或其它基质)的动力学，和丹参酮化合物的效能，以达到预期的抗血管生成效果和 最低限度的不利副作用。丹参酮化合物一般给药于接受治疗的主体的时间周期从l日至数周 变化，与治疗主体的临床情况相一致。
本领域普通技术人员很容易明白，丹参酮化合物的剂量和给药方案可根据它们的效能和/ 或相对于标准物(例如15,16-二氢丹参酮)的效能进行调整，。剂量可在约0.01 mg—lO mg 范围变化，每日给药1一20次，并且可高至日总剂量约0.1mg—100mg。如果局部应用，为了 达到全身效果，贴片或乳膏设计以约O.Olmg—lO mg范围的剂量提供全身性给药。如果局部 制剂(例如乳膏)的目的是提供局部抗血管生成效果，那么剂量可在约0.001mg—lmg的范围内。如果注射为了达到全身效应，丹参酮化合物的基质设计以约0.001mg—lmg范围的剂 量提供全身传输。如果注射为了达到局部效应，设计基质以约0.003mg—lmg范围的剂量局 部释放丹参酮化合物。
不管给药途径如何，丹参酮化合物的剂量可在任何合适的时间周期内给药，例如，l一 24小时的时间内，l至数天内等。此外，可在所选时间周期内给药多倍剂量。适合的剂量可 以分配成每日适合的亚剂量给予，特别是预防疾病的方案中。精确的治疗水平将有赖于接受 治疗的主体的反应。 传递系统
本发明进一步提供了向有需要的个体传送丹参酮化合物的传递系统，例如包含丹参酮化 合物的制剂。传递系统包括口服传递系统和注射系统。
一些实施方式中，活性试剂(例如丹参酮化合物)包装成以口服给药。本发明提供了包 括活性试剂每日剂量单位的包装单位。例如， 一些实施方式中的包装单位是常规的泡罩包装 或包括片剂、丸剂等的任何其它形式。泡罩包装将含有适当数量的单位剂型，密封于有卡纸 板，硬厚纸板，薄片或塑料垫片的密封泡罩包装中，并且用适当的覆盖物包好。每个泡罩可 以编号或作其他标记，例如从第一天开始。
一些实施方式中，主体传递系统包括注射装置。非限制性药物传递装置一般包括注射装 置，例如笔式注射器，和针状/注射器装置。 一些实施方式中，本发明提供了预先载入含有效 量活性试剂(例如丹参酮化合物)的制剂的注射传递装置。例如，所说传递装置包括预先载 有单次剂量活性试剂(例如丹参酮化合物)的注射装置。该注射装置可重复使用或一次性使 用。
笔式注射器在本领域中是公知的。可适于在本方法中使用的典型装置是来自Becton Dickinson的多种笔式注射器中的任意一种，例如BDtm Pen, BD Pen II， BDtm自幼注射 器；来自I皿oject， Inc.的笔式注射器；美国专利号5,728,074, 6,096,010， 6,146,361， 6,248,095, 6,277,099,和6,221,053中讨论的任一种药物传递笔装置等。药物传递笔可以是一次性的，或 可重复使用和可再装满的。 适合治疗的主体
适于使用本发明方法治疗的主体("需要治疗的个体")包括患有上述病症或紊乱的主 体，例如接受降低血管生成治疗的紊乱。适于治疗的主体包括患有肿瘤的个体，其中肿瘤中的癌细胞有转移的风险；患有由病理性血管生成导致的眼部紊乱的个体，例如患有与年龄相 关的黄斑退行性改变的个体，患有湿性AMD的个体等；遭受关节炎痛苦的个体；等等，例如患 有与如上讨论的病理性血管生成相关或由其产生的紊乱的任何个体。
实施例
提出以下实施例是为了向本领域普通技术人员提供如何实施和使用本发明的完全公开和 说明，并非对发明范围的限制或表示下列实验是本发明全部的实验或仅能进行的实验。尽管 已经努力确保关于所用数据(例如，量，温度等)的精确性，但应当说明的是还存在某些实 验误差和偏差。除非另外指出，份是重量份，分子量按平均分子量计，温度为摄氏温度，以 及压力为大气压或接近大气压。可使用标准縮写，例如，bp，碱基对；kb，千碱基；pl，微 微升；s或sec，秒；min，分钟；h或hr,小时；aa,氨基酸；kb，千碱基；bp，碱基对； nt，核苷酸；i.m.，肌内的(地)；i.p.，腹膜内的(地)；S.C.,皮下的(地)；等等。 实施例1: 15,16-二氢丹参酮降低内皮细胞增生
根据Connally等人(1986) (Anal. Biochem. 152:136-140)的程序和改进法(Liang and Wong (2000) Angiogenesis: From the Molecular to Integrative Pharmacology, edited by Maradoudakis, Kluwer Academic/Plenum Publishers, New York, pp 209-223 )进行内皮细胞增殖 试验。从美国标准培养物收集所(ATCC; ATCC No. CCL-209)获得的牛心肺动脉内皮 (CPAE)细胞在MEM-10E中生长至近95X融合。用0.25%胰岛素溶液使细胞从组织培养瓶 中释放，然后以10000细胞/孔的密度涂覆在24孔组织培养皿的相同培养基中。将培养皿于37 °C、 5%二氧化碳的细菌培养器中培养8小时后，加入试验样品和对照样品。每种样品以 10(^1/孔装入两个不同的孔中以保证再现性。样品培养60小时后，吸出培养基，然后根据细 胞酸性酸磷脂酶的色度测量法测量细胞数量。
结果显示15，16-二氢丹参酮I可抑制内皮细胞增殖。在50ng/ml的低浓度下，15,16-二氢丹 参酮1达到了84.4%的内皮细胞生长抑制率。也完成了其它15，16-二氢丹参酮I样品对内皮细胞 增殖抑制的浓度依赖性研究，结果显示在图l中。显然，在非常低的浓度下，15，16-二氢丹参 酮I就是内皮细胞增殖的强抑制剂。此外，15,16-二氢丹参酮1以浓度依赖方式抑制内皮细胞增 殖。15,16-二氢丹参酮I还是几种体内癌细胞系的有效抑制剂，包括SW480 (结肠癌)和HTB 72 (黑素瘤)癌细胞系。在非常低的约2微克每毫升的浓度下，就达到100%抑制。这提示该化合 物有另外的转移抑制活性。 实施例2:用丹参酮化合物治疗AMD
表现出新血管生成("湿性")的年龄相关性黄斑退行性改变(AMD)症状的个体用多剂 量的丹参酮化合物以规律的时间间隔进行治疗。包括浓度为50 pg/ml， 100 ^g/ml，和200 pg/ml 丹参酮化合物的制剂，以50吗，100吗，或200吗的总剂量，分别通过眼内注射给药于个体。 通过让患者阅读标准字母表来测定视力改善。
虽然本发明巳经参考其特定的实施方式进行了描述，但本领域技术人员应该理解，在不 背离本发明实质精神和范围的前提下，可以进行多种改变或等同替换。另外，对于本发明的
客观精神和范围而言，可以进行许多修饰以适应特殊情形，原料，物质组成，过程，工序或 步骤。所有这样的修饰应该在后面所附的权利要求范围内。
权利要求
1. 式I的丹参酮化合物或其药学上可接受的盐在制备用来降低哺乳动物中病理性血管生成的药物中的应用其中R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，和R9分别独立选自H，低级烷基，羟基，低级烷氧基，卤素，氨基，氨基烷基，硝基，杂芳基，芳基，OC(＝O)R14，OC(＝O)OR14，OC(＝O)N(R14)2，O(CH2)mN(R14)2，C(＝O)N(R14)2，和O(CH2)mCOOH，其中m是1-5和R14是H或低级烷基；或R1和R2一起形成共价键；或R2和R3一起形成＝Z，其中Z选自O，S，和NH；X1和X2是C＝O；和X3是O。
2.如权利要求1中所述的应用，其中所述丹参酮化合物是如下结构的化合物或其药学上可接受的盐。
3.如权利要求1或2中所述的应用，其中所述病理性血管生成和癌细胞转移相关。
4.式I的丹参酮化合物或其药学上可接受的盐和至少一种另外的抗血管生成药物组合在 制备用来降低哺乳动物中病理性血管生成的药物中的应用<formula>formula see original document page 3</formula>其中R1, R2， R3， R4， R5， R6, R7， R8，和r9分别独立选自H，低级垸基，羟基，低级烷 氧基，卤素，氨基，氨基烷基，硝基，杂芳基，芳基，OC(=0)R14， OC(=0)OR14， OC(=0)N(R14)2， 0(CH2)mN(R14)2， C(=0)N(R14)2,和0(CH2)mCOOH，其中m是l-5禾口R14是H 或低级烷基；或W和rz—起形成共价键；或R2和r3—起形成Z，其中Z选自O， S，和NH;X!和xZ是C-0;和X3是0。
5.如权利要求4中所述的应用，其中所述丹参酮化合物是如下结构的化合物<formula>formula see original document page 3</formula>或其药学上可接受的盐。
6...式I的丹参酮化合物或其药学上可接受的盐在制备用来治疗哺乳动物中与病理性血管 生成有关或由其导致的疾病或病症的药物中的应用，其中R1， R2, R3， R4， R5， R6， R7， R8，和R9分别独立选自H，低级烷基，羟基，低级烷 氧基，卤素，氨基，氨基垸基，硝基，杂芳基，芳基，OC(=0)R14， OC(=0)OR14， OC(=0)N(R14)2， 0(CH2)mN(R14)2， C(=0)N(R14)2，和0(CH2)mCOOH，其中m是l-5和R14是H 或低级垸基；或w和Fe—起形成共价键；或R2和R3—起形成^Z，其中Z选自O， S，和NH; Xi和X2是C二0;和X3是0。
7.如权利要求6中所述的方法，其中所述丹参酮化合物是如下结构的化合物或其药学上可接受的盐。
8.式I的丹参酮化合物或其药学上可接受的盐和至少一种另外的抗血管生成药物组合在制备用来治疗哺乳动物中与病理性血管生成有关或由其导致的疾病或病症的药物中的应用<formula>formula see original document page 5</formula>其中R1， R2, R3， R4， R5， R6， R7， R8，和R9分别独立选自H，低级垸基，羟基，低级垸 氧基，卤素，氨基，氨基烷基，硝基，杂芳基，芳基，OC(=0)R14， OC(=0)OR14, OC(=0)N(R14)2， 0(CH2)mN(R14)2， C(=0)N(R14)2，和0(CH2)mCOOH，其中m是l-5和R14是H 或低级烷基；或R/和W—起形成共价键；或^和113—起形成=2，其中Z选自O， S，和NH; Xi和xZ是CO;和 X3是0。
9.如权利要求8中所述的应用，其中所述丹参酮化合物是如下结构的化合物<formula>formula see original document page 5</formula>或其药学上可接受的盐。
10.如权利要求6_9中任一项所述的应用，其中所述与病理性血管生成有关或由其导致 的疾病或病症是和病理性血管生成有关的关节炎病症。
11.如权利要求10中所述的应用，其中所述关节炎病症是骨关节炎。
12. 如权利要求10中所述的应用，其中所述关节炎病症是类风湿性关节炎。
13. 如权利要求10中所述的应用，其中所述关节炎病症是牛皮癣性关节炎。
14. 如权利要求10中所述的应用，当式I的丹参酮化合物或其药学上可接受的盐和至少 一种另外的抗血管生成药物组合时，所述另外的抗血管生成药物是适于治疗关节炎病症的治 疗剂。
15. 如权利要求6 — 9中任一项所述的应用，其中所述和病理性血管生成有关或由其导致 的疾病或病症是和病理性血管生成有关的眼部病症。
16. 如权利要求15中所述的应用，其中所述眼部病症是糖尿病性视网膜病。
17. 如权利要求15中所述的应用，其中所述眼部病症是年龄相关性黄斑退行性病变。
18. 如权利要求15中所述的应用，当式I的丹参酮化合物或其药学上可接受的盐和至少 一种另外的抗血管生成药物组合时，所述另外的抗血管生成药物是血管'内皮生长因子拮抗 剂。
全文摘要
本发明提供了抗血管生成的组合物及其使用方法。所述方法通常包括给予个体有效量的丹参酮化合物。所述方法对于治疗与血管生成，特别是病理性血管生成相关或由其产生的病症是有用的。本发明进一步提供了治疗与血管生成相关或由其产生的病症的方法。
文档编号A61K31/58GK101412744SQ200810127838
公开日2009年4月22日 申请日期2008年7月2日 优先权日2007年10月5日
发明者汪建平 申请人:汪建平