专利名称：一种海藻低聚糖及其制备方法和在抗辐射药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种海藻低聚糖及其制备方法和在抗辐射药物中的应用。
技术背景20世纪四十年代以来，核反应堆研制成功后，核能的应用一方面对经济、社会发展起 到了巨大的推动作用，另一方面对辐射防护和放射生物学研究也提出了新的要求。战争中 核武器的使用，以及核能领域的发展和核技术在经济领域及医学领域的广泛应用，不可避 免地造成了人员的辐射损伤。目前，用于抗辐射损伤治疗的抗辐射药物主要有氨磷汀、茜 草提取物、碘化钾、细胞因子类药物和金属元素螯合物。而有效的化学辐射防护药物都有 较大的毒副作用，使其临床应用受到极大限制。许多天然多糖和化学修饰多糖对辐射损伤 具有明显保护作用，其作用与多糖的结构、取代基团、分子量、溶解度等有关，由于糖工 程药物研究开发中一些关键技术问题没有得到解决，目前，多糖或低聚糖类抗辐射药物未 见报道。 发明内容本发明的目的是提供一种海藻低聚糖及其制备方法和在抗辐射药物中的应用，它能弥 补现有技术的上述不足。一种海藻低聚糖，其特征在于该海藻低聚糖的糖链中含有鼠李糖基、木糖基、葡萄糖 基、半乳糖基、甘露糖基和葡萄糖醛酸基，是以cc-l,2-糖苷键和a-l,3-糖苷键连接的线形分 子；鼠李糖基占单糖总摩尔百分含量的60~卯％，硫酸基位于鼠李糖基的C-3位和/或C-2位 和/或C-4位，海藻低聚糖中硫酸基的重量百分含量为10 40%;分子量为3000 10000道尔 顿。上述的海藻低聚糖的制备方法，其特征在于将海藻藻体加水浸泡匀浆，加热提取，分 离出清液，将所得清液浓縮，脱盐，将脱盐后的溶液浓縮，脱蛋白，再将脱蛋白后的溶液 浓縮，加入酸或氧化剂，然后加热反应，冷却，加碱中和或加酶终止反应，分离出清液， 然后浓縮，脱盐，将脱盐后的清液浓縮，用超滤膜分离，将收集的溶液脱盐，浓縮，干燥， 粉碎。上述海藻低聚糖在制备抗辐射药物中的应用。制备本发明的海藻低聚糖所用的原料独特，得到的产品组成与结构特异，抗辐射作用 好，可以通过添加各种附剂制成片剂、散剂、颗粒剂、胶囊等作为预防和治疗辐射损伤的 药物，将具有良好的市场应用前景。
具体实施方式
加入海藻重量1~60倍的水浸泡匀浆，在60 100'C水浴中搅拌提 取多糖0.01 8小时，离心弃去杂质，取清液，将所得清液减压浓縮，然后进行透析或超滤 去除盐，将去除盐后的多糖溶液减压浓縮，使水溶胶中多糖的重量百分浓度为0.1 6，然后 用酶法和/或Sevage法去除多糖中的蛋白质，再将去除蛋白质后的多糖溶液减压浓縮，使水 溶胶中多糖的重量百分浓度为0.1 ~6，加入酸至水溶液中的摩尔浓度为O.01mol/L~3.0 mol/L，在30~100°C下反应1~600分钟，反应结束后，将反应物用冷水浴冷却至室温，加 碱中和至中性，终止反应，离心弃去杂质，取清液，将所得清液减压浓縮，然后进行透析 去除盐，将去除盐后的多糖溶液减压浓縮后，通过截留分子量10000的超滤膜分离，收集 超滤膜外的溶液，用透析法去除盐，将去除盐后的溶液减压浓縮后，冷冻干燥，粉碎即得 本发明的海藻低聚糖。本发明的海藻低聚糖通过与淀粉和/或糖粉充分混合后，用浓度为75%(重量百分浓度， 下同)的乙醇水溶液制软材，然后过12目不锈钢筛进行制粒、于50 6(TC下干燥后，通过 14目的不锈钢筛整粒。再加入海藻低聚糖1%重量的硬脂酸镁和/或滑石粉，充分混合均匀 后按一般压制片芯要求进行压片，使得片芯具有适宜的硬度。将压制得到的素片用糖浆和 滑石粉进行交替包粉衣层15 18层、包糖衣层10 15层，最后打光即得具有抗辐射作用的 片剂。本实施例中所述的海藻藻体可为礁膜、宽礁膜、袋礁膜、北极礁膜、破礁膜、囊礁膜、 厚礁膜、尖种礁膜、皱礁膜、褐色礁膜、石莼、孔石莼、长石莼、花石莼或硬石莼；所述 的酸为盐酸、硫酸、硝酸、甲酸、草酸或三氟乙酸;加入酸的量为至水溶胶中的浓度为0.01-3.0 mol/L;所述的加入酸还可改加入氧化剂；所述的氧化剂为过氧化氢、次氯酸、次氯酸钠、 亚硝酸或亚硝酸钠；加入氧化剂的量为至水溶胶中的重量百分浓度为0.01 10;所述的加热 反应时间为1-600分钟，加热反应温度为30-100'C;所述的碱为氢氧化钠、氢氧化钾、碳 酸钠、碳酸钾、碳酸氢钾、氢氧化铵或碳酸氢钠；所述的超滤膜为截留分子量10000、 8000、 5000或3000;所述的片剂还可改为散剂、颗粒剂或胶囊。本发明的海藻低聚糖为类白色或白色无定形固体，用气相色谱测定6次制得的海藻低 聚糖的单糖组成，用硫酸钡-明胶比浊法测定硫酸基含量，用高效凝胶渗透色谱法测定分子 量，用高碘酸氧化、Smith(史密斯)降解、甲基化分析、红外光谱、核磁共振波谱和质谱测 定了糖链结构，并通过分析确定，得到的海藻低聚糖的糖链中含有鼠李糖基、木糖基、葡 萄糖基、半乳糖基、甘露糖基和葡萄糖醛酸基，是以a-l，2-糖苷键和a-l，3-糖苷键连接的线 形分子；鼠李糖基占单糖总摩尔百分含量的60~90%，硫酸基位于鼠李糖基的C-3位和/或 C-2位和/或C-4位，海藻低聚糖中硫酸基的重量百分含量为10~40%;分子量为3000-10000 道尔顿。本发明的海藻低聚糖的抗辐射作用是通过对辐射损伤小鼠的存活率、外周血白细胞总数、血小板数、红细胞数、脾脏指数、脾脏淋巴细胞增殖能力、全血谷胱甘肽过氧化物酶 活性、血清超氧化物歧化酶活性以及脂质过氧化产物丙二醛含量的影响进行评价的，实验 结果证明，本发明的产品具有明显的抗辐射作用。 具体的实验方法和结果如下1. 海藻低聚糖对辐射损伤小鼠30d存活率的影响小鼠150只随机分为正常对照组、 照射对照组和3个海藻低聚糖组。海藻低聚糖组照射前连续10d和照射后继续给药15d， 每天腹腔给药一次，剂量分别为4， 8和16mg/kg，正常对照组和照射对照组均腹腔注射等 量生理盐水0.2!111/只，计算30d存活率。实验结果表明，海藻低聚糖组30d存活率显著提 高，与照射对照组比较有显著性差异(PO.Ol)，表明本海藻低聚糖能显著提高辐射损伤小鼠 30d的存活率，延长生存时间。2. 海藻低聚糖对辐射损伤小鼠外周血白细胞总数(WBC)、血小板数(PLT)、红细胞数 (RBC)的影响小鼠60只随机分为正常对照组、照射对照组和3个海藻低聚糖组。海藻低 聚糖组照射前连续10d和照射后继续给药15d，每天腹腔给药一次，剂量分别为4,8和 16mg/kg，正常对照组和照射对照组均腹腔注射等量生理盐水0.21111/只。在照射后O， 5， 10， 15d取小鼠静脉血，测定小鼠外周血WBC、 PLT、 RBC。 WBC、 PLT和RBC用血细胞自 动分析仪测定。实验结果表明，该海藻低聚糖能加速辐射损伤小鼠外周血WBC、 PLT和 RBC的恢复，与照射对照组相比差异显著(PO.Ol)，表明本海藻低聚糖具有显著防护辐射 对机体造血系统的影响。造血系统是辐射损伤较为敏感的组织器官之一，有效地保护造血 组织、促进造血功能恢复是辐射保护的重要方面。白细胞数恢复是辐射损伤得到改善的重 要标志之一，海藻低聚糖组照射后白细胞数量迅速升高可能由海藻低聚糖刺激白细胞产生 系统所致，而血小板数增加也许与促红细胞生成作用有关。3. 海藻低聚糖对辐射损伤小鼠抗氧化酶活性、脂质过氧化物水平的影响小鼠60只随 机分为正常对照组、照射对照组和3个海藻低聚糖组。海藻低聚糖组照射前连续10d和照射 后继续给药15d，每天腹腔给药一次，剂量分别为4，8和16mg/kg，正常对照组和照射对照组 均腹腔注射等量生理盐水0.2加1/只。在照射后O， 5， 10， 15d取小鼠静脉血，测定小鼠全血 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和血清脂质过氧 化产物丙二醛(MDA)含量。全血GSH-Px活性、血清SOD活性及血清MDA含量，按试剂 盒说明书测定。实验结果表明，该海藻低聚糖能显著增高辐射损伤小鼠机体的抗氧化物酶 GSH-Px和SOD活性，降低脂质过氧化产物MDA含量，与照射对照组相比差异显著 (PO.Ol)，表明本海藻低聚糖具有显著防护辐射对机体抗氧化系统功能的影响。4. 海藻低聚糖对辐射损伤小鼠脾脏指数、脾脏淋巴细胞增殖能力的影响小鼠60只 随机分为正常对照组、照射对照组和3个海藻低聚糖组。海藻低聚糖组照射前连续10d和 照射后继续给药15d，每天腹腔给药一次，剂量分别为4，g和16mg/kg，正常对照组和照射对照组均腹腔注射等量生理盐水0.21111/只。在照射后15d时，取小鼠脾脏测定小鼠脾脏指 数和脾脏淋巴细胞增殖反应。脾脏指数测定小鼠称重，取小鼠脾脏称重，计算脾脏指数; 脾脏指数=脾脏重量"000/体重。脾淋巴细胞增殖反应测定，采用MTT比色法。实验结果 表明，该海藻低聚糖能明显提高辐射损伤小鼠的脾脏指数和增强脾脏淋巴细胞的增殖能力， 与照射对照组相比差异显著(PO.01)，表明本海藻低聚糖具有显著防护辐射对机体免疫系统 功能的影响。机体淋巴细胞在受到促有丝分裂原特异的刺激后，可导致细胞增殖行为的变 化，淋巴细胞的增殖反应表示了细胞活化程度。
权利要求
1.一种海藻低聚糖，其特征在于该海藻低聚糖的糖链中含有鼠李糖基、木糖基、葡萄糖基、半乳糖基、甘露糖基和葡萄糖醛酸基，是以α-1，2-糖苷键和α-1，3-糖苷键连接的线形分子；鼠李糖基占单糖总摩尔百分含量的60～90％，硫酸基位于鼠李糖基的C-3位和/或C-2位和/或C-4位，海藻低聚糖中硫酸基的重量百分含量为10～40％；分子量为3000～10000道尔顿。
2. 权利要求1所述的海藻低聚糖的制备方法，其特征在于将海藻藻体加水浸泡匀 浆，加热提取，分离出清液，将所得清液浓縮，脱盐，将脱盐后的溶液浓縮，脱蛋 白，再将脱蛋白后的溶液浓縮，加入酸或氧化剂，然后加热反应，冷却，加碱中和 或加酶终止反应，分离出清液，然后浓縮，脱盐，将脱盐后的清液浓縮，用超滤膜 分离，将收集的溶液脱盐，浓缩，干燥，粉碎。
3. 权利要求1所述的海藻低聚糖在制备抗辐射药物中的应用。
全文摘要
一种海藻低聚糖，其特征在于该海藻低聚糖的糖链中含有鼠李糖基、木糖基、葡萄糖基、半乳糖基、甘露糖基和葡萄糖醛酸基，海藻低聚糖中硫酸基的重量百分含量为10～40％，分子量为3000～10000道尔顿。制备时将海藻藻体加水浸泡匀浆，加热提取，分离出清液，将所得清液浓缩，脱盐，将脱盐后的溶液浓缩，脱蛋白，再将脱蛋白后的溶液浓缩，加入酸或氧化剂，然后加热反应，冷却，加碱中和或加酶终止反应，分离出清液，然后浓缩，脱盐，将脱盐后的清液浓缩，用超滤膜分离，将收集的溶液脱盐，浓缩，干燥，粉碎。本发明的海藻低聚糖可用于制备一种新型的抗辐射药物。
文档编号A61P17/16GK101328228SQ20081013809
公开日2008年12月24日 申请日期2008年7月16日 优先权日2008年7月16日
发明者翊 李, 王海青 申请人:中国人民解放军济南军区第四○一医院