专利名称：一种青蒿琥酯纳米乳药物组合物及其制备方法
技术领域：
本发明属于兽药领域，涉及一种高效杀灭疟原虫、牛羊泰勒焦虫的抗寄 生虫药物，具体是指一种青蒿琥酯纳米乳药物及其制备方法。
背景技术：
青蒿琥酯(Artesunate)，化学名为二氢青蒿素-1，2-a-琥珀酸单酯，是具有 倍半萜结构的抗疟药青蒿素的衍生物，呈无色结晶或白色结晶性粉末，无臭， 几乎无味。微溶于水，易溶于乙醇、丙酮、氯仿。青蒿琥酯作为一有效的抗 疟药，对间日疟、恶性疟、脑型疟均有效。兽医临床主要用于治疗牛、羊泰 勒焦虫病及双芽fe虫病。青蒿琥酯的传统片剂不能克服肝脏的首过效应，而 且，市售的青蒿號酯粉针剂在人医临床肌注时病人有疼痛感。此外，由于青 蒿琥酯在水中溶解性差，难以有效地被输送至病变部位及细胞内，另外，其 钠盐稳定性差，进而造成其生物利用度低，病人用药次数频繁，耐受性差， 药效差，大大限制其临床应用。
发明内容
针对青蒿琥酯粉针剂现有剂型的缺陷和技术的不足，本发明的目的在于 提供一种青蒿琥酯纳米乳药物组合物。将药物增溶到纳米乳体系中制成兽医 临床用于抗泰勒焦虫及双芽焦虫的含青蒿琥酯纳米乳剂。本发明将青蒿琥酯 制成纳米乳，极大地增强了青蒿琥酯的效力，同时也解决了青蒿琥酯水溶性 差，而钠盐稳定性差等缺点。
由于纳米乳基质属于纳米级乳液，可以使药物增溶到纳米乳体系中，提 高其稳定性，可最大化地提高其药物的利用率，故本发明将青蒿琥酯增溶于 纳米乳基质，制成纳米级药物，旨在通过该发明为兽医临床上提供新型的抗 寄生虫药物，起到对动物寄生虫病的治疗和预防作用。
本发明的另一 目的是提供青蒿琥酯纳米乳药物组合物的制备方法。
3本发明的目的可以通过以下技术方案来实现-
一种青蒿琥酯纳米乳药物组合物，其配方组分用量在下述重量百分比范 围都具有较好的效果 配方
油酸乙酯 1.6% 8%;
Tween-80 13.2 30%; 正丁醇 10°/。 18。/0; 超纯水 50.4% 74%; 青蒿琥酯 0.5% 11%。 配方
油酸乙酯1.6 6.5%、 Tween画80 13.2 27%、正丁醇10% 13.2%、青蒿 琥酯0.5°/。 5%、超纯水50.4°/。 60%; 配方
油酸乙酯6%、 Tween-80 24%、正丁醇11.5%、超纯水53.5%、青蒿琥 酯5%。
制备青蒿琥酯纳米乳药物的方法，包括以下步骤 一种制备青蒿琥酯纳米乳药物的方法，包括以下步骤
a) 称取各药物组分油酸乙酯、Tween-80、正丁醇、超纯水、青蒿琥酯备
用；
b) 在室温条件下，将a)称取的油酸乙酯、Tween-80、正丁醇、青蒿琥 酯置于恒温磁力，觉拌器上以200 400rpm搅拌混匀，搅拌至药物溶于体系中；
c) 向混合物中缓慢滴加超纯水，边滴加边搅拌；开始时体系黏度较小， 随着水量的增加；体系逐渐变得黏稠，当体系出现液晶相或W/0 (油包水型) 纳米乳，继续滴加超纯水并不断的搅拌，当水量达到一定量时，体系呈透亮 变稀，即是0/W型纳米乳；再将超纯水加到足够量，纳米乳呈现澄清透亮、 淡黄色的液体。
本发明是将青蒿琥酯增溶于纳米乳基质制备成青蒿琥酯纳米乳药物，并 可以根据实际需要用超纯水稀释成不同浓度的青蒿琥酯纳米乳液。
青蒿琥酯纳米乳药物经透射电镜检测，按配方制成的纳米乳外观呈现澄清透亮，淡黄色的液体；纳米乳滴粒径分布在50 70nm之间》平均粒径60nm (见图1)。
本发明热力学稳定性好，贮存稳定性好，久置不分层，甚至在离心加速 试验中12000rpm离心30min不分层。本发明防腐性能较好，不需要另加防腐 剂，所以比市售同类产品具有更好的防腐和防霉变能力，保质期时间长。
含量测定
将制备好的青蒿琥酯纳米乳用HPLC法进行含量测定，采用安捷仑1100 系歹U高效液相色谱仪(Agilent 1100 series ); 色谱柱ODS柱 (4.6xl00mm,5um);检测器G1314A紫外可变波长检测器；泵G1311A 四元泵；柱温箱G1316A;流动相乙腈冰(65:35,用稀醋酸调PH二3.8); 柱温为室温；检测波长210nm;进样量；20ui
标准曲线的建立精密称取青蒿琥酯标准品:lOmg，置100ml容量瓶中， 用流动相溶解并稀释至刻度，配成lOOpg/ml的青蒿琥酯对照品储备液，精密 吸取青蒿琥酯对照品储备液lOml， 8ml， 6ml， 4ml， 2ml， lml，分别置于10ml 容量品中，用流动相稀释至刻度，摇匀，配置成浓度分别为100pg/ml， 80pg/ml， 60ng/ml,40|ig/ml, 20jig/ml， lOpg/ml系列的青蒿琥酯标准液，分别量取20pl 注入液相色谱仪，记录色谱图，计算峰面积，以峰面积A对青蒿琥酯浓度C 进行线性回归，得标准曲线的回归方程A=34961C- 36.725(r=0.9999)，表明 青蒿琥酯在10 100pg/ml浓度范围内有良好的线性关系。
含量测定精密量取己知含量的青蒿琥酯纳米乳O.lml,置100ml容量瓶 中，以乙腈一水(63:35)稀释至刻度，超声混合均匀，静置10min，过滤， 取续滤液用微孔滤膜(0.45pm)滤过，进样20ji1,记录色谱图，计算峰面积， 由标准曲线计算药物含量，结果见表l。
表l青蒿琥酯纳米乳含量测定结果(n=3) Table 1 Contents of Artesunate nanoemulsion (n=3)
批号，相当标示量(％)RSD(%)
A100.361.23
B99.890.79
C99.520.98
5急性毒性试验
将制备好的纳米乳以15g/kg灌胃，结果小鼠均无死亡，按照药物急性毒 性分级标准，该K方青蒿琥酯纳米乳属于实际无毒。 综上所述，本发明具有如下的有益效果-
1.传统的青蒿琥酯注射剂为青蒿琥酯钠，放置不稳定，需要现用现配， 很不方便。本发明剂型为青蒿琥酯纳米级乳液，给药方便，能有效杀灭动物 体内外寄生虫，大大提高疗效(详见试验例)。
i青蒿琥酯纳米乳安全、高效，是一种有一定缓释作用的抗寄生虫纳米 级药物。
3. 本发明热力学稳定性好，贮存稳定性好，久置不分层，甚至在离心加 速试验中也不会分层，保质期时间长。
4. 本发明属于纳米级药物，外观澄清透明，乳液滴粒径平均为60nm,分 散度良好，可用超纯水稀释成为不同浓度梯度的纳米乳液。
5. 通过上述方法制备纳米乳基质工艺简单，便于操作，而且所需原料价 格适中。
图1为青蒿琥酯纳米乳药物透射电镜图。
具体实施例方式
以下通过试验例来阐述本发明所述药物的有益效果，这些试验例包括了本 发明药物的药效学试验和临床疗效观察试验。
试验例本发明对羔羊进行血孢子虫病防治试验
试验材料'
选本发明药物青蒿琥酯纳米乳(中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农 业部新兽药工程重点开放实验室制备，载药量27.52mg/g)，焦虫净(粉针剂， 0.2g/支，专用溶媒2.5ml/支，中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所提供， 批号980910)试验方法-
选择己感染患病且年龄、体重接近的羔羊i20只作为试验病例。将血孢子 虫病羔羊按试验点分组，每个试验点选30只羔羊，随即分为4组(两个试验 组和两个焦虫净对照组)。试验组纳米乳以2个剂量(0.1mg/kg与0.4mg/kg) 肌肉注射，每天1次，连用2 3天。焦虫净对照组以0.5mg/kg和1mg/kg深 部肌注，每天1次，连用3 4天。治疗后以用药次数、体重变化、治愈时间、 治愈率、平均用药成本等指标进行疗效综合评估，详见表2。
表2青蒿琥酯纳米乳和焦虫净治疗羔羊血孢子虫病试验结果
药物剂量 /mg.kg小动物数/ 只月龄试验前体 淑g试验后体 ——一渔g —治愈率/%治愈时间/d
纳米乳0.3306 78.9±3.08.7±1.997.5%4
纳米乳0.7306 78.6±2.68.5±2.3100%3
焦虫净0.5306 78.7±2.78.5±2.296.7%
焦虫净1.0306 78.8±3.1100%4
经过对试验点使用青蒿琥酯纳米乳和焦虫净治疗羔羊血孢子虫病结果比
较分析(见表2)，青蒿琥酯纳米乳治愈所需时间短，治愈率较高，以青蒿琥 酯纳米乳高剂量组为佳。
下面，再通过实施例对本发明进一步予以说明 实施例l
1) 称取油酸乙酯6g、 Tween-80 22g、正丁醇11.5g、青蒿琥酯3g、超纯 水57.5g备用；
2) 在室温4件下，将上所述重量的油酸乙酯、Tween-80、正丁醇、青蒿 琥酯置于恒温磁力搅拌器上200 400rpm搅拌混匀，搅拌至药物溶于体系中。
3) 向混合物中缓慢滴加超纯水，边滴加边搅拌；开始时体系黏度较小， 随着水量增加至16ml时，体系逐渐变得黏稠，此时体系可能出现液晶相或 W/0 (油包水型)纳米乳，继续滴加并不断的搅拌，当水量达到32ml时，体 系会突然变透亮变稀，此时产生的即是O/W型纳米乳，将超纯水加到57.5ml， 体系流动性良好，制备成澄清透明的OAV型纳米乳。
实施例2 :
71) 称取各药物组分油酸乙酯4,6g、 Tween-80 13.2g、正丁醇8。7g、青蒿 琥酯2g、超纯水71.5g备用。
2) 在室温条件下，将上所述重量的油酸乙酯、Tween-80、正丁醇、超纯 水、青蒿琥酯置于恒温磁力搅拌器上200 400rpm搅拌混匀，搅拌至药物溶 于上述体系中。
3) 向混合物中缓慢滴加超纯水，边滴加边搅拌；开始时体系黏度较小， 随着水量增加，体系逐渐变得黏稠，此时体系可能出现液晶相或W/0 (油包 水型)纳米乳，继续滴加并不断的搅拌，当水量达到50ml时，体系会突然变 透亮变稀，此时产生的即是0/W型纳米乳，将超纯水加到71.5ml，体系流动 性良好，制备成澄清透明的O/W型纳米乳。
实施例3
1) 称取各药物组分油酸乙酯6g、 Tween-80 24g、正丁醇11.5g,超纯水 53.5g、青蒿琥酯5g备用。
2) 在室温条件下，将上所述重量的油酸乙酯、Tween-80、正丁醇、超纯 水、青蒿琥酯置于恒温磁力搅拌器上200 400rpm搅拌混匀，搅拌至药物溶 于上述体系中。
3) 向混合物中缓慢滴加超纯水，边滴加边搅拌；开始时体系黏度较小， 随着水量增加至，体系逐渐变得黏稠，此时体系可能出现液晶相或W/O (油 包水型)纳米乳，继续滴加并不断的搅拌，当水量达到28ml时，体系会突然 变透亮变稀，此时产生的即是0/W型纳米乳，将超纯水加到53.5ml，体系流 动性良好，制备成澄清透明的0/W型纳米乳。
上述三个实施例中，以实施例3的配方比例最佳，载药量最高。三个实 施例中制备的纳米乳其颜色，透明度无明显变化，0'C 6(TC放置均很稳定。
权利要求
1.一种青蒿琥酯纳米乳药物组合物，由下列重量百分比的原料组成油酸乙酯1.6％～8％；Tween-8013.2～30％；正丁醇 10％～18％；超纯水 50.4％～74％；青蒿琥酯0.5％～11％。
2. 根据权利要求1所述的青蒿琥酯纳米乳药物，其中各原料优选的重量百分比为油酸乙酯1.6 6.5°/o、 Tween-80 13.2 27%、正丁醇10% 13。2%、超纯 水50.4% 60%、青蒿琥酯0.5% 5%。
3. 根据权利要求1所述的青蒿琥酯纳米乳药物，其中各原料最佳的重量百分比为油酸乙酯'6%、 Tween-80 24%、正丁醇11.5%、超纯水53.5%、青蒿琥 酯5%。
4. 根据权利要求1 3所述的--种青蒿琥酯纳米乳药物，其特征在于 所述的纳米乳药物的乳液滴粒径为10 100nm。
5. —种制备权利要求1所述的青蒿琥酯纳米乳药物的方法，包括以下步 骤 ，a) 称取各药物组分油酸乙酯、Tween-80、正丁醇、超纯水、青蒿琥酯备用；b) 在室温舉件下，将a)称取的油酸乙酯、Tween-80、正丁醇、青蒿琥 酯置于恒温磁力揮拌器上以200 400rpm搅拌混匀，搅拌至药物溶于体系中；c)向混合物中缓慢滴加超纯水，边滴加边搅拌；开始时体系黏度较小， 随着水量的增加，体系逐渐变得黏稠，当体系出现液晶相或W/0 (油包水型) 纳米乳，继续滴加超纯水并不断的搅拌，当水量达到一定量时，体系呈透亮 变稀，即是0/W型纳米乳；再将超纯水加到足够量，纳米乳呈现澄清透亮、 淡黄色的液体。
全文摘要
本发明公开了一种青蒿琥酯纳米乳药物，由油酸乙酯、Tween-80、正丁醇、超纯水、青蒿琥酯组成的O/W型(水包油型)纳米乳体系。该纳米乳药物有效地克服了传统片剂在肝脏的首过效应，注射无疼痛感，极大地提高了原青蒿琥酯的杀虫驱虫作用。同时该纳米乳体系具有较高的载药量，放置稳定，与市售青蒿琥酯注射剂相比有一定的缓释作用，而且给药方便，极大地提高了生物利用度。此外，通过对小鼠的急性毒性实验和临床药效试验表明，该纳米乳无明显毒副作用，是一种安全、可靠、高效的纳米级抗寄生虫药物。
文档编号A61K9/107GK101623255SQ20081015035
公开日2010年1月13日 申请日期2008年7月8日 优先权日2008年7月8日
发明者吴培星, 周绪正, 张继瑜, 李剑勇, 李金善, 牛建荣, 胡宏伟, 魏小娟 申请人:中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所