专利名称：FGFR2IIIc胞外段在制备预防、治疗特发性肺纤维化药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于基因工程药物领域，具体涉及FGFR2IIIc胞外段在制 备预防、治疗特发性肺纤维化药物中的应用。
技术背景特发性肺纤维化(idiopath ic pulmonary fibro sis, EPF)是指原因不 明并以普通型间质性肺炎(UIP)为特征性病理改变的一种慢性炎症 性间质性肺疾病，主要病理表现为弥漫性肺泡炎、肺泡单位结构紊乱 和肺纤维化。本病临床上多表现为进行性呼吸困难伴有刺激性干咳， 双肺闻及velcro罗音，常有杵状指(趾)，胸部X线示双肺弥漫性网 状阴影；肺功能为限制性通气障碍。病情一般进行性发展，最终因呼 吸衰竭导致死亡。流行病学资料显示，IPF发病率呈不断上升趋势，由于发病机制不 清,病死率高,至今尚无确切有效的治疗方法，因此，积极寻找新的治疗 方法已成为改善IPF患者预后，提高生存率的迫切需要。越来越多的证据表明IPF的病理变化源于肺泡上皮受损和修复 异常。分布广泛的成纤维细胞灶是损伤和修复的主要部位。肺泡上皮 细胞损伤可导致纤维母细胞增殖和向肌成纤维细胞表型转变。通常认 为肌成纤维细胞可促使伤口收縮、软组织回縮，并可产生和分泌胶原 及包括致纤维化的多种细胞因子如细胞因子TGF-3、 FGF2等。活跃的纤维母细淑肌成纤维细胞可使ECM产生增多,导致ECM过度沉积 和肺泡结构破坏，最终导致肺纤维化和肺功能受损。此外，肌成纤维细 胞还可诱导肺泡上皮细胞死亡，从而维持肺泡上皮已有病变、抑制有 效的再上皮化.故肺泡上皮损伤修复过程中抗纤维活性和致纤维活性 之间的平衡最终决定了肺纤维化是否发生。成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factors FGFs)是一组同源 的肝素结合多肽，其家族包含23个成员。FGFs有广泛的生物学活性， 例如在胚胎发育中调控细胞增殖、迁移和分化，有证据表明致纤维化 的细胞因子TGF - P通过分泌大量的FGF2而起作用，抑制FGF2的 活性可有效的抑制纤维化的产生。成纤维细胞生长因子受体(Fibroblast growth factor receptors FGFRs)属于酪氨酸激酶受体家族，它们在特定的时间和空间表达， 是FGF信号通路上重要的调控点之一，FGFR正常功能的紊乱可导致 人类疾病的发生。本发明在已公开的发明(申请号200710029286.6) 基础上，通过大肠杆菌以包涵体形式高效表达FGFR2，对其进行一 定的变复性后，获得具有活性的FGFR2IIIc产品。FGFR2IIIc胞外段 可以和FGF配体结合，但因缺乏胞内的酪氨酸激酶活性而不能传导 信号，因此起到抑制FGF过量信号的作用，从而可显著抑制肺的纤 维化。目前尚未有利用成纤维细胞生长因子受体的胞外段预防和/或治 疗特发性肺纤维化的报道。发明内容本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供FGFR2IIIc胞外段 在制备预防和/或治疗特发性肺纤维化药物中的应用。本发明的FGFR2IHc胞外段对特发性肺纤维化有明显的治疗作 用，也有明显的预防作用，可以药物组合物的形式使用，这种组合物 含有FGFR2HIc胞外段和可药用辅料；可药用辅料为药学领域通用的 各种辅料。上述药物组合物的主要剂型包括冻干粉针剂和注射液剂，通常以 静脉注射途径给药。上述药物组合物的剂型为冻干粉针剂时，该药物组合物为固体的 灭菌组合物形式，该组合物除了 FGFR2IIIc胞外段还可以含有辅料 (或赋形剂)，如甘露醇、右旋糖苷、水解明胶、柠檬酸钠、甘露酸 等。该灭菌组合物在使用时溶解于灭菌注射用水或其它注射用灭菌介 质中，静脉注射即可。上述药物组合物为注射液剂时，该药物组合物为水溶液形式，使 用时直接静脉注射即可。该组合物除了 FGFR2inc胞外段还可以含有 添加剂，如甘露醇、氯化钠、葡萄糖等。与现有技术相比，本发明的优点为TGFP是纤维化过程中最重 要的细胞因子，通过释放FGF2而促进纤维化，而FGFR2IIIc可结合 FGF2，降低其有效浓度，从而抑制纤维化进程，因此本发明将 FGFR2IIIc用于制备预防和/或治疗特发性肺纤维化药物，能够起到较 好的预防、治疗作用。
图1为三组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度(HE染色X 200)比较的对 照组电镜图；图2为三组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度(HE染色X200)比较的模 型组电镜图；图3为三组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度(HE染色X 200)比较的治 疗组电镜图。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明作进一步说明。实施例1制备FGFR2IIIc胞外段干粉针取过滤灭菌的FGFR2IIIc胞外段(根据专利200710029286.6生 产)'300mg;加7.5克甘露醇，调节pH'至中性，力l/注射用水至500 毫升，无菌过滤，分装1000个安瓿中，无菌条件下冷冻干燥，即得。实施例2制备FGFR2UIc胞外段注射液取过滤灭菌的FGFR2inc胞外段水溶300mg，调节pH至中性， 加注射用水至500ml，加氯化钠调节等渗，无菌过滤，分装1000个 安瓿中，即得。实施例3 FGFR2IIIc胞外段对小鼠特发性肺纤维化的作用1、实验方法选择雌性C57BL/6小鼠，6—8周，体重20 —25g，用2%戊巴比 妥钠40mg/kg腹腔内注射麻醉小鼠后，按无菌操作原则，在小鼠颈部 正中处切开皮肤，暴露气管。用弯尖眼科钳经气管下方穿过，轻微抬起气管，模型组和治疗组向气管内注入博来霉素BLM(50mg/kg)50ul， 对照组注入等体积的生理盐水，建立小鼠肺纤维化模型。注入博莱霉素后，再向气管内注入0.2ml的空气2 3次，以使 药物在肺部分布均匀。注药完毕后缝合皮肤，局部碘氟消毒防止感染， 将小鼠直立，旋转，尽量使药物在肺内分布均匀。模型建立第二天起，治疗组小鼠每天腹腔内注入FGFR2IIIc胞外 段蛋白(50微克/只)。对照组和模型组注入等体积的生理盐水。在模 型建立后第21天，分别处理各组小鼠。用2%戊巴比妥钠40mg/kg 腹腔内注射麻醉小鼠后，剖胸取出肺部。2、肺泡炎、肺纤维化程度判断左肺石蜡切片进行苏木精-伊红染色(HE)及Masson染色(M asson染色是在酸性复红，橙黄，亮绿3种特殊染料共同作用—卜,使胶原纤 维染成绿色,肌纤维染成红色,红细胞染成橘黄色的一种特殊染)，在光 学显微镜下观察肺组织病理学改变。按Szapiel等提供的力法评定肺组 织肺泡炎和肺组织纤维化程度(Szapiel S V， Elson N A， Fulmer J D， et al. Bleomycin-induced interstitial pulmonary disease in the n ude athymicmouse.Am Rev Respir Dis， 1979， 120(4):893-899.)。肺泡炎分为四级①0级:无肺泡炎；②I级:肺泡间隔因炎性细 胞浸润而增宽，病变局限,范围<20 % ，肺泡结构完整；③n级:其受累 面积占全肺的20 % 50 % ; 111级:弥漫性肺泡炎,其受累面积>50 % ,偶可见肺泡腔内细胞及出血造成的实变。肺纤维化也分为四级①0级:无纤维化；②I级:范围< 20 % ,累及胸膜及胸膜下肺实质，肺泡结构发生紊乱；③II级:病变范围占全肺 20 % 50 % ,肺纤维化从胸膜开始延伸，但仍属局部；④m级:弥散性 肺纤维化，范围> 50 % ，融合损伤并伴有广泛肺实质结构紊乱。3、 统计学处理采用SPSS12. 0软件，数据以(x土s)表示，等级资料转化为计量资料,o级为o分，i级为i分，n级为2分，ni级为3分。3个组间进行单因素方差分析,以LSD、SNK法进行不同组别之间的比较，P < 0. 05为差异有统计学意义。LSD和SNK法是统计学中常用的多组数据间两两比较的方法。4、 实验分组雌性C57BL/6小鼠，随机分为对照组，模型组和治疗组，每组 i(J只。5、 实验结果由图K 2、 3及表1可见，对照组肺泡化良好,肺泡间隔薄,肺m 次级隔较多，肺泡数目较多；模型组失去正常肺组织结构、结构紊乱、 肺泡间隔变宽、肺泡次级隔明显减少,肺泡数量减少,可见肺泡内出血、 渗出；治疗组肺泡间隔较模型组变薄、间质细胞减少、纤维化明显减 轻、但肺泡次级隔数目少，肺泡腔呈蜂窝样改变，肺泡数量较对照组减 少。6、 实验结论TGF 3是纤维化过程中最重要的细胞因子，通过释放FGF2而促 进纤维化。FGFR2IHc可结合FGF2，降低其有效浓度，从而抑制纤维化进程，起到较好的治疗作用。表l三组大鼠肺泡炎、肺纤维化程度评分(X士S)比较组别N(只)肺泡炎程度评分肺纤维化程度评分对照组 (生理盐水)150.2 ±0.30.0 ±0.0模型组 (博莱霉素)151.7±0.7'*2.1 ±0.7**处理组 (FGFR2IIIc)150.9 ±0.6"1.1±0.7''A上述表1中，'P<0.05， ''P<0. Olvs对照组；a尸〈0. Olvs模型组。
权利要求
1、FGFR2IIIc胞外段在制备预防、治疗特发性肺纤维化药物中的应用。
2、 根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述FGFR2IIIc胞 外段在制备预防、治疗特发性肺纤维化药物时的剂型为冻干粉针剂或 注射液剂。
3、 根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述药物的注 射途径为静脉注射。
4、 一种制备预防、治疗特发性肺纤维化的药物，其特征在于该 药物的活性成分为FGFR2IIIc胞外段。
全文摘要
本发明公开FGFR2IIIc胞外段在制备预防、治疗特发性肺纤维化药物中的应用。FGFR2IIIc可结合FGF2，降低其有效浓度，从而抑制纤维化进程，本发明将FGFR2IIIc用于制备预防和/或治疗特发性肺纤维化药物，能够起到较好的预防、治疗作用。本发明的FGFR2IIIc胞外段一般以药物组合物的形式使用，这种组合物含有FGFR2IIIc胞外段和可药用辅料；FGFR2IIIc胞外段的用量可根据病情严重程度、治疗时间而定，一般注射给药每次250-300μg，每天1-2次。本发明的药物组合物可制成冻干粉针剂或注射液剂两种剂型，通过静脉注射使用。
文档编号A61K38/43GK101401933SQ20081019896
公开日2009年4月8日 申请日期2008年10月7日 优先权日2008年10月7日
发明者颖 何, 炬 汪, 岸 洪 申请人:暨南大学