人源干细胞与灵芝孢子生物活性物质组合物及制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种人源干细胞与灵芝孢子生物活性物质组合物,其由胚胎干细胞生物活性物质与灵芝孢子生物活性物质按照1：10?12的质量比进行混合。本发明还公开了人源干细胞与灵芝孢子生物活性物质组合物的制备方法。本发明组合物起到活化人体自身干细胞来进行生理性修复或替代机体损伤、病变和衰老的组织细胞的作用，同时增强机体免疫力。
【专利说明】
人源干细胞与灵芝孢子生物活性物质组合物及制备方法
技术领域
[0001]本发明涉及人源干细胞与灵芝孢子生物活性物质组合物及制备方法，属于生物技术领域。
【背景技术】
[0002]干细胞(stem cell)是一类具有自我复制能力(self-renewing)的多潜能细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞(embryonic stem cell，ES细胞)和成体干细胞(somatic stem cell)。根据干细胞的发育潜能分为三类:全能干细胞(totipotent stem cell，TSC)、多能干细胞(pluripotent stemcell)和单能干细胞(unipotent stem cell)(专能干细胞)。干细胞(Stem Cell)是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞” O
[0003]灵芝孢子的化学成分可分为以下几类:蛋白质和氨基酸类、糖肽类、维生素类、胡萝卜素、留醇类、三萜类、生物碱类、脂肪酸类、内酯和无机离子等。灵芝孢予蛋白质含量达18%，其中异亮氨酸、亮氨酸赖氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸等机体必需氨基酸的含量非常丰富，均离达10 g/kg。维生素类主要是维生素E(VE)，在每100 g孢子中，VE含量超过60mg，另外也含有少量的维生素C。灵芝孢子中富含多糖和寡糖，其中二糖、三糖、四糖的含量分别是1.94、1.67和2.5 mg/g。固醇类有麦角甾-7，22-乙烯_3β醇(ergosta-7，22-diene-3-ol)和β-谷留醇。从赤芝孢子粉的酸性提取物中还分离得到了一些三萜类化合物，它们是赤芝抱子酸A、B、C、E(ganosporeic acid A、B、C、E)和ganodenn anon-Trol。并且不断在灵芝孢子中发现新的三萜类物质，这些物质具有良好的生物活性。灵芝绝子中的脂肪酸类有二十四烷酸、硬脂酸、棕榈酸、二十二烷酸等。其内酯类属五环三萜内脂，有赤芝孢子内酯A和B。生物碱类有胆碱、甜菜碱和硫组氨酸甲基内胺盐。无机元素有钙、磷、铁、镁、钠、锌、锗砸等，其中有机锗与人类的键康和疾病的防治有密切关系。
【发明内容】
[0004]本发明目的是提供一种人源干细胞与灵芝孢子生物活性物质组合物，起到活化人体自身干细胞来进行生理性修复或替代机体损伤、病变和衰老的组织细胞的作用，同时增强机体免疫力。
[0005]本发明的方案如下:人源干细胞与灵芝孢子生物活性物质组合物，由胚胎干细胞生物活性物质与灵芝孢子生物活性物质按照I: 10-12的质量比进行混合。
[0006]人源干细胞与灵芝孢子生物活性物质组合物的制备方法，包括以下步骤: a、人源干细胞物活性物质的制备
将去内血管和外层薄膜的胎盘切成l*lmm大小的小块;将该小块种植于间充质干细胞培无血清培养液的培养皿中，并放置于培养箱中；
每隔两天半量换液，当细胞达到80%汇合时，使用0.33%磷酸酯酶对细胞进行消化，以l.l-2.5X105cells/ml接种于培养皿中传代培养，并收集更换的废培养液于_80°C环境下保存；
重复多次后，分离、纯化获得高纯度间充质干细胞，并将浓度调整为2 X1MV ml密封，经超低温液氮反复冻融6-7次至细胞破碎，再通过低温分离、纯化，便可获得高纯度的胚胎干细胞物活性物质。
[0007]b、灵芝孢子生物活性物质的制备
将灵芝孢子粉在100w的紫外灯下辐射处理1.5小时；
将辐射处理过的灵芝孢子粉与水按1:10的重量比配比混合，并加入纤维素酶、维生素C，然后进行超声波振荡，处理条件为22-35kHz，30-40°C超声处理10-30小时；
将超声波处理后的孢子粉在_55°C真空冷冻干燥处理4-5小时；
然后采用超音速气流粉碎机在_15°C到-10°C的温度下进行超音速气流破壁、过筛，选取粒径为550-600目的孢子粉；
C、组合物的制备方法
人源干细胞生物活性物质与灵芝孢子生物活性物质按照I: 10-12的质量比进行混合即得。
[0008]进一步，所述的培养箱的培养环境为:5%⑶2、pH值:7.3、相对饱和湿度95%，温度37。C。
[0009]进一步，所述的水与纤维素酶、维生素C的质量比为I:0.003:0.0012o
[0010]本发明可活化人体自身干细胞来进行生理性修复或替代机体损伤、病变和衰老的组织细胞的作用，同时增强机体免疫力。
【具体实施方式】
[0011]实施例1
人源干细胞与灵芝孢子生物活性物质组合物，由胚胎干细胞生物活性物质与灵芝孢子生物活性物质按照I: 10的质量比进行混合。
[0012]制备方法，包括以下步骤:
a、胚胎干细胞物活性物质的制备
将去内血管和外层薄膜的胎盘切成l*lmm大小的小块;将该小块种植于间充质干细胞培无血清培养液的培养皿中，并放置于培养箱中，培养箱的培养环境为:5%C02、pH值:7.3、相对饱和湿度95%，温度37° C;每隔两天半量换液，当细胞达到80%汇合时，使用0.33%磷酸酯酶对细胞进行消化，以1.9 X 105cells/ml接种于培养皿中传代培养，并收集更换的废培养液于-80°C环境下保存;重复多次后，分离、纯化获得高纯度间充质干细胞，并将浓度调整为2 X 16个/ ml密封，经超低温液氮反复冻融7次至细胞破碎，再通过低温分离、纯化，便可获得高纯度的胚胎干细胞物活性物质。
[0013]b、灵芝孢子生物活性物质的制备
将灵芝孢子粉在100w的紫外灯下辐射处理2小时;将辐射处理过的灵芝孢子粉与水按1:10的重量比配比混合，并加入纤维素酶、维生素C，然后进行超声波振荡，处理条件为29kHz，33°C超声处理22小时；将超声波处理后的孢子粉在_55°C真空冷冻干燥处理4小时;然后采用超音速气流粉碎机在-110C的温度下进行超音速气流破壁、过筛，选取粒径为600目的孢子粉；
C、组合物的制备方法
人源干细胞生物活性物质与灵芝孢子生物活性物质进行混合，即得。
[0014]实施例2
人源干细胞与灵芝孢子生物活性物质组合物，由胚胎干细胞生物活性物质与灵芝孢子生物活性物质按照1:11的质量比进行混合。
[0015]制备方法，包括以下步骤:
a、胚胎干细胞物活性物质的制备
将去内血管和外层薄膜的胎盘切成l*lmm大小的小块;将该小块种植于间充质干细胞培无血清培养液的培养皿中，并放置于培养箱中，培养箱的培养环境为:5%C02、pH值:7.3、相对饱和湿度95%，温度37° C;每隔两天半量换液，当细胞达到80%汇合时，使用0.33%磷酸酯酶对细胞进行消化，以2.2X105cellS/ml接种于培养皿中传代培养，并收集更换的废培养液于-80°C环境下保存;重复多次后，分离、纯化获得高纯度间充质干细胞，并将浓度调整为2 X 16个/ ml密封，经超低温液氮反复冻融7次至细胞破碎，再通过低温分离、纯化，便可获得高纯度的胚胎干细胞物活性物质。
[0016]b、灵芝孢子生物活性物质的制备
将灵芝孢子粉在100w的紫外灯下辐射处理2小时;将辐射处理过的灵芝孢子粉与水按1:10的重量比配比混合，并加入纤维素酶、维生素C，然后进行超声波振荡，处理条件为33kHz，31°C超声处理17小时；将超声波处理后的孢子粉在_55°C真空冷冻干燥处理4小时;然后采用超音速气流粉碎机在_14°C的温度下进行超音速气流破壁、过筛，选取粒径为580目的孢子粉；
C、组合物的制备方法
人源干细胞生物活性物质与灵芝孢子生物活性物质进行混合，即得。
[0017]实施例3
人源干细胞与灵芝孢子生物活性物质组合物，由胚胎干细胞生物活性物质与灵芝孢子生物活性物质按照I: 12的质量比进行混合。
[0018]制备方法，包括以下步骤:
a、胚胎干细胞物活性物质的制备
将去内血管和外层薄膜的胎盘切成l*lmm大小的小块;将该小块种植于间充质干细胞培无血清培养液的培养皿中，并放置于培养箱中，培养箱的培养环境为:5%C02、pH值:7.3、相对饱和湿度95%，温度37° C;每隔两天半量换液，当细胞达到80%汇合时，使用0.33%磷酸酯酶对细胞进行消化，以18X105cellS/ml接种于培养皿中传代培养，并收集更换的废培养液于-80°C环境下保存;重复多次后，分离、纯化获得高纯度间充质干细胞，并将浓度调整为2 X 16个/ ml密封，经超低温液氮反复冻融7次至细胞破碎，再通过低温分离、纯化，便可获得高纯度的胚胎干细胞物活性物质。
[0019]b、灵芝孢子生物活性物质的制备
将灵芝孢子粉在100w的紫外灯下辐射处理1.2小时;将辐射处理过的灵芝孢子粉与水按1:10的重量比配比混合，并加入纤维素酶、维生素C，然后进行超声波振荡，处理条件为33kHz，36°C超声处理16小时，水与纤维素酶、维生素C的质量比为1:0.003:0.0012;将超声波处理后的孢子粉在_55°C真空冷冻干燥处理4小时;然后采用超音速气流粉碎机在-12°C的温度下进行超音速气流破壁、过筛，选取粒径为560目的孢子粉；
C、组合物的制备方法
人源干细胞生物活性物质与灵芝孢子生物活性物质进行混合，即得。
[0020]尽管上文对本发明的【具体实施方式】给予了详细描述和说明，但是应该指明的是，我们可以依据本发明的构想对上述实施方式进行各种等效改变和修改，其所产生的功能作用仍未超出说明书所涵盖的精神时，均应在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.人源干细胞与灵芝孢子生物活性物质组合物，其特征在于，由胚胎干细胞生物活性物质与灵芝孢子生物活性物质按照I: 10-12的质量比进行混合。2.人源干细胞与灵芝孢子生物活性物质组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: a、人源干细胞物活性物质的制备 将去内血管和外层薄膜的胎盘切成l*lmm大小的小块;将该小块种植于间充质干细胞培无血清培养液的培养皿中，并放置于培养箱中； 每隔两天半量换液，当细胞达到80%汇合时，使用0.33%磷酸酯酶对细胞进行消化，以l.l-2.5X105cells/ml接种于培养皿中传代培养，并收集更换的废培养液于_80°C环境下保存； 重复多次后，分离、纯化获得高纯度间充质干细胞，并将浓度调整为2X 16个/ ml密封，经超低温液氮反复冻融6-7次至细胞破碎，再通过低温分离、纯化，便可获得高纯度的胚胎干细胞物活性物质； b、灵芝孢子生物活性物质的制备 将灵芝孢子粉在100w的紫外灯下辐射处理1-2小时； 将辐射处理过的灵芝孢子粉与水按1:10的重量比配比混合，并加入纤维素酶、维生素C，然后进行超声波振荡，处理条件为22-35kHz，30-40°C超声处理10-30小时； 将超声波处理后的孢子粉在_55°C真空冷冻干燥处理4-5小时； 然后采用超音速气流粉碎机在_15°C到-10°C的温度下进行超音速气流破壁、过筛，选取粒径为550-600目的孢子粉； C、组合物的制备方法 人源干细胞生物活性物质与灵芝孢子生物活性物质按照1:10-12的质量比进行混合即得。3.根据权利要求2所述的人源干细胞与灵芝孢子生物活性物质组合物的制备方法，其特征在于，所述的培养箱的培养环境为:5%C02、pH值:7.3、相对饱和湿度95%，温度37° C。4.根据权利要求2所述的人源干细胞与灵芝孢子生物活性物质组合物的制备方法，其特征在于，所述的水与纤维素酶、维生素C的质量比为I:0.003:0.0012o
【文档编号】A61K36/074GK106038616SQ201610376243
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月31日
【发明人】张正亮, 郑家德
【申请人】安徽惠恩生物科技股份有限公司