化合物蛋氨酸脑啡肽作为制备治疗肠癌、胰腺癌药物的应用的制作方法

专利名称：化合物蛋氨酸脑啡肽作为制备治疗肠癌、胰腺癌药物的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于采用免疫治疗法治疗肿瘤的技术领域，特别是涉及 一种蛋氨酸脑啡肽在体内注射和体外细胞培养条件下对肠癌、胰腺癌细胞进行 治疗，以达到治疗目的的方法。
背景技术：
1975年Hughes等人从猪脑抽提液中分离的、具有内源性吗啡 样活性的蛋氨酸脑啡肽(methionine enk印halin， MEK)。后来研究发现是由 肾上腺产生的前激素和前脑啡肽衍生来，释放入血，由酪-甘-甘-苯丙-蛋氨酸 五个氨基酸构成的五肽。正常体内含量极低，每毫升血浆50-150pg。 1975年 被首次发现蛋氨酸脑啡肽具有免疫调节作用。白细胞包括有粒白细胞(中性 粒细胞，嗜酸性粒细胞，嗜碱性粒细胞)无粒白细胞(淋巴细胞，单核细胞). 正常的T淋巴细胞，巨噬细胞，自然杀伤细胞(NK)含有MEK受体， 一些的肿 瘤细胞如胰腺癌细胞和肠癌细胞也含有MEK受体。近年来研究证明蛋氨酸脑 啡肽对免疫系统真有如下作用增加淋巴细胞数量和活性，增加CD2， CD4， CD8 等受体分子的表达，增加T细胞玫瑰花节形成百分率，增加NK细胞数量活性， 增加有丝分裂素诱导的细胞增殖，增加Y-干扰素，白介素和肿瘤坏死因子等 多种细胞因子的产生，增加单核细胞(巨噬细胞)和中性粒细胞的趋化作用， 对树突状细胞的成熟和活性有明显的促进作用，同时与癌细胞受体结合可以诱 导肿瘤细胞调亡。我们的研究也证明了上述部分结果。虽然蛋氨酸脑啡肽具有 显著的免疫调节作用，诱导肿瘤细胞凋亡作用，但如何对胰腺癌和肠癌肿瘤 患者加以治疗，却没有具体方法，更没有人类治疗胰腺癌和肠癌的报道。
我们采用化合物蛋氨酸脑啡肽用于治疗肠癌、胰腺癌患者的方法与实际例 子及疗效，目前还未见报道。

发明内容
发明目的本发明提供一种化合物蛋氨酸脑啡肽作为制备治疗肠癌、胰腺 癌药物的应用，其目的在于解决现有的临床方法在治疗肠癌、胰腺癌方面不能有效和存在的问题。
技术方案本发明是通过以下技术方案实现的
化合物蛋氨酸脑啡肽作为制备治疗肠癌、胰腺癌药物的应用，所述的蛋氨
酸脑啡肽以0. 0001-10mg/ml制备成注射剂作为治疗肠癌、胰腺癌药物的应用
将上述浓度范围内的蛋氨酸脑啡肽在体外T淋巴细胞的细胞培养条件中 进行剌激，体外培养的温度25-38C°范围、2-7天的时间，使其浓度范围为 ]0—2 10—'6克分子/升后回输体内。或者直接采用静脉注射、皮下注射或肌肉注 射的剂型。
蛋氨酸脑啡肽加在体外淋巴细胞的细胞培养条件中与一定浓度的淋巴因 子、如胸腺肽、白细胞介素、干扰素一起使用，蛋氨酸脑啡肽与白细胞介素 的重量比为1: K)0 10000;蛋氨酸脑啡肽与胸腺肽的重量比为1:100 10000。
蛋氨酸脑啡肽还包括其它蛋氨酸脑啡肽的类似物，如亮氨酸脑啡肽以相
同的方法使用。
优点及效果本发明的特点在于蛋氨酸脑啡肽在体外直接作用于培养条件 下的免疫系统细胞或体内直接注射治疗。同时通过与癌细胞受体结合诱导癌细 胞凋亡。用量小，效率高。经蛋氨酸脑啡肽激活的免疫系统细胞具有边普通方
法激活更高效的免疫细胞增殖数量和细胞活性， 一般应高出5-10倍，特别是T
淋巴细胞数量明显增加。治疗后癌症患者肿瘤部位明显縮小或消失。但是，应 当指出，蛋氨酸脑啡肽是一种对免疫系统细胞数量和活性双向调节剂，仅仅在 一定的浓度范围内有正向调节作用，超出此范围及呈现负向调节作用，抑制免 疫系统细胞的生长。
具体实施例方式下面通过具体实施例详细说明如下 实施例1:
将化合物蛋氨酸脑啡肽溶解于注射用水或生理盐水，分别制成浓度为
0.0005mg/ml、 0. 001mg/ml 0. 7mg/ml、 2mg/ml注射剂。实施例2:
将化合物蛋氨酸脑啡肽溶解于注射用水或生理盐水，分别制成浓度为
0. 0005mg/ml、 0. 001mg/ml 0. 7mg/ml、 2mg/ml的冻干粉针制剂。
给药方式为通过皮下、静脉或腹腔注射的方式直接施用于患者。 实施例3:
取正常人静脉血30毫升，放入含有肝素抗凝剂的试管内(每毫升血液加 入O. 1毫升125-205U)，领取含有淋巴细胞分离液20毫升的试管，将血液轻 轻加到淋巴细胞分离液上，2000转/分，离心20分钟，用吸管吸取淋巴细胞 层，用1640培养液洗涤两次，每次加入30毫升，1500转/分，5分钟。调整 细胞浓度为106个/毫升，按下列设计分组培养
(1) ， 106淋巴细胞+ 10毫升含有10%小牛血清的细胞培养液；
(2) ， 106淋巴细胞+ 10毫升含有10%小牛血清，10—2克分子/升蛋氨酸 脑啡肽的细胞培养液；
(3) ， 106淋巴细胞+ 10毫升含有10%小牛血清，10—5克分子/升蛋氨酸 脑啡肽的细胞培养液；
(4) ， 106淋巴细胞+ 10毫升含有10%小牛血清，10—6克分子/升蛋氨酸 脑啡肽的细胞培养液；
(5) ， 106淋巴细胞+ 10毫升含有10%小牛血清，1(T克分子/升蛋氨酸 脑啡肽的细胞培养液；
(6) ， 106淋巴细胞+ 10毫升含有10%小牛血清，10—8克分子/升蛋氨酸 脑啡肽的细胞培养液；
(7) ， 106淋巴细胞+ 10毫升含有10%小牛血清，1(T克分子/升蛋氨酸 脑啡肽的细胞培养液；
(8) ， 106淋巴细胞+ 10毫升含有10%小牛血清，10,克分子/升蛋氨酸脑啡肽的细胞培养液；
(9) ， 106淋巴细胞+ 10毫升含有10%小牛血清，10—"克分子/升蛋氨酸 脑啡肽的细胞培养液；
(10) ， 106淋巴细胞+ 10毫升含有10%小牛血清，10"6克分子/升蛋氨 酸脑啡肽的细胞培养液；
将上述培养放入37。C细胞培养箱中进行培养，分别在24、 48、 72、 96、 120、 168小时时取样进行细胞计数，按照免疫学实验技术进行E-花环形成试 验，检测阳性百分率(百分率越高，表示T细胞活性越高)，并将120小时的 结果作为最终结果，通过静脉或腹腔注射的方法回输患者体内。通过实验证明， 蛋氨酸脑啡肽在体外培养再回输体内的方法，只有在此浓度下(10—2 10—16克 分子/升)及这种培养条件(体外培养的温度25-38C。范围、2-7天的时间) 才有治疗和免疫的效果，其它情况均为无效。
实施例4:
1， 106淋巴细胞+ 10毫升含有10%小牛血清的细胞培养液；
2， 106淋巴细胞+ 10毫升含有10%小牛血清，10—3克分子/升蛋氨酸脑啡 肽的细胞培养液+ 1毫克小牛胸腺肽；胸腺肽的浓度为1毫克/毫升。
将上述培养放入37'C细胞培养箱中进行培养，分别在24、 48、 72、 96、 120小时时取样进行细胞计数，按照免疫学实验技术进行E-花环形成试验，并 将120小时的结果作为最终结果，将细胞处理后回输体内。
实施例5:
1， 106淋巴细胞+ 10毫升含有10%小牛血清的细胞培养液；
2， 106淋巴细胞+ 10毫升含有10%小牛血清，10—3克分子/升蛋氨酸脑啡 肽的细胞培养液+ l毫克白细胞介素；白细胞介素的浓度为2毫克/毫升。
将上述培养放入37t细胞培养箱中进行培养，分别在24、 48、 72、 96、 120小时时取样进行细胞计数，按照免疫学实验技术进行E-花环形成试验，并将120小时的结果作为最终结果，将细胞处理后回输体内。
在以上实施例的研究基础上，做以下实验
蛋氨酸脑啡肽治疗肠癌和胰腺癌的试验 一，肠癌的治疗实验
1. 方法在裸鼠身上移植人HT-29结肠癌细胞制备癌症模型，每日给蛋氨
酸脑啡肽，剂量20mg/kg。连续21天。
2. 结果85%的小鼠在三周内显示出肿瘤细胞生长抑制现象，相比之下， 对照组有93%肿瘤发生。
二，胰腺癌的治疗实验
1. 方法接种了人胰腺癌BXPC-3细胞的裸鼠，给蛋氨酸脑啡肽20mg/kg， 每日一次，连续21天。
2. 结果与对照组相比，所有裸鼠出现明显的肿瘤生长抑制。
三，对胰腺癌患者的治疗实验
白XX:男，45岁，经诊断为急性胰腺癌，未接受任何治疗，给蛋氨 酸脑啡肽20mg/kg，每天一次，连续30天。经CT检查，前后比较，肿瘤 消失，患者自觉症状恢复正常。
赵XX:男，54岁，晚期结肠癌肝转移，目前所有对症治疗都已经无 效，生命垂危，给蛋氨酸脑啡肽20mg/kg，每天一次，连续90天。经CT .检査，前后比较，肿瘤消失，患者自觉症状恢复正常。
实验结论上述病例，在特定浓度范围的蛋氨酸脑啡肽加在体内注射 和体外淋巴细胞细胞培养条件下对胰腺癌和肠癌均有明显的治疗作用，有 效率极高。
权利要求
1、化合物蛋氨酸脑啡肽作为制备治疗肠癌、胰腺癌药物的应用，所述的蛋氨酸脑啡肽以0.0001-10mg/ml制备成注射剂。
2、 根据权利要求1所述的化合物蛋氨酸脑啡肽作为制备治疗结肠癌、胰 腺癌药物的应用，其特征在于将权利要求l浓度范围内的蛋氨酸脑啡肽在 体外对培养的T淋巴细胞进行剌激，体外培养的温度25-38C°范围、2-7天 的时间，使其浓度范围为10一2 10—'6'克分子/升后回输。
3、 根据权利要求1所述的化合物蛋氨酸脑啡肽作为制备治疗结肠癌、胰 腺癌药物的应用，其特征在于将权利要求l浓度范围内的蛋氨酸脑啡肽， 以静脉注射、皮下注射或肌肉注射的剂型。
4、 根据权利要求2所述的化合物蛋氨酸脑啡肽作为制备治疗结肠癌、胰腺癌药物的应用，其特征在于蛋氨酸脑啡肽加在体外淋巴细胞的细胞培养条 件中单独或与一定浓度的淋巴因子、如胸腺肽、白细胞介素、干扰素一起使 用，蛋氨酸脑啡肽与白细胞介素的重量比为1: 100 10000;蛋氨酸脑啡肽与胸腺肽的重量比为1: 100 10000。
5、 根据权利要求1所述的化合物蛋氨酸脑啡肽作为制备治疗结肠癌、胰腺癌药物的应用，其特征在于蛋氨酸脑啡肽还包括其它蛋氨酸脑啡肽的类似 物，如亮氨酸脑啡肽以相同的方法使用。
全文摘要
本发明属于采用免疫治疗法治疗肿瘤的技术领域，特别是涉及一种蛋氨酸脑啡肽在体内注射和体外细胞培养条件下对肠癌、胰腺癌细胞进行治疗，以达到治疗目的的方法。所述的蛋氨酸脑啡肽以0.0001-10mg/ml制备成注射剂或在体外T淋巴细胞的细胞培养条件中进行刺激，使其浓度范围为10^-2～10^-16克分子/升后回输体内，或者直接经静脉、皮下、肌肉注射。本发明的特点在于蛋氨酸脑啡肽在体内或体外直接作用于培养条件下的免疫系统细胞，或癌细胞，用量小，效率高。经蛋氨酸脑啡肽激活的免疫系统细胞具有比普通方法激活更高效的免疫细胞增殖数量和细胞活性，一般应高出5-10倍，特别是T淋巴细胞数量明显增加。蛋氨酸脑啡肽直接通过受体结合杀伤胰腺癌和肠癌细胞。
文档编号A61K38/08GK101411865SQ20081022908
公开日2009年4月22日 申请日期2008年11月26日 优先权日2008年11月26日
发明者单风平, 吕昌龙 申请人:单风平