专利名称：：抗肿瘤药物、药剂、组合物及其用途的制作方法抗肿瘤药物、药剂、组合物及其用途本发明涉及癌症治疗领域。更具体而言，本发明涉及使用源自属于四跨膜蛋白(tetraspanin)超家族的蛋白质的多肽来治疗癌症。癌症是以无限制的细胞分裂，和这些细胞能够通过侵入而直接生长到附近组织中或者通过转移移植到远处(其中，癌细胞通过血流或淋巴系统转运)而扩散为特征的一类疾病或病症。癌症可以侵袭各个年龄段的人们，但是随着年龄的增长风险倾向于加大。癌症是发达国家中死亡的主要原因之一。癌症有多种类型。症状的严重程度取决于恶性肿瘤的位置和特性以及是否存在转移。一旦确诊，癌症通常可以通过联合使用手术治疗、化疗和放疗来进行治疗。随着研究的发展，针对癌症的病理类型的治疗更加具有特异性。对于几种癌症已经研究出耙向于特定癌症的药物。如果不加治疗，癌症可能最终导致病态和死亡，尽管并不总是如此。目前的治疗针对恶性细胞的独特性质，例如，举例来说，避开细胞凋亡、由于端粒末端转移酶过多造成的不受限制的生长潜力(无限增殖化)、生长因子的自足性(self-sufficiency)、对于抗生长因子的不敏感性、细胞分裂速率提高、分化能力改变、无接触抑制能力、侵入邻近组织的能力、在远处形成转移的能力、促进血管生长(血管生成)的能力。肺瘤血管生成是进入到肺瘤中的血管网络的增殖，从而提供养分5和氧气并清除废物。肿瘤血管生成实际上从癌症肿瘤细胞释放向周围正常宿主组织发送信号的分子开始。该信号激活了宿主组织中的某些基因，而这些基因随之产生蛋白质以促使新血管的生长。实体瘤必须刺激新血管的生成以获得其生长必需的营养物和氧气，这样还提供了一条肿瘤可以转移到远处的途径。试验证据显示恶性肺瘤可以通过多种因子的精密作用诱导血管生成，例如酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、血小板源生长因子(PDGF)、转化生长因子a(TGF-a)、肺瘤坏死生长因子a(TNF-a)和许多其它因子(Liotta等人，1991，Cell64:327-336;Hanahan等人，Cell86:353-364)。目前，市场上存在许多靶向于血管生成的化疗分子。公知的天然存在的血管生成抑制剂是血管抑素(angiostatin)、内皮抑素(endostatin)、干扰素、血小板因子4、催乳激素16Kd片段、凝血酶致敏蛋白(thrombospondin)、TIMP-1(金属蛋白酶-1组织抑制剂)、TIMP-2和TIMP-3。这些分子以及其它药物(例如，举例来说，考布他汀(combrestatin)A4、EMD121974、TNP-470、角堇胺、沙立度胺(thalidomide)、干扰素-a、抗VEGF、抗体......)可被用作化疗剂。但是，它们的效率远远不够，因而需要替代的治疗剂。因此，需要用于治疗肿瘤的替代的化疗剂，其具有更高的效力、较低的侵袭性或毒性，以及使得恢复率提高。本申请人所拥有的WO03/074073描述了参与调控血管生成的54种基因的家族。在这些基因中，编码"蛋白质497"(本说明书中的SEQIDNO:2)-在WO03/074073中也称作TM4SF2-的"基因497"(本说明书中的SEQIDNO:l)被描述为参与血管生成的激活(促血管生成)。当促血管生成因子(例如VEGF和FGF2)刺激血管生成时，基因497的表达增强。WO03/074073还描述了人内皮细胞中基因497的反义序列的表达(即基因497表达的抑制)抑制了毛细管的形成。生物信息分析揭示，含有244个氨基酸的蛋白质497C包含1个SEL细胞外环(小的细胞外环)、1个LEL细胞外环(大的细胞外环)、4个跨膜域(span)和2个对应于N-和C-末端的细胞内尾。因此，该蛋白质属于四跨膜蛋白超家族的成员(Levy等人，NatRevImmunol.2005Feb;5(2):136画48)。四跨膜蛋白为一大族在大量生物体中表达的进化保守的细胞表面蛋白质。该家族的成员倾向于在提供用于将外部刺激物传送到分子内信号传导部件的构架(scaffold)的膜微域(microdomain)内与它们的伴体(partner)—起彼此结合。基本上，四跨膜蛋白包含4个含有保守的极性残基并与小和大的细胞外环(分别为SEL和LEL)相邻的跨膜(TM)结构域。LEL包含由螺旋a、b和e构成的核心，该核心结构在四跨膜蛋白之间是保守的。螺旋c和d包含LEL的可变部分，它们与CCG基序和更加保守的半胱氨酸残基相邻。由于二碌u桥的作用，该区域折叠以形成蘑菇样结构。根据LEL结构域中存在的半胱氨酸的数目可将该超家族的成员划分为三组。第一组在LEL结构域中包含4个半胱氨酸，第二组在LEL结构域中包含6个半胱氨酸，和第三组在LEL结构域中包含8个半胱氨7酸。由于蛋白质497C在其LEL结构域中包含6个半胱氨酸，因此可以划分到第二组，与该家族的另一个成员一一蛋白质CD151类似。这些蛋白质的LEL结构域包含6个结构域a、b、c、dl、d2和e，其中，dl、d2和c是LEL的可变部分。随着进一步的研究，本发明人制备了蛋白质497C的截短形式，对应于蛋白质497C细胞外结构域SEL和LEL的各种不同片段-497C-T2:蛋白质497C的整个LEL结构域，由本说明书中的SEQIDNO:3确i人(112个氨基酸)，-497C-T3:LEL结构域的c、dl、d2和e结构域，由本说明书中的SEQIDNO:4确认(74个氨基酸)，—497C-T4:LEL结构域的dl、d2和e结构域，由本说明书中的SEQIDNO:5确认(49个氨基酸)，-497C-T5:LEL结构域的d2和e结构域，由本说明书中的SEQIDNO:6确认(43个氨基酸)。为了确保这些片段的三维构型(即LEL结构域的三维构型)及因而确保其潜在的活性，根据一个实施方式，发明人在片段的C-末端添加了一个尾部。该尾部由30至70个氨基酸、优选45至65个氨基酸、更优选50-60个氨基酸、再更优选大约55个氨基酸的随机序列构成。该尾部本身并无活性，其推测的作用为稳定LEL片段的三维结构，即维持以生物活性形式折叠的多肽。在第一个试验中，本发明人发现蛋白质497C-T2可以在体外以剂量依赖的方式抑制人内皮细胞增殖。然后，在第二个试验中，本发明人惊奇地发现蛋白质497C的截短形式显示出很强的以剂量依赖的方式抑制体外毛细管形成的活性。本发明人进行的其它的试验表明蛋白质497C的截短形式在体外以剂量依赖的方式引起内皮细胞迁移的抑制。497C-T2对血管生成抑制的剂量-反应研究的结果显示，重组蛋白质497C-T2在270nM时引起较弱的抑制，而在540nM时497C-T2可以抑制超过50%的体外血管生成(即，IC5()<540nM)。这表明重组蛋白质497C-T2为高效的抗血管生成化合物，有可能比抗VEGFmAb和/或基于VEGF受体(KDR)识别的肽效力高至少200倍(Binetruy-TournaireR等人，Identificationofapeptideblockingvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)-mediatedangiogenesis,EMBOJ.2000;19:1525-1533)。毛细管形成、人内皮细胞增殖和人内皮细胞迁移是血管生成的三个关键步骤。因此，497C-T2在体外能够以剂量依赖的方式抑制毛细管形成、人内皮细胞增殖和/或迁移的事实强有力地证明了蛋白质497C的截短形式的高效抗血管生成活性。所有这些结果都是绝对无法预料的，因为，原始蛋白质497C据公开是促血管生成的，并且人内皮细胞中基因497反义序列的表达(即基因497的抑制)抑制了毛细管的生成。因此，蛋白质497C的截短形式可以具有抗血管生成活性是非常令人惊异的。此外，本发明人还测试了497C-T2对多种细胞系增殖的影响，包括成纤维细胞系MRC5、CHO、肺瘤细胞系Calu-6、NCI-H460及更多的细胞系，但即4吏在高浓度下也未检测到任何抗增殖效应。相反，497C-T2在低至500mM的浓度下显著地抑制人内皮细胞的增殖，在5liM时抑制达75。/。。因此，除了比目前可用的抗VEGF治疗策略更加有效以外，497C-T2对内皮细胞是高特异性的。有趣的是，本发明人发现缺少a和b结构域的截短形式497C-T3与497C-T2具有几乎相同的抑制血管生成和细胞迁移的效力，表明a和很小。相对于497C-T2的活性，截短形式497C-T4(缺少a、b和c结构域)和497C-T5(缺少a、b、c和dl结构域)的活性有限，表明c和dl结构域对于蛋白质497C-T2的活性是必需的。这些结果也是出人意料的，并使得本发明人在小鼠体内测试497C-T2的抗肿瘤活性。本发明人还令人惊异地发现蛋白质497C-T2具有很强的体内抗肿瘤活性，与其它化疗剂(例如，举例来说，顺铂)联用时还具有很强的协同活性。本发明人发现在不同的测试剂量下，测试物质497C-T2对携带人NCIH460或CALU-6肺瘤的棵鼠无毒性。而且，最早在治疗开始后的两天(第二次IP注射与CDDP联合)，497C-T2便显示出针对NCIH460和CALU-6胂瘤的强的统计学显著的抗肺瘤活性。这种抗肿瘤活性在治疗期间持续。497C-T2在这一人肺癌模型中的抗肿瘤效应代表了一种现实的作为单一治疗的治疗途径。当与抑制肿瘤生长的细胞毒性抗癌药物CDDP(顺柏)联用时，497C-T2的效力极大增强。但是，顺铂单独不能根除肺瘤生长。还不清楚是否497C-T2的抗血管生成活性单独造成其抗肿瘤活性。目前公认的说法为生物化合物(例如干扰素、EGF和Her-2受体拮抗剂)可调控宿主反应，并提高标准化疗的效力。数据强烈表明497C-T2可作为主要的抗肿瘤剂使用，或者也可以作为用于治疗癌症的主要细胞毒性剂的附加协同治疗。如上所述，现在可以确定的是，蛋白质497C在内皮细胞中表达，且当促血管生成因子(如，VEGF和FGF2)刺激血管生成时，蛋白质497C的表达提高(参见WO2003/074073)。蛋白质497C属于四跨膜蛋白超家族，它们是包含参与细胞外信号识别的2个细胞外环和参与信号传导的2个细胞内尾(C-末端和N-末端)的跨膜受体。信号传导的关键特征在于在受体的细胞外环和配体之间形成配体-受体复合物。非限于理论，本申请人:认为497C的截短形式可能通过"可溶性受体机制"发挥作用497C的截短形式可以在细胞表面上保持可溶性，并可以被配体识别。因此，在497C的可溶形式(本发明的片段)和原始跨膜蛋白之间在配体识别上存在竟争，因而以剂量依赖的方式中造成促血管生成信号的传导的降低，因此，造成了血管生成的抑制，并因而造成了肿瘤体积的减小。因此在第一方面，本发明涉及包含SEQIDNO:3的氨基酸序列或与SEQIDNO:3的氨基酸序列具有至少50%、优选70%、更优选90%同一性的活性多肽，或者包含至少21个连续氨基酸的该活性多肽的片段，或者与所述片段的氨基酸序列具有至少50%、优选70%、更优选90%同一性的肽，条件是所述多肽不是SEQIDNO:2、其抗原性片段、SEQIDNO:16或其片段以及SEQIDNO:17或其片段。此处所使用的"肽"是指少于100个氨基酸以限定的顺序连接形成的短的分子。此处所使用的"多肽"是指至少100个氨基酸以限定的顺序连接形成的分子。此处所使用的"活性多肽"是指具有生物学活性的多肽。在本发明中，所述多肽具有抗血管生成和抗肿瘤活性。在本发明的一个实施方式中，所述活性多肽包含SEQIDNO:3的氨基酸序列，或与SEQIDNO:3的氨基酸序列具有至少50%、优选70%、更优选90%同一性，或者包含具有至少21个连续氨基酸的该活性多肽的片段，或者包含与所述片段的氨基酸序列具有至少50%、优选70%、更优选90%同一性的肽，条件是所述多肽不是SEQIDNO:2、其变体和抗原性片段、SEQIDNO:16或其片段以及SEQIDNO:17或其片段。SEQIDNO:2的"变体"是指基中一个、两个或更多个氨基酸发生突变的SEQIDNO:2。这样的变体包括例如SEQIDNO:2中残基的缺失或插入或取代，或者缺失、插入和取代的任何组合。SEQIDNO:2变体的一个例子为SEQIDNO:37,对应于249聚体跨膜4超家族成员2蛋白质(P41732),与SEQIDNO:2相比，其序列具有5个额外的N-末端氨基酸。在本发明的一个实施方式中，所述活性多肽包含SEQIDNO:3的氨基酸序列，或与SEQIDNO:3的氨基S臾序列具有至少50%、优选70%、更优选90%同一性，或者包含具有至少21个连续氨基酸的该活性多肽的片段，或者与所述片段的氨基S交序列具有至少50%、优选70%、更优选90%同一性的肽，条件是所述多肽不是SEQIDNO:2及其抗原性片段、SEQIDNO:2的变体(例如SEQIDNO:37)、SEQIDNO:16或其片段以及SEQIDNO:17或其片段。在一个实施方式中，根据本发明的多肽进一步包含使其折叠成为活性三维构型的工具。优选地，所述使其折叠成为活性构型的工具是包含30至70个氨基酸、优选45至65个氨基酸、更优选50至60个氨基酸、再更优选大约55个氨基酸的任意序列，所述序列与所述多肽的C-末端融合。在一个优选实施方式中，与所述多肽C-末端融合的所述序列为SEQIDNO:18(DRASPQPWRYRIRILAPSTSLRPHSSTTTTTTXIRULTKPERKLSWIXPPLS丽)。此处所使用的"三维构型"是指多肽发挥其生物功能的多肽三级结构，即其整体形状。此处所使用的术语"片段"是指具有抗胂瘤活性的蛋白质497CLEL结构域的截短形式。所述片^a优选具有SEQIDNO:3的至少21个连续氨基酸的氨基酸序列。在一个特定实施方式中，所述片段具有至少43个连续氨基酸的氨基酸序列。在另一个特定实施方式中，所述片段具有SEQIDNO:4(74个氨基酸)、SEQIDNO:5(49个氨基酸)或SEQIDNO:6(43个氨基酸)的氨基酸序列。片段还包括具有抗肺瘤活性的、与所述片段的氨基酸序列具有至少50%、优选70%、更优选90%同一性的肽。在另一个实施方式中，所述片段具有下述序列SEQIDNO:19:DERSRAVDHVQRSLSCCGVQNYTNWSTSPYFLEHGIPPSCC丽ETDCNPQDL丽LTVAATKVNQKGCYDLVTSFMETNMGIIAGSEQIDNO:20:AATKVNQKGCYDLVTSFMETNMGIIAGSEQIDNO:21:ISGFVFRHEIKDTFLRTYTDAMQTYNGNDERSSEQIDNO:22:YNGNDERSRAVDHVQRSLSCCGVQNSEQIDNO:23:SLSCCGVQNYTNWSTSPYFLEHGIPPSCCMNSEQIDNO:24:EHGIPPSCCMNETDCNPQDLHSEQIDNO:25:ETDCNPQDLHNLTVAATKVNQKGSEQIDNO:26:ISGFVFRHEIKDTFLRTYTDAMQTYNGNDERSRAVDHVQRSLSCCGVQNYSEQIDNO:27:ISGFVFRHEIKDTFLRTYTDAMQTYNGNDEKDTFLRTYTDTNWSTSPYFLAMQTYNGNDEEHGIPPSCCMSEQIDNO:28:ISGFVFRHEIRSRAVDHVQRSLSCCGVQNYNETDCNPQDLSEQIDNO:29:ISGFVFRHEIRSRAVDHVQRSLSCCGVQNYNETDCNPQDLHNLTVAATKVNQKGSEQIDNO:30:YNGNDERSRAVDHVQRSLSCCGVQNYTNWSTSPYFLEHGIPPSCCMNKDTFLRTYTDTNWSTSPYFLAMQTYNGNDEEHGIPPSCCMSEQIDNO:31:YNGNDERSRAVDHVQRSLSCCGVQNYTNWSTSPYFLEHGIPPSCCMNETDCNPQDLSEQIDNO:32:YNGNDERSRAVDHVQRSLSCCGVQNYSEQIDNO:33:YNGNDERSRAVDHVQRSLSCCGVQNYTNWSTSPYFLEHGIPPSCCMNETDCNPQDLHNLTVAATKVNQKGCYDLVTSFMETNMGIIAGSEQIDNO:34:SLSCCGVQNYTNWSTSPYFLEHGIPPSCCMNETDCNPQDSEQIDNO:35:SLSCCGVQNYTNWSTSPYFLEHGIPPSCCMNETDCNPQDLHNLTVAATKVSEQIDNO:36:IPPSCCMNETDCNPQDLHNLTVAATKVNQKG本发明还包括与所述片段的氨酸序列具有至少50%、优选70%、更优选90%同一性并具有抗肿瘤活性的肽。在一个实施方式中，所述具有至少21个连续氨基酸的SEQIDNO:3的片4殳选自SEQIDNO:4至6和SEQIDNO:19至36、或与所述片革殳具有至少50%、优选70%、更优选90%同一性的任何肽。在一个优选实施方式中，所述具有至少21个连续氨基酸的SEQIDNO:3的片段选自SEQIDNO:4、SEQIDNO:5和SEQIDNO:6或与所述片段具有至少50%、优选70%、更优选90%同一性的肽。第二方面，本发明涉及包含上述的多肽、片段和/或肽的药物。第三方面，本发明涉及包含上述的多肽、片段和/或肽，及一种或15多种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。第四方面，本发明涉及用于治疗人体或动物体癌症和/或肺瘤的方法中的包含上述的多肽、片段和/或肽及一种或多种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在一个特定的实施方式中，上述药物组合物进一步包含至少一种选自抗血管生成物质或抗肺瘤物质的另外的活性物质。本领域的技术人员可以根据需要实现的效果来选择这些物质。优选地，这些物质可以选自顺铂、卡铂、依托泊苷、异环磷酰胺、丝裂霉素、长春^^、长春瑞滨、吉西他滨、紫杉醇、多西他赛和依立替康等等。第五方面，本发明涉及药物组合物，包含协同有效量的-上述的多肽、片段和/或肽，和_选自顺铂和卡铂的铂配合物。使用已知的常规途径将可用于实施本发明的药物或组合物施用于哺乳动物。在此描述的药物或组合物可以通过相同的途径或通过不同的途径施用。例如，药物或化合物可以经口服或肠胃外(静脉内、皮下、肌肉内、脊柱内、腹膜内等)给予患者。当经肠胃外施用时，组合物优选利用至少一种药学上可接受的赋形剂配制成单位注射剂型(溶液、悬浮剂、乳液)。这样的赋形剂通常为无毒的，并且无治疗效应。这样的赋形剂的例子是水、水性载体(如盐水、林格氏溶液、葡萄糖溶液和汉克溶液(Hank'ssolution))和非水性载体(如不4军发油(例如玉米油、棉籽油、花生油和芝麻油)、油酸乙酯和十四烷酸异丙酯)。灭菌盐水为优选的H武形剂。贝武形剂可以包含少量添加剂，如提高溶解度、等渗性和化学稳定性的物质，例如抗氧化剂、緩沖液和防腐剂。当口服(或直肠)施用时，通常将化合物配制成单位剂型，例如片剂、胶嚢、栓剂或扁嚢剂。这样的制剂通常包括固体、半固体或液体的载体或稀释剂。示例性的稀释剂和赋形剂是乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯树胶、磷酸钙、矿物油、可可脂、可可油、藻酸盐、黄蓍胶、明胶、甲基纤维素、聚氧乙烯、单月桂酸山梨坦、羟基苯甲酸甲酯、鞋基苯曱酸丙酯、滑石粉和硬脂S臾镁。在优选实施方式中，本发明的药物组合物经静脉内施用。根据本发明，药物或组合物中存在的多肽的量能够有效治疗敏感的肿瘤。优选地，在药物或组合物中存在的多肽的量为0.01%至90%重量，优选为0.1%至10%重量，更优选为1%至5%重量。能够选择患者施用的最佳量以使患者康复的本领域的技术人员可以对这些量进行常规调整。第六方面，本发明涉及上述多肽、片段和/或肽、或者上述药物，或上述药物组合物在治疗癌症和/或肺瘤中的用途。根据本发明，待治疗的肿瘤优选为实体瘤。更优选地，待治疗的肺瘤选自肉瘤、癌瘤和淋巴瘤。这样的肿瘤的例子是膀胱癌、黑素瘤、乳腺癌、非何杰金氏淋巴瘤、脑癌、骨癌、结肠和直肠癌、肝癌、胰腺癌、子宫内膜癌、前列腺癌、肾癌、皮肤癌(非黑素瘤)、曱状腺癌、肺癌(小细胞肺癌和非小细胞肺癌)。第七方面，本发明涉及治疗方法，包括向需要治疗的受试者施用足以抑制癌症或肺瘤生长的量的上述多肽、载体和/或肽，或上述药物，或上述药物组合物。在一个特定的实施方式中，本发明涉及上述的治疗方法，进一步包括施用至少一种其它的抗癌或抗肺瘤药物。在这些方法中，施用包括局部施用、口月良施用、静脉内施用或腹膜内施用。第八方面，本发明涉及治疗方法，包括向需要治疗的受试者施用足以抑制癌症或肺瘤生长的协同有效量的-上述的多肽、片段和/或肽，和_选自顺铂和卡铂的铂配合物。在一个实施方式中，所述多肽或其片段和所述铂配合物同时施用。在另一个实施方式中，所述多肽或其片段和所述铂配合物顺序施用。优选地，所述多肽或其片段和所述铂配合物经各自的途径(即口服或肠胃夕卜(静脉内、皮下、肌肉内、脊柱内、腹膜内等))施用。在一个特定的实施方式中，所述铂配合物为顺铂。在另一个特定的实施方式中，所述铂配合物为卡铂。现在参照下面的非限制性的实施例进一步描述本发明。附图简述图1的图表代表了随着蛋白质497C-T2浓度的增加体外内皮细胞增殖的抑制％。图2a、2b、2c、2d、2e、2f、2g、2h和2i为不同条件下内皮细胞体外血管生成的照片-图2a:对照(緩冲液，尿素2M)-图2b:497C-T26.5^g/mL(0.27|uM)-图2c:497C-T213|tig/mL(0.54^M)—图2d:497C-T226|iig/mL(1.08pM)-图2e:497C-T248fig/mL(2一)-图2f:497C-T351pg/mL(2.55,-图2g:497C-T455|ug/mL(3.18,-图2h:497C-T556貼/mL(3.35一)-图2i:C-末端尾53|ug/mL(4.14pM)图3a、3b、3c、3d、3e、3f和3g为不同条件下进行的内皮细胞创伤分析的照片-图3b:497C-T220吗/mL(0.83|xM)—图3c:497C-T240吗/mL(1.66pM)-图3d:497C-T348|ng/mL(2.4,一图3e:497C-T460pg/mL(3.52阔-图3f:497C-T561/mL(3.65一)-图3g:C-末端尾63貼/mL(4.92pM)图4的图表代表了根据实施例7处理的不同组的小鼠的平均肿瘤体积(mm"对时间(天)的曲线图。图5的图表代表了根据实施例7处理的不同组的小鼠的平均相对肿瘤体积(没有单位)对时间(天)的曲线图。图6的图表代表了根据实施例8处理的不同组的小鼠的平均肿瘤体积(mm3)对时间(天)的曲线图。图7的图表代表了根据实施例8处理的不同组的小鼠的平均相对肿瘤体积(没有单位)对时间(天)的曲线图。具体实施例方式实施例1:制备蛋白质497C-T2插入鄉證,7C-:T2WW..首先，根据已知的步骤在pGEM⑧-Teasy载体系统(Promega⑧)中克隆基因497C(得到的载体被称为"pGEM-T-497C")。第二，通过使用质粒"pGEM-T-497C，，以及两个引物-CDS5(SEQIDNO:9)和CDS4(SEQIDNO:IO)(表l)的PCR扩增对应于蛋白质497C的细胞外部分LEL的插入片段T2(SEQIDNO:3),两个引物分别沿5，和3'端构造(frame)LEL结构域。<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>第三，根据已知的步骤将编码蛋白质497C-T2的DNA序列插入载体pET-30EK/LIC(Novagen)中(pET-30-497C-T2)。pET-30载体内的编码497C-T2的核酸序列在SEQIDNO:7中给出。然后将纯化的载体导入大肠杆菌BL21(DE3)pLys中以产生蛋白质。通过PCR来控制菌落以保证载体和插入物都存在。产生的蛋白质497C-T2的大小为24kD，高于预期的大小。通过测序确定，这是由于在C-末端加了一个补充尾(54个随才几氨基酸)和在N-末端加了一个His尾。产生的蛋白质497C-T2的氨基酸序列在SEQIDNO:8中给出。蛋白质497C-T2是在细菌的不溶性部分中产生的，因此需要在变性条件下进行提取。资^,497C-T2^炎承和遂^培养之后，裂解细菌，离心并弃去上清液。使用Tris-HCl20mM、8M尿素、5mM咪唑、0.5MNaCl、5mMGSH，pH8.0处理所得到的不溶性部分。该处理之后，离心悬浮液，收集上清液，使用0.45^m的膜过滤并弃去不溶物质。然后，通过使用与HPLC系统(Amersham)连接的His-Trap柱(Amersham⑧)从过滤的提取液中纯化蛋白质497C-T2。使用4M尿素和0.3M咪唑稀释得到的纯化蛋白质。为从制剂中去除这些试剂，溶液在4°C下进行透析。透析的这些步骤之后，纯化蛋白质在4,000xg下离心15min，并使用0.45|am的膜过滤以去除可能存在的沉淀物。按照布拉德福(Bradford)在1976年描述的方法(Anal.Biochem.72:248-54)和通过SDS-PAGE来控制纯化的蛋白质制剂的蛋白质含量。使用GeneGenius软件分析凝胶以通过图象分析定量纯度。为了提高蛋白质497C-T2的纯度，我们进行了第二个纯化步骤一一使用离子交换液相色谱法。使用緩冲液Tris-HCl20mM,pH8、2M尿素对HisTrap纯化的制剂三倍稀释(以降低NaCl的浓度到50mM),21并上样到与由Unicorn软件运行的HPLC系统(Amersham，GE，Saclay,法国)连接的MonoS柱上。然后彻底洗涤该柱，并使用离子强度线性梯度(0.05M至0.5MNaCl，在Tris-HCl20mM緩冲液、pH8、2M尿素中)进行洗脱。通过Bradford方法和SDS-PAGE来控制纯化的蛋白质制剂的蛋白质含量。实施例2:截短形式497C-T3、497C-T4和497C-T5的设计和制备。为了识别蛋白质497C-T2的活性位点，设计并制备了另外三种截短形式——称为497C-T3、497C-T4和497C-T5,以及对应于来自载体的N-末端连接His尾和C末端尾的对照多肽。为此，设计了5'特异性引物，使得蛋白质497C-T2的N末端序列能够渐次截短而不会影响纯化所得的截短形式必需的N-末端His尾。截短的497C-T3通过DNA的PCR扩增得到，使用作为模板的载体pET30-497C-T2、使得去除大部分的b结构域而保留第一个C-C桥的5'特异性引物497c-cds7(SEQIDNO:ll)和3'特异性引物497C画cds4(SEQIDNO:10)。<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>截短的497C-T4通过DNA的PCR扩增得到，^吏用作为才莫才反的载体pET30-497C-T2、使得去除第一个C-C桥、b和c结构域而保留dl结构域的5'特异性引物497c-cds9(SEQIDNO:12)和3'特异性引物497C画cds4(SEQIDNO:10)。<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>表5按照蛋白质497C-T2所述的方法，克隆和制备对应于截短形式497C-T3、497C-T4、497C-T5和C-末端尾的扩增产物。实施例3:体外测试497C-T2对内皮细胞增殖的抑制在37°C和5%C02的潮湿空气中，在EGM2-MV完全培养基(Cambrex)中培养HUVEC细胞至融合(confluency)。通过胰蛋白酶-EDTA消化(Versene，Eurobio)来收获细胞。五分钟之后，添力口3ml的含5%FCS的培养基来终止酶反应。然后在室温下以220g离心细胞10分钟，使用5ml培养基洗涤细胞两次，将细胞悬浮在完全培养基中，计数并调节到50000细胞/ml。将细胞悬液以每孔IOOinL分布在96孔细胞培养级的微板(5000细胞/孔)中，并与含150mMNaCl和2M尿素的Tris-HCl20mM緩冲液(pH8)中的不同浓度的纯化蛋白质497C-T2—起孵育；该緩沖液用作对照。在37°C下42小时之后，通过p塞唑蓝溴化四唑(MTT)方法来测量细胞的增殖。简而言之，将MTT(Sigma)溶于PBS中，浓度为5mg/ml，然后将溶液进行过滤(0.22pm),并向％孔孩么板的每个孔中添加10pi该溶液。在37。C下和5y。C02的潮湿空气中孵育3小时之后，樣^反在220xg下离心10min，弃去上清液，然后通过向每个孔中添加100plDMSO来溶解晶体。使用与KC4(Bio-Tek)软件配合的iuQuant微板阅读器(Bio-TekInstrumentgmbh,Colmar,法国)来测量570nm处的光密度(OD)。通过减去空白孔的OD值(从没有细胞的孔得到的OD值)来校准OD，并相对于对照(从包含未经处理的HUVEC的孔中得到的OD,代表最大增殖响应，即100%)衡量细胞增殖的抑制。如图1所示，蛋白质497C-T2以剂量依赖的方式抑制人内皮细胞增殖。该抑制在122jug(即5juM)的蛋白质497C-T2浓度下为77%。实施例4:497C-T2、497C-T3、497C-T4和497C-T5对体外血管生成的抑制体外测试纯化的蛋白质497C-T2、497C-T3、497C-T4和497C-T5对Matrigel上FGF2和VEGF诱导的HUVEC的血管生成的作用。24孔板用250iuLBDMatrigelTM/孔制备，然后在培养箱中孵育30分钟。HUVEC细胞的制备参照上述的实施例3,且每个孔中接种70000个细胞并与含150mMNaCl和2M尿素的Tris-HCl20mM緩冲液(pH8)中的不同浓度的纯化蛋白质497C-T2、497C-T3、497C-T4或497C-T5一起孵育；该緩冲液被用作对照-图2a:对照(緩沖液，尿素2M)-图2b:497C-T26.5貼/mL(0.27^M)-图2c:497C-T213pg/mL(0.54,一图2d:497C-T226/mL(1.08|nM)-图2e:497C-T248貼/mL(2|tiM)-图2f:497C-T351pg/mL(2.55pM)-图2g:497C-T455叫/mL(3.18,-图2h:497C-T556叫/mL(3.35|uM)-图2i:C-末端尾53)ng/mL(4.14|iM)如图2b、2c、2d和2e所示，蛋白质497C-T2在体外以剂量依赖的方式抑制血管生成。此外，如图2f、2g和2h所示，截短形式497C-T3、497C-T4和497C-T5显示出不同水平的活性497C-T3(图2f)和497C画T4(图2g)的抗血管生成活性与497C-T2几乎同样有效，表明a、b和cLEL结构域对于蛋白质497C-T2的抗血管生成活性不是必需的。相反，497C-T5(图2h)仅显示出残留的抑制活性，而C-末端尾完全无活性(图2i)。实施例5:497C-T2、497C-T3、497C-T4和497C-T5对人内皮细胞迁移的抑制通过具有少许修改的Sato和Rifkin描述的创伤分析(JCellBiol.1988;107:1199)来测试细胞的迁移。在EGM-2MV生长培养基(Cambrex)中生长的HUYEC在24孔板中以每孔80000个细胞的浓度接种在500IliL生长培养基中，并在37。C下和含5%C02的潮湿空气中生长至融合。仅在一条线上使用塑料尖端刮除细胞。创伤之后，将培养基更换为新鲜的培养基(对照，图3a)或补充下述物质的新鲜培养基—图3b:497C-T220吗/mL(0,83|iM)-图3c:497C-T240吗/mL(1.66|tiM)-图3d:497C-T348jig/mL(2.4,—图3e:497C-T460|iig/mL(3.52阔-图3f:497C-T561pg/mL(3.65pM)-图3g:C-末端尾63pg/mL(4.92,培养18小时之后，使用倒置显微镜(Analysis,Olympus,Rungis,法国)观察细胞并照相。如图3b和3c所示，蛋白质497C-T2以剂量依赖的方式抑制人内皮细力包的迁移。此外，如图3d、3d、3e和3f所示，截短形式497C-T3、497C-T4和497C-T5显示出不同水平的活性。截短形式497C-T3与蛋白质497C-T2类似地抑制细胞迁移(图3d)。相反，截短形式497C-T4(图3e)比497C-T2活性低，497C-T5(图3f)显示出非常有限的抗迁移活性，而C-末端尾(图3g)完全没有活性。这些结果表明a和bLEL结构域对蛋白质497C-T2的抗迁移活性不是必需的。实施例6:肿瘤样品中蛋白质497C的表达在多种不同的人肺瘤样品中对基因497C的表达进行了筛查。在每种病理样品中，将肺瘤的外周与肿瘤的核心进行分离，在mRNA表达、RT-PCR之后对比了在这两个区域中基因497C的表达。分析了来自肾肿瘤的19个病理活组织检查样品。在19位患者的13位中，肿瘤核心的497C表达比肿瘤外周的497C表达高得多。班爐^分析了来自人肺肺瘤的40个病理活组织4企查样品。在40位患者的37位中，肿瘤外周的497C表达比肿瘤核心的497C表达高得多。肿瘤外周的497C表达水平与患者的结(nod)状况(即转移潜力)之间密切相关。样品的解剖检验也显示肿瘤外周的血管化比肿瘤核心高得多(如一般在肺癌中已确定的)。參顺脊口S分析了来自人结肠肺瘤的33个病理活组织检查样品。在33位患者的25位中，胂瘤外周的497C表达比肿瘤核心的497C表达高得多。实施例7:497C-T2在瑞士棵鼠中对NCIH460人肿瘤的体内测试在37。C下和5%C02的潮湿空气中，在包含2mML-谷氨酰胺、调整到4.5g/L的葡萄糖(参考号G7528，批号033K0121,Sigma,法国)并补充10mMHEPES(参考号H0887，批号113K2338,Sigma，法国)、1.0mM丙酮酸钠(参考号CSTVAT00-0U,批号520818,Sigma,法国)和100/o胎牛血清(FCS;参考号CVFSVF00-01,批号S13021，Eurobio，法国)的RPMI1640完全培养基(参考号CMlRPM08-01，批号623615,Eurobio，法国)中培养NCIH460细胞作为粘附细胞。使用75cn^烧瓶进行细胞扩增以达到90xl(f个细胞。在第0天，通过去除培养基并添加3ml胰蛋白酶-EDTA(参考号CEZTDA00-0U,批号633920,Eurobio,法国)从75cm2烧瓶中收集NCIH460细胞(人肺癌)。在37°C下孵育5min之后，细胞从塑料脱离，并添加3ml包含10%胎牛血清的RPMI1640培养基来终止酶反应。然后在室温下以700g离心细胞5分钟。重新悬浮细胞于包含L-谷氨酰胺(2mM)、葡萄糖(4.5g/1)、丙酮酸钠(lmM)并使用HEPES(10mM)緩冲的、不含血清的RPMI1640培养基中。细胞计数，活的NCIH460细胞的数目〉99%。然后在不含血清的培养基中将细胞的数量调节到25x106细胞/ml。狩通过IP注射氯胺酮-曱苯噻。秦(80mg/kg-12mg/kg;参考号K-113,Sigma,法国)麻醉30只健康的雌性瑞士棵鼠。然后在每只小鼠的右侧腹皮下植入NCIH460细胞(5xl(f个细胞/小鼠，在200pl不含血清的培养基中)。在植入NCIH460细胞之后的第12天，将30只小鼠随机分为6组，每组5只小鼠。随机分配后肺瘤的体积已经长到228至468mm3，且平均肿瘤体积在组间不存在统计学差异。开始于第12天和结束于第28天的处理方案总结于表6中-组1动物使用载体溶液治疗处理(C批)Tris-HClpH7.5、2M尿素、150mMNaCl、0.1mMCaCl2，-组2动物-使用生理血清中的0.5mg/mL顺铂溶液处理(CDDP,顺二氯二氨基铂(II),参考号P4394,批号014K0993,Sigma,法国，纯度100%,MW.300),-组3和4动物使用补充1mg/mL的测试物质497C-T2的载体溶液处理(A批)，-组5动物使用补充1mg/mL的测试物质497C-T2的载体溶液处理(A批)，并进一步接受CDDP。-组6动物使用补充1.8mg/mL的测试物质497C-T2的载体溶液处理(B批)，并进一步接受CDDP。所有的溶液经IP注射。按照方案Q2DX8(即每2天给药1次，共给药8次对组1、2、3、5和6进行注射。按照方案Q1DX16(即每天给药1次，共给药16次)对组4进行注射。CDDP重新悬浮在灭菌的生理血清中，浓度为0.5mg/mL,并按照处理方案Q2DX8以5mg/kg的浓度、10mL/kg的体积IP注射。注射之后观察小鼠2小时。在使用脱颈推法处死小鼠之前，使用氯胺酮/曱苯噻嗪(80mg/kg-12mg/kg;参考号K-113,Sigma,法国)麻醉动物。每日观察动物。在试-验记录中记录动物行为的改变。直到试-验结束，每2天记录1次体重和肺瘤体积。如下计算下面列举的数据-使用平均胂瘤体积(MTV)来制作肿瘤生长曲线，-平均相对肿瘤体积(MRTV)计算为时间t的MTV与注射时(t-第12天)的体积的比例。-肿瘤生长抑制(T/C,%)计算为处理组的平均肺瘤体积与载体组的平均肿瘤体积的比例。<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>表7:在第12天和第28天携带NCIH-460胂瘤的小鼠的平均体重(MBW),小鼠使用载体、5mg/kgCDDP(方案Q2DX8,G2)、10.0mg/kg497C-T2(方案Q2DX8,G3)、10.0mg/kg497C-T2(方案Q1DX16，G4)、联合10.0mg/kg497C-T2和5mg/kgCDDP(方案Q2DX8，G5)以及联合18.0mg/kg497C-T2和5mg/kgCDDP(方案Q2DX8,G6)进行处理。对所有组进行肿瘤体积(V)、达到"V"的时间、肿瘤加倍时间(DT)、相对肺瘤体积(RTV)和肿瘤生长抑制(T/C)的统计学分析。数据表示为平均值±SD。数据组为正常分布。进行单变量分析来评估组间的差异。然后使用Student'st检验来确定统计学显著性。P<0.05被认为统计学显著。使用XLSTAT(Addinsoft,法国)进行统计分析。如表7所示，载体对体重无影响小鼠的行为和体重增长正常，有没有动物过早死亡。在两种测试剂量下(IO和18mg/kg)使用测试物质497C-T2进行处理的过程中，未观察到毒性。相反，使用CDDP处理的组2、5和6观察到严重的毒性(体重降低-12至-18%;p<0.05)。平均肺瘤体积(MTV)、平均相对肿瘤体积(MRTV)、肿瘤体积和肿瘤生长参数的结果示于图4、5和表8、9中。如表8所示，与载体组1中的小鼠(4441±1135mm"相比，使用CDDP处理的组2中的小鼠的MTV(1440±1097mm"在第28天降低。使用10mg/kg的测试物质497C-T2分别每天注射一次和每隔一天注射一次的组3(2482±2075mm3)和组4(3167±1681mm3)WMTV在第28天也降低了。与使用载体处理的组1中的动物(4441±1135mm"相比，组5(807士692mm"和组6(639±416mm"中的动物MTV出现巨大的下降。在第28天，组2中小鼠的T/C比例(其为肿瘤生长抑制的参数)为32%,表明CDDP与载体处理的组1相比降低了68%的肿瘤大小。组3中小鼠的T/C为56o/。，组4中小鼠的T/C为71%,表明当作为单一治疗剂时，测试物质具有中等的抗肿瘤活性。但是，当与CDDP联用时，组5和组6中小鼠的T7C分别降低到18%和14%。这说明当与细胞毒性剂(例如CDDP)联用时，497C-T2具有高效的抗肿瘤活性。载体处理的组1中肿瘤大小加倍时间(DT)为1.23±0.49天。使用单独的CDDP处理的组2中的小鼠的DT增加4倍(5.12士2.89天)。组3和组4的DT(分别为4.08±1.4天和5.9±1.21天)与组2的DT类似。这表明当作为单一治疗剂时，497C-T2的降低肿瘤活性同CDDP—样有效。但是最重要的是，与载体处理组1中的小鼠测得的DT相比，组5和组6中的小鼠使用497C-T2和CDDP的双治疗，它们的DT增加了20倍(分别为25.02±29.89天和20.07±9.28天)。这进一步确认了当单独施用或与CDDP联用时测试物质497C-T2的高效抗肺瘤活性。如表9所示，MRTV的测量值证实组6中的动物的肺瘤体积降低的最多，在两个测试浓度下(组5和组6)肿瘤体积都降低。单独4吏用497C-T2处理在第28天得到的MRTV为7.37(组3)或6.76(组4)，使用顺铂处理得到的MRTV为4.88(组2)。所有的这些结果证实了当单独用药或与顺铂协同用药时，497C-T2为高效的抗肿瘤剂。实施例8:在瑞士棵鼠中497C-T2对人非小细胞肺癌(CALU-6)异种移植物模型的作用的体内测试在37。C下和5。/oC02的潮湿空气中，在含10。/。胎牛血清(FCS;参考号CVFSVF00-01,批号S1302l,Eurobio,法国)的EMEM完全培养基(参考号CM1MEM18-01,批号462502,Eurobio,法国)中培养CALU-6细胞作为粘附细胞。在75cm2烧瓶中进行细胞扩增以达到90xl(^个细胞。在第0天，通过去除培养基并添加3ml胰蛋白酶-EDTA(参考号CEZTDA00-0U,批号633920,Eurobio,法国)从75cm2烧瓶中收集CALU-6细胞(人肺癌)。在37°C下孵育5min之后，细胞与塑料脱离，并添加3ml含10%胎牛血清的EMEM培养基来终止酶反应。然后在室温下以700g离心细胞5分钟。细胞重新悬浮于不含血清的EMEM培养基中。通过台盼蓝排除(参考号CSTCOL03-OU,批号434511,Eurobio，法国)对细胞计数并评估其生存力。活的CALU-6细胞数>99%。然后在不含血清的培养基中将细胞的数量调节到25x106细胞/ml。<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>表8:在载体、497C-T2(10mg/kg和18mg/kg)和CDDP(5mg/kg)IP处理后棵鼠中人NCIH460肿瘤生长的监测。MTV:平均胂瘤体积；T/C:处理/载体胂瘤体积比例；DT:胂瘤体积加倍的时间。a:p<0.05，与Gl相比；b:p<0.05,与G2相比；c:p<0.05，与G3相比；d:p<0.05,与G4相比。<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>表9:携带NCIH460肿瘤并使用载体(组1)、单独CDDP(组2)、每隔一天(组3)或每天一次(组4)施用497C-T2、联合使用CDDP和低剂量497C-T2(组5)及联合使用CDDP和高剂量497C-T2(组6)进行处理的动物的平均相对肿瘤体积(MRTV)。通过IP注射氯胺酮-曱苯噻。秦(80mg/kg-12mg/kg;参考号K-113,Sigma，法国)麻醉30只健康的雌性瑞士棵鼠。然后在每只小鼠的右侧腹皮下植入CALU-6细胞(5xl06个细胞/小鼠，在200|il不含血清的培养基中)。植入之后观察小鼠2小时。义、逻才袭在植入CALU-6细胞之后的第12天，将30只小鼠随机分为6组，每组5只小鼠。随机分组后肺瘤的体积已经长到228至468mm3，且平均肿瘤体积在组间不存在统计学差异。开始于第12天和结束于第28天的治疗方案总结于表10中。-组1动物使用载体溶液(Tris-HClpH7.5、2M尿素、150mMNaCl、O.lmMCaCl2)处理(C批)；-组2动物<吏用生理血清中的0.5mg/mL顺铂溶液(CDDP,顺二氯二氨基铂(II),参考号P4394,批号014K0993,Sigma，法国，纯度100%,MW.300)处理。-组3动物使用补充剂量为10mg/kg的测试物质497C-T2的载体处理。-组4动物使用补充剂量为10mg/kg的测试物质497C-T2的载体处理，并进一步接受CDDP。按照方案Q2DX8(即每2天给药1次，共给药8次)对组1、2、3和4进4于注射。将CDDP重新悬浮于灭菌生理血清中，浓度为0.5mg/mL，并按照处理方案Q2DX8以5mg/kg的浓度、10mL/kg的体积进行IP注射。注射之后观察小鼠2小时。在使用脱颈推法处死小鼠之前，使用氯胺酮-甲苯噻溱(80mg/kg-12mg/kg;参考号K-113,Sigma,法国)麻醉小鼠。所有动物使用测径器每周两次测量肿瘤大小。计算肿瘤体积(mm3)的公式为(长x宽2)/2(4)。按照实施例7计算平均肿瘤体积(MTV)、平均相对肿瘤体积(MRTV)和肿瘤生长抑制(T/C)。沐,如表ll所示，载体无影响小鼠的行为和体重增长正常，没有动物过早死亡(除了组1中的5号小鼠)。以10mg/kg的剂量使用测试物质497C-T2进行处理的过程中未观察到发现毒性，观察到体重略有增长(+1.44g)。相反，使用CDDP处理的组2和4中观察到严重的毒性(体重分别降低12.6%和8.7%)。组l与组2/组4之间、以及组3与组2/组4之间37存在统计学显著的差异(p<0.0001),但是组2与组4之间不存在统计学显著的差异。组<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>表11:在第12天和第28天携带CALU-6肿瘤的小鼠的平均体重(MBW),小鼠使用载体、5mg/kgCDDP(方案Q2DX8,G2)、10.0mg/kg497C-T2(方案Q2DX8,G3)、联合使用10.0mg/kg497C-T2和5mg/kgCDDP(方案Q2DX8,G4)进行处理。平均胂瘤体积(MTV)、平均相对肿瘤体积(MRTV)、肺瘤体积和肺瘤生长参数的结果示于图6、7和表12、13中。与载体组1中的小鼠(1233.44±663.82mm3)相比，使用CDDP处理的组2中的小鼠的MTV(742.44±215.85mm"在第28天降低。使用测试物质497C-T2，以10mg/kg每两天注射一次的组3中MTV在第28天也降低(813.70±439.00mm3)。这些结果得到在第28天的MRTV分析的证实(表13)。与组1载体处理的动物(1233.44±663.82mm"相比，组4中的动物观察到MTV的巨大下降(430.89士290.89mm3)。组1和使用测试物质处理的两个组之间的差异具有统计学显著性(p<0.0001,与组4相比；p=0.003,与组3相比)。组2和组4之间的差异也是显著的(pK).OOl)。相反，组2(CDDP单独)和组3097c-T2单独)之间未观察到统计学差异。组1与处理组之间首次出现的统计学显著性对于组3是在第22天和对于组4是在第20天。这些结果通过得到了第28天的MRTV分析的证实(表13)。与组1载体治疗的动物(1233.44土663.82mm3)相比，组4中的动物观察到MTV的显著降低(430.89±290.89mm3)。<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>表12:基于T/C比例的生长抑制作为肺瘤生长抑制的参数的T/C比例(表12)揭示了测试物质作为单一治疗剂具有轻微的抗肺瘤活性，其与载体处理的组1相比时降低了27%的肺瘤大小。但是当与CDDP联用时，相对于载体处理的组l,抑制率达肿瘤大小降低64%。这些结果直接表明，当与细胞毒性剂(例如CDDP)联用时，497C-T2具有高效的抗肺瘤活性。<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>表13:携带NCIH-460细胞并根据治疗方案Q2DX8使用载体(组1)、CDDP单独(组2)、497C-T2(10.0mg/kg)(组3)或联合使用497C-T2和CDDP(组4)进行处理的动物的平均相对肿瘤体积(MRTV)。如表13所示，组4中动物的MRTV在第28天达到2.96,这证实了497C-T2与顺柏具有协同效应。而且，单独4吏用顺钼(组2)或单独4吏用497C-T2(组3)在第28天显示出非常接近的MRTV,表明497C-T2也是一种有效的单治疗抗肿瘤剂。权利要求1.一种包含SEQIDNO3的氨基酸序列或与SEQIDNO3的氨基酸序列具有至少50％、优选70％、更优选90％同一性的活性多肽，或者具有至少21个连续氨基酸的该活性多肽的片段，或者与所述片段的氨基酸序列具有至少50％、优选70％、更优选90％同一性的肽，条件是所述多肽不是SEQIDNO2、其变体和抗原性片段、SEQIDNO16或SEQIDNO17。2.根据权利要求1所述的多肽，其中，所述多肽进一步包含使其折叠成活性三维构型的工具。3.根据权利要求2所述的多肽，其中，所述使其折叠成活性三维构型的工具是包含30至70个氨基酸，优选包含45至65个氨基酸，更优选包含50至60个氨基酸，再更优选包含大约55个氨基酸的任何序列，所述序列与所述多肽的C-末端融合。4.根据权利要求1_3中任一项所述的多肽，其中，所述片段具有SEQIDNO:4、SEQIDNO:5或SEQIDNO:6的氨基酸序列。5.根据权利要求1-4中任一项所述的多肽，其中，所述多肽具有抗胂瘤活性。6.—种包含权利要求1-5中任一项所述的多肽的药物。7.—种包含权利要求1-5中任一项所述的多肽和一种或多种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。8.—种用于治疗人或动物体癌症和/或肿瘤的药物组合物，包含权利要求1-5中任一项所述的多肽和一种或多种药学上可接受的赋形剂。9.根据权利要求7或8所述的药物组合物，进一步包含至少一种选自抗血管生成物质或抗肿瘤物质的另外的活性物质。10.—种药物组合物，包含协同有效量的-根据权利要求1-5中任一项所述的多肽，和-选自顺铂和卡铂的铂配合物。11.才艮据;f又利要求7-10中任一项所述的药物组合物，其为适于局部、全身、口服、皮下、透皮、肌肉内或腹膜内施用的形式。12.根据权利要求7-11中任一项所述的药物组合物，其中，所述多肽的存在量为0.01%至90%重量，优选为0.1%至10%重量，更优选为1%至5%重量。13.根据权利要求1-5中任一项所述的多肽、或权利要求6所述的药物、或权利要求7-12中任一项所述的药物组合物用于治疗癌症和/或肺瘤的用途。14.根据权利要求13所述的用途，其中，所述胂瘤为实体瘤。15.根据权利要求14所述的用途，其中，所述实体瘤选自肉瘤、癌瘤和'淋巴瘤。16.—种抑制癌症和/或肿瘤生长的方法，包括向需要治疗的受试者施用足以抑制癌症或肿瘤生长的量的根据权利要求1-5中任一项所述的多肽、或权利要求6所述的药物、或权利要求7-12中任一项所述的药物组合物。17.根据权利要求16所述的方法，其中，所述肿瘤为实体瘤。18.根据权利要求16或17所述的方法，进一步包括施用至少一种其它的抗癌或抗肿瘤药物。19.根据权利要求16-18中任一项所述的方法，其中，施用包括局部施用、口月l施用、静脉内施用或腹膜内施用。20.—种抑制癌症或肿瘤生长的方法，包括向需要治疗的受试者施用足以抑制癌症或肿瘤生长的协同有效量的-根据权利要求1-5中任一项所述的多肽，和-选自顺铂和卡铂的铂配合物。21.根据权利要求20所述的方法，其中，所述多肽和所述铂配合物同时施用。22.根据权利要求20所述的方法，其中，所述多肽和所述铂配合物顺序施用。23.根据权利要求20所述的方法，其中，所述多肽和所述铂配合物经各自的途径施用。24.根据权利要求20-23中任一项所述的方法，其中，所述铂配合物为顺铂。25.根据权利要求20-23中任一项所述的方法，其中，所述铂配合物为卡铂。全文摘要本发明涉及包含SEQIDNO3的氨基酸序列或与SEQIDNO3的氨基酸序列具有至少50％、优选70％、更优选90％同一性的活性多肽，或者具有至少21个连续氨基酸的该活性多肽的片段，或者与所述片段的氨基酸序列具有至少50％、优选70％、更优选90％同一性的肽，条件是所述多肽不是SEQIDNO2、其变体和抗原性片段、SEQIDNO16或SEQIDNO17。文档编号A61K38/17GK101679499SQ200880016381公开日2010年3月24日申请日期2008年4月11日优先权日2007年4月11日发明者S·科林,S·阿尔玛穆德申请人:基因信号国际公司