抗-icos抗体及其在治疗肿瘤、移植和自身免疫病中的应用的制作方法

专利名称：抗-icos抗体及其在治疗肿瘤、移植和自身免疫病中的应用的制作方法
抗-1 cos抗体及其在治疗肿瘤、移植和自身免疫病中的应
用1.介绍本发明涉及效应功能提高的抗-IC0S抗体。本发明也涉及含有介导下列一种 或多种作用的效应功能增强的抗-IC0S抗体的组合物补体依赖性细胞介导的细胞毒 性(CDC)、抗原依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)和抗体依赖性吞噬作用(调理作用 (opsonisation)).本发明还涉及含有抗-IC0S抗体IgGl和/或IgG3人同种型的组合物， 以及含有抗-IC0S抗体IgG2和/或IgG4人同种型的组合物，所述组合物能介导人ADCC、 ⑶C和/或抗体依赖性吞噬作用。本发明还涉及使用效应功能增强的治疗性抗-IC0S抗体治疗和预防T细胞介导的 疾病和失调的方法，所述疾病和失调例如但不限于，慢性感染、自身免疫性疾病或失调、炎 性疾病或失调、移植物抗宿主病(GVHD)、移植物排斥和T细胞增殖性疾病。2.背景IC0S是含有细胞外(Ig)V样结构域的I型跨膜蛋白质。IC0S用作B7h共刺激分子 的受体。幼稚人T细胞中IC0S低表达，但TCR确定(engagement)后数小时表达上调。在 活化T细胞亚群如Thl、Th2和Thl7⑶4+细胞中IC0S持续表达。假如在活化T辅助细胞群体集中表达IC0S，希望使用效应功能增强的治疗性 抗-IC0S抗体提高治疗和预防T细胞介导的疾病和失调的效果，所述疾病和失调例如但不 限于，慢性感染、自身免疫性疾病或失调、炎性疾病或失调、移植物抗宿主病(GVHD)、移植物 排斥和T细胞增殖性疾病。3.发明概述本发明涉及效应功能增强的结合于人IC0S分子的抗-IC0S抗体，以及包含这些抗 体的组合物。在一个实施方式中，本发明提供了比亲本JMab-136能更有效的介导抗体效应 功能的JMab-136抗-IC0S抗体(参见美国专利6，803，039)。在一个实施方式中，本发明的 抗-IC0S抗体含有变异Fc区。在一个实施方式中，本发明的抗-IC0S抗体含有不同于亲本 抗体的糖基化形式。本发明也提供包含效应功能增强的抗-IC0S抗体的药物组合物。本发明还涉及使用效应功能增强的治疗性抗-IC0S抗体治疗或预防T细胞介导的 疾病和失调的方法，所述疾病和失调例如但不限于，慢性感染、自身免疫性疾病或失调、炎 性疾病或失调、移植物抗宿主病(GVHD)、移植物排斥和T细胞增殖性疾病。3. 1.定义本文所用术语“抗体”(免疫球蛋白)包括单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多 克隆抗体、由至少两种完整抗体形成的多特异性抗体(如双特异性抗体)、人抗体、人源化 抗体、骆驼化抗体、嵌合抗体、单链Fv(SCFv)、单链抗体、单结构域抗体、结构域抗体、Fab片 段、F(ab' ) 2片段、具有所需生物学活性的抗体片段、二硫键连接的Fv(SdFv)和抗独特型 (抗-Id)抗体(包括例如，本发明抗体的抗-Id抗体)、细胞内抗体和上述物质的表位结合 片段。具体说，抗体包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫学活性片段，即含有抗原
5结合位点的分子。免疫球蛋白分子可以是任何类型(如化6、18￡、化11、180、184和18幻、类 (如 IgG” IgG2、IgG3、IgG4、IgA,和 IgA2)或小类。天然抗体通常是约150，000道尔顿的异源四聚体糖蛋白，它们由两个相同的轻链 (L)和两个相同的重链(H)组成。各轻链通过一个共价二硫键与重链相连，而不同免疫球 蛋白同种型的重链之间的二硫键连接数不同。各重链和轻链也具有规则间隔的链内二硫桥 键。各重链的一端具有可变区(VH)，后接若干恒定区。各轻链的一端具有可变区(VL)，另 一端具有恒定区，轻链的恒定区与重链的第一恒定区对应排列，轻链可变区与重链可变区 对应排列。根据轻链恒定区的氨基酸序列，将轻链分为、链或k链。在本文中，K轻链 的可变区也可被称为VK。术语“可变区”也可用于描述重链或轻链的可变域。相信某些特 定氨基酸残基会形成轻链和重链可变域之间的界面。这类抗体可衍生自任何哺乳动物，包 括但不限于人、猴、猪、马、兔、犬、猫、小鼠等。术语“可变”指以下事实不同抗体之间可变域的某些部分的序列广泛不同，这 些序列负责产生各种具体抗体与其特定抗原的结合特异性。然而，可变性并不是均勻地 分布在抗体的可变域上。在轻链和重链可变域中称为互补决定区(CDR)的区段比较集 中。可变区中高度保守的部分称为构架区(FW)。天然重链和轻链的可变域各自包含四个 FW区，主要采取片层构型，通过三个⑶R连接，形成环连接片层结构，在一些情况 下形成片层结构的一部分。各链中的CDR被FW区聚集在一起，紧密相邻，与另一条链 的CDR —起形成抗体的抗原结合位点(参见Kabat等，《免疫学感兴趣的蛋白质的序列》 (Sequences ofProteins of Immunological Interest)，第 5 版，公共卫生月艮务部(Public HealthService)，国立卫生研究院(National Institutes of Health)，美国马里兰州贝塞 斯达(Bethesda，MD)(1991))。恒定区通常不直接参与抗原结合，但可能影响抗原结合亲和 力，并可能具有各种效应功能，如抗体参与ADCC、⑶C和/或凋亡。本文所用术语“高变区”指与抗原结合有关的抗体的氨基酸残基。高变区包括 “互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基(例如，轻链可变区的残基24-34 (LI)、50_56(L2)和 89-97 (L3)，以及重链可变区的残基 31-35 (HI) ,50-65 (H2)和 95-102 (H3) ；Kabat 等，免疫学 感兴趣的蛋白质序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest),第 5 版，公 共卫生服务部(Public Health Service)，马里兰州贝塞斯达的国立卫生研究院(National Institutes of Health, Bethesda, MD) (1991))和/或来自“高变环”的残基(例如轻链 可变区的残基26-32 (L1)、50-52 (L2)和91-96 (L3)，以及重链可变区的残基26-32 (HI)、 53-55 (H2)和 96-101 (H3) ；Chothia 和 Lesk, J. Mol. Biol.，196 :901_917 (1987))。“构架”或 “FW”残基是侧接于CDR的那些可变区残基。嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、结构域抗体、双 抗体、疫苗抗体、线性抗体和双特异性抗体中均存在FW残基。本文所用的“Fc区”包括含有除第一恒定区免疫球蛋白结构域之外的抗体恒定区 的多肽。因此，Fc指IgA、IgD和IgG的后两个恒定区免疫球蛋白结构域，IgE和IgM的后三 个恒定区免疫球蛋白结构域，以及这些结构域N末端的弹性绞链区。对IgA和IgM而言，Fc 可包括J链。就IgG而言，Fc包括免疫球蛋白结构域C Y 2和C Y 3以及C y 1和C Y 2之间的 绞链区。虽然Fc区的边界可变，但人IgG重链Fc区通常被定义为羧基端包括残基C226或 P230，其中编号是按照Kabat等所述的EU索引进行的。(1991，NIH出版物91-3242，弗吉尼 亚州斯普林菲尔德的国家技术信息服务中心(National Technical Information Service,
6))0 “Kabat所述的EU索引”指Kabat等，同上所述的人IgGl EU抗体的残 基编号。Fc可单独指这个区域，或抗体、抗体片段或Fc融合蛋白中的这个区域。Fc变异蛋 白可以是抗体、Fc融合蛋白或任何含有Fc区的蛋白质或蛋白质结构域。特别优选的是含 有变异Fc区，即非天然产生的Fc区变体的蛋白质。与野生型氨基酸序列相比，非天然产生 的Fc区(本文中也称为“变异Fc区”)的氨基酸序列包含至少一个氨基酸残基的取代、插 入和/或缺失。变异Fc区序列中由于插入或取代而出现的任何新氨基酸残基可称为非天 然产生的氨基酸残基。注在许多Fc位置上观察到多态性，这些位置包括但不限于Kabat 270、272、312、315、356和358，因此所述序列和现有技术的序列之间可能存在略微差异。本文所用术语“单克隆抗体”指获自基本均一抗体群体的抗体”，即除了可能出现 的少量天然产生的突变外，群体包含的单独抗体是相同的。单克隆抗体具有针对某一抗原 性位点的高度特异性。而且，与通常包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的常规(多 克隆)抗体制剂相比，每一单克隆抗体针对抗原的单一决定簇。除了其特异性外，单克隆抗 体的优势还在于可通过杂交瘤细胞合成，这些杂交瘤细胞不被其他产生免疫球蛋白的细胞 污染。本领域受训技术人员了解其他生产方法，例如，单克隆抗体可由编码单克隆抗体重链 和轻链基因稳定或瞬时转染的细胞产生。定语“单克隆”表明抗体的特征在于获自基本均一的抗体群，而不解释为需要通过 任何特定方法对抗体进行工程改造。本文所用术语“单克隆”指起源于克隆细胞群体的抗 体，所述细胞包括任何真核、原核或噬菌体克隆，而非工程改造抗体的方法。例如，本发明所 用单克隆抗体可通过Kohler等，Nature，256 =495(1975)首先描述的杂交瘤方法产生，或通 过任何重组DNA方法产生(参见例如，美国专利号4，816，567)，包括使用例如Clackson等， Nature, 352 :624_628 (1991)和 Marks 等，J. Mol. Biol.，222 :581_597 (1991)所述技术从噬 菌体抗体文库中分离产生。可使用这些方法产生单克隆的哺乳动物抗体、嵌合抗体、人源化 抗体、人抗体、结构域抗体、双抗体、疫苗抗体、线性抗体和双特异性抗体。“人抗体”可为源于人的抗体，或获自经工程改造对抗原性刺激响应产生特异性人 抗体的转基因生物体的抗体，并能通过本领域任何已知方法产生。在某些技术中，将人重链 和轻链基因座元件引入起源于胚胎干细胞系的生物体品系中，品系包含对内源性重链和轻 链基因座的靶向破坏。转基因生物体可合成人抗原特异性的人抗体，并且可使用该生物体 产生人抗体_分泌性杂交瘤。人抗体可为重链和轻链由起源于一种或多种人DNA来源的核 苷酸序列编码的抗体。也可通过本领域所知的遗传学或染色体转染方法，以及噬菌体展示 技术或体外活化的表达IC0S的T细胞来构建完全人抗体。“抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用”和“ADCC”指细胞介导的反应，其中非特异 性细胞毒性细胞(如自然杀伤(NK)细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)能识别靶细胞上结合 的抗体，随后引起靶细胞裂解。在一个实施方式中，这类细胞是人细胞。虽然不希望受任 何特定作用机理的限制，但介导ADCC的这些细胞毒性细胞通常表达Fc受体(FcR)。介导 ADCC的原代细胞NK细胞表达Fc yRIII，而单核细胞表达Fc yRI、FcyRII, FcyRIII和/ 或 Fc y RIV。Ravetch 和 Kinet，Annu. Rev. Immunol 9 :457_92 (1991)小结了造血细胞上的 FcR表达情况。为了评估分子的ADCC活性，可进行体外ADCC实验，如美国专利5，500，362 或5，821，337所述。可用于这类测得的效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和天然杀伤 (NK)细胞。或者或此外，可在体内评价感兴趣分子的ADCC活性，例如在Clynes等，Proc.
7Natl. Acad. Sci. USA 95:652-656(1998)所述的动物模型中进行评价。“补体依赖性细胞毒作用”或“CDC”指某分子启动补体活化和在补体存在下裂解 靶点的能力。通过补体系统第一组分(Clq)与复合关联抗原的分子(如抗体)结合，启动 补体激活途径。为了评估补体激活，可进行⑶C测定，如Gazzano-Santoro等，J. Immunol. Methods, 202 163 (1996)所述。本文所用“抗体依赖性吞噬作用”或“调理作用”指细胞介导的反应，其中表达 FcyR的非特异性细胞毒性细胞识别靶细胞上的结合抗体，然后引起靶细胞的吞噬。“效应细胞”是表达一种或多种FcR并执行效应功能的白细胞。该细胞至少表达 Fc y RI、FC y RII、Fc y RIII和/或Fc y RIV并执行ADCC效应功能。介导ADCC的人白细胞 的例子包括外周血单核细胞(PBMC)、自然杀伤(NK)细胞、单核细胞、细胞毒性T细胞和嗜中 性粒细胞。使用术语“Fc受体”或“FcR”描述结合于抗体Fc区的受体。在一个实施方式中，FcR 是天然序列人FcR。而且，在某些实施方式中，FcR结合于IgG抗体(Y受体)，包括FcyRI、 Fc y RII、Fc Y RIII和Fc Y RIV亚型的受体，包括这些受体的等位基因变体和另路剪接形 式。FcyRII受体包括FCYRIIA( “活化受体”)和FCYRIIB( “抑制受体”)，它们具有相似 的氨基酸序列，主要是其胞质结构域不同。活化受体FcyRIIA的胞质结构域中包含基于免 疫受体酪氨酸激活基序(ITAM)。抑制受体FcyRIIB的胞质结构域中包含免疫受体酪氨酸 抑制基序(ITIM)。(参见，Dagron,Annu. Rev. Immunol.，15 :203-234 (1997))。Ravetch 和 Kinet, Annu. Rev. Immunol.，9 :457_92(1991) ；Cape1 等，Immunomethods, 4 :25_34(1994)； 和 de Haas 等，J. Lab. Clin. Med.，126 :330_41 (1995)对 FcR 进行了综述。本文所用术语 “FcR”还涵盖其他FcR，包括那些将来鉴定的FcR。该术语还包括新生儿受体FcRn，该受体 负责将母体 IgG 转移到胎儿(Guyer 等，Immunol.，117 587(1976)和 Kim 等，J. Immunol.， 24 =249(1994)) 0本文所述处理所用的抗体与表位的“亲和力”是本领域熟知的术语，指抗 体与表位结合的程度或强度。亲和力可以本领域已知的数种方式测定和/或表示，包括但 不限于平衡解离常数(KD或Kd)、表观平衡解离常数(KD'或Kd')和IC50(在竞争实验 中实现50%抑制所需的用量)。应当理解的是，出于本发明的目的，所述亲和力是与表位结 合的给定抗体群体的平均亲和力。本文所报道以mg IgG/mL或mg/mL表示的KD'值表示每 mL血清中Ig的mg数，尽管也可使用血浆。当抗体亲和力用作给予本文所述治疗的基础或 选择本文所述治疗方法时，可在治疗前和/或治疗中测定抗体亲和力，并且所获的值可用 于临床医生评估病人是否是该治疗的合适候选人。如本文所用术语“亲合力”是抗体结合抗原的总体结合强度(即抗体的双臂)的 衡量。可使用本领域任何已知方法在抗原过量时测量抗原_抗体键合的解离从而测定抗体 亲合力，所述方法例如但不限于，Gray等，J. Virol. Meth. ,44 11-24 (1993)所述对间接荧 光抗体的修饰。“表位”是本领域熟知的术语，指能特异性结合抗体的任何化学部分。“抗原”是含 有表位的部分或分子，同样也能与抗体特异性结合。本文所述术语“抗体半衰期”指抗体的一个药代动力学特性，是给药后抗体分子平 均残留时间的衡量。抗体的半衰期可表示为从病人体内或其特定部位将已知量的免疫球蛋 白清除50%所需时间，例如在血清或血浆中测量，即循环半衰期，或在其它组织中测量。一种免疫球蛋白或一类免疫球蛋白的半衰期与另一种不同。通常，增加抗体半衰期引起所给 抗体在循环中的平均滞留时间(MRT)增加。术语“同种型”指抗体的重链或轻链恒定区的分类。抗体的恒定区不参与抗原结 合，但具有各种效应功能。根据重链恒定区的氨基酸序列，可将给定的人抗体或免疫球蛋 白指定为物种主要免疫球蛋白类型之一 IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。这些类型中的若干类 型可进一步分成亚类(同种型)，如IgGl ( Y 1)、IgG2 (γ 2), IgG3 ( γ 3)、和IgG4 ( γ 4)以及 IgAl和IgA2。对应于不同类型的免疫球蛋白的重链恒定区分别称为α、δ、ε、Y和μ。 不同类型的免疫球蛋白的结构和三维构型是众所周知的。在各种人免疫球蛋白分子类型 中，已知只有IgGl、IgG2、IgG3、IgG4和IgM能激活补体。已知人IgGl和IgG3在人体中介 导ADCC。人轻链恒定区可分成两个主要类型，即κ和入。本文所用术语“免疫原性”指能够刺激免疫应答(刺激产生特异性抗体和/或特 异性T细胞增殖)的化合物。本文所用术语“抗原性”指某化合物被抗体识别，或可结合于抗体并诱导免疫应答。术语“治疗”(或语法等同术语)指对象病症的严重性减轻或至少部分改善或好转 和/或达到至少一种临床症状的缓和、缓解或减轻和/或抑制或延迟症状进展和/或预防 或延迟疾病或病症的发作。因此，术语“治疗”(或语法等同术语)指预防性和治疗性治疗方案。的化合物如本文所用“足量”或“足以达到特定结果的量”指有效产生所需效应，任 选为治疗效应的本发明抗体或组合物量(即，通过给予治疗有效量)。例如，“足量”或“足 够量”可以是有效耗尽表达ICOS的T细胞的用量。本文所用“治疗有效”量指为对象提供某些改善或受益的量。换言之，“治疗有效”量是对至少一种临床症状中提供一定的缓和、缓解和/或减轻作用的量。本领域熟练技术 人员熟知本发明方法可治疗的失调相关的临床症状。此外，本领域熟练技术人员将意识到 治疗效应无需完全或治愈，只要为对象提供某些受益。4.附图简要说明

图1. JMab-136抗-ICOS抗体VH(A)和VL(B)结构域的氨基酸序列。根据Kabat 定义的CDR残基以带框粗体字表示。灰色表示潜在的0-糖基化位点(T或S残基)和脱酰 胺位点(DS或DG残基)。图2. IC9Gl-aFuc对人和猕猴FcgRIIIa的增强的结合亲和力。通过与对照抗体 (IC009和IC9G1)比较测定IC9Gl-aFuc与重组的人和猕猴Fc y R的结合亲和力(ηΜ)，并在 该图中总结。图3. IC9Gl-aFuc抑制CD3/IC0SL诱导的人T细胞增殖。在IC9Gl_aFuc抗体量递 增的条件下，将人T细胞在包被B7h-Fc(50y l，4yg/ml)和抗-CD3抗体(50 μ 1,0. 2 μ g/ ml)的板上孵育72小时。显示T细胞增殖与IC9Gl-aFuC抗体浓度的关系。还显示了使用 IC009和IC9G1抗体作为对照实验所获取的数据。图4. IC9Gl-aFuc不抑制抗-⑶3/抗⑶28抗体介导的人扁桃体T细胞的增殖。在 包被抗-⑶3和/或抗⑶28抗体的平板上孵育分离的人扁桃体T细胞72小时。显示10 μ g/ ml IC9G1存在下检测的细胞增殖。
图5. IC9Gl-aFuc的ADCC活性高于IC9G1或IC009抗体。使用表达人ICOS的稳 定转化子(A) HPB-ALL 细胞(HPB-ALL h-ICOS)和(B) Jurkat 细胞(Jurkat h-ICOS)作为靶 细胞测定ADCC活性。IC9Gl-aFuc和IC9G1抗体在HPB-ALL h-ICOS细胞上的EC50活性分 别为138pM和648pM。IC9Gl_aFuc和IC9G1抗体在转基因Jurkat h-ICOS细胞上的EC50 活性分别为5. 7pM和61pM。图6.人扁桃体中ICOS的表达仅限于⑶4+记忆Tfb细胞。显示 CD4+CD45R0-CXCR5-幼稚 T 细胞和 CD4+CD45R0+CXCR5+ 记忆 Tfh 的抗-ICOS 染色图样。
图7. IC9Gl-aFuc的ADCC活性高于IC9G1或IC009抗体。使用分离的人扁桃体T 细胞作为靶细胞测定ADCC活性。本实验中IC9Gl-aFuc和IC9G1抗体的EC50活性分别为 8. 2pM 和 60. 4pM。图8. IC9Gl-aFuc在新鲜分离的猕猴脾T细胞靶点上介导的ADCC活性。(A)流式 细胞术测定分离的猕猴脾⑶4+⑶45RA+幼稚T细胞和⑶4+⑶45RA-记忆T细胞的ICOS表 达概况。显示染色细胞的流式细胞图。⑶4+⑶45RA-记忆T细胞中ICOS表达水平显著高 于⑶4+⑶45RA+幼稚T细胞。(B)显示使用分离的猕猴脾T细胞测定的IC009、IC9G1和 IC9Gl-aFuc抗体的ADCC细胞毒性曲线。IC9Gl_aFuc的ADCC活性高于IC009或IC9G1抗 体。该实验中IC9Gl-aFuc和IC9G1抗体的EC50活性分别为14. 6pM和236pM。图9. IC9Gl-aFuc在新鲜分离的猕猴肠系膜淋巴结(MLN) T细胞靶点上介导的ADCC 活性。(A)流式细胞术测定分离的猕猴MLN⑶4+⑶45RA+幼稚T细胞和⑶4+⑶45RA-活化 T细胞的ICOS表达概况。显示染色细胞的流式细胞图。⑶4+⑶45RA-活化T细胞中ICOS 表达水平显著高于⑶4+⑶45RA+幼稚T细胞。(B)显示使用分离的猕猴MLN T细胞测定 的IC009、IC9G1和IC9Gl-aFuc抗体的ADCC细胞毒性曲线。IC9Gl_aFuc的ADCC活性高于 IC009或IC9G1抗体。该实验中IC9Gl-aFuc和IC9G1抗体的EC50活性分别为17. IpM和 198pM。图10. IC9Gl-aFuc在猕猴中的PK概况。单次静脉内给予猕猴0. lmg/kg、Img/ kg或10mg/kg IC9Gl-aFuc抗体。给药后4周测定血清中IC9Gl_aFuc抗体的浓度。显示 IC9Gl-aFuc血清浓度与时间的关系。图11.单次IV给予IC9Gl-aFuc显著消耗了猕猴体内CD3+CD4+CD45RA_IC0S+记忆 T细胞的水平。单次静脉内给予猕猴0. 01mg/kg、0. lmg/kg、lmg/kg或10mg/kg IC9Gl_aFuc 抗体。随时间监测CD3+CD4+CD45RA-IC0S+记忆T细胞的水平。显示给予IC9Gl_aFuc后标 准化的记忆T细胞水平与时间的关系。单次给予0. lmg/kg、lmg/kg或10mg/kgIC9Gl_aFuc 抗体后第四天基本上完全消除了⑶3+⑶4+⑶45RA_IC0S+记忆T细胞。ICOS+记忆T细胞的 恢复是剂量依赖性的。图12.基于流式细胞术表征生发中心B细胞。猕猴生发中心B细胞鉴定为 CD3-CD20+IgM-CD95+ 细胞或 CD3-CD20+IgM-CD27+ 细胞。图13.单次IV给予IC9Gl_aFu显著降低猕猴体内肠系膜淋巴结(MLN)记忆辅 助IC0S+T细胞和MLN生发中心B细胞的水平。单次静脉内给予猕猴0. lmg/kg或10mg/kg IC9Gl-aFuc抗体。用10mg/kg IC009或PBS治疗对照动物。随时间监测MLN记忆IC0S+T 细胞和MLN生发中心B细胞的水平。MLN记忆辅助T细胞鉴定为⑶3+⑶4+⑶45RA-IC0S+细 胞。MLN生发中心B细胞鉴定为⑶20+⑶95+IgM-细胞。(A)显示治疗后第8天MLN T细胞和MLN生发中心B细胞的总数。(A)显示治疗后第8天ICOS+T细胞消耗百分比和生发中心 B细胞的分解百分比。给予IC9Gl-aFuc导致剂量依赖性消耗MLN中的记忆辅助ICOS+T细 胞和生发中心B细胞。图14.单次IV给予IC9Gl-aFuc显著降低猕猴体内脾记忆辅助IC0S+T细胞和生 发中心B细胞的水平。单次静脉内给予猕猴0. lmg/kg或10mg/kgIC9Gl-aFuC抗体。用 10mg/kg IC009或PBS治疗对照动物。随时间监测脾记忆IC0S+T细胞和生发中心B细胞 的水平。脾记忆辅助T细胞鉴定为⑶3+⑶4+⑶45RA-IC0S+细胞；生发中心B细胞鉴定为 ⑶3-⑶20+⑶95+IgM-细胞。(A)显示治疗后第8天和第30天脾记忆辅助T细胞和生发中 心B细胞的总数。(A)显示治疗后第8天和第29天T细胞消耗百分比和生发中心B细胞 的分解百分比。给予IC9Gl-aFuC导致显著消耗脾中的记忆辅助T细胞和生发中心B细胞。 接受IC9Gl-aFuC的动物的消耗水平显著高于接受IC009抗体的对照动物。T细胞消耗在 给予IC9Gl-aFuc后第8天达到最大值。生发中心B细胞消耗水平在给予IC9Gl-aFuc后第 29天达到最大值。 图15.单次给予猕猴IC9Gl-aFuC抗体后第29天脾生发中心萎缩。单次给予 IC9Gl-aFuc抗体后检查脾脏白髓的形态。显示给予IC9Gl-aFuc抗体后第8天(A)和第29 天(B)分离的脾组织切片。给予IC9Gl-aFuC后第29天导致脾小结严重萎缩。图16.人ICOS长同种型和短同种型的氨基酸序列比对(分别为SEQ ID NO 32和 33)。图17. ICOS mRNA(SEQ ID NO 34)和所选微RNA分子的核苷酸序列互补性。图18. TaqMan QRT-PCR测定的与健康正常对照相比包涵体肌炎(IBM)、多肌炎 (PM)和皮肌炎(DM)患者肌肉样品中的miR-101相对表达水平。图19.昂飞(Affymetrix)全基因组阵列测定的与正常对照相比包涵体肌炎 (IBM)、多肌炎(PM)和皮肌炎(DM)患者肌肉样品中(A) ICOS和ICOS-L, (B)CD4和(C) CD3 ε mRNA的相对水平。(D)TaqMan QRT-PCR测定的与正常对照相比包涵体肌炎(IBM)、多 肌炎(PM)和皮肌炎(DM)患者全血(WB)样品中ICOS和ICSO-L mRNA的表达水平。图20. TaqMan QRT-PCR测定的与正常对照相比SLE患者受影响皮肤病灶中(A) ICOS 和 IC0SL，(B) CD4 和(C) CD3 ε 的 mRNA 相对表达水平。图21. TaqMan QRT-PCR测定的与正常对照相比SLE患者全血(WB)中(A) CD28、 CTLA4、I COS, ICOS-L, (B) CD4 和(C) CD3 ε 的 mRNA 相对表达水平。5.发明详述本发明涉及产生效应功能增强的抗-ICOS抗体的方法。使用本发明的方法改进 抗-ICOS亲本抗体使其具有增强的效应功能，例如但不限于，增强的ADCC、增强的CDC和 增强的抗体依赖性吞噬作用。任何与人ICOS抗原特异性结合的抗-ICOS抗体均可作为亲 本抗体用于实践本发明方法的目的。在一个实施方式中，美国专利号6，803，039所公开的 抗-ICOS抗体作为亲本抗体。在一个具体实施方式
中，JMAb-136(IgG2)抗-ICOS抗体作为 亲本抗体。本发明提供了效应功能增强的抗-人ICOS抗体。在一个实施方式中，本发明 抗-ICOS抗体能比亲本抗-ICOS抗体更有效地介导抗体依赖性效应功能。在一个具体实施 方式中，本发明抗-ICOS抗体能比JMAb-136 (参见美国专利号6，803，039)更有效地介导抗体依赖性效应功能。
在一个实施方式中，本文所述的抗-ICOS抗体能比亲本抗-ICOS抗体更有效地 介导抗体依赖性效应功能，其中所述效应功能选自抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用 (ADCC)、补体介导的细胞毒性(CDC)、抗体依赖性吞噬作用。在一个实施方式中，本发明 抗-ICOS抗体能比亲本抗-ICOS抗体更有效地介导抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用 (ADCC)。在另一实施方式中，本发明抗-ICOS抗体能比亲本抗-ICOS抗体更有效地介导补 体介导细胞毒作用(CDC)。在另一实施方式中，本发明抗-ICOS抗体能比亲本抗-ICOS抗体 更有效地介导抗体依赖性吞噬作用。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体能比亲本抗-ICOS抗体更有效地介导抗 体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)，其中通过体外细胞毒实验测定ADCC活性。在一 个具体实施方式
中，在体外ADCC实验中，本发明抗-ICOS抗体介导最大细胞毒作用比亲 本抗-ICOS抗体高至少约5%、至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少 约50%、至少约75%、至少约100%。在另一具体实施方式
中，在体外ADCC实验中，本发明 抗-ICOS抗体介导的最大细胞毒作用是亲本抗-ICOS抗体的至少2倍、至少3倍、至少4倍、 至少5倍或至少10倍。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体能比JMab-136抗-ICOS抗体更有效地 介导抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)，其中通过体外细胞毒实验测定ADCC活性。 在一个具体实施方式
中，在体外ADCC实验中，本发明抗-ICOS抗体介导最大细胞毒作用比 JMab-136抗-ICOS抗体高至少约5 %、至少约10 %、至少约20 %、至少约30 %、至少约40 %、 至少约50%、至少约75%、至少约100%。在另一具体实施方式
中，在体外ADCC实验中，本 发明抗-ICOS抗体介导的最大细胞毒作用是JMab-136抗-ICOS抗体的至少2倍、至少3倍、 至少4倍、至少5倍或至少10倍。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体在体外ADCC实验中的EC50是亲本 抗-ICOS抗体的至多约1/2、至多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约 1/100。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体在体外ADCC实验中的EC50是JMab-136 抗-ICOS抗体的至多约1/2、至多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约 1/100。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体能比亲本抗-ICOS抗体更有效地介导抗 体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)，其中通过体内细胞毒实验测定ADCC活性。在一 个具体实施方式
中，在体内ADCC实验中，本发明抗-ICOS抗体介导最大细胞毒作用比亲本 抗-ICOS抗体高至少约5 %、至少约10 %、至少约20 %、至少约30 %、至少约40 %、至少约 50%、至少约75%、至少约100%。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体能比JMab-136抗-ICOS抗体更有效地介 导抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)，其中通过体内细胞毒实验测定ADCC活性。在 一个具体实施方式
中，在体内ADCC实验中，本发明抗-ICOS抗体介导的最大细胞毒作用比 JMab-136抗-ICOS抗体高至少约5 %、至少约10 %、至少约20 %、至少约30 %、至少约40 %、 至少约50%、至少约75%、至少约100%。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体能比亲本抗-ICOS抗体更有效地介导补 体依赖性细胞毒作用(CDC)，其中通过体外细胞毒实验测定CDC活性。在一个具体实施方式
中，在体外CDC实验中，本发明抗-ICOS抗体介导的最大细胞毒作用比亲本抗-ICOS抗体 高至少约5%、至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约 75%、至少约100%。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体能比JMab-136抗-ICOS抗体更有效地介导补体依赖性细胞毒作用(CDC)，其中通过体外细胞毒实验测定CDC活性。在一个具体 实施方式中，在体外CDC实验中，本发明抗-ICOS抗体介导的最大细胞毒作用比JMab-136 抗-ICOS抗体高至少约5%、至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约 50%、至少约75%、至少约100%。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体在体外⑶C实验中的EC50是亲本 抗-ICOS抗体的至多约1/2、至多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约 1/100。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体在体外⑶C实验中的EC50是JMab-136 抗-ICOS抗体的至多约1/2、至多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约 1/100。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体能比比亲本抗-ICOS抗体更有效地介导 抗体依赖性吞噬作用，其中通过体外细胞毒实验测定抗体依赖性吞噬作用活性。在一个具 体实施方式中，在体外抗体依赖性吞噬实验中，本发明抗-ICOS抗体介导最大细胞毒作用 比亲本抗-ICOS抗体高至少约5%、至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至 少约50%、至少约75%、至少约100%。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体能比比JMab-136抗-ICOS抗体更有效地 介导抗体依赖性吞噬作用，其中通过体外细胞毒实验测定抗体依赖性吞噬作用活性。在一 个具体实施方式
中，在体外抗体依赖性吞噬实验中，本发明抗-ICOS抗体介导最大细胞毒 作用比JMab-136抗-ICOS抗体高至少约5%、至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少 约40%、至少约50%、至少约75%、至少约100%。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体在体外抗体依赖性吞噬实验中的EC50是 亲本抗-ICOS抗体的至多约1/2、至多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多 约1/100。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体在体外抗体依赖性吞噬实验中的EC50是 JMab-136抗-ICOS抗体的至多约1/2、至多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50 或至多约1/100。 在一个实施方式中，本发明的抗-ICOS抗体含有变异Fc区。在另一实施方式中，本 发明抗-ICOS抗体包含对Fc配体蛋白亲和性改变的变异Fc区。在另一实施方式中，本发 明抗-ICOS抗体包含对Fc配体亲和性改变的变异Fc区，其中所述Fc配体选自Fc y RIA、 Fc y RIΙΑ, Fc γ RIIB、Fc γ RIIIA、Fc γ RIIIB、Fc γ RIV 和 Clq。在一个具体实施方式
中，本 发明抗-ICOS抗体包含对Fc y RIIIA蛋白亲和性改变的变异Fc区。在一个具体实施方式
中，本发明抗-ICOS抗体包含对Clq蛋白亲和性改变的变异Fc区。在一个具体实施方式
中， Fc配体蛋白可以是小鼠、人或灵长动物(如猕猴)Fc配体蛋白。 在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体包含对Fc配体蛋白亲和性增加的变异Fc 区。在另一实施方式中，本发明抗-ICOS抗体包含对Fc配体亲和性增加的变异Fc区，其中 所述 Fc 配体选自Fc y RIA、Fc y RIΙΑ, Fc γ RIIB、Fc γ RIIIA、Fc γ RIIIB、Fc γ RIV 禾P Clq0 在一个具体实施方式
中，本发明抗-ICOS抗体包含对Fc YRIIIA亲和性增加的变异Fc区。在一个具体实施方式
中，本发明抗-ICOS抗体包含对Clq蛋白亲和性增加的变异Fc区。在 一个具体实施方式
中，Fc配体蛋白可以是小鼠、人或灵长动物(如，猕猴)Fc配体蛋白。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体包含变异Fc区，所述变异Fc区具有至 少一个氨基酸取代、插入或缺失。在另一实施方式中，本发明抗-ICOS抗体包含具有至少 一个氨基酸取代、插入或缺失的变异Fc区，其中所述至少一个氨基酸残基的取代、插入或 缺失导致对选自下组的Fc配体亲和性增高FcyRIA、Fc y RIIA, FcyRIIB, Fc yRIIIA, Fc y RIIIB、Fc y RIV和Clq。在一个具体实施方式
中，本发明抗-ICOS抗体包含具有至少一 个氨基酸取代、插入或缺失的变异Fc区，其中所述至少一个氨基酸残基的取代、插入或缺 失导致对Fc γ RIIIA蛋白的亲和性增高。在另一实施方式中，本发明抗-ICOS抗体包含具 有至少一个氨基酸取代、插入或缺失的变异Fc区，其中所述至少一个氨基酸残基的取代、 插入或缺失导致对Clq蛋白的亲和性增高。在一个具体实施方式
中，Fc配体蛋白可以是小 鼠、人或灵长动物(如，猕猴)Fc配体蛋白。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体包含具有至少一个氨基酸取代、插入或 删除的变异Fc区，其中所述至少一个氨基酸残基选自残基239、330和332，其中按照EU索 引对氨基酸残基进行编号。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体包含具有至少一个氨 基酸取代、插入或缺失的变异Fc区，其中所述至少一个取代、插入或缺失的氨基酸残基选 自残基239、330和332，其中按照EU索引对氨基酸残基进行编号。在另一实施方式中，本 文所述抗-ICOS抗体包含具有至少一个氨基酸取代的变异Fc区，其中所述至少一个取代的 氨基酸残基选自残基239、330和332，其中按照EU索引对氨基酸残基进行编号。在另一 实施方式中，本文所述抗-ICOS抗体包含具有至少一个氨基酸取代的变异Fc区，其中所述 至少一个氨基酸取代选自S239D、A330L、A330Y和I332E，其中按照EU索引对氨基酸残基 进行编号。在一个具体实施方式
中，本发明抗-ICOS抗体包含含有S239D、 A330L、和I332E 氨基酸取代的变异Fc区，其中按照EU索引对氨基酸残基进行编号。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体包含含有至少一个选自下组的氨基酸残 基的变异Fc区残基239上的D、残基239上的E、残基330上的L、残基330上的Y、残基 332上的E以及残基332上的D，其中按照EU索引对氨基酸残基进行编号。在一个具体实 施方式中，本发明抗-ICOS抗体包含的变异Fc区在残基239上含有D、在残基330上含有L 并且在残基332上含有E，其中根据EU索引对氨基酸残基进行编号。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体包含工程改造的Fc区，其中所述工程改 造的Fc区包含不同于亲本抗-ICOS抗体的翻译后修饰。在一个具体实施方式
中，本发明 抗-ICOS抗体包含工程改造的Fc区，其中所述工程改造的Fc区包含复杂的N-糖苷-连接 的糖链，在所述糖链的还原末端岩藻糖不结合于N-乙酰基葡糖胺。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体包含对Fc配体蛋白亲和性改变的工程改 造的Fc区。在另一实施方式中，本发明抗-ICOS抗体包含对Fc配体亲和性改变的工程改 造的 Fc 区，其中所述 Fc 配体选自Fc y RIA、Fc y RIΙΑ, Fc y RIIB、Fc γ RIIΙΑ、Fc γ RIIIB、 Fc γ RIV和Clq。在一个具体实施方式
中，本发明抗-ICOS抗体包含对Fc Y RIIIA亲和性改 变的工程改造的Fc区。在另一具体实施方式
中，本发明抗-ICOS抗体包含对Clq蛋白亲和 性改变的工程改造的Fc区。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体包含对Fc配体蛋白亲和性增加的工程改造的Fc区。在另一实施方式中，本发明抗-ICOS抗体包含对Fc配体亲和性增加的工程改造 的 Fc 区，其中 Fc 配体选自:Fc y RIA,Fc y RIΙΑ,Fc y RUB,Fc γ RIIIA.Fc γ RIIIB.Fc γ RIV 和Clq。在一个具体实施方式
中，本发明抗-ICOS抗体包含对Fc Y RIIIA亲和性增加的工程 改造的Fc区。在另一具体实施方式
中，本发明抗-ICOS抗体包含对Clq蛋白亲和性增加的 工程改造的Fc区。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体包含工程改造的Fc区，其中所述工程改 造的Fc区与天然抗体相比包含的岩藻糖水平降低。在另一实施方式中，本发明抗-ICOS抗 体包含岩澡糖水平降低的工程改造的Fc区，其中所述岩藻糖水平降低导致与选自下组的 Fc 配体亲和性增加:Fc y RIA,Fc y RIΙΑ,Fc y RIIB、Fc γ RIIIA、Fc γ RIIIB、Fc γ RIV 和 Clq。 在一个具体的实施方式中，本发明抗-ICOS抗体包含岩澡糖水平降低的工程改造的Fc区， 其中所述岩藻糖水平降低导致与Fc γ RIIIA蛋白的亲和性增加。在另一实施方式中，本发 明抗-ICOS抗体包含岩澡糖水平降低的工程改造的Fc区，其中所述岩藻糖水平降低导致与 Clq蛋白的亲和性增加。
本文所述抗-ICOS抗体包含与人Fc y RIIIA蛋白具有高度结合亲和力的Fc区。 在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体包含Fc区的亲和常数或Ka(kg合/I^w)为至少 ΙΟ^1、至少 δΧΙ ΛΓ1、至少愈1、至少 δΧΙΟ 1、至少 ΙΟ^1、至少 5 X ιο 1、至少 IO6M-1, 至少 5 X IO6IT1、至少 IO7IT1、至少 5 X IO7IT1、至少 IO8IT1、至少 5 X IO8IT1、至少 IO9IT1、至少 δΧΙΟ 1、至少 Ι ΓΜ—1、至少 δΧΙ ΓΜ—1、至少 ΙΟ、—1、至少 5X ΙΟ、—1、至少 IO12Mi 或至少 5 X IO12M-10在另一实施方式中，本发明抗-ICOS抗体包含Fc区的解离常数或KdG^wA 结合)小于5 X 1(Γ3Μ、小于1(Γ3Μ、小于5 X 1(Γ4Μ、小于1(Γ4Μ、小于5 X 1(Γ5Μ、小于1(Γ5Μ、小于 5 X 1(Γ6Μ、小于 1(Γ6Μ、小于 5 X 1(Γ7Μ、小于 1(Γ7Μ、小于 5 X 1(Γ8Μ、小于 1(Γ8Μ、小于 5 X 1(Γ9Μ、 小于1(Γ9Μ、小于5X1(T1QM、小于ΙΟ,Μ、小于5Χ1(Γ"Μ、小于1(Γ"Μ、小于5Χ 1(Γ12Μ、或小于 1(Γ12Μ。根据本文所述方法使用的抗体可包含Fc区，用本文所述方法或本领域熟练技术 人员所知方法(如BIAcore实验，ELISA)(瑞典乌普萨拉的必爱可国际公司)(Biacore International AB, Uppsala, Sweden)测量所述 Fc 区与人 Fc γ RIIIA 结合的解离常数(Kd) 小于 3000ηΜ、小于 2500ηΜ、小于 2000ηΜ、小于 1500ηΜ、小于 ΙΟΟΟηΜ、小于 750nM、小于 500nM、 小于250nM、小于200nM、小于150nM、小于ΙΟΟηΜ、小于75nM、小于50nM、小于25nM、小于 ΙΟηΜ、小于5nM、小于InM。在一个具体实施方式
中，根据本文所述方法使用的抗体可包含 Fc区，用本文所述方法或本领域熟练技术人员所知方法(如BIAcore实验，ELISA)测量所 述 Fc 区与人 Fc γ RIIIA 结合的解离常数(Kd)为 1_3000ηΜ、1_3000ηΜ、1_2000ηΜ、1_1500ηΜ、 1-lOOOnM、1-750ηΜ、1_500ηΜ、1_250ηΜ、1-lOOnM、1_50ηΜ、l_25nM、1-lOnM。在另一实施方式 中，根据本文所述方法使用的抗-ICOS抗体可包含Fc区，用本文所述方法或本领域熟练技 术人员所知方法(如BIAcore实验，ELISA)测量所述Fc区与人Fc Y RIIIA结合的解离常 数(Kd)为 500nM、250nM、100nM、75nM、50nM、25nM、10nM 或 InM。本文所述抗-ICOS抗体包含与非人灵长动物(如猕猴)Fc y RIIIA蛋白具有高 度结合亲和力的Fc区。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体包含Fc区的亲和常数
结合/k解离)为至少ιο 1、至少5ΧΚΛΓ1、至少10%人至少5Χ104Μ—1、至少IO5M-1、 至少 5 X IO5IT1、至少 IO6IT1、至少 5 X IO6IT1、至少 IO7IT1、至少 5 X IO7IT1、至少 IO8IT1、至少 5 X IO8IT1、至少 IO9IT1、至少 5 X IO9IT1、至少 IO10ITi、至少 5 X IOiqIT1、至少 IO11ITi、至少 5 X Ι ΑΤ1、至少ΙΟΙ—1、或至少5 X IO12MA在另一实施方式中，本发明抗-ICOS抗体包含Fc 区的解离常数或KdG^wA结合)小于5X10_3M、小于10_3M、小于5X10_4M、小于10_4M、小于 5Χ 1(Γ5Μ、小于 1(Γ5Μ、小于 5Χ 1(Γ6Μ、小于 1(Γ6Μ、小于 5Χ 1(Γ7Μ、小于 1(Γ7Μ、小于 5Χ 1(Γ8Μ、小 于 1(Γ8Μ、小于 5Χ1(Γ9Μ、小于 1(Γ9Μ、小于 5X1(T1QM、小于 1(Γ10Μ、小于 5Χ1(Γ"Μ、小于 1(Γ"Μ、 小于 5Χ 1(Γ12Μ、或小于 IO-12M0根据本文所述方法使用的抗体可包含Fc区，用本文所述方法或本领域熟练技术人员所知方法(如BIAcore实验，ELISA)(瑞典乌普萨拉的必爱可国际公司)(Biacore International AB, Uppsala, Sweden)测量所述Fc区与非人灵长动物(如猕猴)Fc γ RIIIA 结合的解离常数(Kd)小于3000ηΜ、小于2500ηΜ、小于2000ηΜ、小于1500ηΜ、小于ΙΟΟΟηΜ、 小于750nM、小于500nM、小于250nM、小于200nM、小于150nM、小于ΙΟΟηΜ、小于75nM、小于 50nM、小于25nM、小于10nM、小于5nM、小于InM。在一个具体实施方式
中，根据本文所述方 法使用的抗体可包含Fc区，用本文所述方法或本领域熟练技术人员所知方法(如BIAcore 实验，ELISA)测量所述Fc区与非人灵长动物Fc γ RIIIA结合的解离常数(Kd)为1_3000ηΜ、 1-3000ηΜ、1-2000ηΜ、1_1500ηΜ、1-ΙΟΟΟηΜ、1_750ηΜ、1_500ηΜ、1_250ηΜ、1-ΙΟΟηΜ、1_50ηΜ、 1-25ηΜ、1-10ηΜ。在另一实施方式中，根据本文所述方法使用的抗-ICOS抗体可包含Fc区， 用本文所述方法或本领域熟练技术人员所知方法(如BIAcore实验，ELISA)测量所述Fc区 与非人灵长动物Fc γ RIIIA结合的解离常数(Kd)为500nM、250nM、100nM、75nM、50nM、25nM、 IOnM 或 InM。本文所述抗-ICOS抗体包含与小鼠Fc γ RIIIA蛋白具有高度结合亲和力的Fc 区。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体包含Fc区的亲和常数或Ka(kg合/I^w)为 至少 IO3IT1、至少 5 X IO3IT1、至少 IO4IT1、至少 5 X IO4IT1、至少 IO5IT1、至少 5 X IO5IT1、至少 虛1、至少δΧΙΟ 1、至少虛1、至少5 X ιο 1、至少愈1、至少δΧΙΟ 1、至少IO9M-1, 至少 δΧΙ ΛΓ1、至少 ΙΟ1、-1、至少 δΧΙΟ^Τ1、至少 10"Μ_\ 至少 δΧΙΟ^Μ-1、至少 IO12IT1、或 至少5Χ IO12MA在另一实施方式中，本发明抗-ICOS抗体包含Fc区的解离常数或KdGciff 离/k结合)小于5Χ1(Γ3Μ、小于1(Γ3Μ、小于5Χ1(Γ4Μ、小于1(Γ4Μ、小于5Χ1(Γ5Μ、小于1(Γ5Μ、小 于 5Χ 1(Γ6Μ、小于 1(Γ6Μ、小于 5Χ 1(Γ7Μ、小于 1(Γ7Μ、小于 5Χ 1(Γ8Μ、小于 1(Γ8Μ、小于 5Χ 1(Γ9Μ、 小于1(Γ9Μ、小于5X1(T1QM、小于ΙΟ,Μ、小于5Χ1(Γ"Μ、小于1(Γ"Μ、小于5Χ 1(Γ12Μ、或小于 1(Γ12Μ。根据本文所述方法使用的抗体可包含Fc区，用本文所述方法或本领域熟练技术 人员所知方法(如BIAcore实验，ELISA)(瑞典乌普萨拉的必爱可国际公司)(Biacore International AB, Uppsala, Sweden)测量所述Fc区与小鼠Fc γ RIIIA结合的解离常数 (Kd)小于 3000ηΜ、小于 2500ηΜ、小于 2000ηΜ、小于 1500ηΜ、小于 ΙΟΟΟηΜ、小于 750ηΜ、小于 500ηΜ、小于 250ηΜ、小于 200ηΜ、小于 150ηΜ、小于 ΙΟΟηΜ、小于 75nM、小于 50nM、小于 25nM、 小于ΙΟηΜ、小于5nM、小于InM。在一个具体实施方式
中，根据本文所述方法使用的抗体可 包含Fc区，用本文所述方法或本领域熟练技术人员所知方法(如BIAcore实验，ELISA) 测量所述Fc区与小鼠Fc γ RIIIA结合的解离常数(Kd)为1_3000ηΜ、1_3000ηΜ、1_2000ηΜ、 1-1500ηΜ、1-lOOOnM、1_750ηΜ、1_500ηΜ、1_250ηΜ、1-lOOnM、1_50ηΜ、l_25nM、I-IOnM0 在另一 实施方式中，根据本文所述方法使用的抗-ICOS抗体可包含Fc区，用本文所述方法或本领域熟练技术人员所知方法(如BIAcore实验，ELISA)测量所述Fc区与小鼠Fc y RIIIA结 合的解离常数(Kd)为 50011]\1、25011]\1、10011]\1、7511]\1、5011]\1、2511]\1、1011]\1或111]\1。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体包含JMAb-136的1、2、3、4、5或所有6个 CDR(参见美国专利6，803，039)。将按照Kabat定义的JMAb_136重链可变区⑶R1、⑶R2和⑶R3的氨基酸序列分别 鉴定为 SEQ ID N0:8、SEQ ID NO 9 禾口 SEQ ID NO :10。将按照 Kabat 定义的 JMAb-136 轻 链可变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别鉴定为SEQ ID NO :3、SEQ ID NO 4和SEQ ID NO :5。
Kabat编号方案基于Kabat等的开创性工作(1991)《免疫学感兴趣的蛋白质的序 列》(Sequences of Proteins of Immunological Interest)，出版号 91—3242，由国立卫生 研究院(National Institutes of Health)国家技术信息服务中心(National Technical Information Service)出版为三卷丛书(下面称为“Kabat”)。Kabat能够对来自许多物 种的抗体同种型的免疫球蛋白链进行多序列比对。按照一种编号系统，即Kabat编号系统 对比对序列进行编号。自1991年公开以来，Kabat序列已经升级，可以电子序列数据库的 形式获得(最新可下载版本为1997版)。任何免疫球蛋白序列均可通过与Kabat参比序列 的比对进行Kabat编号。因此，Kabat编号系统为免疫球蛋白链的编号提供了一个统一的 系统。除非另有说明，本文所述的所有免疫球蛋白氨基酸序列均按照Kabat编号系统编号。 相似地，本文提及的所有单个氨基酸位置也是按照Kabat编号系统编号的。在某些实施方式中，本文所述的抗ICOS抗体可包含重链可变区VH，其包含具有选 自SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :9和SEQ ID NO 10的氨基酸序列的至少一个CDR。在某些实 施方式中，本发明抗-ICOS抗体可包含具有氨基酸序列SEQ ID NO 7的VH结构域。在某些实施方式中，本文所述的抗ICOS抗体可包含轻链可变区VK，其包含具有选 自SEQ ID NO :3、SEQ ID NO :4和SEQ ID NO 5的氨基酸序列的至少一个CDR。在某些实施 方式中，本发明抗-ICOS抗体可包含具有氨基酸序列SEQ ID NO 2的VK结构域。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体包含VK结构域和VH结构域，其中VK结 构域具有氨基酸序列SEQ ID NO :2，VH结构域具有氨基酸序列SEQID NO :7。本发明包括结合人ICOS的抗体，其包含可结合人ICOS的本文所述的VH结构域、 VH CDRUVH CDR2、VH CDR3、VK 结构域、VK CDRUVK CDR2 或 VK CDR3 的衍生物。本领域技 术人员知道可用于在编码抗体的核苷酸序列中引入突变的标准技术(如加入、缺失和/或 取代)包括例如，通常用于产生氨基酸取代的定位诱变和PCR介导的诱变。在一个实施方 式中，相对于JMab-136抗-ICOS抗体的初始VH和/或VK⑶R，VH和/或VK⑶R衍生物可 包含少于25个氨基酸取代、少于20个氨基酸取代、少于15个氨基酸取代、少于10个氨基 酸取代、少于5个氨基酸取代、少于4个氨基酸取代、少于3个氨基酸取代、少于2个氨基酸 取代或1个氨基酸取代。在另一实施方式中，VH和/或VK CDR衍生物可以在一个或多个预 测的非必需氨基酸残基(即，抗体与人ICOS特异性结合中不那么至关重要的氨基酸残基) 上发生保守性氨基酸取代(同上)。也可沿所有或一部分VH和/或VK CDR编码序列随机 引入突变(例如通过饱和诱变)，可筛选所得突变体的生物学活性，以鉴定保持活性的突变 体。诱变后，可表达编码的抗体，并可测定该抗体的活性。本发明进一步包括结合人ICOS的抗体，所述抗体或抗体片段含有一个或多个⑶R，其中所述⑶R包含与JMab-136抗ICOS抗体的一个或多个⑶R的氨基酸序列有至少 45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少 85 %、至少90 %、至少95 %或至少99 %相同的氨基酸序列。可利用本领域技术人员已知的 任何方法测定两个氨基酸序列的相同性百分数，这些方法包括但不限于BLAST蛋白质搜
索。 本发明还包括结合人ICOS的抗体，所述抗体或抗体片段包含VH和/或VK结构 域，其中所述VH和/或VK结构域包含与JMab-136抗ICOS抗体的VH和VK结构域的氨基 酸序列至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少 80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%相同的氨基酸序列。可利用本领域技术 人员已知的任何方法测定两个氨基酸序列的相同性百分数，这些方法包括但不限于BLAST 蛋白质搜索。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体结合人ICOS的亲和力与JMab-136 抗-ICOS抗体相当。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体与JMab-136抗-ICOS抗体结合于ICOS 的相同表位。在一个实施方式中，抗-ICOS抗体与JMab-136抗-ICOS抗体特异性竞争与ICOS 结合。可使用任何本领域已知结合实验进行竞争实验，例如但不限于ELISA实验，放射性免 疫实验和流式细胞术。本发明还提供包含编码效应功能增强的抗-ICOS抗体的核苷酸序列的多核苷 酸。本发明还涵盖在本文定义的严谨性或低严谨性杂交条件下，与编码效应功能增强的 抗-ICOS抗体的多核苷酸杂交的多核苷酸。在一个实施方式中，编码如本文所述增强效应功能增强的抗-ICOS抗体的本发明 多核苷酸包含优化的多核苷酸序列。在一个具体的实施方式中，编码本文所述抗体VH结构 域的本发明多核苷酸包含SEQ ID NO :28的核苷酸序列。在一个具体的实施方式中，编码本 文所述抗体VK结构域的本发明多核苷酸包含SEQ ID NO :29的核苷酸序列。在一个具体的 实施方式中，编码本文所述抗体重链的本发明多核苷酸包含SEQ ID NO :30的核苷酸序列。 在一个具体的实施方式中，编码本文所述抗体轻链的本发明多核苷酸包含SEQ ID N0:31的 核苷酸序列。本发明的另一实施方式是包含编码效应功能增强的抗-ICOS抗体的一种或多种 核苷酸序列的载体。在一个实施方式中，本发明的载体包含一种或多种编码效应功能增强的抗-ICOS 抗体的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列是优化的核苷酸序列。在一个具体实施方式
中，本 发明的载体包含SEQ ID NO :28的核苷酸序列。在一个具体实施方式
中，本发明的载体包含 SEQ ID NO :29的核苷酸序列。在一个具体实施方式
中，本发明的载体包含SEQ ID NO 30 的核苷酸序列。在一个具体实施方式
中，本发明的载体包含SEQ ID NO :31的核苷酸序列。 在另一具体实施方式
中，本发明的载体包含一种或多种编码效应功能增强的抗-ICOS抗体 的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列选自SEQ ID N0:28-31。在另一具体实施方式
中，本发 明的载体包含一种或多种编码效应功能增强的抗-ICOS抗体的核苷酸序列，其中所述核苷 酸序列选自SEQ ID NO 28-310
本发明还涉及包含载体的分离细胞，其中所述载体包含一种或多种编码效应功能增强的抗-ICOS抗体的核苷酸序列。在一个具体实施方式
中，本发明的分离细胞包含含有 选自SEQ ID N0:28-31的核苷酸序列的多核苷酸。在另一具体实施方式
中，本发明的分离 细胞包含含有选自SEQ ID NO 28-31的核苷酸序列的多核苷酸。本发明的抗-ICOS抗体包括IgGl、IgG2、IgG3或IgG4人同种型。本发明还涉及包含效应功能增强的抗-ICOS抗体的药物组合物。在另一方面，本发明还涉及使用效应功能增强的治疗性抗-ICOS抗体治疗和预防 T细胞介导的疾病和失调的方法，所述疾病和失调例如但不限于，慢性感染、自身免疫性疾 病或失调、炎性疾病或失调、移植物抗宿主病(GVHD)、移植物排斥和T细胞增殖性疾病，所 述方法包括给予需要的病人治疗有效量的效应功能增强的抗-ICOS抗体。本发明涉及效应功能增强的抗-ICOS抗体，以及包含这些抗体的组合物。在某些 实施方式中，本发明的抗-ICOS抗体可介导抗原依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)。在 另一实施方式中，本发明还涉及含有抗-ICOS抗体IgGl和/或IgG3人同种型的组合物，以 及抗-ICOS抗体IgG2和/或IgG4人同种型的组合物，它们能介导人ADCCjDC和/或抗体 依赖性吞噬作用。本文所述的抗-ICOS抗体与人ICOS抗原的结合亲和力可能很高。例如，本文所 述抗体的结合速率常数或速率(抗体(Ab) +抗原k_°n —Ab-Ag)为至少ZXlOlY1、 至少 5 X IO5IT1 s \ 至少 IO6M 1S 入至少 5 X IO6IT1S^至少 IO7IT1 s \至少5 X IO7M 1S 1或至少 IO8MW在另一实施方式中，本发明抗-ICOS抗体的I^w速率((Ab-Ag)k_°ff—抗体(Ab) + 抗原(Ag))可能小于 5X ΙΟ、—1、小于 10-18-1、小于5\10、_1、小于 ΙΟ、—1、小于 5X ΙΟ、—1、 小于ΙΟ—、—1、小于5 X IO-4S-1或小于ΙΟ—4。。在另一实施方式中，本发明抗体的k小 于5X10、人小于ICT5S人小于5X ICT6S人小于10、弋小于5Χ 10、弋小于10WJ、于 sxio、-1、小于 ΙΟ、—1、小于 5X ΙΟ、—1、小于 IO-iV1 或小于 low在另一实施方式中，抗-ICOS抗体的亲和常数或Ka(k结合/k解离)可以是至少 102Μ_1、至少 δΧΙΟ 1、至少 ΙΟ^1、至少 5 X ιο 1、至少愈1、至少 δΧΙΟ 1、至少 IO5M-1, 至少 5 X IO5IT1、至少 IO6IT1、至少 5 X IO6IT1、至少 IO7IT1、至少 5 X IO7IT1、至少 IO8IT1、至 少 5 X IO8IT1、至少 IO9IT1、至少 5 X IO9IT1、至少 IO10ITi、至少 5 X IOiqIT1、至少 IO11ITi、至少 SXlOllM-1,至少 ΙΟΙ—1、至少 δΧΚ^Μ—1、至少 1013Μ_\ 至少 5Χ1013Μ_\ 至少 ΙΟ14]^1、至少 δΧΙΟ、-1、至少ΚΑΤ1或至少5X IO15MA在又一实施方式中，抗-ICOS抗体的解离常数或 Kd(k解离/k结合)可能小于5X10_2M、小于10_2M、小于5X10_3M、小于10_3M、小于5X 10_4M、小于 1(Γ4Μ、小于 5Χ1(Γ5Μ、小于 1(Γ5Μ、小于 5Χ1(Γ6Μ、小于 1(Γ6Μ、小于 5Χ1(Γ7Μ、小于 1(Γ7Μ、小于 5\10^1、小于10^1、小于5\10^1、小于10^1、小于5\1(^°]\1、小于10,]\1、小于5\10 ]\1、小 于 1(Γ"Μ、小于 5 X 1(Γ12Μ、小于 1(Γ12Μ、小于 5 X 1(Γ13Μ、小于 1(Γ13Μ、小于 5 X 1(Γ14Μ、小于 1(Γ14Μ、 小于5 X ICT15M或小于IO-15M0本文所述方法所用的抗体可能与ICOS发生免疫特异性结合，利用本文所述或本 领域技术人员已知的方法(如BIAcore试验、ELISA)(瑞典乌普萨拉的比亚科国际公司 (Biacore International AB,Uppsala, Sweden))评估，其解离常数(Kd)可能小于 3000pM、 小于 2500pM、小于 2000pM、小于 1500pM、小于 ΙΟΟΟρΜ、小于 750pM、小于 500pM、小于 250pM、小于200pM、小于150pM、小于ΙΟΟρΜ、小于75pM。在一个具体实施方式
中，本文所述方法所 用的抗体可能与人ICOS发生抗原免疫特异性结合，利用本文所述或本领域技术人员已知 的方法(如BIAcore试验、ELISA)评估，其解离常数(Kd)可以是25-3400pM、25_3000pM、 25-2500pM、25-2000pM、25_1500pM、25-1000pM、25_750pM、25_500pM、25_250pM、25-100pM、 25-75pM、25-50pM。在另一实施方式中，本文所述方法所用的抗-ICOS抗体可与ICOS发生 免疫特异性结合，利用本文所述或本领域技术人员已知的方法(如BIAcore试验、ELISA)评 估，其解离常数(Kd)可以是500pM、100pM、75pM或50pM。 本发明还提供包含编码效应功能增强的抗ICOS抗体的核苷酸序列的多核苷酸。 本发明也包括在严谨或较低严谨的杂交条件(如本文所述)下，与编码效应功能增强的抗 ICOS抗体的多核苷酸杂交的多核苷酸。严谨性杂交条件包括但不限于在6X氯化钠/枸橼酸钠(SSC)中，约45°C下与滤 膜结合的DNA杂交，然后用0. 2XSSC/0. 1 % SDS在约50-65°C下洗涤一次或多次，高度严 谨条件例如，在6X SSC中，约45°C下与滤膜结合的DNA杂交，然后用0. 1XSSC/0. 2% SDS 在约60°C下洗涤一次或多次，或者是本领域技术人员已知的任何其它严谨性杂交条件(参 见例如，Ausubel, F.M.等编，1989《新编分子生物学实验指南》(Current Protocols in Molecular Biology),第 1 卷，格林出版联合公司(Green Publishing Associates, Inc.) 和约翰韦利森公司(JohnWiley and Sons, Inc.)，NY，第 6· 3. 1-6. 3. 6 和 2· 10. 3 页)。可通过本领域已知的任何方法获得多核苷酸，并测定多核苷酸的核苷酸序列。例 如，如果抗体的核苷酸序列已知，则可由化学合成的寡核苷酸组装编码该抗体的多核苷酸 (如Kutmeier等，BioTechniques 17 =242(1994)所述)，简言之，该方法包括合成含有编码 该抗体的序列的某部分的重叠寡核苷酸，使这些寡核苷酸退火和连接，然后通过PCR扩增 连接的寡核苷酸。也可由合适来源的核酸产生编码抗体的多核苷酸。如果无法获得含有编码特定 抗体的核酸的克隆，但该抗体分子的序列已知，则可通过化学合成或利用可与该序列3'和 5'端杂交的合成引物进行PCR扩增、或利用具体基因序列的特异性寡核苷酸探针进行克 隆以鉴定cDNA文库中编码该抗体的cDNA克隆，由合适来源(如抗体cDNA文库，或由表达 该抗体的任何组织或细胞，如选择表达抗体的杂交瘤细胞分离的核酸，优选聚A+RNA产生 的cDNA文库)获得编码该免疫球蛋白的核酸。然后，可利用本领域熟知的任何方法将PCR 产生的扩增核酸克隆到可复制克隆载体中。本发明还提供了在小鼠异种移植物模型系统中有效消耗ICOS表达细胞的抗体。 在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体能使小鼠异种移植物 模型系统中ICOS表达细胞消耗至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少 约60%、至少约70%、至少约80%、至少约90%、至少约95%、至少约97%、至少约99%或 至少约100%。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体比亲本 抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2) 未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)更有效地消耗小鼠异种移植物模型 中的ICOS表达细胞.在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体 比岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体更有效地消耗小鼠异种移植物模型中ICOS表达细胞。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的小鼠 异种移植物模型中的ICOS表达细胞是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序 列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列 的抗体)消耗的至少约2倍、至少约3倍、至少约5倍或至少约10倍。在一个实施方式中， 给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的小鼠异种移植物模型中的ICOS表 达细胞是岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的至少约2倍、至少约3倍、至少约5 倍或至少约10倍。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体消耗小鼠异种移植物模型中ICOS表达细 胞的EC50值是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化 的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)的至多约1/2、 至多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约至多约1/100。在另一实施 方式中，本发明抗-ICOS抗体消耗小鼠异种移植物模型中ICOS表达细胞的EC50值是亲本 抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2) 未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)的至多约1/2、至多约1/5、至多约 1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约1/100。 在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体比亲本 抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2) 未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)消耗的小鼠异种移植物模型中的 ICOS表达细胞多至少约5 %、至少约10%、至少约20%、至少约30 %、至少约40 %、至少约 50%、至少约75%或至少约100%。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发 明抗-ICOS抗体比岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的小鼠异种移植物模型中的 ICOS表达细胞多至少约5%、至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约 50%、至少约75%、至少约100%。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的小鼠 异种移植物模型中的ICOS表达细胞是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序 列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列 的抗体)消耗的至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约 25倍、至少约50倍或至少约100倍。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发 明抗-ICOS抗体消耗的小鼠异种移植物模型中的ICOS表达细胞是岩藻糖基化的JMab-136 抗-ICOS抗体消耗的至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至 少约25倍、至少约50倍或至少约100倍。本发明还包括在转基因小鼠模型系统中有效消耗ICOS表达细胞的抗体。在一个 实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体能使转基因小鼠模型系统中 ICOS表达细胞消耗至少约20 %、至少约30 %、至少约40 %、至少约50 %、至少约60 %、至少 约70 %、至少约80 %、至少约90 %、至少约95 %、至少约97 %、至少约99 %或至少约100 %。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体比亲本 抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2) 未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)更有效地消耗转基因小鼠模型模型中的ICOS表达细胞.在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体 比岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体更有效地消耗转基因小鼠模型中ICOS表达细胞。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的转基 因小鼠模型中ICOS表达细胞是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具 有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体) 消耗的至少约2倍、至少约3倍、至少约5倍或至少约10倍。在一个实施方式中，给予一个 或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的转基因小鼠模型中的ICOS表达细胞是岩藻 糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的至少约2倍、至少约3倍、至少约5倍或至少约10 倍。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体消耗转基因小鼠模型中ICOS表达细胞的 EC50值是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc 结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)的至多约1/2、至多约 1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约1/100。在另一实施方式中，本发明 抗-ICOS抗体消耗转基因小鼠模型中ICOS表达细胞的EC50值是亲本抗-ICOS抗体(如， 含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC 的Fc结构域氨基酸序列的抗体)的至多约1/2、至多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至 多约1/50或至多约1/100。
在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体比亲本 抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未 被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)消耗的转基因小鼠模型中的ICOS表达 细胞多至少约5 %、至少约10 %、至少约20 %、至少约30 %、至少约40 %、至少约50 %、至少 约75 %或至少约100 %。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗 体比岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的转基因小鼠模型中的ICOS表达细胞多至 少约5%、至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约75%、 至少约100%。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的转基 因小鼠模型的ICOS表达细胞是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具 有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体) 消耗的至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至 少约50倍或至少约100倍。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS 抗体消耗的转基因小鼠模型的ICOS表达细胞是岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗 的至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约 50倍或至少约100倍。本发明也提供了有效消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中ICOS表达细胞的抗 体。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体能使灵长动物(非 人灵长动物或人)中ICOS表达细胞消耗至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约 50 %、至少约60 %、至少约70 %、至少约80 %、至少约90 %、至少约95 %、至少约97 %、至少 约99%或至少约100%。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体比亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2) 未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)更有效地消耗灵长动物(非人灵长 动物或人)中的ICOS表达细胞。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明 抗-ICOS抗体比岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体更有效地消耗灵长动物(非人灵长 动物或人)中ICOS表达细胞。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)的ICOS表达细胞是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨 基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基 酸序列的抗体)消耗的至少约2倍、至少约3倍、至少约5倍或至少约10倍。在一个实施 方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物 或人)的ICOS表达细胞是岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的至少约2倍、至少 约3倍、至少约5倍或至少约10倍。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中 ICOS表达细胞的EC50值是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1) 岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)的至 多约1/2、至多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约1/100。在另一实施 方式中，本发明抗-ICOS抗体消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中ICOS表达细胞的EC50 值是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构 域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)的至多约1/2、至多约1/5、 至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约1/100。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)的ICOS表达细胞是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨 基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基 酸序列的抗体)消耗的多至少约5 %、至少约10 %、至少约20 %、至少约30 %、至少约40 %、 至少约50 %、至少约75 %或至少约100 %。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的 本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)的ICOS表达细胞比岩藻糖基 化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的多至少约5%、至少约10%、至少约20%、至少约30%、 至少约40%、至少约50%、至少约75%、至少约100%。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)的ICOS表达细胞是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨 基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基 酸序列的抗体)消耗的至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、 至少约25倍、至少约50倍或至少约100倍。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量 的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)的ICOS表达细胞是岩藻糖基 化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约15倍、 至少约20倍、至少约25倍、至少约50倍或至少约100倍。本发明也提供了有效消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的T细胞的 抗体。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体能使灵长动物 (非人灵长动物或人)中表达ICOS的T细胞消耗至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50 %、至少约60 %、至少约70 %、至少约80 %、至少约90 %、至少约95 %、至少约97 %、 至少约99%或至少约100%。
在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体比亲本 抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2) 未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)更有效地消耗灵长动物(非人灵长 动物或人)中表达ICOS的T细胞。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明 抗-ICOS抗体比岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体更有效地消耗灵长动物(非人灵长 动物或人)中表达ICOS的T细胞。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的T细胞是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变 区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域 氨基酸序列的抗体)消耗的至少约2倍、至少约3倍、至少约5倍或至少约10倍。在一个 实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵长 动物或人)中表达ICOS的T细胞是岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的至少约2 倍、至少约3倍、至少约5倍或至少约10倍。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中 表达ICOS的T细胞的EC50值是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具 有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体) 的至多约1/2、至多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约1/100。在另一 实施方式中，本发明抗-ICOS抗体消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的T细 胞的EC50值是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化 的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)的至多约1/2、至 多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约1/100。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的T细胞比亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变 区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域 氨基酸序列的抗体)消耗的多至少约5%、至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约 40%、至少约50%、至少约75%或至少约100%。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗 剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的T细胞 比岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的多至少约5%、至少约10%、至少约20%、至 少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约75%、至少约100%。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的T细胞是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变 区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域 氨基酸序列的抗体)消耗的至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20 倍、至少约25倍、至少约50倍或至少约100倍。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗 剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的T细胞 是岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、至 少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约50倍或至少约100倍。
本发明也提供了有效消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的T辅助细胞的抗体。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体能使灵 长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的T辅助细胞消耗至少约20%、至少约30%、至 少约40 %、至少约50 %、至少约60 %、至少约70 %、至少约80 %、至少约90 %、至少约95 %、 至少约97%、至少约99%或至少约100%。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体比亲本 抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2) 未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)更有效地消耗灵长动物(非人灵长 动物或人)中表达ICOS的T辅助细胞。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本 发明抗-ICOS抗体比岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体更有效地消耗灵长动物(非人 灵长动物或人)中表达ICOS的T辅助细胞。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的T辅助细胞是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同 可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结 构域氨基酸序列的抗体)消耗的至少约2倍、至少约3倍、至少约5倍或至少约10倍。在 一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人 灵长动物或人)中表达ICOS的T辅助细胞是岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的 至少约2倍、至少约3倍、至少约5倍或至少约10倍。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中 表达ICOS的T辅助细胞的EC50值是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列， 但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的 抗体)的至多约1/2、至多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约1/100。 在另一实施方式中，本发明抗-ICOS抗体消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS 的T辅助细胞的EC50值是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1) 岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)的至 多约1/2、至多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约1/100。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的T辅助细胞比亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同 可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结 构域氨基酸序列的抗体)消耗的多至少约5%、至少约10%、至少约20%、至少约30%、至 少约40 %、至少约50 %、至少约75 %或至少约100 %。在另一实施方式中，给予一个或多个 治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的T 辅助细胞比岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的多至少约5%、至少约10%、至少 约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约75%、至少约100%。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的T辅助细胞是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同 可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结 构域氨基酸序列的抗体)消耗的至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约15倍、至少 约20倍、至少约25倍、至少约50倍或至少约100倍。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的T 辅助细胞是岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的至少约2倍、至少约5倍、至少约 10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约50倍或至少约100倍。本发明也提供了有效消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的Thl细 胞的抗体。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体能使灵长 动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的Thl细胞消耗至少约20%、至少约30%、至少约 40 %、至少约50 %、至少约60 %、至少约70 %、至少约80 %、至少约90 %、至少约95 %、至少 约97%、至少约99%或至少约100%。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体比亲本 抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2) 未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)更有效地消耗灵长动物(非人灵长 动物或人)中表达ICOS的Thl细胞。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发 明抗-ICOS抗体比岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体更有效地消耗灵长动物(非人灵 长动物或人)中表达ICOS的Thl细胞。
在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的Thl细胞是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可 变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构 域氨基酸序列的抗体)消耗的至少约2倍、至少约3倍、至少约5倍或至少约10倍。在一 个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵 长动物或人)中表达ICOS的Thl细胞是岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的至少 约2倍、至少约3倍、至少约5倍或至少约10倍。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中 表达ICOS的Thl细胞的EC50值是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但 具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗 体)的至多约1/2、至多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约1/100。在 另一实施方式中，本发明抗-ICOS抗体消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的 Thl细胞的EC50值是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻 糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)的至多约 1/2、至多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约1/100。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的Thl细胞比亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可 变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构 域氨基酸序列的抗体)消耗的多至少约5%、至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少 约40 %、至少约50 %、至少约75 %或至少约100 %。在另一实施方式中，给予一个或多个治 疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的Thl细 胞比岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的多至少约5%、至少约10%、至少约20%、 至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约75%、至少约100%。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的Thl细胞是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构 域氨基酸序列的抗体)消耗的至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约 20倍、至少约25倍、至少约50倍或至少约100倍。在另一实施方式中，给予一个或多个治 疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的Thl细 胞是岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、 至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约50倍或至少约100倍。
本发明也提供了有效消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的Th2细 胞的抗体。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体能使灵长 动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的Th2细胞消耗至少约20%、至少约30%、至少约 40 %、至少约50 %、至少约60 %、至少约70 %、至少约80 %、至少约90 %、至少约95 %、至少 约97%、至少约99%或至少约100%。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体比亲本 抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2) 未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)更有效地消耗灵长动物(非人灵长 动物或人)中表达ICOS的Th2细胞。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发 明抗-ICOS抗体比岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体更有效地消耗灵长动物(非人灵 长动物或人)中表达ICOS的Th2细胞。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的Th2细胞是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可 变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构 域氨基酸序列的抗体)消耗的至少约2倍、至少约3倍、至少约5倍或至少约10倍。在一 个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵 长动物或人)中表达ICOS的Th2细胞是岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的至少 约2倍、至少约3倍、至少约5倍或至少约10倍。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中 表达ICOS的Th2细胞的EC50值是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但 具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗 体)的至多约1/2、至多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约1/100。在 另一实施方式中，本发明抗-ICOS抗体消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的 Th2细胞的EC50值是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻 糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)的至多约 1/2、至多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约1/100。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的Th2细胞比亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可 变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构 域氨基酸序列的抗体)消耗的多至少约5%、至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少 约40 %、至少约50 %、至少约75 %或至少约100 %。在另一实施方式中，给予一个或多个治 疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的Th2细 胞比岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的多至少约5%、至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约75%、至少约100%。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的Th2细胞是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可 变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构 域氨基酸序列的抗体)消耗的至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约 20倍、至少约25倍、至少约50倍或至少约100倍。在另一实施方式中，给予一个或多个治 疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的Th2细 胞是岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、 至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约50倍或至少约100倍。本发明也提供了有效消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的Thl7细 胞的抗体。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体能使灵长 动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的Thl7细胞消耗至少约20%、至少约30%、至少 约40 %、至少约50 %、至少约60 %、至少约70 %、至少约80 %、至少约90 %、至少约95 %、至 少约97%、至少约99%或至少约100%。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体比亲本 抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2) 未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)更有效地消耗灵长动物(非人灵长 动物或人)中表达ICOS的Thl7细胞。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本 发明抗-ICOS抗体比岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体更有效地消耗灵长动物(非人 灵长动物或人)中表达ICOS的Thl7细胞。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的Thl7细胞是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同 可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结 构域氨基酸序列的抗体)消耗的至少约2倍、至少约3倍、至少约5倍或至少约10倍。在 一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人 灵长动物或人)中表达ICOS的Thl7细胞是岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的 至少约2倍、至少约3倍、至少约5倍或至少约10倍。在另一实施方式中，本发明抗-ICOS抗体消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中 表达ICOS的Thl7细胞的EC50值是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列， 但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的 抗体)的至多约1/2、至多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约1/100。 在另一实施方式中，本发明抗-ICOS抗体消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS 的Thl7细胞的EC50值是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1) 岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)的至 多约1/2、至多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约1/100。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的Thl7细胞比亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同 可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结 构域氨基酸序列的抗体)消耗的多至少约5%、至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约75%或至少约100%。在另一实施方式中，给予一个或多 个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的 Thl7细胞比岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的多至少约5%、至少约10%、至少 约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约75%、至少约100%。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的Thl7细胞是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同 可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结 构域氨基酸序列的抗体)消耗的至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约15倍、至少 约20倍、至少约25倍、至少约50倍或至少约100倍。在另一实施方式中，给予一个或多 个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的 Thl7细胞是岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的至少约2倍、至少约5倍、至少约 10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约50倍或至少约100倍。本发明也提供了有效消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的记忆辅 助T细胞的抗体。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体能 使灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的记忆辅助T细胞消耗至少约20%、至少约 30 %、至少约40 %、至少约50 %、至少约60 %、至少约70 %、至少约80 %、至少约90 %、至少 约95%、至少约97%、至少约99%或至少约100%。
在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体比亲本 抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未 被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)更有效地消耗灵长动物(非人灵长动 物或人)中表达ICOS的记忆辅助T细胞。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的 本发明抗-ICOS抗体比岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体更有效地消耗灵长动物(非 人灵长动物或人)中表达ICOS的记忆辅助T细胞。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的记忆辅助T细胞是亲本抗-ICOS抗体(如，含有 相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的 Fc结构域氨基酸序列的抗体)消耗的至少约2倍、至少约3倍、至少约5倍或至少约10倍。 在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非 人灵长动物或人)中表达ICOS的记忆辅助T细胞是岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体 消耗的至少约2倍、至少约3倍、至少约5倍或至少约10倍。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中 表达ICOS的记忆辅助T细胞的EC50值是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序 列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列 的抗体)的至多约1/2、至多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约1/100。 在另一实施方式中，本发明抗-ICOS抗体消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS 的记忆辅助T细胞的EC50值是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具 有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体) 的至多约1/2、至多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约1/100。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的记忆辅助T细胞比亲本抗-ICOS抗体(如，含有 相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc 结构域氨基酸序列的抗体)消耗的多至少约5%、至少约10%、至少约20%、至少约30%、 至少约40 %、至少约50 %、至少约75 %或至少约100 %。在另一实施方式中，给予一个或多 个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的记 忆辅助T细胞比岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的多至少约5%、至少约10%、 至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约75%、至少约100%。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的记忆辅助T细胞是亲本抗-ICOS抗体(如，含有 相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的 Fc结构域氨基酸序列的抗体)消耗的至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约15倍、 至少约20倍、至少约25倍、至少约50倍或至少约100倍。在另一实施方式中，给予一个或 多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)中表达ICOS的 记忆辅助T细胞是岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的至少约2倍、至少约5倍、 至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约50倍或至少约100倍。消耗特定细胞类型可引起所述细胞类型分泌产物的消耗。例如，使用本发明中效 应功能增强的抗-ICOS抗体消耗Thl7细胞可引起IL-17的消耗。本发明也提供了有效消 耗灵长动物(非人灵长动物或人)中IL-17的抗体。在一个实施方式中，给予一个或多个 治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体能使灵长动物(非人灵长动物或人)中IL-17消耗至少约 20 %、至少约30 %、至少约40 %、至少约50 %、至少约60 %、至少约70 %、至少约80 %、至少 约90%、至少约95%、至少约97%、至少约99%或至少约100%。 在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体比亲本 抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未 被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)更有效地消耗灵长动物(非人灵长动 物或人)中的IL-17。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体 比岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体更有效地消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中 的 IL-17。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)中的IL-17是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸 序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序 列的抗体)消耗的至少约2倍、至少约3倍、至少约5倍或至少约10倍。在一个实施方式 中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人) 中的IL-17是岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的至少约2倍、至少约3倍、至少 约5倍或至少约10倍。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中 IL-17的EC50值是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖 基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)的至多约 1/2、至多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约1/100。在另一实施方 式中，本发明抗-ICOS抗体消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中IL-17的EC50值是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2) 未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)的至多约1/2、至多约1/5、至多约 1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约1/100。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)中的IL-17比亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序 列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列 的抗体)消耗的多至少约5 %、至少约10 %、至少约20 %、至少约30 %、至少约40 %、至少约 50%、至少约75%或至少约100%。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明 抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)中的IL-17比岩藻糖基化的JMab-136 抗-ICOS抗体消耗的多至少约5 %、至少约10 %、至少约20 %、至少约30 %、至少约40 %、至 少约50%、至少约75%、至少约100%。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)中的IL-17是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸 序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序 列的抗体)消耗的至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至 少约25倍、至少约50倍或至少约100倍。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量 的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)中的IL-17是岩藻糖基化的 JMab-136抗-ICOS抗体消耗的至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约 20倍、至少约25倍、至少约50倍或至少约100倍。本发明也提供了有效消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中IL-2的抗体。在一 个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体能使灵长动物(非人灵长 动物或人)中IL-2消耗至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约60%、 至少约70%、至少约80%、至少约90%、至少约95%、至少约97%、至少约99%或至少约 100%。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体比亲本 抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未 被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)更有效地消耗灵长动物(非人灵长动 物或人)中的IL-2。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体 比岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体更有效地消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中 的 IL-2。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)中的IL-2是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序 列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列 的抗体)消耗的至少约2倍、至少约3倍、至少约5倍或至少约10倍。在一个实施方式中， 给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-ICOS抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)中 的IL-2是岩藻糖基化的JMab-136抗-ICOS抗体消耗的至少约2倍、至少约3倍、至少约5 倍或至少约10倍。在一个实施方式中，本发明抗-ICOS抗体消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中 IL-2的EC50值是亲本抗-ICOS抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)的至多约1/2、 至多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约1/100。在另一实施方式中，本 发明抗-IC0S抗体消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中IL-2的EC50值是亲本抗-IC0S 抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰 以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)的至多约1/2、至多约1/5、至多约1/10、至多 约1/20、至多约1/50或至多约1/100。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)中的IL-2比亲本抗-IC0S抗体(如，含有相同可变区氨基酸序 列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列 的抗体)消耗的多至少约5 %、至少约10 %、至少约20 %、至少约30 %、至少约40 %、至少约 50%、至少约75%或至少约100%。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明 抗-IC0S抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)中的IL-2比岩藻糖基化的JMab-136 抗-IC0S抗体消耗的多至少约5 %、至少约10 %、至少约20 %、至少约30 %、至少约40 %、至 少约50%、至少约75%、至少约100%。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)中的IL-2是亲本抗-IC0S抗体(如，含有相同可变区氨基酸序 列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列 的抗体)消耗的至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约 25倍、至少约50倍或至少约100倍。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明 抗-IC0S抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)中的IL-2是岩藻糖基化的JMab-136 抗-IC0S抗体消耗的至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至 少约25倍、至少约50倍或至少约100倍。表达IC0S的T细胞参与小鼠模型系统中生发中心的形成。本文数据表明IC0S表 达细胞也参与维持已形成的生发中心的结构完整性和B细胞组分。不限于具体模型，通过 给予一个或多个治疗剂量的本发明的抗-IC0S抗体消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中 表达IC0S的T细胞，可阻碍生发中心的形成，破坏已经形成的生发中心的结构，消耗二级淋 巴器官中的生发中心B细胞和/或消耗循环类型转换B细胞。可通过本领域任何已知方法 监测生发中心的形成，例如但不限于，二级淋巴器官的组织学检查或流式细胞术分析从二 级淋巴组织中分离的淋巴细胞。可通过本领域所知任何方法监测生发中心结构的破坏，例 如但不限于二级淋巴器官的组织学检查。可通过本领域任何已知方法监测二级淋巴器官中 生发中心B细胞的消耗，例如但不限于，二级淋巴器官的组织学检查或流式细胞术分析从 二级淋巴组织中分离的淋巴细胞。可通过本领域已知任何技术监测循环类型转换B细胞的 消耗，例如但不限于用流式细胞术分析循环淋巴细胞。根据细胞表面标记物的特定表达或 缺失可鉴定类型转换B细胞，例如但不限于，循环类型转换B细胞可鉴别为⑶27+IgM-IgD-B 细胞。本发明提供能有效防止灵长动物(非人灵长动物或人)的二级淋巴器官中形成生 发中心的抗体。在一个实施方式中，二级淋巴器官是淋巴结。在另一实施方式中，二级淋巴 器官是脾。在另一实施方式中，二级淋巴器官是扁桃体。在一个实施方式中，二级淋巴器官 是肠系膜淋巴结。
在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体能防止灵长 动物(非人灵长动物或人)二级淋巴器官中生发中心形成至少1天、至少2天、至少5天、 至少1周、至少2周、至少3周、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5 个月、至少6个月、至少9个月。在一个具体实施方式
中，二级淋巴器官是脾。在另一具体 实施方式中，二级淋巴器官是扁桃体。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体比亲本 抗-IC0S抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未 被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)防止灵长动物(非人灵长动物或人) 的二级淋巴器官中生发中心形成的时间长。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量 的本发明抗-IC0S抗体比岩藻糖基化的JMab-136抗-IC0S抗体防止灵长动物(非人灵长 动物或人)二级淋巴器官中生发中心形成的时间长。在一个具体实施方式
中，二级淋巴器 官是脾。在另一具体实施方式
中，二级淋巴器官是扁桃体。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体比亲本 抗-IC0S抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2) 未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)更有效地防止灵长动物(非人灵长 动物或人)二级淋巴器官中生发中心的形成。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂 量的本发明抗-IC0S抗体比岩藻糖基化的JMab-136抗-IC0S抗体更有效地阻止灵长动物 (非人灵长动物或人)二级淋巴器官中生发中心的形成。本发明提供能有效破坏灵长动物(非人灵长动物或人)的二级淋巴器官中生发中 心结构的抗体。在一个实施方式中，二级淋巴器官是淋巴结。在另一实施方式中，二级淋巴 器官是脾。在另一实施方式中，二级淋巴器官是扁桃体。在一个实施方式中，二级淋巴器官 是肠系膜淋巴结。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体能破坏灵长 动物(非人灵长动物或人)二级淋巴器官中生发中心的结构至少1天、至少2天、至少5天、 至少1周、至少2周、至少3周、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5 个月、至少6个月、至少9个月。在一个具体实施方式
中，二级淋巴器官是脾。在另一具体 实施方式中，二级淋巴器官是扁桃体。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体比亲本 抗-IC0S抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未 被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)破坏灵长动物(非人灵长动物或人) 二级淋巴器官中生发中心结构的时间长。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的 本发明抗-IC0S抗体比岩藻糖基化的JMab-136抗-IC0S抗体破坏灵长动物(非人灵长动 物或人)二级淋巴器官中生发中心结构的时间长。在一个具体实施方式
中，二级淋巴器官 是脾。在另一具体实施方式
中，二级淋巴器官是扁桃体。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体比亲本 抗-IC0S抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2) 未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)更有效地破坏灵长动物(非人灵长 动物或人)二级淋巴器官中生发中心的结构。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂 量的本发明抗-IC0S抗体比岩藻糖基化的JMab-136抗-IC0S抗体更有效地破坏灵长动物
33(非人灵长动物或人)二级淋巴器官中生发中心的结构。本发明提供能有效消耗灵长动物(非人灵长动物或人)二级淋巴器官中生发中心 B细胞的抗体。在一个实施方式中，二级淋巴器官是淋巴结。在另一实施方式中，二级淋巴 器官是脾。在另一实施方式中，二级淋巴器官是扁桃体。在一个实施方式中，二级淋巴器官 是肠系膜淋巴结。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体能消耗灵长 动物(非人灵长动物或人)二级淋巴器官中生发中心B细胞至少1天、至少2天、至少5天、 至少1周、至少2周、至少3周、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个 月、至少6个月、至少9个月。在一个具体实施方式
中，二级淋巴器官是脾。在另一具体实 施方式中，二级淋巴器官是扁桃体。在给予一个或多个剂量的抗-icos抗体后一段时间，当 抗体治疗样品的生发中心B细胞数比未治疗对照样品的生发中心B细胞数少至少10%时， 认为生发中心B细胞的消耗是“基本持续”的。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体比亲本 抗-IC0S抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未 被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)消耗灵长动物(非人灵长动物或人) 二级淋巴器官中生发中心B细胞的时间长。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量 的本发明抗-IC0S抗体比岩藻糖基化的JMab-136抗-IC0S抗体消耗灵长动物(非人灵长 动物或人)二级淋巴器官中生发中心B细胞的时间长。在一个具体实施方式
中，二级淋巴 器官是脾。在另一具体实施方式
中，二级淋巴器官是扁桃体。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体能使灵长动 物(非人灵长动物或人)二级淋巴器官中生发中心B细胞消耗至少约20%、至少约30%、至 少约40 %、至少约50 %、至少约60 %、至少约70 %、至少约80 %、至少约90 %、至少约95 %、 至少约97%、至少约99%或至少约100%。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体比亲本 抗-IC0S抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2) 未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)更有效地消耗灵长动物(非人灵长 动物或人)二级淋巴器官中的生发中心B细胞。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗 剂量的本发明抗-IC0S抗体比岩藻糖基化的JMab-136抗-IC0S抗体更有效地消耗灵长动 物(非人灵长动物或人)二级淋巴器官中的生发中心B细胞。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)二级淋巴器官中的生发中心B细胞是亲本抗-IC0S抗体(如，含 有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的 Fc结构域氨基酸序列的抗体)消耗的至少约2倍、至少约3倍、至少约5倍或至少约10倍。 在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-icos抗体消耗的灵长动物(非 人灵长动物或人)二级淋巴器官中的生发中心B细胞是岩藻糖基化的JMab-136抗-IC0S 抗体消耗的至少约2倍、至少约3倍、至少约5倍或至少约10倍。在一个实施方式中，本发明抗-IC0S抗体消耗灵长动物(非人灵长动物或人)第 二淋巴器官中生发中心B细胞的EC50值是亲本抗-IC0S抗体(如，含有相同可变区氨基酸 序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸
34序列的抗体)的至多约1/2、至多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约 1/100。在另一实施方式中，本发明抗-IC0S抗体消耗灵长动物(非人灵长动物或人)第二 淋巴器官中生发中心B细胞的EC50值是亲本抗-IC0S抗体的至多约1/2、至多约1/5、至多 约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约1/100。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)二级淋巴器官中的生发中心B细胞比亲本抗-IC0S抗体(如， 含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC 的Fc结构域氨基酸序列的抗体)消耗的多至少约5%、至少约10%、至少约20%、至少约 30 %、至少约40 %、至少约50 %、至少约75 %或至少约100 %。在另一实施方式中，给予一个 或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)二级淋巴器 官中的生发中心B细胞比岩藻糖基化的JMab-136抗-IC0S抗体消耗的多至少约5%、至少 约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约75%、至少约100%。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)二级淋巴器官中的生发中心B细胞是亲本抗-IC0S抗体(如， 含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC 的Fc结构域氨基酸序列的抗体)消耗的至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约15 倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约50倍或至少约100倍。在另一实施方式中，给予一 个或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)二级淋巴 器官中的生发中心B细胞是岩藻糖基化的JMab-136抗-IC0S抗体消耗的至少约2倍、至少 约5倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约50倍或至少约100 倍。本发明也提供有效消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中循环类型转换B细胞的 抗体。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体能消耗灵长动 物(非人灵长动物或人)的循环类型转换B细胞至少1天、至少2天、至少5天、至少1周、 至少2周、至少3周、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少 6个月、至少9个月。在给予一个或多个剂量的抗-IC0S抗体后一段时间，当抗体治疗样品 的循环类型转换B细胞数比未治疗对照样品的循环类型转换B细胞数低至少10%时，认为 循环类型转换B细胞的消耗是“基本持续”的。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体比亲本 抗-IC0S抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未 被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)消耗灵长动物(非人灵长动物或人) 的循环类型转换B细胞的时间长。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明 抗-IC0S抗体比岩藻糖基化的JMab-136抗-IC0S抗体消耗灵长动物(非人灵长动物或人) 的循环级别B细胞的时间长。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体能使灵长动 物(非人灵长动物或人)中循环类型转换B细胞消耗至少约20%、至少约30%、至少约 40 %、至少约50 %、至少约60 %、至少约70 %、至少约80 %、至少约90 %、至少约95 %、至少 约97%、至少约99%或至少约100%。在一个实施方式中，给予灵长动物(非人灵长动物或人)一个或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体可使循环类型转换B细胞消耗至占外周血淋巴细胞的少于2%、少于 1. 5%、少于1%、少于0. 9%、少于0. 8%、少于07%、少于0. 6%、少于0. 5%、少于0. 4%、少 于0.3%或少于0. 1%。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体比亲本 抗-IC0S抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2) 未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)更有效地消耗灵长动物(非人灵长 动物或人)中的循环类型转换B细胞。在另一实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本 发明抗-IC0S抗体比岩藻糖基化的JMab-136抗-IC0S抗体更有效地消耗灵长动物(非人 灵长动物或人)中循环类型转换B细胞。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)的循环类型转换B细胞是亲本抗-IC0S抗体(如，含有相同可 变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构 域氨基酸序列的抗体)消耗的至少约2倍、至少约3倍、至少约5倍或至少约10倍。在一 个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体消耗的灵长动物(非人灵 长动物或人)的循环类型转换B细胞是岩藻糖基化的JMab-136抗-IC0S抗体消耗的至少 约2倍、至少约3倍、至少约5倍或至少约10倍。在一个实施方式中，本发明抗-IC0S抗体消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中 循环类型转换B细胞的EC50值是亲本抗-IC0S抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但 具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗 体)的至多约1/2、至多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约1/100。在 另一实施方式中，本发明抗-IC0S抗体消耗灵长动物(非人灵长动物或人)中循环类型转 换B细胞的EC50值是亲本抗-IC0S抗体(如，含有相同可变区氨基酸序列，但具有1)岩藻 糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构域氨基酸序列的抗体)的至多约 1/2、至多约1/5、至多约1/10、至多约1/20、至多约1/50或至多约1/100。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)的循环类型转换B细胞比亲本抗-IC0S抗体(如，含有相同可 变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构 域氨基酸序列的抗体)消耗的多至少约5%、至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少 约40 %、至少约50 %、至少约75 %或至少约100 %。在另一实施方式中，给予一个或多个治 疗剂量的本发明抗-IC0S抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)的循环类型转换B细 胞比岩藻糖基化的JMab-136抗-IC0S抗体消耗的多至少约5 %、至少约10 %、至少约20 %、 至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约75%、至少约100%。在一个实施方式中，给予一个或多个治疗剂量的本发明抗-IC0S抗体消耗的灵长 动物(非人灵长动物或人)的循环类型转换B细胞是亲本抗-IC0S抗体(如，含有相同可 变区氨基酸序列，但具有1)岩藻糖基化的Fc结构域或2)未被修饰以增加ADCC的Fc结构 域氨基酸序列的抗体)消耗的至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约 20倍、至少约25倍、至少约50倍或至少约100倍。在另一实施方式中，给予一个或多个治 疗剂量的本发明抗-IC0S抗体消耗的灵长动物(非人灵长动物或人)的循环类型转换B细 胞是岩藻糖基化的JMab-136抗-IC0S抗体消耗的至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约50倍或至少约100倍。在一个实施方式中，本文所述的抗-IC0S抗体介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、 补体依赖性细胞介导的细胞毒性(CDC)和/或抗体依赖性吞噬作用。在一个实施方式中， 本发明抗-IC0S抗体介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和/或抗体依赖性吞噬作用。在某 些实施方式中，本发明的抗-IC0S抗体可介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。在一个实施方式中，本发明抗-IC0S抗体包含介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)增 强的变异Fc区。在另一实施方式中，本发明抗-IC0S抗体包含至少一个选自下组的氨基酸 残基被取代的变异Fc区残基239、330和332，其中根据EU惯例确定氨基酸残基位置。在 一个具体实施方式
中，本发明抗-IC0S抗体包含含有至少一个选自下组的氨基酸取代的变 异Fc区S239D、A330L和I332E，其中根据EU惯例确定氨基酸残基位置。在另一实施方式 中，本发明抗-IC0S抗体包含至少一个选自下组的氨基酸残基239位的D、330位的L以及 332位的E ；其中根据EU惯例确定氨基酸残基位置。在一个实施方式中，本发明抗-IC0S抗体包含含有至少一个工程改造糖形的工程 改造的Fc区，其中所述工程改造Fc区介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)增强。在一个实施 方式中，本发明抗-IC0S抗体包含缺少糖基化的工程改造的Fc区。在一个实施方式中，本 发明抗-IC0S抗体包含具有与Asn297连接的复杂N-糖苷连接的糖链的工程改造的Fc区， 其中在还原末端岩藻糖不结合于N-乙酰基葡糖胺。 在某些实施方式中，本发明抗-IC0S抗体包含比野生型Fc区对Fc结合蛋白，例如 但不限于Fc受体、Clq的亲和力更高的变异Fc区。在一个实施方式中，本发明抗-IC0S抗 体包含比野生型Fc区对FcyRIIIA受体蛋白亲和力更高的变异Fc区。在某些实施方式中，本发明抗-IC0S抗体包含含有至少一个工程改造糖形的工程 改造的Fc区，与野生型Fc区相比，所述工程改造Fc区对Fc结合蛋白，例如但不限于Fc受 体、Clq具有更高亲和力。在一个实施方式中，本发明抗-IC0S抗体包含含有至少一个工程 改造糖形的工程改造的Fc区，与野生型Fc区相比，所述工程改造Fc区对Fc yRIIIA受体 蛋白具有更高亲和力。本发明也涉及治疗和预防人体T细胞介导的疾病和失调，例如但不限于，慢性感 染、自身免疫性疾病或失调、炎性疾病或失调、移植物抗宿主病(GVHD)、移植物排斥和T细 胞增殖性疾病的方法，所述方法包括给予需要的人足量的效应功能(如抗体依赖性细胞毒 性(ADCC)、补体依赖性细胞介导的细胞毒性(CDC)和/或抗体依赖性吞噬作用)增强的 抗-IC0S抗体以消耗循环IC0S表达细胞。在一个具体方面，本发明还涉及治疗和预防T细 胞介导的疾病和失调，例如但不限于，慢性感染、自身免疫性疾病或失调、炎性疾病或失调、 移植物抗宿主病(GVHD)、移植物排斥和T细胞增殖性疾病的方法，所述方法包括给予效应 功能增强的抗-IC0S抗体的治疗有效剂量方案，所述抗体是IgGl或IgG3的人同种型。本发明包括鉴定、诊断、治疗和监测患者的疾病进展的方法。患者可能因为实验性 研究而患上所述疾病、失调或病症，例如，它可能是开发的所述疾病、失调或病症的实验模 型。或者，患者可能在没有实验性操作的情况下患上所述疾病、失调或病症。患者包括人、 小鼠、大鼠、马、猪、猫、犬和用于研究的任何动物。病人可包含差异调节的ICOS mRNA或ICOSL mRNA或miR-101水平。差异调节 的ICOS mRNA或ICOSL mRNA或miR-101水平可为，相对于病人对照组织样品或正常对照个体，病人的组织样品显示出ICOS mRNA或ICOSLmRNA或miR-101表达升高。差异调节的 ICOS mRNA或ICOSL mRNA或miR-101水平可为，相对于病人对照组织样品或正常对照个体， 病人的组织样品显示出ICOS mRNA或ICOSL mRNA或miR-101表达降低。表达的差异升高 或降低可为对照样品的约10% -500%、约10% -400%、约10% -300%、约10% -250%, 约 10 % -200 %、约 10 % -150 %、约 10 % -100 %、约 10 % -50 %、约 100 % -500 %、约 200 % -500 约 300 % -500 %、约 400 % -500 %、约 50 % -100 约 100 % -200 约 100 % -400 %、约 200 % -400 %、约 10 % -50 %、约 20 % -100 %、约 25 % -75 % 或约 50% -100%。可为对照样品的 10%、20%、25%、30%、40%、50%、75%、100%、125%、 150%、175%、200%、250%、300%、400% 或 500%。给予本发明的抗-IC0S抗体可导致差异调节的ICOS mRNA或ICOSLmRNA或 miR-101水平的中和。差异调节的ICOS mRNA或ICOSL mRNA或miR-101水平的中和可为 ICOS mRNA或ICOSL mRNA或miR-101水平降低至少2%、至少3%、至少4%、至少5%、至少 7%、至少8%、至少10%、至少15%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、 至少50 %、至少60 %、至少70 %、至少75 %、至少80 %或至少90 %。或者，差异调节的IC0S mRNA 或 ICOSL mRNA 或 miR-101 水平的中和指上调的 ICOS mRNA 或 ICOSL mRNA 或 miR-101 表达的降低程度至多在对照样品ICOS mRNA或ICOSL mRNA或miR-101表达水平的50%、 45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%或 之内。病人中ICOS mRNA或ICOSL mRNA或miR-101的上调或下调可为相对对照样品(可 以是来自病人的非疾病组织(如SLE病人的非病损皮肤)或来自未患疾病或失调的健康人 的样品)的任何上调或下调程度。上调或下调程度可以是对照或对照样品的至少10%、至 少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少 75%、至少80%、至少90%、至少100%、至少125%、至少150%、至少200%、至少300%、至 少400%或至少500%。在监测或预测患者疾病进展的方法中，可以在给药之前和之后获取 患者样品。样品包括任何生物液体或组织，如全血、血清、肌肉、唾液、尿液、滑膜液、骨髓、脑 脊液、鼻腔分泌物、痰液、羊水、支气管肺泡灌洗液、外周血单核细胞、全白细胞、淋巴结细 胞、脾细胞、扁桃体细胞或皮肤。也通过本领域已知的任何方式获得样品。获得样品中(给药之前和之后)的ICOS mRNA或ICOSL mRNA或miR-101水平。比 较样品中的ICOS mRNA或ICOSL mRNA或miR-101水平。可以在第一次给予药剂前由患者获得样品，即该患者未曾接触过该药剂。或者，可 以在疗程中给予该药剂后由患者获得样品。例如，可以在启动监测方案之前给予该药剂。 给予药剂之后，可从患者获取额外的样品。样品可以是相同或不同类型，例如，所得各样品 可以是血液样品，或所得各样品可以是血清样品。各样品中检测到的ICOS mRNA或ICOSL mRNA或miR-101水平可以相同、可以基本重叠或可以相似。可以在给予治疗剂之前和之后的任何时间获得样品。可以在给予治疗剂后至少2 天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至 少12天或至少14天，获得给予治疗剂后获得的样品。可以在给予治疗剂后至少2周、至少 3周、至少4周、至少5周、至少6周、至少7周或至少8周获得给予治疗剂后获得的样品。 可以在给予治疗剂后至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月或至少6个月获得
38给予治疗剂后获得的样品。 可以在给予治疗剂后由患者获得其它样品。可以从患者获得至少2个、至少3个、 至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少12个、至少 15个、至少20个、至少25个样品，以监测疾病或失调随时间的进展或消退。可以在至少1 周、至少2周、至少3周、至少4周、至少5周、至少6周、至少7周、至少2个月、至少3个月、 至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少1年、至少2年、至少3年、至少4年、至少5年、 至少10年或患者终生的时间期间监测疾病进展。可以规则间隔，例如每个月、每连个月、每 三个月、每半年或每年的间隔由患者获得其它样品。可以在给予药剂后以规则间隔由患者 获得样品。例如，可以在每次给予药剂一周后、在每次给予药剂两周后、在每次给予药剂三 周后、在每次给予药剂一个月后、或在每次给予药剂两个月后由患者获得样品。或者，每次 给予药剂后，可由患者获得多个样品。本发明也包括使用ICOS mRNA或ICOSL mRNA或miR-101水平治疗、诊断、预测和 监测肌炎的方法。还可利用ICOS mRNA或ICOSL mRNA或miR-101水平指导肌炎患者或肌 炎疾病模型的剂量和治疗。单克隆抗-ICOS抗体单克隆抗-ICOS抗体与人ICOS抗原有结合特异性，可介导人ADCC、⑶C和/或抗 体依赖性吞噬作用。可采用本领域已知的各种技术产生这种抗体，这些技术包括使用杂交 瘤、重组技术和噬菌体展示技术，或它们的组合。抗体具有针对某一抗原性位点的高度特异 性。可通过本领域已知的任何方法产生工程改造的抗-ICOS抗体，这些方法包括但不限于 下述技术及其改进形式。大规模高产率生产一般包括培养产生工程改造的抗ICOS抗体的 宿主细胞和由所述宿主细胞培养物回收抗ICOS抗体。5. 1. 1.杂交瘤技术可采用杂交瘤技术产生单克隆抗体，该技术是本领域已知的，参见例如Harlow等， Antibodies :A Laboratory Manual (抗体实验室手册)，(Cold SpringHarbor Laboratory Press (冷泉港实验室出版社)，第2版，1988) ；Hammer ling等，刊于Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas (单克隆抗体和T细胞杂交瘤)563-681 (艾思威尔 出版社(Elsevier)，纽约，1981)，其全文通过引用纳入本文)。例如，在杂交瘤方法中，对 小鼠或其它合适的宿主动物(如仓鼠或猕猴)进行免疫，以引发产生或能够产生特异性结 合免疫所用蛋白质的抗体的淋巴细胞。淋巴细胞也可体外免疫。然后，用合适的融合试剂 如聚乙二醇使淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞(Goding，单克隆抗体原理和 实践(Monoclonal Antibodies principles and Practice)，第 59-103 页(学术出版社 (Academic Press),1986))。将如此制备的杂交瘤细胞进行接种，并用含有一种或多种能够抑制未融合的亲本 骨髓瘤细胞生长或存活的物质的合适培养基进行培养。例如，如果亲本骨髓瘤细胞缺少次 黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HGPRT或HPRT)，则杂交瘤培养基一般包含次黄嘌呤、氨 蝶呤和胸苷(HAT培养基)，这些物质能防止HGPRT-缺陷细胞的生长。特定实施方式采用能够有效融合、支持由所选抗体生产细胞稳定高水平产生抗体 且对培养基(如HAT培养基)敏感的骨髓瘤细胞。这些骨髓瘤细胞系包括鼠骨髓瘤细胞 系，如衍生自M0PC-21和MPC-Il小鼠肿瘤的细胞系(获自美国加州圣地亚哥的索尔克细胞销售中心(Salk Institute Cell Distribution Center, SanDiego, CA, USA))和 SP-2 或X63-Ag8. 653细胞(获自美国马里兰州罗克维尔的美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection, Rockville，MD，USA))的细胞系。也记载过将人骨髓瘤和小 鼠_人异源骨髓瘤细胞系用于生产人单克隆抗体(Kozbor，J. Immunol.，133 3001 (1984)； Brodeur 等，单克隆抗体生产技术禾口应用(Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications)，第 51-63 页(纽约 MD 公司(Marcel Dekker, Inc.，New York)，1987))。
检测培养杂交瘤细胞的培养基中是否产生人ICOS抗原的单克隆抗体。杂交瘤细 胞产生的单克隆抗体的结合特异性可通过免疫沉淀或体外结合试验，例如放射性免疫试验 (RIA)或酶联免疫吸附实验(ELISA)测定。鉴定到产生具有所需特异性、亲和力和/或活性的抗体的杂交瘤细胞后，可通 过有限稀释步骤和标准方法培养对该克隆进行亚克隆(Goding，单克隆抗体原理和实 践(Monoclonal Antibodies principles and Practice),第 59-103 页，(学术出版社， 1986))。适用于此种目的培养基包括例如，D-MEM或RPMI 1640培养基。此外，杂交瘤细胞 可以作为腹水瘤在动物体内培养。通过常规免疫球蛋白纯化方法，例如蛋白A-琼脂糖、羟基磷灰石色谱、凝胶电泳、 透析或亲和色谱，适当地由培养基、腹水或血清分离所述亚克隆分泌的单克隆抗体。5. 1. 2.重组 DNA 技术不难用常规方法(例如，使用能够特异性结合编码抗ICOS抗体的重链和轻链的基 因的寡核苷酸探针)对编码本文所述的抗-ICOS抗体的DNA进行分离和测序。杂交瘤细胞 用作这类DNA的来源。一旦分离后，则可将该DNA设置到表达载体中，然后转移到宿主细胞 如大肠杆菌(E. coli)细胞、猿COS细胞、中华仓鼠卵巢(CHO)细胞或不产生免疫球蛋白的 骨髓瘤细胞中，在重组宿主细胞中合成抗-ICOS抗体。在噬菌体展示法中，功能性抗体结构域展示在携带编码它们的多核苷酸序列的噬 菌体颗粒表面上。具体说，由动物cDNA文库(如人或鼠患病组织的cDNA文库)扩增编码 Vh和Vl区的DNA序列。通过PCR将编码Vh和\区的DNA与scFv接头重组在一起，克隆 到噬菌粒载体中。将该载体电穿孔到大肠杆菌中，用辅助噬菌体感染该大肠杆菌。用于这 些方法的噬菌体一般是丝状噬菌体，包括fd和M13，通常将Vh和\结构域重组融合于噬菌 体基因III或基因VIII。可以利用抗原，如标记抗原或者结合或捕获在固体表面或珠上的 抗原来选择或鉴定表达能够结合特定抗原的抗原结合域的噬菌体。可用于制备本发明抗 体的噬菌体展示法的例子包括 Brinkman 等，1995，J. Immunol. Methods 182 41-50 ；Ames 等，1995，J. Immunol. Methods 184 177-186 ；Kettleborough 等，1994，Eur. J. Immunol. 24 952-958 ；Persic φ,1997, Genel87 9-18 ；Burton φ,1994, Advances in Immunology 57 :191-280 ；国际申请号 PCT/GB91/01134 ；国际公开号 W090/02809、W091/10737、 W092/01047、W092/18619、W093/11236、W095/15982、W095/20401 和 W097/13844 ；以及美国 专利号 5，698，426,5, 223，409,5, 403，484,5, 580，717,5, 427，908,5, 750，753,5, 821，047、 5，571，698,5, 427，908,5, 516，637,5, 780，225,5, 658，727,5, 733，743 和 5，969，108 所述的 方法，上述文献全文通过引用纳入本文。如上述参考文献所述，噬菌体选择后，可分离噬菌体的抗体编码区，用于产生完整 抗体，包括人抗体或任何其它所需的抗原结合片段，在任何所需宿主，包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、酵母和细菌中表达，如下所述。也可采用通过本领域已知方法，例如PCT
发明者A·科伊尔, B·加莱, G·卡勒索, M·鲍恩, Y·姚 申请人:米迪缪尼有限公司