专利名称：Xyloketal B在制备治疗自由基损伤疾病的药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及xyloketal B在医疗领域中的应用，具体涉及xyloketal B在制备治疗自由基损 伤疾病的药物中的应用。
背景技术：
xyloketal B是从南海红树林真菌X;;/an'G取2508中分离到的代谢产物。Xy/a〃'a平2508 的代谢产物包括xyloketal A、 B、 C禾PD，其中，xyloketal B的化学结构如下
由于已发现该化合物可以明显的非竞争性抑制乙酰胆碱酯酶活性，而乙酰胆碱酯酶抑制剂在 早老性痴呆，即阿尔茨海默病(Alzheimer'disease, AD)的治疗中具有重要意义，故该化合物 常被用作AD治疗药物以及学习记忆功能改善药物的活性成分。
缺血性脑卒中，造成脑损伤的主要原因是再灌注中产生了负面的级联瀑布效应，其中尤 以自由基的产生最为重要。因此，寻找一种可以直接清除自由基活性的药物对治疗缺血性脑 卒中和自由基损伤疾病的预防和治疗尤为重要。
发明内容
本发明的目的在于提供xyloketal B在制备治疗自由基损伤疾病的药物中的应用。 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案
发明人经过长期的研究发现，xyloketal B的化学基团具有直接清除自由基的活性，并通 过进一步的研究发现其可以用于制备治疗自由基损伤疾病的药物。
3由于神经元缺血缺氧再灌注损伤过程中，造成损伤的主要原因就是再灌注中产生了自由 基，因此，本发明还将xyloketalB应用于制备治疗神经元缺血缺氧再灌注损伤的药品中。 其中，可以将xyloketalB制备成药物领域可以接受的各种剂型，如片剂、胶囊等等。 与现有的xyloketal B的应用相比，本发明具有如下有益效果(1) 本发明的化合物xyloketal B在治疗自由基损伤疾病中疗效显著，尤其适合于治疗神 经元缺血缺氧再灌注损伤。(2) 本发明的化合物xyloketal B安全无毒，药理作用强，预示着很好的药用前景。
具体实施方式
下面将描述本发明的几个实施例，但本发明内容并不局限于此。 实施例1xyloketal B对PC12氧气葡萄糖剥夺-再灌注损伤的影响(一)材料与方法1. 药物xyloketal B，白色粉末。溶于DMSO，贮存浓度80mmol/L，保存于4"C备用。2. 细胞培养及模型制备采用PC12(大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞)作为体外研究神经元的细胞体系，851/。 1640 (GIBCO， 8108029)+10%马血清(GIBCO， 720129)+5%胎牛血清(MOREGATE， 27825123) 于37"C 5%(302培养箱孵育，待细胞生长至70%-80%可于实验。使用离体氧气葡萄糖剥夺-再灌注模型模拟在体缺血缺氧-再灌注模型把生长状态良好 的PC12接种于96孔板，待其生长至70%-80%时将其正常培养基换成缺氧液(2mM CaCl2 0.221g， 3mMKCl 0.224g， 156mMNaCl 9.116g， 1.25mMKH2P04 0.17g， 10mMHEPES 2.383g， 2mMMgSO4 0.492g加入去离子水达到1L容量，过滤后使用)，再将其置于一个2L容器中， 向内通入95%N2+5% C02混合气体30分钟，随后将容器密闭并放入37°C ， 5%C02培养箱中 4-6小时，以使细胞损伤达40%左右为准。缺氧后把装有细胞的96孔板从密闭容器中取出并 换入各自的正常培养基，恢复氧气和葡萄糖供应24小时后进行实验指标的检测。3、 细胞活性检测——MTT法将PC12和SVAREC分别接种于96孔板，每组使用6个复孔，待处理完成后各孔加入 180pL 1640+20pL MTT (噻唑蓝)，在37。C温箱中避光孵育4小时后吸出MTT，加入lOO)iL DMSO溶解结晶，摇床混匀15分钟，于荧光/化学发光分析仪(BIO-TEK)以540nm波长检 测各组分光度，将各组分光度与空白对照组相比较，从而计算各组细胞的存活比例。4、 统计分析本实验为多组定量数据间两两比较，且符合正态性及方差齐性的要求，因此选 用方差分析(One-way ANOVA)作为统计分析的方法。使用SPSS软件执行统计分析操作。剥夺-再灌注损伤的保护作用如表1 。 表1不同剂量Xyloketal B处理对PC12氧气葡萄糖剥夺-再灌注损伤程度的影响序号 组别 样品数(？L)分光光度值 比例(％)1空白对照组61.4212 ± 0.1254100.002缺氧组60.8728 ± 0.0934 *61.413xyloketal B 12.5 +缺氧组60.8213 ± 0.133757.794xyloketal B 25 +缺氧组60.9445 ± 0.060666.46xyloketal B 50 +缺氧组60.9948 ± 0.0615**70.006xyloketal B 100 +缺氧组61.1213 ± 0.0431 **78.907xyloketal B 200 +缺氧组61.2738 ± 0.0969 **89.63*经单因素方差分析得到缺氧组与空白对照组的细胞活性具有统计学差异(P < 0.05);**经单因素方差分析得到xyloketal B 50)iM/100nM/20(VM处理组与缺氧组的细胞活性具有 统计学差异(P < 0.05)上述实验结果说明PC12细胞氧气葡萄糖剥夺-再灌注模型构建成功，损伤比例约为40%; 同时，xyloketal B具有减轻PC12缺氧再灌注损伤的作用，且呈现剂量依赖(25-200 pM)效应。 实施例2 xyloketal B抗氧化活性的研究(一)材料与方法1. 药物Xyloketal B，白色粉末。溶于DMSO，贮存浓度80mmol/L，保存于4。C备用。2. 细胞培养及模型制备采用PC12 (大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞)作为体外研究神经元的细胞体系，培养方 法同前。使用过氧化氢(H202)损伤模型把生长状态良好的PC12接种于96孔板，待其生长 至70。/。-80。/。时将其正常培养基换成100pM的H2O2培养基(100 1640中加入1 pL 10mM的H202溶液)l小时，随后可进行实验指标的检测。3. 细胞活性检测——MTT法同前所述。4. 丁苯酞还原活性检测——DPPH法使用DPPH (1,1-二苯基-2-苦基偕腙肼)作为检测丁苯酞是否具有直接清除自由基作用的 试剂。将80pM的DPPH溶于0.2ml乙醇配成DPPH溶液，将0.2ml的DPPH溶液加入0.6ml 样品中(Asample)，并以0.2ml的DPPH溶液加入0.6ml乙醇中作为对照(Ac。ntroI)，避光于室 温孵育30分钟,在荧光/化学发光分析仪(BIO-TEK)以517nm波长检测各组分光度，以(l-Awn^e/Ac。^。OX100作为公式计算出脱色度(％)，与溶剂对照组进行比较，从而反映该药 物清除自由基的能力。5.统计分析本实验为多组定量数据间两两比较，且符合正态性及方差齐性的要求，因此选 用方差分析(One-wayANOVA)作为统计分析的方法。使用SPSS软件执行统计分析操作。 (二)实验结果1. Xyloketal B 100 处理对PC12过氧化损伤的保护作用如表2。表2 Xyloketal B100 处理对PC12过氧化损伤程度的影响 序号 组别 样品数(？L) 分光光度值 比例(％)1 空白对照组 6 0.03885±0.0198 100.002 xyloketal B组 6 0.3640±0.0272 93.693 过氧化氢组 6 0.1490±0.0168* 38.354 xyloketal B +过氧化氧组 6 0.2420 ± 0.0064* * 62.29*经单因素方差分析得到过氧化氢组与空白对照组的细胞活性具有统计学差异(P < 0.05);**经单因素方差分析得到xyloketal B 100 pM处理组与过氧化氢组的细胞活性具有统计学差 异CP < 0.05)上述实验结果说明PC12过氧化损伤模型构建成功，xyloketal B 100 nM具有显著减轻PC12过氧 化损伤的作用。2. Xyloketal B直接清除自由基的活性研究如表3。表3不同剂量Xyloketal B清除自由基活性的能力序号组别样品数(孔)分光光度值脱色度(％)1空白对照组60.1463 ± 0.00200.002溶剂对照组60.1505 ± 0.00100.003xyloketal B 12.560.1432 ± 0.0015*2.124xyloketal B 25岸60.1307 ± 0.0022 *10.66xyloketal B 50 |xM60.1190 ± 0.0009 *18.666xyloketal B 100岸60.1027 ± 0.0008 *29.807xyloketal B 200 一60.0835 ± 0.0005 *42.938xyloketal B 400 ,60.0670 ± 0.0006 *54.209xyloketal B 800 |iM60.0565 ± 0.0005 *61.38*经单因素方差分析得到各个剂量的xyloketal B与溶剂对照组的分光光度值均具有统计学差6异(P < 0.05)上述实验结果说明xyloketal B具有直接清除自由基的活性，且呈现剂量依赖(12.5-800 )iM)效应。
权利要求
1.xyloketal B在制备治疗自由基损伤疾病的药物中的应用。
2. 如权利要求1所述的应用，其特征在于所述自由基损伤疾病为神经元缺血缺氧再灌注损伤。
全文摘要
本发明公开了xyloketal B在制备自由基损伤疾病的药物中的应用。该化合物可以直接清除自由基的活性，可显著减轻自由基过氧化损伤，对神经元的缺血缺氧损伤具有明显的保护作用。本发明xyloketal B在制备自由基损伤疾病的药物中的应用发掘了xyloketal B新的医疗用途，开拓了一个新的应用领域，且xyloketal B安全无毒，药理作用强，有很好的药用前景。
文档编号A61K31/352GK101647795SQ20091004220
公开日2010年2月17日 申请日期2009年8月27日 优先权日2009年8月27日
发明者捷 刘, 庞冀燕, 玲 李, 李振兴, 林永成, 王冠蕾, 中 裴, 许忠良, 嘉 赵, 艳 钱, 陈文亮, 黄如训 申请人:中山大学