专利名称：从植物中提取α-葡萄糖苷酶活性抑制剂的方法
技术领域：
本发明涉及一种a -葡萄糖苷酶活性抑制剂的提取方法，尤其是一种以植物(多 枝柽柳茎叶或花花柴茎叶或琵琶柴茎叶)为原料，产品无毒副作用、安全性高、成本廉价、 可产业化生产的从植物中提取a-葡萄糖苷酶活性抑制剂的方法。
背景技术：
糖尿病(Diabetes mellitus，DM)是一种多病因的代谢性疾病群，主要与胰岛素产 生和作用异常有关，可引起糖、脂肪、蛋白质代谢紊乱，以血糖增高和尿糖为特征，进而导致 多个系统、多个脏器损害的综合征，是人类患心脑血管疾病、致盲、截肢和肾衰的主要原因。 目前已研制出多种新型降血糖化学药物应用于临床，如改善葡萄糖耐受性及胰岛素应答水 平的胰岛素分泌促进剂(二肽基肽酶DPP-IV抑制剂)、改善葡萄糖代谢剂(双胍类药物)、 可有效改善机体聚醇代谢，预防和延缓病症发生的醛糖还原酶抑制剂(吡咯啶环类物质) 以及胰岛素增敏剂。其中胰岛素增敏剂已成为目前口服降糖药物的研发热点，可增加人体 组织对胰岛素的敏感性，特别是a -葡萄糖苷酶抑制剂，如阿卡波糖，其作用机制为竞争性 地抑制a -葡萄糖苷酶，在碳水化合物消化的最后一步抑制双糖降解为单糖，延缓碳水化 合物在肠道的消化，延迟来自双糖、低聚糖及多糖的葡萄糖吸收，有效推迟并减轻糖尿病人 餐后血糖升高的时间及进程，是糖尿病人常用的控制血糖的药物。 虽然现有抗糖尿病种类较多，但均为化学药物，存在着作用途径单一，甚至具有严
重的不良反应，如导致低血糖、乳酸酸中毒等，长期服用伴有药效降低的可能。 柽柳又名西河柳，为柽柳科植物柽柳Tamarix chinensis Lou rl的干燥细嫩枝
叶。具有疏风解表、透疹解毒之功效，主治风热感冒、麻疹初起、皮肤瘙痒、风湿痹痛等病症；
民间用来治疗癌症；临床上用于治疗慢性气管炎和类风湿性关节炎等。 花花柴Karelinia caspia(Pall. )Less. 系菊禾斗(Compositae)花花柴属
(KareliniaLess.)多年生草本植物，又称胖姑娘、胖娃娃草。是生长于盐生荒漠和盐生沼泽
中的一种盐生植物，已被公认为最有效的泌盐植物之一。有关其药用价值的文献未见报道，
仅有用其作为饲料。 琵琶柴Reaumuria soongonica(PalL)Maxim.，又称枇杷柴、红沙、红虱、海葫戸根， 系柽柳科琵琶柴属小灌木植物，主要分布于陕西、甘肃、青海、新疆、内蒙古和东北地区，具 有治疗湿疹、皮炎等功效。 迄今为止还没有关于从上述三种植物中提取a -葡萄糖苷酶活性抑制剂相关报 道。
发明内容
本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种以植物为原料，产 品无毒副作用、安全性高、成本廉价、可产业化生产的从植物中提取a _葡萄糖苷酶活性抑 制剂的方法。
本发明的技术解决方案是一种从植物中提取a-葡萄糖苷酶活性抑制剂的方 法，其特征在于按如下步骤进行 a.取干燥多枝柽柳茎叶或干燥花花柴茎叶或干燥琵琶柴茎叶，剪碎研磨后放入
提取器中，加入体积与多枝柽柳茎叶或花花柴茎叶或琵琶柴茎叶质量比为8 30ml/g的
醇_水或丙酮_水溶液浸泡，加热回流提取，提取温度为达至沸腾温度，提取次数为1 3
次，每次提取时间为1. 0 3. Oh，弃去提取液并将剩下茎叶晾干为提取物； b.向提取物中加入体积与提取物质量比为5 30ml/g的水进行二次提取，提取温
度为达致沸腾温度，提取次数为1 3次，每次提取时间为1. 0 3. Oh ; c.收集合并冷却后的提取液，减压浓縮，冷冻干燥得植物提取物。 所述a步骤的醇-水溶液或丙酮-水溶液的浓度为70% 100%，所述醇为甲醇、
乙醇或丙醇。 本发明是以来源广泛、价格低廉的植物为原料，利用溶剂提取法对植物全草进行 提取，所得到的提取物经过a-葡萄糖苷酶活性抑制实验证明，具有显著的抑制a-葡萄糖
苷酶活性的作用且无毒副作用、安全性高、成本廉价，可广泛应用于制备降低糖尿病的药品 及保健品中。本发明操作简单，所用溶剂均为普通化学试剂，易重复，适于大规模生产。
图1是本发明实施例9提取物浓度与a -葡萄糖苷酶的抑制活性对应曲线图。
具体实施例方式 实施例1 : a.准确称取干燥多枝柽柳茎叶10g，剪碎研磨后浸入100ml无水乙醇溶液中过夜，
采用索氏提取器加热回流提取，提取温度为达至沸腾温度，提取次数为2次，每次提取时间
为2h，弃去提取液以除去色素等小极性物质，将剩下茎叶晾干为提取物； b.向提取物中加入200ml纯水水煮提取，提取2次，每次2h; c.收集合并冷却后的水煮提取液，在6(TC下减压浓縮，冷冻干燥得多枝柽柳茎叶
提取物。 取实施例1多枝柽柳茎叶提取物，加蒸馏水定容，配制浓度为1. 5625mg/mL的多 枝柽柳提取物溶液，按现有技术方法进行a -葡萄糖苷酶抑制活性实验，测得抑制率为 62. 3%，高于阳性对照物 一 阿卡波糖(在相等浓度下抑制率为32. 8% )。
实施例2: a.准确称取干燥的多枝柽柳茎叶5g，剪碎研磨后放入提取器中，加入50ml丙酮溶 液中浸泡，采用索氏提取器提取3次，每次1小时，提取温度为达至沸腾温度，弃去提取液以 除去色素等小极性物质，将剩下茎叶晾干为提取物；
b.向提取物中加入50ml纯水水煮提取，提取3次，每次lh ; c.收集合并冷却后的水煮提取液，在6(TC下减压浓縮，冷冻干燥得多枝柽柳茎叶 提取物。 取实施例2多枝柽柳茎叶提取物，加蒸馏水定容，配制浓度为0. 5mg/mL的多枝柽 柳提取物溶液，按照现有技术方法进行a -葡萄糖苷酶抑制活性实验，测得抑制率为40%，与浓度为3. 125mg/mL的阳性对照物 一 阿卡波糖抑制率相当。
实施例3 : a.准确称取干燥的多枝柽柳茎叶lOg，剪碎研磨后放入提取器中，加入100ml70% 乙醇溶液中浸泡，采用索氏提取器提取1次，每次1小时，提取温度为达至沸腾温度，弃去提 取液以除去色素等小极性物质，将剩下茎叶晾干为提取物；
b.向提取物中加入100ml纯水水煮提取，提取1次，每次3h ; c.收集冷却后的水煮提取液，在6(TC下减压浓縮，冷冻干燥得多枝柽柳茎叶提取 物。 取实施例3的多枝柽柳茎叶提取物，加蒸馏水定容，依次稀释配制浓度分别为2、 1、0. 5、0. 25mg/mL的多枝柽柳提取物溶液，按照现有技术方法进行a -葡萄糖苷酶抑制活 性实验，测得四个浓度下的提取物对a -葡萄糖苷酶均有抑制活性，其活性存在剂量依赖 关系，IC5。值为1. 21mg/mL(阳性对照药阿卡波糖的IC5。值为6. 25mg/mL)。
实施例4: a.准确称取干燥花花柴茎叶10g，剪碎研磨后浸入100ml无水乙醇溶液中过夜，采
用索氏提取器加热回流提取，提取温度为达至沸腾温度，提取次数为2次，每次提取时间为
2h，弃去提取液以除去色素等小极性物质，将剩下茎叶晾干为提取物； b.向提取物中加入200ml纯水水煮提取，提取2次，每次2h ; c.收集合并冷却后的水煮提取液，在6(TC下减压浓縮，冷冻干燥得花花柴茎叶提取物。 取实施例4花花柴茎叶提取物，加蒸馏水定容，配制浓度为1. 5625mg/mL的花花柴 提取物溶液，按现有技术方法进行a -葡萄糖苷酶抑制活性实验，测得抑制率为48. 1 % ，高 于阳性对照物 一 阿卡波糖(在相等浓度下抑制率为32. 8% )。
实施例5 : a.准确称取干燥的花花柴茎叶5g，剪碎研磨后放入提取器中，加入50ml丙酮溶液 中浸泡，采用索氏提取器提取3次，每次1小时，提取温度为达至沸腾温度，弃去提取液以除 去色素等小极性物质，将剩下茎叶晾干为提取物；
b.向提取物中加入50ml纯水水煮提取，提取3次，每次lh ; c.收集合并冷却后的水煮提取液，在6(TC下减压浓縮，冷冻干燥得花花柴茎叶提 取物。 取实施例5的花花柴茎叶提取物，加蒸馏水定容，配制浓度为0. 5mg/mL的花花柴 提取物溶液，进行a-葡萄糖苷酶抑制活性实验，测得抑制率为32%，与浓度为1.56mg/mL 的阳性对照物 一 阿卡波糖抑制率相当。
实施例6: a.准确称取干燥的花花柴茎叶lOg，剪碎研磨后放入提取器中，加入100ml70X乙 醇-水溶液中浸泡，采用索氏提取器提取1次，每次1小时，提取温度为达至沸腾温度，弃去 提取液以除去色素等小极性物质，将剩下茎叶晾干为提取物；
b.向提取物中加入100ml纯水水煮提取，提取1次，每次3h ; c.收集冷却后的水煮提取液，在6(TC下减压浓縮，冷冻干燥得花花柴茎叶提取 物。
5
取实施例6花花柴茎叶提取物，加蒸馏水定容，依次稀释配制浓度分别为2、1、
0. 5、0. 25mg/mL的花花柴提取物溶液，按现有技术方法进行a -葡萄糖苷酶抑制活性实验， 测得四个浓度下的提取物对a-葡萄糖苷酶均有抑制活性，其活性存在剂量依赖关系，IC5。 值为1. 52mg/mL(阳性对照药阿卡波糖的IC5。值为6. 25mg/mL)。 实施例7 : a.准确称取干燥琵琶柴茎叶lOg，剪碎研磨后浸入100ml 70%的乙醇-水溶液中
过夜，采用索氏提取器加热回流提取，提取温度为达至沸腾温度，提取次数为2次，每次提
取时间为2h，弃去提取液以除去色素等小极性物质，将剩下茎叶晾干为提取物； b.向提取物中加入100ml纯水水煮提取，提取2次，每次2h ; c.收集合并冷却后的水煮提取液，在6(TC下减压浓縮，冷冻干燥得琵琶柴茎叶提取物。 取实施例7琵琶柴茎叶提取物，加蒸馏水定容，配制浓度为6. 25mg/mL的琵琶柴提 取物溶液，按照现有技术方法进行a -葡萄糖苷酶抑制活性实验，测得抑制率为62. 4%，高 于阳性对照物 一 阿卡波糖(在相等浓度下抑制率为51. 2% )。
实施例8: a.准确称取干燥的琵琶柴茎叶5g，剪碎研磨后放入提取器中，加入50ml丙酮溶液 中浸泡，采用索氏提取器提取3次，每次1小时，提取温度为达至沸腾温度，弃去提取液以除 去色素等小极性物质，将剩下茎叶晾干为提取物；
b.向提取物中加入50ml纯水水煮提取，提取3次，每次lh ; c.收集合并冷却后的水煮提取液，在6(TC下减压浓縮，冷冻干燥得琵琶柴茎叶提 取物。 取实施例8的琵琶柴茎叶提取物，加蒸馏水定容，配制浓度为0. 875mg/mL的琵琶 柴提取物溶液，按照现有技术进行a -葡萄糖苷酶抑制活性实验，测得抑制率为35 % ，略高 于浓度为1. 56mg/mL的阳性对照物 一 阿卡波糖的抑制率(其抑制率为32. 8% )。
实施例9 : a.准确称取干燥的琵琶柴茎叶lOg，剪碎研磨后放入提取器中，加入100ml无水乙
醇溶液中浸泡，采用索氏提取器提取1次，每次1小时，提取温度为达至沸腾温度，弃去提取
液以除去色素等小极性物质，将剩下茎叶晾干为提取物； b.向提取物中加入200ml纯水水煮提取，提取1次，每次3h ; c.收集冷却后的水煮提取液，在6(TC下减压浓縮，冷冻干燥得琵琶柴茎叶提取物。 取实施例9琵琶柴茎叶提取物，加蒸馏水定容，依次稀释配制浓度分别为7、3. 5、
1. 75、0. 875mg/mL的琵琶柴提取物溶液，按照现有技术方法进行a -葡萄糖苷酶抑制活性 实验(见图1)，测得四个浓度下的提取物对a -葡萄糖苷酶均有抑制活性，其活性存在剂量 依赖关系，IC5。值为2. 53mg/mL(阳性对照药阿卡波糖的IC5。值为6. 25mg/mL)。 本发明实施例1 9制备获得的提取物可以作为治疗和预防糖尿病及其并发症药 物的各种制剂、抑制糖尿病及其并发症的保健食品以及作为降低血糖的食品添加剂等。
治疗和预防糖尿病及其并发症的药物或保健食品，可以与辅料混合形成各种形式 的丸齐U、散剂、片齐U、膏剂，粉剂，针齐U、水剂，颗粒齐U、胶囊、注射剂等；保健食品形态可以是液体的比如像清凉饮料，碳酸饮料，调味品；作为添加剂，比如加入到面食类，果冻，冰淇淋，腌制品，火腿，点心中。
权利要求
一种从植物中提取α-葡萄糖苷酶活性抑制剂的方法，其特征在于按如下步骤进行a.取干燥多枝柽柳茎叶或干燥花花柴茎叶或干燥琵琶柴茎叶，剪碎研磨后放入提取器中，加入体积与多枝柽柳茎叶或花花柴茎叶或琵琶柴茎叶质量比为8～30ml/g的醇-水或丙酮-水溶液浸泡，加热回流提取，提取温度为达至沸腾温度，提取次数为1～3次，每次提取时间为1.0～3.0h，弃去提取液，并将剩下茎叶晾干为提取物；b.向提取物中加入体积与提取物质量比为5～30ml/g的水进行二次提取，提取温度为达致沸腾温度，提取次数为1～3次，每次提取时间为1.0～3.0h；b.收集合并冷却后的提取液，减压浓缩，冷冻干燥得植物提取物。
2. 根据权利要求1所述的从植物中提取a-葡萄糖苷酶活性抑制剂的方法，其特征在 于所述a步骤的醇_水溶液或丙酮_水溶液的浓度为70 % 100 % ，所述醇为甲醇、乙醇 或丙醇。
全文摘要
本发明公开一种以植物全草为原料，产品无毒副作用、安全性高、成本廉价、可产业化生产的从植物中提取α-葡萄糖苷酶活性抑制剂的方法，是取干燥多枝柽柳茎叶或干燥花花柴茎叶或干燥琵琶柴茎叶，剪碎研磨后放入提取器中，加入体积与干燥多枝柽柳茎叶或干燥花花柴茎叶或干燥琵琶柴茎叶质量比为8～30ml/g的醇-水或丙酮-水溶液浸泡，加热回流提取，提取温度为达至沸腾温度，提取次数为1～3次，每次提取时间为1.0～3.0h；向提取物中加入体积与提取物质量比为5～30ml/g的水进行二次提取，提取温度为达致沸腾温度，提取次数为1～3次，每次提取时间为1.0～3.0h；收集合并冷却后的提取液，在60℃下减压浓缩，冷冻干燥得植物提取物。
文档编号A61K36/28GK101757059SQ20091024903
公开日2010年6月30日 申请日期2009年12月30日 优先权日2009年12月30日
发明者刘宇, 吴迪, 李倩, 谭成玉, 赵莹 申请人:大连水产学院