专利名称：一种米托蒽醌纳米靶向缓释长循环脂质体及制备方法
技术领域：
本发明涉及一种米托蒽醌纳米靶向缓释长循环脂质体及制备方法，属于药物技术
领域。
背景技术：
米托蒽醌(mitoxantrone)于1978年由Zee-Cheng和1979年由Murdock首次合 成，是第二代蒽环类抗肿瘤药物，临床上多用于治疗白血病、乳腺癌、恶性淋巴瘤等。其作用 机制是插入细胞DNA中，抑制癌细胞核酸合成而发挥抗癌作用，但其有较严重的骨髓抑制 作用，且游离药物进入血后大部分(95%以上)与血浆蛋白结合。但是其大量应用时常引起 严重的骨髓抑制和心肝肺的系统毒性，因而极大的限制了其临床应用。
脂质体是目前降低药物毒性常见的制剂手段之一，但是以传统的卵磷脂、胆固醇 制备的常规脂质体在体内多被网状内皮系统(reticuloendothelial system,RES)吞噬，在 血液循环中驻留时间较短。并且其物理化学稳定性差，储存和应用过程中容易发生融合聚 集，包封药物容易泄漏；官能团少，不易进行表面修饰，无靶向性、功能单一 ；基因转染效率 仍显著低于病毒载体等。近年来，开发新型脂质体的研究受到广泛关注。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有靶向性能，具有良好的缓控释功能，包封率高，稳 定性好，粒径小，毒副作用小，缓释时间可调的一种米托蒽醌纳米靶向缓释长循环脂质体及 制备方法。 具体技术方案如下 —种米托蒽醌纳米靶向缓释长循环脂质体，其粒径在90 120nm之间，如图2的 粒径分析测试结果所示。其粒径均匀，分散性好，很少发生熔合，团聚现象，如图l透射图片 所示。表面富含有叶酸。 本发明的一种米托蒽醌纳米靶向缓释长循环脂质体的制备方法，其原料质量份数 比配比为 聚乙二醇修饰的o-羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐(PEG-0QCMC):叶酸修饰 的o-羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐(FA-0QCMC) : o-羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐
(oqcmc):米托蒽醌=1 : i 2 : 2 4 : o. 5 i ;o-羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐
胆固醇的质量比为4 2 : i; 采用反相乳液法聚合时制备步骤如下 a.将聚乙二醇修饰的0-羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐、叶酸修饰的0-羧甲基壳 聚糖十八烷基季铵盐、米托蒽醌溶于蒸馏水中，形成水相，待用； b.将O-羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐，胆固醇，溶于二氯甲烷中，形成油相；
c.将油相在110 200w功率范围下进行超声，加入水相，超声形成水油均匀的分 散体系；
d.将上述乳液在32 4(TC下于旋转蒸发仪上以45 55r/min的旋转速度进行 旋蒸，同时向旋转蒸发仪中通入氮气流加以保护，当有机溶剂完全挥发后，继续旋蒸30 50min，即得到产品。
采用薄膜分散法时制备步骤如下 a.将聚乙二醇修饰的0-羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐、叶酸修饰的O-羧甲基壳 聚糖十八烷基季铵盐、0-羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐，胆固醇，溶于二氯甲烷中；
b.将上面所述的混合物置于反应器中，在32 4(TC下于旋转蒸发仪上以45 55r/min的旋转速度进行旋蒸，同时向旋转蒸发仪中通入氮气流加以保护；当反应器中的 有机溶剂完全挥发后，继续旋蒸30 50min。 c.将米托蒽醌溶于蒸馏水中，之后将反应器取下，向反应器中加入米托蒽醌水溶 液，将脂质膜水化，然后用超声波清洗器以70 99w的功率进行超声分散，直至形成半透明 乳液，即得到高分子脂质体溶液。
本发明的有益效果 整个制备过程简单快捷，制备周期短，产率高。所制备的米托蒽醌纳米靶向缓释 长循环脂质体的性能包括粒径大小在90 120nm之间，粒径均匀，且可以根据制剂的组 成成分，实验条件等进行调节进行调节；稳定好，可在水溶液中保存至少2个月；包封率高， 载药能力强，制备的高分子脂质体对药物的包封率大于90%，载药率载高达9. 0% ;缓释性 能明显，缓释时间可调，制备的米托蒽醌制剂相对于传统制剂而言具有明显的缓释效果，并 且缓释时间可以根据制剂的组成成分，实验条件等进行调节。具有穿过靶组织内皮细胞的 能力，可以被肿瘤细胞摄取进入细胞内，将所包含的米托蒽醌在细胞内释放，大大提高药物 的利用效率。在多种肿瘤细胞(如卵巢癌、乳腺癌、肺癌，结直肠癌等)膜表面的叶酸受体 活性和数量明显高于一般正常细胞，而制备的米托蒽醌纳米靶向缓释长循环脂质体表面富 含有叶酸，利用叶酸与其受体的特异性结合的特点，可增加药物在病灶局部的浓度，提高疗 效，降低毒副作用，达到靶向治疗的目的。通过表面PEG的修饰，可使高分子脂质体不易被 人体网状内皮系统捕捉，延长在体内的循环时间，同时增加高分子脂质体的生物利用度和 生物相容性。 总之，与现有的米托蒽醌制剂相比，本发明涉及的米托蒽醌纳米靶向缓释长循环 脂质体具有粒径均匀可控，制剂稳定性好，制备工艺简单，载药率高，具有缓释功能等特点， 适合大批量生产。 本发明所提供的脂质体(反向乳液聚合方法)主要质量指标见下表
具体指标高分子脂质体传统脂质体
粒径90nm 120nm500nm
包封率> 90%< 90%
载药率可达9. 0%< 8%
缓释时间可达15d< 15d
图1 :米托蒽醌纳米靶向缓释脂质体透射照片；
图2 :米托蒽醌纳米靶向缓释脂质体粒度分析图。
具体实施例方式以下通过实施例对本发明作进一步的阐述。 所述的0-羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐(0QCMC)按照常津等提供的方法(申请 (专利)号200710056993. 4)进行制备。将十八烷基二甲基叔胺12g置四口瓶中，加入60ml 溶剂，剧烈搅拌，升温至55摄氏度，缓慢滴加环氧氯丙烷5. 5g，保温回流数小时，减压蒸馏 除去未反应的环氧氯丙烷及溶剂，得浅黄色膏状物二甲基环氧丙基十八烷基氯化铵。取水 溶性羧甲基壳聚糖(粘均分子量10万，脱乙酰度80%)3.08溶于浓度为42% (w/v)的氢 氧化钠溶液100mL中，搅拌均匀后，加入异丙醇50mL，缓慢分批加入二甲基环氧丙基十八烷 基氯化铵O. lmol，控制温度在80摄氏度-85摄氏度，搅拌48h。盐酸调pH = 7，无水丙酮洗 涤，真空烘干得双亲性羧甲基壳聚糖十八烷基氯化铵。 所述的PEG-OQCMC，其制备过程中，各组分的含量为聚乙二醇PEG (2000Da) 5. Og 10. Og ;马来酸酐4. 3 8. 6g ;N-羟基琥珀酰亚胺酯(NHS)O. 75 1. Og ;羧基化的PEG 2. 8 5. Og ;二环己基碳二亚胺(DCC)O. 3 0. 5g ;NHS-PEG质量4 8g ;二甲基亚砜 (匿SO) 100 150mL ;OQCMC质量3 5g。 PEG-OQCMC制备过程如下: a. PEG的羧基化将PEG(2000Da)溶于40 80mL无水甲苯；将马来酸酐在通氮气 保护的条件下，加入到四口瓶中，加热到7(TC反应48 53h，过程持续搅拌。反应后减压蒸 馏除去有机溶剂得到初步产品；加入乙醚萃取，减压蒸馏，得到产物羧基化的PEG。
b. PEG的活化将羧基化的PEG与N_羟基琥珀酰亚胺酯(NHS) —起溶于40 60mL 氯仿中，在冰浴，磁搅拌及氮气保护的条件下加入DCC，反应1 1. 5h，再撤去冰浴，常温下 反应24 30h ;反应结束后，过滤。 c. PEG的提纯将上述过滤后的滤液加入到50 70mL丙酮中，4t:条件下放置2h， 析出固体，过滤；重复两次，除尽残留的NHS，放入真空烘箱过夜。得到提纯后的活化羧基化 PEG (NHS-PEG)。 d. PEG-OQCMC的制备将上述NHS-PEG溶于100 150mLDMS0 ;将实验室制备 的OQCMC溶于100 150mL水中；两者混合，室温下搅拌反应24 30h ;反应结束后，用 12000-14000的透析袋透析一周，最后过滤，冻干，得到产品。 所述的FA-OQCMC，其制备过程中，各组分的含量为叶酸3 10g ;;三乙胺1. 8 5ml ;NHSl. 56 3g ;NHS-FA 2. 0 5. Og ;0QCMC15 30mg。其制备过程如下将叶酸溶于 60 100ml匿S0溶液中，向其加入三乙胺，将NHS用一定量的匿SO溶解后加入到上述反应 体系中避光反应12 20h以上。将产物过滤，得到黄色固体NHS-FA活性脂。取NHS-FA活 性脂溶于50 80mlDMS0中，加入OQCMC。用Na2HP04与NaOH缓冲溶液调节反应体系的pH =10，反应1 1. 5h。将最后产物透析24h，冻干即得FA-OQCMC。
实施例1 PEG改性OQCMC的实验过程
a. PEG的羧基化将PEG (2000Da) 5. Og溶于40mL无水甲苯；再称马来酸酐4. 3g，在 通氮气保护的条件下，加入到四口瓶中，加热到7(TC反应48，过程持续搅拌。反应后减压蒸 馏除去有机溶剂得到初步产品；加入乙醚萃取，减压蒸馏，得到产物羧基化的PEG。
b. PEG的活化称取NHS 0. 75g， DCC质量0. 3g备用；称取羧基化的PEG2. 8g与NHS 一起溶于40mL氯仿中，在冰浴，磁搅拌及氮气保护的条件下加入DCC，反应lh，再撤去冰浴， 常温下反应24h ;反应结束后，过滤。 c. PEG的提纯将上述过滤后的滤液加入到50mL丙酮中，4。C条件下放置2h，析 出固体，过滤；重复两次，除尽残留的NHS，放入真空烘箱过夜。得到提纯后的活化羧基化 PEG (NHS-PEG)。 d. PEG-OQCMC的制备称取上述NHS-PEG质量4g溶于lOOmLDMSO ;称取实验室 制备的0QCMC质量3g溶于100mL水中；两者混合，室温下搅拌反应24h ;反应结束后，用 12000-14000的透析袋透析一周，最后过滤，冻干，得到产品。
FA-OQCMC制备过程如下将3g叶酸溶于60mlDMS0溶液中，向其加入1.8ml三乙胺，将1.56g NHS用一定量 的匿SO溶解后加入到上述反应体系中避光反应12h。将产物过滤，得到黄色固体NHS-FA活 性脂。取2. Og的NHS-FA活性脂溶于50mlDMS0中，加入15mg的OQCMC。用Na2HP04与NaOH 缓冲溶液调节反应体系的PH = 10，反应lh。将最后产物透析24h，冻干即得FA-OQCMC。
实施例2 PEG改性OQCMC的实验过程 a. PEG的羧基化将PEG (2000Da) 7. Og溶于60mL无水甲苯；再称马来酸酐7. 2g，在 通氮气保护的条件下，加入到四口瓶中，加热到7(TC反应50h，过程持续搅拌。反应后减压 蒸馏除去有机溶剂得到初步产品；加入乙醚萃取，减压蒸馏，得到产物羧基化的PEG。
b. PEG的活化称取NHS 0. 8g， DCC质量0. 4g备用；称取羧基化的PEG3. 5g与NHS 一起溶于50mL氯仿中，在冰浴，磁搅拌及氮气保护的条件下加入DCC，反应1. 2h，再撤去冰 浴，常温下反应28h ;反应结束后，过滤。 c. PEG的提纯将上述过滤后的滤液加入到60mL丙酮中，4。C条件下放置2h，析 出固体，过滤；重复两次，除尽残留的NHS，放入真空烘箱过夜。得到提纯后的活化羧基化 PEG (NHS-PEG)。 d. PEG-OQCMC的制备称取上述NHS-PEG质量6g溶于120mLDMS0 ;称取实验室 制备的OQCMC质量4g溶于120mL水中；两者混合，室温下搅拌反应26h ;反应结束后，用 12000-14000的透析袋透析一周，最后过滤，冻干，得到产品。
FA-OQCMC制备过程如下将7g叶酸溶于80mlDMS0溶液中，向其加入3ml三乙胺，将2g NHS用一定量的DMSO 溶解后加入到上述反应体系中避光反应18h。将产物过滤，得到黄色固体NHS-FA活性脂。 取3g的NHS-FA活性脂溶于65mlDMS0中，加入20mg的OQCMC。用Na2HP04与NaOH缓冲溶 液调节反应体系的pH = 10，反应1 1. 5h。将最后产物透析24h，冻干即得FA-OQCMC。
实施例3 PEG改性OQCMC的实验过程a. PEG的羧基化将PEG(2000Da) 10. Og溶于80mL无水甲苯；再称马来酸酐8. 6g，在通氮气保护的条件下，加入到四口瓶中，加热到7(TC反应53h，过程持续搅拌。反应后减 压蒸馏除去有机溶剂得到初步产品；加入乙醚萃取，减压蒸馏，得到产物羧基化的PEG。
b. PEG的活化称取NHS 1. 0g， DCC质量0. 5g备用；称取羧基化的PEG5. Og与NHS 一起溶于60mL氯仿中，在冰浴，磁搅拌及氮气保护的条件下加入DCC，反应1. 5h，再撤去冰 浴，常温下反应30h ;反应结束后，过滤。 c. PEG的提纯将上述过滤后的滤液加入到70mL丙酮中，4。C条件下放置2h，析 出固体，过滤；重复两次，除尽残留的NHS，放入真空烘箱过夜。得到提纯后的活化羧基化 PEG (NHS-PEG)。 d. PEG-OQCMC的制备称取上述NHS-PEG质量8g溶于150mLDMS0 ;称取实验室 制备的0QCMC质量5g溶于150mL水中；两者混合，室温下搅拌反应30h ;反应结束后，用 12000-14000的透析袋透析一周，最后过滤，冻干，得到产品。
FA-OQCMC制备过程如下将10g叶酸溶于100mlDMS0溶液中，向其加入5ml三乙胺，将3g NHS用一定量的 匿SO溶解后加入到上述反应体系中避光反应20h。将产物过滤，得到黄色固体NHS-FA活性 脂。取5. Og的NHS-FA活性月旨溶于80mlDMS0中，加入30mg的OQCMC。用Na2HP04与NaOH 缓冲溶液调节反应体系的PH = 10，反应1. 5h。将最后产物透析24h，冻干即得FA-OQCMC。
实施例4 称取lmgPEG-OQCMC， lmgFA-OQCMC， lmg米托蒽醌，溶于4. 5ml的蒸馏水中，形成水 相；取4mgOQCMC，lmg胆固醇，溶于2ml 二氯甲烷中形成油相，将油相在130W功率下进行 超声，加入水相，超声形成水油均匀的分散体系。将上述乳液在32t:下于旋转蒸发仪上以 45r/min的旋转速度进行旋蒸，同时向旋转蒸发仪中通入适当流速的氮气流加以保护。当茄 形瓶中的有机溶剂完全挥发后，继续旋蒸30min，即得到产品。重复组装2次。制备的米托 蒽醌靶向缓释长循环脂质体粒径为106. 6nm，分散性好，载药率为8. 5%，包封率为90. 7%， 体外缓释时间达到11天。 采用傅里叶变换红外光谱仪(FTIR)对样品进行对比分析，与未叶酸化的脂质体 谱图相比，包覆米托蒽醌的脂质体谱图中出现了一个在1580cm—1附近的新的吸收锋，说明 OQCMC的游离氨基和叶酸的COOH形成了酰胺。
实施例5 称取10mgPEG-0QCMC， 10mgFA-0QCMC， 10mg米托蒽醌，溶于40ml的蒸馏水中，形成 水相；取40mgOQCMC，10mg胆固醇，溶于20ml二氯甲烷中形成油相，将油相在150W功率下进 行超声，加入水相，超声形成水油均匀的分散体系。将上述乳液在35t:下于旋转蒸发仪上以 50r/min的旋转速度进行旋蒸，同时向旋转蒸发仪中通入适当流速的氮气流加以保护。当茄 形瓶中的有机溶剂完全挥发后，继续旋蒸40min，即得到产品。制备的米托蒽醌靶向缓释长 循环脂质体粒径为90nm，分散性好，载药率为9. 0%，包封率为95. 0%，体外缓释时间达到 14天。采用傅里叶变换红外光谱仪(FTIR)对样品进行对比分析，与未叶酸化的脂质体谱图 相比，包覆米托蒽醌的脂质体谱图中出现了一个在1580cm—1附近的新的吸收锋，说明OQCMC 的游离氨基和叶酸的COOH形成了酰胺。
实施例6称取15/3mgPEG-0QCMC， 20/3mgFA-0QCMC， 10/3mg米托蒽醌，溶于50ml的蒸馏水(或已经做好的高分子脂质体)中，形成水相；取40/3mg0QCMC， 10/3mg胆固醇，溶于25ml
二氯甲烷中形成油相，将油相在iiow功率下进行超声，加入水相，超声形成水油均匀的分
散体系。将上述乳液在35t:下于旋转蒸发仪上以50r/min的旋转速度进行旋蒸，同时向 旋转蒸发仪中通入适当流速的氮气流加以保护。当茄形瓶中的有机溶剂完全挥发后，继续 旋蒸40min，即得到产品。重复组装3次。制备的米托蒽醌靶向缓释长循环脂质体粒径为 115. 6nm，分散性好，载药率为9. 0%，包封率为93. 4%，体外缓释时间达到12天。采用傅里 叶变换红外光谱仪(FTIR)对样品进行对比分析，与未叶酸化的脂质体谱图相比，包覆米托 蒽醌的脂质体谱图中出现了一个在1580cm—1附近的新的吸收锋，说明OQCMC的游离氨基和 叶酸的COOH形成了酰胺。
实施例7 称取10/4mgPEG-0QCMC， 20/4mgFA-0QCMC， 10/4mg米托蒽醌，溶于40ml的蒸馏水 (或已经做好的高分子脂质体)中，形成水相；取30/4mgOQCMC， 10/4mg胆固醇，溶于20ml 二 氯甲烷中形成油相，将油相在200W功率下进行超声，加入水相，超声形成水油均匀的分散 体系。将上述乳液在4(TC下于旋转蒸发仪上以50r/min的旋转速度进行旋蒸，同时向旋转 蒸发仪中通入适当流速的氮气流加以保护。当茄形瓶中的有机溶剂完全挥发后，继续旋蒸 30min，即得到产品。重复组装4次制备的米托蒽醌靶向缓释长循环脂质体粒径为107. 3nm， 分散性好，载药率为8. 5%，包封率为94. 5%，体外缓释时间达到13天。采用傅里叶变换 红外光谱仪(FTIR)对样品进行对比分析，与未叶酸化的脂质体谱图相比，包覆米托蒽醌的 脂质体谱图中出现了一个在1580cm—1附近的新的吸收锋，说明OQCMC的游离氨基和叶酸的 COOH形成了酰胺。
实施例8 称取16/2mgPEG-0QCMC， 20/2mgFA-0QCMC， 10/2mg米托蒽醌，溶于45ml的蒸馏水 (或已经做好的高分子脂质体)中，形成水相；取35/2mgOQCMC， 10/2mg胆固醇，溶于20ml 二氯甲烷中形成油相，将油相在130W功率下进行超声，加入水相，超声形成水油均匀的分 散体系。将上述乳液在35t:下于旋转蒸发仪上以50r/min的旋转速度进行旋蒸，同时向 旋转蒸发仪中通入适当流速的氮气流加以保护。当茄形瓶中的有机溶剂完全挥发后，继续 旋蒸40min，即得到产品。重复组装2次。制备的米托蒽醌靶向缓释长循环脂质体粒径为 106. 6nm，分散性好，载药率为8. 8%，包封率为90. 0%，体外缓释时间达到11天。采用傅里 叶变换红外光谱仪(FTIR)对样品进行对比分析，与未叶酸化的脂质体谱图相比，包覆米托 蒽醌的脂质体谱图中出现了一个在1580cm—1附近的新的吸收锋，说明OQCMC的游离氨基和 叶酸的COOH形成了酰胺。
实施例9 称取30/3mgPEG-0QCMC， 30/3mgFA-0QCMC， 30/3mg米托蒽醌，溶于40ml的蒸馏水 (或已经做好的高分子脂质体)中，形成水相；取120/3mgOQCMC，30/3mg胆固醇，溶于20ml 二氯甲烷中形成油相，将油相在180W功率下进行超声，加入水相，超声形成水油均匀的分 散体系。将上述乳液在35t:下于旋转蒸发仪上以55r/min的旋转速度进行旋蒸，同时向 旋转蒸发仪中通入适当流速的氮气流加以保护。当茄形瓶中的有机溶剂完全挥发后，继续 旋蒸50min，即得到产品。重复组装3次。制备的米托蒽醌靶向缓释长循环脂质体粒径为 109. 5nm，分散性好，载药率为9. 0%，包封率为93. 4%，体外缓释时间达到15天。采用傅里叶变换红外光谱仪(FTIR)对样品进行对比分析，与未叶酸化的脂质体谱图相比，包覆米托 蒽醌的脂质体谱图中出现了一个在1580cm—1附近的新的吸收锋，说明OQCMC的游离氨基和 叶酸的COOH形成了酰胺。
实施例10 称取40/4mgPEG-0QCMC， 40/4mgFA-0QCMC， 40/4mg米托蒽醌，溶于40ml的蒸馏水 (或已经做好的高分子脂质体)中，形成水相；取160/4mgOQCMC，40/4mg胆固醇，溶于20ml 二氯甲烷中形成油相，将油相在200W功率下进行超声，加入水相，超声形成水油均匀的分 散体系。将上述乳液在35t:下于旋转蒸发仪上以50r/min的旋转速度进行旋蒸，同时向旋 转蒸发仪中通入适当流速的氮气流加以保护。当茄形瓶中的有机溶剂完全挥发后，继续旋 蒸30 50min，即得到产品。重复组装4次。制备的米托蒽醌靶向缓释长循环脂质体粒径 为110. 4nm，分散性好，载药率为8. 9%，包封率为94. 2%，体外缓释时间达到15天。采用傅 里叶变换红外光谱仪(FTIR)对样品进行对比分析，与未叶酸化的脂质体谱图相比，包覆米 托蒽醌的脂质体谱图中出现了一个在1580cm—1附近的新的吸收锋，说明OQCMC的游离氨基 和叶酸的COOH形成了酰胺。
实施例11 称lmgPEG-OQCMC， lmg FA-OQCMC， 4mgOQCMC， lmg胆固醇，溶于2ml 二氯甲烷中。称 取lmg米托蒽醌溶于4. 5ml水中，待用。将该混合物置于茄形瓶中，在32。C下于旋转蒸发 仪上以45r/min的旋转速度进行旋蒸，同时向旋转蒸发仪中通入适当流速的氮气流加以保 护。当茄形瓶中的有机溶剂完全挥发后，继续旋蒸30min。之后将茄形瓶取下，向茄形瓶中 加入米托蒽醌水溶液，将脂质膜水化，然后用超声波清洗器以70w的功率进行超声分散，直 至形成半透明乳液，即得到高分子脂质体溶液。制备的米托蒽醌靶向缓释长循环脂质体粒 径为96. 6nm，分散性好，载药率为8. 5%，包封率为90. 3%，体外缓释时间达到10天。采用 傅里叶变换红外光谱仪(FTIR)对样品进行对比分析，与未叶酸化的脂质体谱图相比，包覆 米托蒽醌的脂质体谱图中出现了一个在1580cm—1附近的新的吸收锋，说明OQCMC的游离氨 基和叶酸的C00H形成了酰胺。
实施例12 称10mgPEG-0QCMC， 20mg FA-0QCMC， 20mgOQCMC， 10mg胆固醇，溶于20ml 二氯甲烷 中。称取5mg米托蒽醌溶于40ml水中，待用。将该混合物置于茄形瓶中，在35°C下于旋转蒸 发仪上以50r/min的旋转速度进行旋蒸，同时向旋转蒸发仪中通入适当流速的氮气流加以 保护。当茄形瓶中的有机溶剂完全挥发后，继续旋蒸40min。之后将茄形瓶取下，向茄形瓶 中加入米托蒽醌水溶液，将脂质膜水化，然后用超声波清洗器以80w的功率进行超声分散， 直至形成半透明乳液，即得到高分子脂质体溶液。制备的米托蒽醌靶向缓释长循环脂质体 粒径为98. 6nm，分散性好，载药率为8. 5%，包封率为90. 1%，体外缓释时间达到10天。采 用傅里叶变换红外光谱仪(FTIR)对样品进行对比分析，与未叶酸化的脂质体谱图相比，包 覆米托蒽醌的脂质体谱图中出现了一个在1580cm—1附近的新的吸收锋，说明OQCMC的游离 氨基和叶酸的C00H形成了酰胺。
实施例13 称40mgPEG-0QCMC， 60mg FA-OQCMC， 120mgOQCMC， 40mg胆固醇，溶于25ml 二氯甲烷 中。称取30mg米托蒽醌溶于50ml水中，待用。将该混合物置于茄形瓶中，在4(TC下于旋转蒸发仪上以55r/min的旋转速度进行旋蒸，同时向旋转蒸发仪中通入适当流速的氮气流 加以保护。当茄形瓶中的有机溶剂完全挥发后，继续旋蒸50min。之后将茄形瓶取下，向茄 形瓶中加入米托蒽醌水溶液，将脂质膜水化，然后用超声波清洗器以99w的功率进行超声 分散，直至形成半透明乳液，即得到高分子脂质体溶液。制备的米托蒽醌靶向缓释长循环脂 质体粒径为120nm，分散性好，载药率为8. 3%，包封率为91. 0%，体外缓释时间达到10天。 采用傅里叶变换红外光谱仪(FTIR)对样品进行对比分析，与未叶酸化的脂质体谱图相比， 包覆米托蒽醌的脂质体谱图中出现了一个在1580cm—1附近的新的吸收锋，说明OQCMC的游 离氨基和叶酸的COOH形成了酰胺。
权利要求
一种米托蒽醌纳米靶向缓释长循环脂质体，其特征其粒径在90～120nm之间，其粒径均匀，表面富含有叶酸。
2. —种米托蒽醌纳米靶向缓释长循环脂质体的制备方法，其特征是原料质量份数比 配比为聚乙二醇修饰的O-羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐叶酸修饰的O-羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐o-羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐米托蒽醌=i : 1 2 : 2 4 : 0.5 l;o-羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐胆固醇的质量比为4 2 : i; 采用反相乳液法聚合时制备步骤如下a. 将聚乙二醇修饰的0-羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐、叶酸倏饰的0-羧甲基壳聚糖 十八烷基季铵盐、米托蒽醌溶于蒸馏水中，形成水相，待用；b. 将O-羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐，胆固醇，溶于二氯甲烷中，形成油相；c. 将油相在110 200w功率范围下进行超声，加入水相，超声形成水油均匀的分散体系；d. 将上述乳液在32 4(TC下于旋转蒸发仪上以45 55r/min的旋转速度进行旋蒸， 同时向旋转蒸发仪中通入氮气流加以保护，当有机溶剂完全挥发后，继续旋蒸30 50min， 即得到产品。
3. 如权利要求2所述的一种米托蒽醌纳米靶向缓释长循环脂质体的制备方法，其特征 是采用薄膜分散法时制备步骤如下a. 将聚乙二醇修饰的0-羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐、叶酸修饰的O-羧甲基壳聚糖 十八烷基季铵盐、0-羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐，胆固醇，溶于二氯甲烷中；b. 将上面所述的混合物置于反应器中，在32 4(TC下于旋转蒸发仪上以45 55r/ min的旋转速度进行旋蒸，同时向旋转蒸发仪中通入氮气流加以保护；当反应器中的有机 溶剂完全挥发后，继续旋蒸30 50min。c. 将米托蒽醌溶于蒸馏水中，之后将反应器取下，向反应器中加入米托蒽醌水溶液，将 脂质膜水化，然后用超声波清洗器以70 99w的功率进行超声分散，直至形成半透明乳液， 即得到高分子脂质体溶液。
全文摘要
本发明涉及一种米托蒽醌纳米靶向缓释长循环脂质体及制备方法。脂质体粒径在90～120nm之间，其粒径均匀，表面富含有叶酸。原料质量份数比配比为聚乙二醇修饰的O-羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐∶叶酸修饰的O-羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐∶O-羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐∶米托蒽醌＝1∶1～2∶2～4∶0.5～1；O-羧甲基壳聚糖十八烷基季铵盐∶胆固醇的质量比为4～2∶1；采用反相乳液法聚合或采用薄膜分散法制备；整个制备过程简单快捷，制备周期短，制备的高分子脂质体对药物的包封率大于90％，载药率载高达9.0％；通过表面PEG的修饰，可使高分子脂质体不易被人体网状内皮系统捕捉，延长在体内的循环时间，同时增加高分子脂质体的生物利用度和生物相容性。
文档编号A61K9/127GK101773471SQ20101013198
公开日2010年7月14日 申请日期2010年3月25日 优先权日2010年3月25日
发明者常津, 康世胤, 王汉杰, 胡秀凤, 苏文雅 申请人:天津大学