一种新型的长循环脂质体组合物及其制备方法

专利名称：一种新型的长循环脂质体组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及药物制剂领域，具体涉及一种新型的长循环脂质体组合物及其应用。
背景技术：
紫杉醇(Paclitaxel)是从短叶红豆杉(Taxus brevifolia Nutt.)的树皮、干燥 根以及枝叶中提取的天然产物，临床用于治疗卵巢癌、乳腺癌以及非小细胞肺癌。其化学结 构如下 化学名称为5β，20-环氧-1，2α，4，7β，10β，13α-六羟基紫杉 烷-11-烯-9"酮-4，10- 二乙酸酯-2-苯甲酸酯_13[ (2，R，3，S)_N_苯甲酰-3-苯基异丝 氨酸酯]。因其在水中的溶解度极微(约0. 1 μ g/ml)，仅在甲醇、乙醇、二甲基亚砜等有机溶 剂溶解，从而给紫杉醇的静脉给药带来极大的困难。紫杉醇注射液采用表面活性剂聚氧乙 烯蓖麻油(Cremophor EL)和无水乙醇(55 45, ν/ν)作为溶剂溶解紫杉醇。如1992年美 国FDA批准的紫杉醇注射液(美国百时美施贵宝公司，商品名=Taxol，泰素)。Cremorphor EL虽然能增加紫杉醇的水溶性，但由于其在体内的降解后能促进机体释放组胺，从而可能 导致严重的超过敏反应。因此，为了预防过敏反应，在静脉滴注紫杉醇注射液前30min，病人 需要接受抗过敏的预处理静脉滴注糖皮质激素，如地塞米松，还有H1和H2受体的拮抗剂， 如苯海拉明、西咪替丁或雷尼替丁。静脉滴注的时间要不低于3h。即便如此处理，紫杉醇注 射液的临床应用时仍然会遇到由于超敏反应，而不能继续用药的病例。此外，作为抗肿瘤药 物，紫杉醇药物本身也存在着骨髓抑制、白细胞减少、血小板减少、贫血等毒性反应，限制了 其抗癌作用的应用。现有技术中也有采用紫杉醇白蛋白纳米粒注射混悬液的方式来解决上述问题的， 但是成本太高，是现在市售紫杉醇注射液的5倍以上，而迄今为止，制备脂质体作为紫杉醇 静脉给药载体仍然是解决紫杉醇注射溶剂问题的一种很好的选择。理想的紫杉醇脂质体能 够发挥如下作用避免紫杉醇注射液由于溶剂而导致的超过敏反应；降低外周循环毒性反 应，提高机体对紫杉醇的耐受性；具有储库效应和被动靶向效应。基于相同的原因，很多像紫杉醇一样的抗肿瘤药物如多烯紫杉醇和10-羟基喜树碱也均可采用脂质体作为载体，在 避免超过敏反应、降低毒性作用的前提下达到提高给药剂量、提高药效。但是现在使用的脂质体，存在着体外稳定性稳定差和载药量低的缺点分散在脂 质体磷脂双分子层中的紫杉醇容易受载药量、温度等因素的影响，发生自身分子间的聚 集，进而生成针状的药物结晶，析出到水溶液中；同时在稳定范围的紫杉醇脂质体中，一般 药物与磷脂材料的摩尔比为1 30，使得脂质体的载药量大大降低。为了解决上述的问题有研究采用在脂质体处方中加入负电性的磷脂材料如蛋黄 卵磷脂酰甘油(ePG)、四肉豆蔻酰心磷脂(Cardiolipin)、DOTAP等来提高紫杉醇脂质体的 稳定性能，但所采用的蛋黄卵磷脂酰甘油(ePG)、四肉豆蔻酰心磷脂(Cardiolipin)、DOTAP 均为人工提纯和合成的磷脂材料，因此存在着价格昂贵的缺点。通常这些荷电性磷脂材 料用量，一般为磷脂的摩尔比的1 10，而紫杉醇的载药量较低，药物与磷脂的摩尔比为 1 30。因此荷电性磷脂材料的用量是紫杉醇摩尔比的3倍，用量相对较高，这就进一步增 加了紫杉醇脂质体的生产成本；而对于载药量过低这一技术问题而言，现有技术中还没有 技术方案可以很好的解决。除此之外，为了提高脂质体在血浆中和体内稳定性的最好的措施，就是设计制备 长循环脂质体，这是由于长循环脂质体由于长循环材料PEG化材料的修饰和保护作用，干 扰体内血液中的调理和脂质交换，从而可明显提高脂质体体内稳定性、延长体内循环时间。 为了达到制备长循环脂质体的目的，关键是对PEG材料的选择和应用，而聚乙二醇2000- 二 硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG2000-DSPE)为目前长循环脂质体通常采用的PEG化磷脂材料， 上市的阿霉素长循环脂质体DOXIL处方中采用即采用该材料，但是PEG2000-DSPE为人工合 成的磷脂材料，合成路线相对复杂，生产成本高，市售价格昂贵，在长循环脂质体的处方中， PEG2000-DSPE用量至少为磷脂总量的5% (摩尔比)，才能起到较好的长循环效果，但由于 其分子量为2790，因此其实际的质量比相对较大，这样就一步增加了长循环脂质体的生产 成本。而也有研究表明，有人采用聚乙二醇或聚山林醇酯或者PEG化胆固醇来作为长循环 材料，均没有取得很好的效果。由此可见，如何选择长循环脂质体的基本制备材料，对于长循环脂质体的生产和 使用有着极为重要的作用，而如何提供一种能够弥补上述提到的技术方案的不足的脂质体 材料，也是现在继续解决的技术问题。

发明内容
本发明针对上述技术方案存在的诸多不足，提供一种一种新型的长循环脂质体组 合物及其应用方法，主要采用磷脂、胆固醇、负电性材料、长循环材料作为主要原料，其中特 别采用了维生素E琥珀酸酯或胆固醇琥珀酸酯为负电性材料，维生素E聚乙二醇琥珀酸酯 (TPGS)作为长循环材料，提高了该长循环脂质体组合物与药物结合的稳定性，可作为抗肿 瘤药物紫杉醇、多烯紫杉醇、10-羟基喜树碱的载体，同时其耐受性提高，作为药物载体时， 其所载药物在体内的循环时间明显长于市售的各种载体，且成本较低，适合于广泛的推广 应用。本发明所采用的具体技术方案是一种长循环脂质体组合物，包括由磷脂和胆固醇构成的成膜材料，负电性材料和长循环材料，所采用的负电性材料为维生素E琥珀酯、胆固醇琥珀酯、脱氧胆酸钠、胆固醇 硫酸钠中的一种或多种；所采用的长循环材料为维生素E聚乙二醇琥珀酸酯，其分子结构 中聚乙二醇的分子量范围为500-5000 ；所述磷脂、胆固醇、负电性材料、长循环材料的摩尔 比为100 10-50 0.1-10 2-10。由于在配方中使用了新的负电性材料，使脂质体分散体系的Zeta电位保持在_15 至_35mV的范围内，有利于保持脂质体分散体系的稳定性；而由于采用了维生素E聚乙二 醇琥珀酸酯(TPGS)作为长循环材料，延长了药物在体内的循环作用时间，达到了提高稳定 性和长循环的目的。为了提高药物的稳定性，本发明所述的脂质体组合物中也含有负电材料，但是为 了克服现有技术中的不足，发明人按照下述的原则进行了选择脂质体的稳定性能好；安 全性好，体内可生物降解，并且已有在药用辅料方面应用的先例；价格低廉、市场来源有保 障。而本发明中所选择的负电材料恰恰满足了这些要求，从而在静脉给药途径的安全性、成 本因素、脂质体的稳定性能等方面做到了均衡处理，取得了理想的效果，除了采用已经报道 过得胆固醇硫酸钠作为负电材料外，本发明的发明人还选择了如下的负电材料维生素E琥珀酸酯是维生素E的琥珀酸酯衍生物(d- α -tocopherol acid succinate, VES)，化学结构式如下 式I维生素E琥珀酸酯具有天然维生素E生理活性功能，稳定性比维生素E大大提高， 已成为VE类药品普遍应用的原料，已得到广泛的应用，几乎所有的片剂、胶囊类药品和营 养补充剂中使用的维生素E均为维生素E琥珀酸酯或其钙盐。维生素E琥珀酸酯具有的广 泛抗肿瘤特性、提高免疫力活性，能有效地作为癌症的辅助治疗手段。用在抗肿瘤药物脂 质体中，可利用其对卵巢癌、乳腺癌等肿瘤的广泛抑制作用，提高紫杉醇等抗肿瘤药物的疗 效。维生素E琥珀酸酯在血浆生理中性ρΗ条件下，其分子结构中的琥珀酸的羧基解 离，分子带负电荷。也可以在使用时将其转换为水溶性的维生素E琥珀酯(钠盐，铵盐)，提 高其水溶性、解离性、荷电性能。同时，维生素E琥珀酸酯，还具有还原性能，可提高脂质体 制剂中药物的稳定性能。维生素E琥珀酸酯，体内可生物降解，不存在安全性风险，因此可 以作为本发明的备选负电性材料。胆固醇琥珀酸酯(cholesterol hemisuccinate, CHS)是胆固醇的琥珀酯衍生物， 又名胆固醇半琥珀酸酯，胆固醇半丁二酸酯，是一种抗动脉硬化的原料药。化学结构如下 式II在血浆生理中性pH条件下，其分子结构中的琥珀酸的羧基解离，分子带负电荷。 也可以在使用时将其转换为水溶性的胆固醇琥珀醋(钠盐)。胆固醇琥珀酯除了荷负电荷 外，还具有较好的脂质体膜稳定作用。这种胆固醇的琥珀酸衍生物，体内可生物降解，不存 在安全性风险，可以安全的作为负电性材料使用。脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate, SDC)是人体胆汁内存在的一种胆盐，是一种
阴离子表面活性剂。化学结构式如下 式III脱氧胆酸钠解离后荷负电荷，因此可利用这一性质来增加脂质体的稳定性。两性 霉素B注射液的处方中，采用等摩尔比脱氧胆酸钠与两性霉素B形成复合物，提高其水溶 性。因此，许多文献报道采用脱氧胆酸钠作为负电性材料，加入脂质体中，来提高稳定性能。 这种材料体内可生物降解，也不存在安全性的风险。上述三种负电性材料加上胆固醇硫酸钠，可以混合使用，也可以单独使用，为了达 到最佳的效果，可以单独选用维生素E琥珀酸酯。前面已经描述过脂质体的处方中的长循环材料是成功制备长循环脂质体关键，在 本发明中针对目前广泛应用的PEG化磷脂材料PEG2000-DSPE价格昂贵的缺点，本发明人试 图选用来源易得，价格相对低廉，同样具有长循环性能的材料来取代PEG2000-DSPE。本发 明人对比目前专利和文献中采用的长循环材料，分析其优缺点，将维生素E聚乙二醇琥珀 酯(DL-α-Tocopherol polyethylene glycol succinate，TPGS)应用到长循环脂质体的 制备中，在处方设计中，通过负电性材料的选用、胆固醇稳定等措施，配合维生素E聚乙二 醇琥珀酯的作用成功制备了体内外性能优良的长循环脂质体，从而达到了本发明的技术目 的，提高了稳定性和长循环功能。TPGS的化学结构如下
式IV 维生素E聚乙二醇琥珀酯又称为水溶性维生素E，目前应用研究大多集中在其对 难溶性药物的增溶方面和作为新型乳化剂、提高乳剂的稳定性。TPGS 1000已经广泛用于医 药、保健、化妆品领域，TPGS已被美国药典收载，因此材料的来源、安全性方面不存在困难。 TPGS的合成路线相对简单，合成路线见专利CN101232871A，原料来源丰富，以维生素E琥珀 酸酯和聚乙二醇(PEG)为原料，通过酯化法合成即得，因此具有明显的价格优势。而对其在 长循环脂质体的应用研究方面，没有引起足够的重视。TPGS的聚乙二醇(PEG)链，随着聚 合度的不同，有许多规格。通常作为乳化剂、增溶剂应用，尤其是通过口服给药途径给药应 用时，一般认为 TPGS 1000 是最合适的(Collnot EM,Baldes C. Influence of vitamin E TPGSpoly(ethylene glycol)chain length on apical, efflux transporters in Caco-2 eellmonolayers[J], Journal of Controlled Release. 2006，111 (1-2) :35_40)。但作为月旨 质体的长循环材料来讲，PEG分子量范围为500-5000时，PEG长链能在脂质体的表面起到较 好的遮蔽效果，特别是PEG分子量为2000时，其链长跟PEG2000-DSPE的链长相同，因此优 选TPGS 2000作为长循环材料，这样就大大降低了成本，同时起到了很好的长循环效果。采用加入了上述负电材料和长循环材料制备的长循环脂质体组合物，用来包封抗 肿瘤药物，本发明所得的脂质体组合物荷负电、电荷量低，质量非常稳定，具有明显的长循 环特性，具备工业化应用的前景，弥补了现有脂质体技术的不足。除了上述方案外，为了完成该发明制备成成形的脂质体材料，配方中还添加有由 磷脂和胆固醇构成的成膜材料，其中所采用的磷脂为不饱和磷脂或饱和磷脂或其混合物； 其中所述的不饱和磷脂为大豆磷脂或蛋黄卵磷脂或其混合物；所述的饱和磷脂为氢化大豆 磷脂或氢化蛋黄磷脂或脂肪酸链的碳原子数为14-18的饱和磷脂，如二棕榈酰磷脂酰胆碱 (DPPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)，但是从生产成本考虑，则优选氢化饱和大豆磷脂、氢 化饱和卵磷脂。氢化饱和大豆磷脂优选纯度97%以上，其主要成分为磷脂酰胆碱，还含有少 量的磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇。由于其脂肪链氢化饱和，因此能够防止磷脂的水解氧化、 提高脂质体的稳定性。而另一个必需组分是胆固醇，胆固醇与磷脂一起作为成膜材料，调节脂质双分子 层的流动性。处方中含有一定量的胆固醇可以避免脂质体与血浆中的脂蛋白进行脂质交 换，而遭到破坏，从而提高脂质体的体内稳定性能。为了达到最佳的效果，发明人将上述物质的比例限定为磷脂、胆固醇、负电性材 料、长循环材料的摩尔比为100 10-50 0.1-10 2-10。而更优先的则采用摩尔比为 100 20-35 0.5-5 3_6，这样可以更好的发挥负电材料和长循环材料的作用，所制备 的长循环脂质体组合物更加稳定。为了提高最终的效果，在上述配方的基础上，所述的长循环脂质体组合物内还含 有抗氧化剂和冻干保护剂，其中抗氧化剂选自维生素E，其与磷脂的摩尔比为0.1-2 100；而在日常生产中，含有活性化合物的脂质体可以用冷冻干燥来稳定，以制成适宜的组合物 形式，在该过程中，需要加入冻干保护剂，依靠其玻璃态的稳定膜作用，来保护脂质体的结 构完整性，本发明的冻于保护剂选自蔗糖、海藻糖、乳糖中的一种或多种，其用量为磷脂重 量的1-8倍，其中更优选采用蔗糖。前面已经说过，本发明所制备的长循环脂质体组合物的用途是作为载体制备包裹 活性成分的药物，而所述的活性成分为抗肿瘤药物，包括紫杉醇或多烯紫杉醇或10-羟基 喜树碱等；当包裹的活性物质为紫杉醇时，紫杉醇与磷脂的摩尔比为1-5 100。更优选的 采用 2-5 100。而将长循环脂质体组合物作为载体制备包裹活性成分的冻干剂的方法，包括薄膜 分散，高压均质，无菌过滤，冷冻干燥法的步骤，其具体步骤如下将活性物质、磷脂、胆固醇、负电性材料、长循环材料及抗氧化剂溶解于无水乙醇 中，于31-50°C的水浴条件下减压旋转蒸发成膜，真空干燥，充分抽去无水乙醇；加入冻干保护剂溶液，50-550C的水浴条件下水化；高压均质或用微孔膜挤出的方 式制备平均粒径80nm-300nm的脂质体；采用0. 22 μ m的聚偏氟乙烯膜无菌过滤；分装于容器中中，冷冻干燥后通入惰性气体，压盖即得。为了使得制备的脂质体更加实用，可控制高压均质或用微孔膜挤出的方式制备的 脂质体平均粒径为lOOnm。在上述的制备方法中，适宜的溶剂为非极性的或弱极性的溶剂，并且能够在蒸发 后不留下毒性的残留物。通常所使用的有机溶剂选自甲醇、乙醇、氯仿或它们的混合物。在 本发明中，优选无水乙醇。本发明中采用的惰性气体选自氮气、氦气、氩气中的一种。所采 用的冻干保护剂溶液为其水溶液，如蔗糖水溶液等。当包裹的活性物质为紫杉醇时，本发明制备所得的紫杉醇长循环脂质体组合物为 紫杉醇注射给药新剂型，由于处方中不含有聚氧乙烯蓖麻油，从而避免了由此导致的超敏 反应，与常规紫杉醇注射液和普通脂质体相比，提高了耐受性，提高了疗效。为了验证本发 明制备的长循环脂质体的效果，发明人将上述的紫杉醇长循环脂质体组合物进行了性能的 测试，取得了下述的有益效果(一 )半成品及制剂的稳定性本发明制备的新型的紫杉醇长循环脂质体组合物在冻干之前测定其粒径、Zeta电 位，为_15mV至-35mV之间，室温条件下放置12h，在此期间测定其粒径、Zeta电位，基本保 持不变。脂质体在混悬状态下，保持均勻分散、不发生聚集和沉淀。冷冻干燥后，用灭菌注 射用水复溶，室温条件下放置12h，在此期间测定其粒径、Zeta电位，基本保持不变，脂质体 在混悬状态下，保持均勻分散状态，没有发生聚集和沉淀现象。冻干前样品和冷冻干燥后复 溶样品的粒径测定结果表明其粒径分布在SOnnHBOOnm范围内。( 二 )动物体内的耐受性试验、药动学实验和药效学试验在动物试验中，新型的紫杉醇长循环脂质体给药组小鼠未表现出毒副反应，各项 生理指标正常，而等剂量的紫杉醇注射液组动物在给药后出现短暂昏迷。药动学试验结果 表明，新型的紫杉醇长循环脂质体同紫杉醇注射液、市售的紫杉醇普通脂质体相比，能显著 延长体内滞留时间，具有明显的长循环特性。药效学试验结果表明，新型的紫杉醇长循环脂
8质体与等剂量的紫杉醇注射液相比，抑瘤率提高，有统计学差异。由此可知，本发明所述的 新型的紫杉醇长循环脂质体可提高动物的耐受性、延长体内滞留时间，提高疗效。(三)产业化的可行性本发明脂质体组合物，处方中采用的磷脂、胆固醇、负电性材料(维生素E琥珀酯、 胆固醇琥珀酯、脱氧胆酸钠)、长循环材料(维生素E聚乙二醇琥珀酸酯TPGS)等各组成成 分均为市场上可以得到的药用制剂材料，来源易得，价格相对低廉；均有在其他药物制剂、 尤其是注射剂中应用的先例，安全性能好。本发明制备工艺简便，采用的制剂设备为脂质体 制备常用设备，便于放大应用到工业化生产规模。以紫杉醇作为活性成分制得的新型长循环脂质体组合物，避免了紫杉醇注射液中 的聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor EL)所导致的超过敏反应。通过复溶后的脂质体急性毒性试 验结果可知，新型紫杉醇长循环脂质体组合物静脉注射给药后可降低紫杉醇的全身毒性， 提高耐受性。药动学实验结果可知，新型紫杉醇长循环脂质体组合物静脉注射给药后延长 脂质体在血浆中的滞留时间，具有长循环特性，从而有更多的脂质体药物通过渗透和滞留 效应(Era效应)，到达肿瘤组织，从而提高药效。综上所述，可以看到应用本发明所述技术方案制备的长循环脂质体组合物，提高 了该长循环脂质体组合物与药物结合的稳定性，可作为抗肿瘤药物紫杉醇、多烯紫杉醇、 10-羟基喜树碱的载体，同时其耐受性提高，作为药物载体时，其所载药物在体内的循环时 间明显长于市售的各种载体，且成本较低，适合于广泛的推广应用。


图1为实施例1制得的脂质体的透射电镜照片；图2为实施例1制得的脂质体冻干前粒径分布；图3为实施例1制得的脂质体冻干复溶后粒径分布；图4为实施例1制得的脂质体、紫杉醇注射液、紫杉醇普通脂质体在人血浆中的释 放曲线；图5为实施例1制得的脂质体、紫杉醇注射液、紫杉醇普通脂质体在大鼠体内的血 药浓度曲线。
具体实施例方式以下通过实施例形式的具体实施方式
，对本发明的上述内容做进一步的详细说 明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容 所实现的技术均属于本发明的范围；实施例中由摩尔比换算得到的物料的质量投料，由于磷脂多为混合物，故在计算 时取其大约分子量。涉及到的物料的分子量如下大豆磷脂(SPC) 750蛋黄卵磷脂(ePC) 780氢化饱和大豆磷脂(HSPC) 762氢化饱和卵磷脂(HEPC) 782二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC) 740二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC) 760胆固醇386· 6胆固醇琥珀酸酯(CHS) 486. 7维生素E琥珀酸酯(VES) 531脱氧胆酸钠(SDC) 414. 6
胆固醇硫酸钠(CS-Na) 489 维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 500)维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 1000) 1510维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000) 2500维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 5000) 5500聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG2000-DSPE) 2790维生素E 430. 7紫杉醇853. 9多烯紫杉醇807. 910-羟基喜树碱364. 3实施例中所用原料或设备均可从市场获得。其中大豆磷脂(SPC)、蛋黄卵磷脂 (ePC)、氢化饱和大豆磷脂(HSPC Lipoid S PC-3)、氢化饱和卵磷脂(HEPC)、二棕榈酰磷脂 酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、脱氧胆酸钠(SDC)、聚乙二醇2000-二硬脂酰 磷脂酰乙醇胺(PEG2000-DSPE)均购自德国利宝益(Lipoid)公司(上海东尚实业有限公 司代理)；胆固醇、胆固醇硫酸钠(CS-Na)购自西安力邦制药有限公司；维生素E琥珀酸酯 (VES)购自武汉合中生化制药有限公司；胆固醇琥珀酸酯(CHS)购自郑州利伟生物化工有 限公司；不同规格的维生素E聚氧乙烯琥珀酸酯(TPGS)购自浙江医药股份有限公司新昌 制药厂；维生素E购自山东博山制药有限公司；紫杉醇、多烯紫杉醇、羟基喜树碱购自成都 天源天然产物有限公司；蔗糖购自山东聊城安信药用辅料有限公司；海藻糖、乳糖购自武 汉远城科技发展有限公司；旋转蒸发仪购自上海亚荣生化仪器厂；循环水真空泵购自巩义市予华仪器有限 责任公司；EmulSiFleX-C3高压均质机(配挤出器、导热管)购自加拿大艾维斯汀公司；恒 温水浴超声仪购自上海科导超声仪有限公司；Nic0mp388/ZetaPALS激光粒度测定仪(美 国Nicomp公司)；Labco台式冷冻干燥机(美国Labco公司)；冷冻干燥西林瓶、胶塞购自 淳安千岛湖高峰玻璃瓶厂；XSP-10C生物显微镜购自上海光学仪器厂；微孔滤膜(lOOnm， 200nm)、0. 22μπι聚偏氟乙烯(PVDF)无菌过滤膜购自海豪夏核孔膜科技开发有限公司；透 析袋(分子截留质量为8000 14400U)购自北京夏斯生物技术公司。实施例1新型紫杉醇长循环脂质体的制备紫杉醇 0.60g氢化大豆磷脂16g胆固醇 2. 5g维生素E琥珀酸酯 0. Ig维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000)2. 5g维生素E 0. 05g蔗糖2Og注射用水 200ml分别称取处方量的紫杉醇、氢化大豆磷脂、胆固醇、维生素E琥珀酸酯(VES)、维生 素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000)、维生素E，加入IOOml无水乙醇，溶解后，置旋转蒸发 仪，在氮气流保护条件下，50°C水浴恒温，抽干溶剂，制备成膜，置真空干燥器中放置，充分 除去残留溶剂。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，55°C恒温，磁力搅拌30min，水浴超声分散 均勻，用高压均质机均质，0. 22um PVDF滤膜无菌过滤，分装于冻干西林瓶中，冷冻干燥，冻 干后通入氮气，压盖密封。按照中药典2005版二部附录XIX E中方法，测得样品的包封率为96. 5%。
按照中国药典版二部附录XIX E中方法，以激光粒径测定仪测定冻干前脂质体样 品，平均粒径为110. 5nm。冷冻干燥样品，用注射用水复溶的样品平均粒径为123. 2nm。其透射电镜照片见图1，粒径分布图见图2和图3。实施例2 新型紫杉醇长循环脂质体的制备紫杉醇 0. 15g 氢化大豆磷脂16g胆固醇 4. 5g 维生素E琥珀酸酯 0. 5g维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 1000) 2. 5g维生素E 0. 08g海藻糖 20g注射用水 200ml分别称取处方量的紫杉醇、氢化大豆磷脂、胆固醇、维生素E琥珀酸酯(VES)、维生 素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 1000)、维生素E，加入IOOml无水乙醇，溶解后，置旋转蒸发 仪，在氮气流保护条件下，50°C水浴恒温，抽干溶剂，制备成膜，置真空干燥器中放置，充分 除去残留溶剂。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，55°C恒温，磁力搅拌30min，水浴超声分散 均勻，用挤出器IOOnm微孔膜挤出，0. 22 μ m PVDF滤膜无菌过滤，分装于冻干西林瓶中，冷 冻干燥，冻干后通入氮气，压盖密封。与实施例1同样方法测定，冻干前样品的平均粒径为108. 5nm，包封率为99. 5%。实施例3 新型紫杉醇长循环脂质体的制备紫杉醇 0.90g 氢化大豆磷脂16g胆固醇 1.25g 维生素E琥珀酸酯 l.Og维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 500)2. Og维生素E 0. Ig乳糖15g注射用水 200ml分别称取处方量的紫杉醇、氢化大豆磷脂、胆固醇、维生素E琥珀酸酯、维生素E聚 乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000)、维生素E，加IOOml无水乙醇，溶解后，置旋转蒸发仪，在氮气 流保护条件下，50°C水浴恒温，抽干溶剂，制备成膜，置真空干燥器中放置，充分除去残留溶 剂。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，55°C恒温，磁力搅拌30min，水浴超声分散均勻，用高 压均质机均质，0. 22 μ m PVDF滤膜无菌过滤，分装于冻干西林瓶中，冷冻干燥，冻干后通入 氮气，压盖密封。与实施例1同样方法测定，冻干前样品的平均粒径为115. 2nm包封率为86. 3%。实施例4 新型紫杉醇长循环脂质体的制备紫杉醇 0.60g 氢化大豆磷脂 16g胆固醇 2.5g 胆固醇琥珀酸酯 l.Og维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000) 4. 5g维生素E 0. 05g蔗糖20g注射用水 200ml分别称取处方量的紫杉醇、氢化大豆磷脂、胆固醇、胆固醇琥珀酸酯、维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000)、维生素E加入，IOOml无水乙醇，溶解后，置旋转蒸发仪，在氮 气流保护条件下，50°C水浴恒温，抽干溶剂，制备成膜，置真空干燥器中放置，充分除去残留 溶剂。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，55°C恒温，磁力搅拌30min，水浴超声分散均勻，用 高压均质机均质，0. 22 μ m PVDF滤膜无菌过滤，分装于冻干西林瓶中，冷冻干燥，冻干后通 入氮气，压盖密封。与实施例1同样方法测定，冻干前样品的平均粒径为114. lnm，包封率为96. 6%。实施例5 新型紫杉醇长循环脂质体的制备紫杉醇 0.30g 氢化卵磷脂16g胆固醇 4. Og 胆固醇琥珀酸酯 l.Og维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 5000) 2. 3g维生素E 0. 05g乳糖15g注射用水 200ml分别称取处方量的紫杉醇、氢化卵磷脂、胆固醇、胆固醇琥珀酸酯、维生素E聚乙 二醇琥珀酸酯(TPGS 1000)、维生素E，加入IOOml无水乙醇，溶解后，置旋转蒸发仪，在氮气 流保护条件下，50°C水浴恒温，抽干溶剂，制备成膜，置真空干燥器中放置，充分除去残留溶 剂。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，55°C恒温，磁力搅拌30min，水浴超声分散均勻，用挤 出器IOOnm微孔膜挤出，0. 22 μ m PVDF滤膜无菌过滤，分装于冻干西林瓶中，冷冻干燥，冻 干后通入氩气，压盖密封。与实施例1同样方法测定，冻干前样品的平均粒径为116. 2nm，包封率为94. 3%。实施例6 新型紫杉醇长循环脂质体的制备紫杉醇 0.6g 二棕榈酰磷脂酰胆碱 15. 5g胆固醇 2. 5g 脱氧胆酸钠0.45g维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000)4. 8g维生素E 0. 05g蔗糖15g注射用水 200ml分别称取处方量的紫杉醇、二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇、脱氧胆酸钠、维生素E 聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000)、维生素E，加入IOOml无水乙醇，溶解后，置旋转蒸发仪，在 氮气流保护条件下，50°C水浴恒温，抽干溶剂，制备成膜，置真空干燥器中放置，充分除去残 留溶剂。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，55°C恒温，磁力搅拌30min，水浴超声分散均勻， 用高压均质机均质，0. 22 μ m PVDF滤膜无菌过滤，分装于冻干西林瓶中，冷冻干燥，冻干后 通入哈、氦气，压盖密封。与实施例1同样方法测定，冻干前样品的平均粒径为102. lnm，包封率为95. 3%。实施例7 新型紫杉醇长循环脂质体的制备紫杉醇 0.2g 二硬脂酰磷脂酰胆碱16g胆固醇 3. 5g 胆固醇硫酸钠0.05g维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 1000)1. 6g维生素E 0. 05g
12
海藻糖 20g注射用水 200ml分别称取处方量的紫杉醇、氢化大豆磷脂、胆固醇、维生素E琥珀酸酯、维生素E聚 乙二醇琥珀酸酯(TPGS 1000)、维生素E，加IOOml无水乙醇，溶解后，置旋转蒸发仪，在氮气 流保护条件下，50°C水浴恒温，抽干溶剂，制备成膜，置真空干燥器中放置，充分除去残留溶 齐U。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，55°C恒温，磁力搅拌30min，水浴超声分散均勻，用挤 出器IOOnm微孔膜挤出，0. 22 μ m PVDF滤膜无菌过滤，分装于冻干西林瓶中，冷冻干燥，冻 干后通入氮气，压盖密封。与实施例1同样方法测定，冻干前样品的平均粒径为116. 3nm，包封率为94. 2%。实施例8 新型紫杉醇长循环脂质体的制备紫杉醇 0.40g 氢化大豆磷脂16g胆固醇 2. Og 维生素E琥珀酸酯 l.Og聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺 3. Og维生素E 0. Ig乳糖15g注射用水 200ml分别称取处方量的紫杉醇、氢化大豆磷脂、胆固醇、维生素E琥珀酸酯、聚乙二醇 2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、维生素E加入IOOml无水乙醇，溶解后，置旋转蒸发仪，在氮 气流保护条件下，50°C水浴恒温，抽干溶剂，制备成膜，置真空干燥器中放置，充分除去残留 溶利。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，55°C恒温，磁力搅拌30min，水浴超声分散均勻，用 高压均质机均质，0. 22 μ m PVDF滤膜无菌过滤，分装于冻干西林瓶中，冷冻干燥，冻干后通 入氩气，压盖密封。与实施例1同样方法测定，冻干前样品的平均粒径为103. 2nm，包封率为96. 5%。实施例9 新型紫杉醇长循环脂质体的制备紫杉醇 0.36g氢化蛋黄磷脂 16g胆固醇 3.2g胆固醇琥珀酸酯 1.6g聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺5.8g维生素E 0. IOg蔗糖2Og注射用水 200ml分别称取处方量的紫杉醇、氢化蛋黄磷脂、胆固醇、胆固醇E琥珀酸酯、聚乙二醇 2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、维生素E加入IOOml无水乙醇，溶解后，置旋转蒸发仪，在氮 气流保护条件下，50°C水浴恒温，抽干溶剂，制备成膜，置真空干燥器中放置，充分除去残留 溶剂。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，55°C恒温，磁力搅拌30min，水浴超声分散均勻，用 挤出器IOOnm微孔膜挤出，0. 22 μ m PVDF滤膜无菌过滤，分装于冻干西林瓶中，冷冻干燥， 冻干后通入氮气，压盖密封。与实施例1同样方法测定，冻干前样品的平均粒径为101. 6nm，包封率为94. 3%。实施例10 新型紫杉醇长循环脂质体的制备紫杉醇 0.2g 二棕榈酰磷脂酰胆碱 16g
胆固醇 2.4g 胆固醇硫酸钠0.03g聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺1.25g维生素E 0. 05g蔗糖15g注射用水 200ml分别称取处方量的紫杉醇、氢化大豆磷脂、胆固醇、胆固醇硫酸钠、聚乙二醇 2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、维生素E加入IOOml无水乙醇，溶解后，置旋转蒸发仪，在氮 气流保护条件下，50°C水浴恒温，抽干溶剂，制备成膜，置真空干燥器中放置，充分除去残留 溶剂。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，55°C恒温，磁力搅拌30min，水浴超声分散均勻，用 挤出器IOOnm微孔膜挤出，0. 22 μ m PVDF滤膜无菌过滤，分装于冻干西林瓶中，冷冻干燥， 冻干后通入氩气，压盖密封。与实施例1同样方法测定，冻干前样品的平均粒径为120. 6nm，包封率为96. 7%。实施例11 新型紫杉醇长循环脂质体的制备紫杉醇 0.6g 大豆磷脂(SPC)16g胆固醇 2.4g 维生素E琥珀酸酯 1.2g维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS1000) 0. 65g维生素E 0. 05g海藻糖 IOg注射用水 200ml分别称取处方量的紫杉醇、大豆磷脂、胆固醇、维生素E琥珀酸酯、维生素E聚乙 二醇琥珀酸酯(TPGS 1000)、维生素E加入IOOml无水乙醇，溶解后，置旋转蒸发仪，在氮气 流保护条件下，40°C水浴恒温，抽干溶剂，制备成膜，置真空干燥器中放置，充分除去残留溶 剂。加入用注射用水溶解的海藻糖溶液，40°C恒温，磁力搅拌30min，水浴超声分散均勻，用 高压均质机均质，0. 22 μ m PVDF滤膜无菌过滤，分装于冻干西林瓶中，冷冻干燥，冻干后通 入氮气，压盖密封。与实施例1同样方法测定，冻干前样品的平均粒径为116. 5nm，包封率为93. 7%。实施例12 新型紫杉醇长循环脂质体的制备紫杉醇 0.2g蛋黄卵磷脂(ePC) 16. 5g胆固醇 0.8g胆固醇琥珀酸酯 1.5g维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000)2. 5g维生素E 0. 04g乳糖15g注射用水 200ml分别称取处方量的紫杉醇、蛋黄卵磷脂、胆固醇、胆固醇琥珀酸酯、维生素E聚乙 二醇琥珀酸酯(TPGS 2000)、维生素E加入IOOml无水乙醇，溶解后，置旋转蒸发仪，在氮气 流保护条件下，40°C水浴恒温，抽干溶剂，制备成膜，置真空干燥器中放置，充分除去残留溶 剂。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，40°C恒温，磁力搅拌30min，水浴超声分散均勻，用挤 出器IOOnm微孔膜挤出，0. 22 μ m PVDF滤膜无菌过滤，分装于冻干西林瓶中，冷冻干燥，冻 干后通入氮气，压盖密封。
与实施例1同样方法测定，冻干前样品的平均粒径为114. Onm，包封率为95. 5%。实施例13 新型紫杉醇长循环脂质体的制备紫杉醇 0.30g 大豆磷脂16g胆固醇 2. 5g 脱氧胆酸钠0. 25g维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 5000) 2. 3g维生素E 0. Ig蔗糖2Og注射用水 200ml分别称取处方量的紫杉醇、大豆磷脂、胆固醇、脱氧胆酸钠、维生素E聚乙二醇琥 珀酸酯(TPGS 5000)、维生素E加入IOOml无水乙醇，溶解后，置旋转蒸发仪，在氮气流保护 条件下，40°C水浴恒温，抽干溶剂，制备成膜，置真空干燥器中放置，充分除去残留溶剂。加 入用注射用水溶解的蔗糖溶液，40°C恒温，磁力搅拌30min，水浴超声分散均勻，用高压均质 机均质，0. 22ym PVDF滤膜无菌过滤，分装于冻干西林瓶中，冷冻干燥，冻干后通入氮气，压 盖笛、封。与实施例1同样方法测定，冻干前样品的平均粒径为123. 4nm，包封率为91. 2%。实施例14 新型多烯紫杉醇长循环脂质体的制备多烯紫杉醇 1. 20g 氢化大豆磷脂16g胆固醇2. Og 维生素E琥珀酸酯 0. Ig维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000)3. Og维生素E0. IOg蔗糖20g注射用水200ml分别称取处方量的多烯紫杉醇、氢化大豆磷脂、胆固醇、维生素E琥珀酸酯、维生 素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000)、维生素E加入IOOml无水乙醇，溶解后，置旋转蒸发 仪，在氮气流保护条件下，50°C水浴恒温，抽干溶剂，制备成膜，置真空干燥器中放置，充分 除去残留溶剂。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，55°C恒温，磁力搅拌30min，水浴超声分散 均勻，用挤出器IOOnm微孔膜挤出，0. 22 μ m PVDF滤膜无菌过滤，分装于冻干西林瓶中，冷 冻干燥，冻干后通入氮气，压盖密封，即得多烯紫杉醇的冻干长循环脂质体制剂。与实施例1同样方法测定，冻干前样品的平均粒径为107. lnm，包封率为93. 3%。实施例15 新型10-羟基喜树碱长循环脂质体的制备10-羟基喜树碱 0. 50g 氢化大豆磷脂 16g胆固醇4. Og 维生素E琥珀酸酯0. Ig
维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000)3. Og维生素E0. IOg蔗糖30g注射用水300ml分别称取处方量的10-羟基喜树碱、氢化大豆磷脂、胆固醇、维生素E琥珀酸酯、维 生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000)、维生素E加入IOOml无水乙醇，溶解后，置旋转蒸发 仪，在氮气流保护条件下，50°C水浴恒温，抽干溶剂，制备成膜，置真空干燥器中放置，充分除去残留溶剂。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，55°C恒温，磁力搅拌30min，水浴超声分散 均勻，用高压均质机均质，0. 22um PVDF滤膜无菌过滤，分装于冻干西林瓶中，冷冻干燥，冻 干后通入氮气，压盖密封，即得10-羟基喜树碱的冻干长循环脂质体制剂。与实施例1同样方法测定，冻干前样品的平均粒径为109. 4nm，包封率为95. 3%。实施例16 新型紫杉醇长循环脂质体的组合物的稳定性试验该试验旨在考察实施例中制备的脂质体样品的贮存稳定性和使用稳定性。将实施例1、4、6制得的干燥的紫杉醇长循环脂质体组合物在2-10°C保存，于0、1、 3、6、12个月取样，观察其外观，用注射用水复溶，用显微镜检查，结果见表1。将实施例1、4、6制得的干燥的紫杉醇长循环脂质体组合物复溶后的溶液室温条 件下放置，于0、1、4、8、12小时取样，观察外观，用显微镜检查，结果见表2。将实施例1、4、6制得的干燥的紫杉醇长循环脂质体组合物用注射用水复溶，然后 用8倍体积的5%葡萄糖注射液稀释，室温条件下放置，于0、1、2、3、4小时取样，观察外观， 用显微镜检查，结果见表3。由结果可知，紫杉醇长循环脂质体组合物冻干剂在2-10°C保存12个月后，复溶后 不发生聚集，没有紫杉醇针状结晶析出。复溶后溶液室温条件下放置12小时，不发生聚集， 没有紫杉醇结晶析出。复溶后用5%葡萄糖注射液稀释8倍，室温条件下放置4小时，不发 生聚集，没有紫杉醇结晶析出。表1新型紫杉醇长循环脂质体低温放置(2-10°C )放置稳定性试验结果 表2新型紫杉醇长循环脂质体组合物复溶后室温放置稳定性试验结果
16 表3新型紫杉醇长循环脂质体组合物复溶后用8倍体积的5 %葡萄糖注射液稀释， 室温放置稳定性试验结果 试验例1新型紫杉醇长循环脂质体组合物的人血浆稳定性试验试验样品(1)紫杉醇注射液(泰素，百时美施贵宝公司，30mg/5ml) ； (2)紫杉醇 普通脂质体(力扑素，注射用紫杉醇脂质体，南京思科药业有限公司，规格30mg/瓶)；(3) 紫杉醇长循环脂质体组合物(实施例1制备的紫杉醇长循环脂质体组合物，规格15mg/瓶)。精密量取紫杉醇注射液1ml，用生理盐水2ml稀释，作为紫杉醇注射液的稀释液。 将紫杉醇普通脂质体、紫杉醇长循环脂质体组合物分别用15ml，IOml注射用水复溶，即得 紫杉醇普通脂质体和紫杉醇长循环脂质体复溶液。精密量取紫杉醇注射液的稀释液，紫杉 醇普通脂质体和紫杉醇长循环脂质体复溶液各1ml，加入人血浆2ml，置筒状透析袋中(分 子截留量1.4万)，封口，置于装有200ml pH7. 4PBS(0. 05mol/L)的烧杯中，37°C水浴磁力搅 拌。分别于0. 5、l、2、4、6、8、10、24h取样Iml (同时补充同温空白介质lml)。HPLC法测定 计算各时间段的脂质体累积释放的药物量。以下公式计算释放度。释放度透析外液的累积释放量/透析袋中药物的总量X 100%。血浆中稳定性试验结果表明，紫杉醇普通脂质体在血浆中药物渗漏迅速，24h释放 46. 72%，比紫杉醇注射液的释放速度(15. 96% )还要快，紫杉醇长循环脂质体在血浆中的 稳定性好，药物释放缓慢，24h释放仅为4. 4%，显示出优良的缓释特性。血浆中的稳定性试 验结果见图4。试验例2新型紫杉醇长循环脂质体组合物的急性毒性试验试验目的考察本发明的紫杉醇长循环脂质体按常规方式给药后的即时毒性反应 和多次给药的耐受性。试验分组及样品⑴阴性对照组空白脂质体；(2)阳性对照组紫杉醇注射液 (泰素，百时美施贵宝，规格30mg/5ml) ； (3)低剂量、高剂量试验组紫杉醇长循环脂质体 (实施例1制备的紫杉醇长循环脂质体组合物，规格15mg/瓶，用注射用水复溶)。试验动物昆明种雌性小鼠，体重18_20g，随机分为4组，每组5只。阴性对照组 给以试验组含有的最高量脂质的空白脂质体。阳性对照组给予紫杉醇注射液。试验组给予 紫杉醇长循环脂质体，在第1，4，7天对各组尾静脉注射给药。试验结果⑴即时毒性反应观察各组小鼠给药后即时观察，阴性对照组和低剂 量、高剂量试验组均无无明显毒性反应。紫杉醇注射液组中有的小鼠出现呼吸急促、短暂昏 迷现象。(2)小鼠体重变化阴性对照组小鼠体重逐步上升。试验结果见表4。表4新型紫杉醇长循环脂质体体急性毒性试验中动物体重变化 试验例3新型紫杉醇长循环脂质体的制备组合物的药动学试验取SD大鼠15只，随机分成3组，分别给予紫杉醇注射液(泰素，百时美施贵宝，规 格30mg/5ml)、紫杉醇普通脂质体(力扑素，注射用紫杉醇脂质体，南京思科药业有限公司， 规格30mg/瓶)、紫杉醇长循环脂质体(实施例1制备，规格15mg/瓶)，(脂质体用注射用 水复溶)，以15mg/kg剂量经大鼠尾静脉缓慢推注，分别于给药后5,30min, 1,2,4,6,8,12， 16，24h眼底静脉丛取血0. 5ml于肝素化离心管中，离心5min分离血浆，经血样处理后，HPLC 分析，标准曲线外标法计算血浆药物浓度。色谱柱0DS_C18柱(20(kimX4. 6謹，5μπι)；流动相甲醇-水(65 35)，流速 1. Oml/min，检测波长227nm，柱温:30°C，进样体积:20μ 1。血样处理精取待测血浆ΙΟΟμ 1，加入叔丁基甲醚2ml于旋涡混合器上混合3min， 3000r/min离心lOmin，吸取上层清液1. 5ml置另一离心管中，于35°C水浴中氮气流下挥干。 残留物以流动相ΙΟΟμ 1溶解，20 μ 1进样。数据处理所得大鼠血药浓度数据用中国药理学会数学药理委员会编写的3Ρ87 药动学程序进行处理。用进行处理，求得各处方药代动力学参数。结果紫杉醇注射液、市售紫杉醇普通脂质体、紫杉醇长循环脂质体血药浓度曲线 均符合二室模型，t1/20 分别为 1. 685h，1. 882h 和 17. 829h，AUCch48 分别为 123. 84，168. 598 和 1028. 896μ g · h/ml。结果见图 5。结论紫杉醇长循环脂质体的大鼠体内药动学行为有明显的改变，与市售紫杉醇 注射液、普通脂质体相比，消除半衰期、血中的循环时间均有不同程度的延长，AUC增加，具 有明显的长循环特性。试验例4新型紫杉醇长循环脂质体脂质体组合物的药效学试验试验动物采用C57BL/6黑小鼠，雄性，体重19_22g，随机分组，每组10只。分组及给药情况如下
(1)对照组空白脂质体；(2)紫杉醇注射液(泰素，百时美施贵宝，规格30mg/5ml)；(3)紫杉醇普通脂质体给药组注射用紫杉醇脂质体(力扑素，南京思科药业有限 公司，规格30mg/瓶)；(4)紫杉醇长循环脂质体给药组实施例1制备的紫杉醇长循环脂质体组合物 (规格15mg/瓶)试验方法取B16黑色素瘤源，采用勻浆法，以生理盐水1 6制备成瘤细胞悬液，右腋皮下 接种B16黑色素瘤，肿瘤接种后24h，小鼠尾静脉注射给药，观察即时反应及体重变化。试验 结束后，剖取肿瘤称重，按下式计算肿瘤抑制率。肿瘤抑制率(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤 重X100%。试验结果见表5，由表可见，新型紫杉醇脂质体的抑瘤率明显高于紫杉醇普通 脂质体和紫杉醇注射液。表5新型紫杉醇长循环脂质体的药效学试验 可见实施例1制备的紫杉醇长循环脂质体组合物抑瘤率明显提高。
权利要求
一种长循环脂质体组合物，包括由磷脂和胆固醇构成的成膜材料，负电性材料和长循环材料，其特征在于所采用的负电性材料为维生素E琥珀酯、胆固醇琥珀酯、脱氧胆酸钠、胆固醇硫酸钠中的一种或多种；所采用的长循环材料为维生素E聚乙二醇琥珀酸酯，其分子结构中聚乙二醇的分子量范围为500 5000；所述磷脂、胆固醇、负电性材料、长循环材料的摩尔比为100∶10 50∶0.1 10∶2 10。
2.根据权利要求1所述的长循环脂质体组合物，其特征在于所采用的负电性材料为 维生素E琥珀酯；所采用维生素E聚乙二醇琥珀酸酯，其分子结构中聚乙二醇的分子量为 2000。
3.根据权利要求1或2所述的长循环脂质体组合物，其特征在于所述的磷脂为不饱 和磷脂或饱和磷脂或其混合物；其中所述的不饱和磷脂为大豆磷脂或蛋黄卵磷脂或其混合 物；所述的饱和磷脂为氢化大豆磷脂或氢化蛋黄磷脂或脂肪酸链的碳原子数为14-18的饱 和磷脂或其混合物。
4.根据权利要求3所述的长循环脂质体组合物，其特征在于所述的脂肪酸链的碳原 子数为14-18的饱和磷脂为二棕榈酰磷脂胆碱或二硬脂酰磷脂酰胆碱。
5.根据权利要求1所述的长循环脂质体组合物，其特征在于所述脂质体组合物 内还含有抗氧化剂和冻干保护剂，其中抗氧化剂选自维生素E，其与磷脂的摩尔比为 0.1-2 100，冻干保护剂选自蔗糖、海藻糖、乳糖中的一种或多种，其用量为磷脂重量的1-8倍。
6.如权利要求1所述长循环脂质体组合物的用途是作为载体制备包裹活性成分的药 物，所述的活性成分为抗肿瘤药物，包括紫杉醇或多烯紫杉醇或10-羟基喜树碱。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于包裹的活性物质为紫杉醇时，紫杉醇与磷 脂的摩尔比为1_5 100。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于所述紫杉醇与磷脂的摩尔比为2-5 100。
9.将长循环脂质体组合物作为载体制备包裹活性成分的冻干剂的方法，包括薄膜分 散，高压均质，无菌过滤，冷冻干燥法的步骤，其具体步骤如下将活性物质、磷脂、胆固醇、负电性材料、长循环材料及抗氧化剂溶解于无水乙醇中，于 30-50°C的水浴条件下减压旋转蒸发成膜，真空干燥，充分抽去无水乙醇；加入冻干保护剂水溶液，50-55°C的水浴条件下水化；高压均质或用微孔膜挤出的方式 制备平均粒径80nm-300nm的脂质体；采用0. 22 y m的聚偏氟乙烯膜无菌过滤； 分装于容器中中，冷冻干燥后通入惰性气体，压盖即得。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于高压均质或用微孔膜挤出的方式制 备的脂质体的平均粒径为lOOnm。全文摘要
本发明涉及一种新型的长循环脂质体组合物及其应用方法，主要采用磷脂、胆固醇、负电性材料、长循环材料作为主要原料，其中特别采用了维生素E琥珀酸酯或胆固醇琥珀酸酯为负电性材料，维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)作为长循环材料，提高了该长循环脂质体组合物与药物结合的稳定性，可作为抗肿瘤药物紫杉醇、多烯紫杉醇、10-羟基喜树碱的载体，同时其耐受性提高，作为药物载体时，其所载药物在体内的循环时间明显长于市售的各种载体，且成本较低，适合于广泛的推广应用。
文档编号A61K9/127GK101889982SQ201010147030
公开日2010年11月24日 申请日期2010年4月15日 优先权日2010年4月15日
发明者刘善奎, 李铁军, 甄天民, 钟延强 申请人:山东京卫制药有限公司