专利名称：一种靶向于miR-122的小分子化合物的制作方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，涉及药物设计方面。
背景技术：
MicroRNA (微小核糖核酸)是一种长度为18 25核苷酸单链的内源性非编码性小RNA。它主要通过与靶标基因3'非翻译区的完全或不完全配对，抑制其翻译，从而参与调控个体发育、细胞凋亡、增殖及分化等生命活动。在病理条件下，microRNA可通过调控其靶标基因及其参与的信号通路，影响肿瘤的发生和发展，发挥着类似于癌基因或抑癌基因的功能。实验表明在很多肿瘤中，一些类型的microRNA是高表达的，这些高表达的 microRNA与肿瘤的侵入性、转移性等有一定的相关性。这些microRNA为肿瘤诊断和治疗提供了新的策略。目前抑制microRNA功能的普遍方法是采用反义抑制的原理。实验证明，与成熟体microRNA完全互补或与前体microRNA—些区域互补的经过修饰的RNA可以有效的抑制 microRNA功能。一些体内实验证明，这种抑制RNA通过体内注射也有效果。因此具有一定的临床应用价值。然而，反义抑制方法存在体内给药困难的问题。目前的各种向体内运送RNA方法， 包括化学转染试剂以及病毒载体等，都存在效率和安全性问题，因此一直无法达到临床应用的要求。而传统的小分子化合物药物则在给药方面存在明显的优势，或注射或口服，简单有效。因此我们认为小分子化合物抑制剂将比传统的反义抑制RNA更有潜力成为靶向 microRNA的药物。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有抑制肿瘤细胞生长或诱导肿瘤细胞凋亡活性的化合物。本发明的第一方面,提供了一种 l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethano 1 chloride的用途，用于制备治疗肿瘤、抑制肿瘤细胞生长、和/或诱导肿瘤细胞凋亡的化合物。在另一优选例中，所述的致凋亡化疗药物包括肿瘤坏死因子，更佳地为人TNFa。在另一优选例中，所述的肿瘤或肿瘤细胞是表达名为mir-122的microRNA的肿瘤或肿瘤细胞。较佳地，所述的肿瘤选自下组乳腺癌、肺癌、胃癌、细肠癌、前列腺癌、肝癌； 更佳的肿瘤选自下组肺癌。在另一优选例中，提供了 一种 l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride的用途，用于制备人mir-122的特异抑制剂。
图 1 是/]、分子化合物 l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanolchloride的属性图。图 2 是小分子化合物 l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanolchloride 的结构式图。图 3 是小分子化合物 l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanolchloride 的3D结构图。
具体实施例方式本发明人经过广泛而深入的研究，发现部分肿瘤细胞内mir-122的表达往往升高，抑制mir-122的表达和功能可以抑制肿瘤细胞的增殖和体内外的致瘤活性。本发明人运用软件从数万个侯选化合物中筛出了若干个可能会和mir-122结合的小分子化合物，首次得到了一个可以强烈增强TNF-a肺癌细胞系MCF-7增殖抑制作用的化合物1-dibenzofu ran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride。在此基础上完成了本发明。具体而言，本发明人的研究表明，mir-122在肺癌肿瘤组织中的选择性高表达，而在正常肺组织中未见表达，提示mir-122可能与肿瘤发生及生长密切相关。因此本发明的研究表明，抗凋亡作用的分子mir-122在细胞生长调控、细胞凋亡、 肿瘤发生等过程中发挥重要作用。因此，mir-122很可能在临床肿瘤的诊断和治疗中作为潜在的候选靶标。在此基础上，本发明人筛选了大量的化合物，从而获得了一种可能有效抑制肿瘤的小分子化合物，所述的小分子化合物特异性地在蛋白水平靶向抗凋亡分子-mir-122。活性成分l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride /]、分子化合物及其药学上可以接受的盐和活性衍生物。l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride 是一禾中指向 mir-122 的先导化合物。一类特别优选的盐是钠盐或钾盐。实施例1/]、分子化合物 l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride 的蹄选。采用计算机辅助的虚拟方法进行。首先用生物信息学的方法下载mir-122序列并利用计算机软件建立三维结构模型，然后对NCI Diversity Set数据库内140，000个化合物进行筛选，取得具有成药潜能的2000个。然后通过ADT软件处理成AutoDoCk4识别的格式，接着利用AutoGricM和 AutoDock4软件生成栅格及执行分子对接。同时，以mir-122略作改变作为对照，剔除对接结果中非特异性结合的化合物。最后选定一个化合物，即l-dibenz0furan-3-yl-2-piperi din-2-ylethanol chloride。实施例2小分子化合物 l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride 对月中瘤细胞的生长抑制本实施例采用了常规的MTT法，方法如下
先将MCF-7细胞30000个细胞/孔的密度铺96孔板过夜，然后把小分子化合物l_d ibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride 以不同浓度单独与人 TNF_a 联合加入。40小时后每孔加入MTT (5mg/ml) IOul，37度孵育4小时后用150ul 二甲亚枫溶液紫色结晶后放置于酶标仪以570吸光度检测。结果 Il 示，l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride 可以在 5-lOul终浓度显著增强TNF-a对细胞增殖的抑制，而其本身未对细胞造成显著的毒性作用，为本发明专利所申请保护的一种靶向于mir-122的抗肿瘤小分子化合物。
权利要求
1.一禾中 l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride 白勺用途，其特征在于，用于制备治疗肿瘤、抑制肿瘤细胞生长、和/或诱导肿瘤细胞凋亡的化合物。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的肿瘤或肿瘤细胞是表达mir-122的肿瘤或肿瘤细胞。
全文摘要
本发明涉及一种基于生物信息学和计算机技术相结合的抑制剂虚拟筛选平台而筛选出的能够特异地结合上mir-122，并抑制其调控作用的一种小分子化合物。该小分子化合物具有有效性高，特异结合能力强，易于筛选等优点。该化合物将比传统的microRNA反义抑制更有潜力成为靶向于microRNA的抗肿瘤新药。
文档编号A61P35/00GK102266335SQ20101019018
公开日2011年12月7日 申请日期2010年6月1日 优先权日2010年6月1日
发明者曾华宗 申请人:上海聚类生物科技有限公司