专利名称：一种完整肽聚糖磁性脂质体的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种磁性脂质体的制备方法。
背景技术：
近年来，由于微生态学的崛起和医学的快速发展，双歧杆菌的很多重要作用被越 来越多的学者重视和研究起来。其中最引人注意的是双歧杆菌的抗肿瘤作用，普遍认为其 抗肿瘤机理是它可以激活吞噬细胞，提高体细胞免疫功能，抑制肿瘤细胞的产生或分化。研 究显示，双歧杆菌细胞壁制备完整肽聚糖可以导致肿瘤细胞的破坏，此后越来越多的研究 显示，肽聚糖发挥着多种的生物学活性，是双歧杆菌众多益生作用(免疫调节、抗感染、抗 肿瘤活性)的效应物质。完整肽聚糖易被消化酶分解进而活性降低甚至消失，因此采用脂质体进行保护， 但是以这种形式给药存在药物剂量大及对正常组织有损害的问题；文章“双歧杆菌肽聚糖 的提取及其白蛋白磁性微球的制备”中所得白蛋白微球在扫描电镜下观察到微球的直径在 6 μ m左右，微球经过激光粒径分布测量仪测得的平均粒径为5. 32 μ m，可见磁性微球粒径 大，导致静脉注射易堵塞血管，口服不易吸收的问题
发明内容
本发明目的是为了解决现有磁性微球制备技术制备出的磁性微球粒径大，静脉注 射易堵塞血管，口服不易吸收的问题，而提供一种完整肽聚糖磁性脂质体的制备方法。完整肽聚糖磁性脂质体的制备方法按以下步骤实现一、取0. 22 0. 26g的蛋黄 磷脂酰胆碱和0. 05 0. 07g的胆固醇并用18 22ml的氯仿溶解，得混合液；二、将混合 液倒入圆底烧瓶，然后置于50 60°C的水浴中，在真空度为-0. 08 0. IMPa的条件下旋 转蒸发至圆底烧瓶内形成脂质薄膜，再加入0. 18 0. 22ml的磁性纳米颗粒悬液、0. 004 0. 006g的完整肽聚糖和48 52ml的磷酸盐缓冲液，在60°C的条件下水化3h，即完成完整 肽聚糖磁性脂质体的制备；其中磁性纳米颗粒悬液的浓度为26 28mg/ml。本发明中应用磁性脂质体作为完整肽聚糖的载体，可以使抗肿瘤药物肽聚糖具有 控释性和靶向性的重要功能，这些功能使药物可以更好的发挥治疗作用可防止药物在胃酸 条件下分解，减少药物与胃蛋白酶等消化酶的接触，从而提高药物在胃肠中的稳定性，磁性 的载体粒径小又具有粘附性，使被包封的药物可以完好的输送至不同的组织和细胞，有利 于局部用药时增加其滞留性，有利于增加药物与肠壁的接触面积，延长接触时间，提高药物 的生物利用率，达到部位特异性和靶向给药的目的；同时由于对磁场有较好的响应，磁性脂 质体可以应用于药物靶向治疗，利用体外磁场效应引导脂质体选择性的到达并定位于肿瘤 靶区，可以降低用药剂量和对正常组织的损害。本发明中采用薄膜法制备完整肽聚糖磁性脂质体，把完整肽聚糖和磁性纳米颗粒 包埋在脂质体中，形成了完整肽聚糖磁性脂质体体系，降低了对外界环境对完整肽聚糖的 影响，使完整肽聚糖更加稳定，这是肽聚糖发挥其生物学效应的基础，同时使整个体系具有良好的磁响应性；完整肽聚糖磁性脂质体的包埋率为64. 6 65. 5%。本发明中所得完整肽聚糖磁性脂质体的磁性微球粒径为180 200nm，在获得靶 向性的同时更加有利于人体吸收；同时静脉注射不易堵塞血管，口服易吸收，且实现了在有 效保护肽聚糖结构完整的同时使其具有磁靶向性这一技术难题，并且制备工艺简单，具有 广泛的应用前景。
图1为具体实施方式
十六中所得完整肽聚糖磁性脂质体的透射电镜图。
具体实施例方式本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式
，还包括各具体实施方式
间的 任意组合。
具体实施方式
一本实施方式完整肽聚糖磁性脂质体的制备方法按以下步骤实 现一、取0. 22 0. 26g的蛋黄磷脂酰胆碱和0. 05 0. 07g的胆固醇并用18 22ml的 氯仿溶解，得混合液；二、将混合液倒入圆底烧瓶，然后置于50 60°C的 水浴中，在真空度 为-0. 08 0. IMPa的条件下旋转蒸发至圆底烧瓶内形成脂质薄膜，再加入0. 18 0. 22ml 的磁性纳米颗粒悬液、0. 004 0. 006g的完整肽聚糖和48 52ml的磷酸盐缓冲液，在60°C 的条件下水化3h，即完成完整肽聚糖磁性脂质体的制备；其中磁性纳米颗粒悬液的浓度为 26 28mg/ml。
具体实施方式
二 本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤一中取0. 22g的蛋 黄磷脂酰胆碱和0. 07g的胆固醇并用18ml的氯仿溶解，得混合液。其它步骤及参数与具体 实施方式一相同。
具体实施方式
三本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤一中取0. 26g的蛋 黄磷脂酰胆碱和0. 05g的胆固醇并用22ml的氯仿溶解，得混合液。其它步骤及参数与具体 实施方式一相同。
具体实施方式
四本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤一中取0.23 0. 25g的蛋黄磷脂酰胆碱和0. 04 0. 06g的胆固醇并用19 21ml的氯仿溶解，得混合液。 其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
五本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤一中取0. 24g的蛋 黄磷脂酰胆碱和0. 06g的胆固醇并用20ml的氯仿溶解，得混合液。其它步骤及参数与具体 实施方式一相同。
具体实施方式
六本实施方式与具体实施方式
一至五之一不同的是步骤二中置于 50°C的水浴中，在真空度为-0. IMPa的条件下旋转蒸发。其它步骤及参数与具体实施方式
一至五之一相同。
具体实施方式
七本实施方式与具体实施方式
一至五之一不同的是步骤二中置于 60°C的水浴中，在真空度为-0. OSMPa的条件下旋转蒸发。其它步骤及参数与具体实施方式
一至五之一相同。
具体实施方式
八本实施方式与具体实施方式
一至五之一不同的是步骤二中置于 55°C的水浴中，在真空度为-0. 09MPa的条件下旋转蒸发。其它步骤及参数与具体实施方式
一至五之一相同。
具体实施方式
九本实施方式与具体实施方式
一至七之一不同的是步骤二中再加 入0. 18ml的磁性纳米颗粒悬液、0. 006g的完整肽聚糖和52ml的磷酸盐缓冲液。其它步骤 及参数与具体实施方式
一至七之一相同。
具体实施方式
十本实施方式与具体实施方式
一至七之一不同的是步骤二中再加 入0. 22ml的磁性纳米颗粒悬液、0. 004g的完整肽聚糖和48ml的磷酸盐缓冲液。其它步骤 及参数与具体实施方式
一至七之一相同。
具体实施方式
十一本实施方式与具体实施方式
一至七之一不同的是步骤二中再 加入0. 2ml的磁性纳米颗粒悬液、0. 005g的完整肽聚糖和50ml的磷酸盐缓冲液。其它步骤 及参数与具体实施方式
一至七之一相同。
具体实施方式
十二 本实施方式与具体实施方式
一至十一之一不同的是步骤二中 磷酸盐缓冲液为每IOOOml由8g氯化钠，0. 2g氯化钾，1. 44g磷酸氢二钠、0. 24g磷酸二氢钾 和余量的蒸馏水组成，PH值为7. 2。其它步骤及参数与具体实施方式
一至十一之一相同。
具体实施方式
十三本实施方式与具体实施方式
一至十二之一不同的是步骤二中 完整肽聚糖提取于两歧双歧杆菌，购买自东北农业大学乳品教育部重点实验室菌种库，菌 种编号为2. 9502。其它步骤及参数与具体实施方式
一至十二之一相同。
具体实施方式
十四本实施方式与具体实施方式
一至十三之一不同的是步骤二中 磁性纳米颗粒悬液的主要成分是Fe3O4，对磁场有良好的响应性，Fe3O4的粒径为20nm。其它 步骤及参数与具体实施方式
一至十三之一相同。
具体实施方式
十五本实施方式完整肽聚糖磁性脂质体的制备方法按以下步骤实 现一、取0. 23g的蛋黄磷脂酰胆碱和0. 06g的胆固醇并用20ml的氯仿溶解，得混合液；二、 将混合液倒入圆底烧瓶，然后置于50°C的水浴中，在真空度为-0. IMPa的条件下旋转蒸发 至圆底烧瓶内形成脂质薄膜，再加入0. 19ml的磁性纳米颗粒悬液、0. 006g的完整肽聚糖和 48ml的磷酸盐缓冲液，在60°C的条件下水化3h，即完成完整肽聚糖磁性脂质体的制备；其 中磁性纳米颗粒悬液的浓度为28mg/ml。本实施方式所得完整肽聚糖磁性脂质体的包埋率为64.6%，磁性微球粒径为 200nmo具体实施方式
十六本实施方式完整肽聚糖磁性脂质体的制备方法按以下步骤实 现一、取0. 24g的蛋黄磷脂酰胆碱和0. 06g的胆固醇并用20ml的氯仿溶解，得混合液；二、 将混合液倒入圆底烧瓶，然后置于55°C的水浴中，在真空度为-0. 09MPa的条件下旋转蒸发 至圆底烧瓶内形成脂质薄膜，再加入0. 2ml的磁性纳米颗粒悬液、0. 005g的完整肽聚糖和 50ml的磷酸盐缓冲液，在60°C的条件下水化3h，即完成完整肽聚糖磁性脂质体的制备；其 中磁性纳米颗粒悬液的浓度为27mg/ml。本实施方式所得完整肽聚糖磁性脂质体的包埋率为65. 5% ；由图1中可见，磁性微 球粒径为180nm。
权利要求
一种完整肽聚糖磁性脂质体的制备方法，其特征在于完整肽聚糖磁性脂质体的制备方法按以下步骤实现一、取0.22～0.26g的蛋黄磷脂酰胆碱和0.05～0.07g的胆固醇并用18～22ml的氯仿溶解，得混合液；二、将混合液倒入圆底烧瓶，然后置于50～60℃的水浴中，在真空度为-0.08～0.1MPa的条件下旋转蒸发至圆底烧瓶内形成脂质薄膜，再加入0.18～0.22ml的磁性纳米颗粒悬液、0.004～0.006g的完整肽聚糖和48～52ml的磷酸盐缓冲液，在60℃的条件下水化3h，即完成完整肽聚糖磁性脂质体的制备；其中磁性纳米颗粒悬液的浓度为26～28mg/ml。
2.根据权利要求1所述的一种完整肽聚糖磁性脂质体的制备方法，其特征在于步骤一 中取0. 23 0. 25g的蛋黄磷脂酰胆碱和0. 04 0. 06g的胆固醇并用19 21ml的氯仿溶 解，得混合液。
3.根据权利要求1所述的一种完整肽聚糖磁性脂质体的制备方法，其特征在于步骤一 中取0. 24g的蛋黄磷脂酰胆碱和0. 06g的胆固醇并用20ml的氯仿溶解，得混合液。
4.根据权利要求1所述的一种完整肽聚糖磁性脂质体的制备方法，其特征在于步骤二 中置于55°C的水浴中，在真空度为-0. 09MPa的条件下旋转蒸发。
5.根据权利要求1所述的一种完整肽聚糖磁性脂质体的制备方法，其特征在于步骤二 中再加入0. 2ml的磁性纳米颗粒悬液、0. 005g的完整肽聚糖和50ml的磷酸盐缓冲液。
6.根据权利要求1所述的一种完整肽聚糖磁性脂质体的制备方法，其特征在于步骤二 中磷酸盐缓冲液为每IOOOml由8g氯化钠，0. 2g氯化钾，1. 44g磷酸氢二钠、0. 24g磷酸二氢 钾和余量的蒸馏水组成，PH值为7. 2。
7.根据权利要求1所述的一种完整肽聚糖磁性脂质体的制备方法，其特征在于步骤二 中完整肽聚糖提取于两歧双歧杆菌，购买自东北农业大学乳品教育部重点实验室菌种库， 菌种编号为2. 9502。
8.根据权利要求1所述的一种完整肽聚糖磁性脂质体的制备方法，其特征在于步骤二 中磁性纳米颗粒悬液的主要成分是Fe3O4，对磁场有良好的响应性，Fe3O4的粒径为20nm。
全文摘要
一种完整肽聚糖磁性脂质体的制备方法，它涉及一种磁性脂质体的制备方法。它解决了现有磁性微球制备技术制备出的磁性微球粒径大，静脉注射易堵塞血管，口服不易吸收的问题。方法1.取蛋黄磷脂酰胆碱和胆固醇并用氯仿溶解，得混合液；2.混合液置于水浴中旋转蒸发至形成脂质薄膜，再加入磁性纳米颗粒悬液、完整肽聚糖和磷酸盐缓冲液，水化后即完成完整肽聚糖磁性脂质体的制备。本发明中完整肽聚糖磁性脂质体的包埋率为64.6～65.5%，磁性微球粒径为180～200nm，在获得靶向性的同时更加有利于人体吸收；同时静脉注射不易堵塞血管，口服易吸收，在有效保护肽聚糖结构完整的同时使其具有磁靶向性这一技术难题，且制备工艺简单。
文档编号A61K47/02GK101843585SQ20101020589
公开日2010年9月29日 申请日期2010年6月22日 优先权日2010年6月22日
发明者刘宁, 孙盟璐, 江虹锐 申请人:东北农业大学