专利名称：一种西洋参药材指纹图谱的测定方法
技术领域：
本发明涉及一种西洋参药材指纹图谱的测定方法，属于药物分析技术领域。
背景技术：
西洋参(Panax quinquefolium L)，为五加科人参属植物，俗名美国人参、花旗参、 洋参、广东参，原产于北美洲加拿大的蒙特利尔、魁北克和美国东部。药用部分为干燥的根， 味苦，性凉，入心、肺、肾经。功能以补益为主，有滋阴生津、凝神益智功效。早在清康熙33 年《补图本草备要》和清乾隆30年《本草纲要拾遗》中已有西洋参药性的记载。我国应用西洋参已有近300年的历史，20世纪70年代后期，在我国和日本引种栽培成功，吉林、黑龙江、北京、山东、陕西等地均有栽培贾继明，吴立军，吴以岭.西洋参与糖尿病.中医药信息，2007，24 (6) :35-38。由于西洋参产地繁多，质量控制对于中药成品质量的影响显著，中药材指纹图谱是在中医药基础理论指导下，针对中药材的品种和质量，在现有认知水平基础上，以整体信息和药效指标为依据，采用多种分析方法和技术，建立的客观、整体和多指标的综合评价体系。中药材指纹图谱的建立，将对中药的规范化、标准化、产业化和国际化提供科学的技术平台，对中药现代化的战略行动具有科学的指导意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种西洋参指纹图谱的测定方法。本发明所述指纹图谱的测定方法是采用高效液相色谱法测定其指纹图谱，其检测设备为蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)。本发明所述指纹图谱的测定方法高效液相的色谱条件优选为色谱柱为C18柱；流动相流动相A为乙腈，流动相B为0. 05%醋酸水溶液，梯度洗脱。本发明所述指纹图谱的测定方法高效液相的色谱条件中梯度洗脱的流动相梯度优选如下0 — 20分钟，流动相A由80 %勻速降至79 %，20 — 25分钟，流动相A由79 %勻速降至74 %，25 —四分钟，流动相A由74 %勻速降至73 %，四一43分钟，流动相A由73 % 勻速降至66 %，43 — 47分钟，流动相A由66 %勻速降至64%，47 — M分钟，流动相A由 64%勻速降至57% — 55分钟，流动相A由57%勻速降至55%，55 — 59分钟，流动相A 由55%勻速降至50%，59 — 65分钟，流动相A由50%勻速降至5%，65 — 69分钟，流动相 A保持5%。本发明所述指纹图谱的测定方法中对供试品溶液的配制方法如下供试品溶液称取过40目筛的药材10. 0g，用100.0ml 70%甲醇溶液超声提取 30min，过滤，滤液减压浓缩蒸去甲醇后用水定容到20. Oml0加入6. Oml石油醚萃取，脱脂， 重复萃取3次；萃取后水层加入6. Oml水饱和正丁醇萃取其中的目标成分，重复萃取3次；正丁醇萃取液减压浓缩至干，用甲醇定容到10.0ml，0. 45μπι滤膜滤过，即得；本发明所述指纹图谱的测定方法的色谱条件更优选如下流动相流动相A为乙腈，流动相B为0. 05%醋酸水溶液，梯度洗脱；洗脱梯度为0 — 20分钟，流动相A由80%勻速降至79%，20 — 25分钟，流动相A由79%勻速降至 74%，25 —四分钟，流动相A由74%勻速降至73%，29 — 43分钟，流动相A由73%勻速降至66 %，43 — 47分钟，流动相A由66 %勻速降至64 %，47 — M分钟，流动相A由64 % 勻速降至57%，Μ — 55分钟，流动相A由57%勻速降至55%，55 — 59分钟，流动相A由 55%勻速降至50%，59 — 65分钟，流动相A由50%勻速降至5%，65 — 69分钟，流动相A 保持5%。色谱柱为C18，规格为250mmX4. 6mmX5ym ；柱温为35°C ；流速为1. Oml/min ；气体压力为25psi ；雾化器级别为60% ；漂移管温度为60°C。为证实该方法准确可靠，重复性好，能够用于控制西洋参药材的内在质量进行如下方法学验证1仪器与材料1. 1 仪器 AT201 电子天平(瑞士 METTLER-TOLDO)，R205 旋转蒸发仪(德国 BUCHI)， HS1(^60D超声波清洗器(天津市恒奥科技公司)，高效液相色谱仪HPLC，Waters alliance 2695，检测器Waters ELSD 2420。1.2试剂与药品人参皂苷对照品Rbl, Rb2，Re, Rd, Rgl, Re, Rg3，P-Fll由中国国家药品生物制品检定所提供。乙腈(HPLC级，美国Fisher公司)、甲醇(HPLC级，美国Fisher公司)，水为重蒸水，正丁醇(分析纯，天津四友化学试剂有限公司)。HPLC用所有试剂均经过0.45 μ m 微孔滤膜过滤及超声脱气处理。1. 3 药材10个国产西洋参样品于2006年10月分别采集于吉林、辽宁、黑龙江、北京、山东、 陕西等地，均为4年生样品，并购买了加拿大蒙特利尔产西洋参。各样品均经河北省药品检验所鉴定为正品西洋参(Panax quinquefoliumL.)，见表1。表 1 西洋参(Panax quinquefolium L.)药材来源
权利要求
1.一种西洋参药材的指纹图谱测定方法，该方法采用高效液相色谱法测定其指纹图谱，其特征在于采用蒸发光散射检测器检测。
2.根据权利要求1所述测定方法，其特征在于所述高效液相色谱法的色谱条件为 色谱柱为C18柱；流动相流动相A为乙腈，流动相B为0. 05%醋酸水溶液，梯度洗脱。
3.根据权利要求1-2任一项所述的测定方法，其特征在于所述色谱条件中梯度洗脱的流动相梯度如下0 — 20分钟，流动相A由80%勻速降至79%，20 — 25分钟，流动相A由79%勻速降至 74%,25 - 29分钟，流动相A由74%勻速降至73%，29 — 43分钟，流动相A由73%勻速降至66%，43 — 47分钟，流动相A由66%勻速降至64%，47 — M分钟，流动相A由64% 勻速降至57%，54 — 55分钟，流动相A由57%勻速降至55%，55 — 59分钟，流动相A由 55%勻速降至50%，59 — 65分钟，流动相A由50%勻速降至5%，65 — 69分钟，流动相A 保持5%。
4.根据权利要求1-2任一项所述的测定方法，其特征在于对供试品溶液的配制方法如下供试品溶液称取过40目筛的药材10. 0g，用100. Oml 70%甲醇溶液超声提取30min， 过滤，滤液减压浓缩蒸去甲醇后用水定容到20. Oml ；加入6. Oml石油醚萃取，脱脂，重复萃取3次；萃取后水层加入6. Oml水饱和正丁醇萃取其中的目标成分，重复萃取3次；正丁醇萃取液减压浓缩至干，用甲醇定容到10. Oml, 0. 45 μ m滤膜滤过，即得。
5.根据权利要求3所述的测定方法，其特征在于该测定方法的色谱条件如下色谱柱为C18，规格为250mmX4. 6謹Χ5μπι ；柱温为35°C ；流速为1. Oml/min ；气体压力为25psi ；雾化器级别为60% ；漂移管温度为60°C。
全文摘要
本发明提供了一种西洋参指纹图谱的测定方法。西洋参原产于北美洲加拿大的蒙特利尔、魁北克和美国东部，味苦，性凉，入心、肺、肾经，功能以补益为主，有滋阴生津、凝神益智功效。本发明采用高效液相色谱法蒸发光检测器检测的方法进行指纹图谱测定，用于西洋参原料质量控制。
文档编号A61P1/14GK102309531SQ20101021532
公开日2012年1月11日 申请日期2010年7月2日 优先权日2010年7月2日
发明者李叶双, 王宗权, 贾继明 申请人:河北以岭医药研究院有限公司