专利名称：一种抗阿片肽的拮抗肽与该拮抗肽的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及肽段及其编码基因与应用，特别是涉及一种具有拮抗吗啡抗伤害作用 的抗阿片肽及其拮抗肽，与该拮抗肽在制备增强吗啡镇痛、逆转吗啡耐受和/或减弱或消 除戒断症状作用的药物中的应用。
背景技术：
众所周知，在世界范围内猖獗的贩毒吸毒活动已成为危害社会的一个毒瘤，严重 干扰了有序的经济建设和社会安定，此外，静脉吸毒还造成了艾滋病人群感染率的攀升。目 前，各国政府虽都加大联合打击毒品走私的力度，但吸毒、贩毒活动仍屡禁不止，其中一个 重要的原因就是吗啡耐受及依赖的原理尚未真正或完全被阐明，国际上尚无有效的戒毒手 段。国外最先采用的”替代疗法”是在戒毒过程中用美沙酮一类的药代替阿片，这种疗法将 导致病人对美沙酮类药物的耐受和依赖。在国内，宁波戒毒所杨国栋先生采用东莨菪硷配 合其它药物戒毒，也未完全解决心瘾问题。韩济生教授采用针灸治疗仪治疗戒断症状，试图 通过特定频率的电脉冲刺激提高体内内源性阿片的合成来减轻症状，但它的最大缺陷是人 群中针刺镇痛的有效率有限而且持续地针刺也存在耐受问题。近来，石家庄中医药专家王 岩对阿片戒断症状进行辩症施治，采用“金甲丸”治疗戒断综合症，正在经临床进一步检验 和完善。因此，迫切需要一种可从源头上彻底消除吗啡耐受及依赖，以及减弱或消除戒断症 状的戒毒药物。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有拮抗吗啡抗伤害作用的抗阿片肽。本发明所提供的抗阿片肽，命名为99A，是下述氨基酸残基序列之一1)序列表中的 SEQ ID NO 1 ；2)将序列表中SEQ ID NO=I的氨基酸残基序列经过一至十个氨基酸残基的取代、 缺失或添加，具有拮抗吗啡抗伤害作用的多肽。所述取代、缺失或添加的一至十个氨基酸残基可以是非结构域中的氨基酸残基， 其改变不会对该蛋白的功能产生影响。序列表中的SEQ ID NO :1由86个氨基酸残基组成。编码本发明抗阿片肽99A的基因，是下述核苷酸序列之一1)序列表中 SEQ ID NO 11 的 DNA 序列；2)编码序列表中SEQ ID NO 1的DNA序列；3)与序列表中SEQ ID NO 11限定的核苷酸序列具有90%以上同源性且具有拮抗 吗啡抗伤害作用的核苷酸序列；
4)在高严谨条件下可与序列表中的SEQ ID NO 11限定的DNA序列杂交的核苷酸 序列。所述高严谨条 件为用0. IX SSPE (或0. 1XSSC)，0. 1% SDS的溶液，在65°C下杂
交并洗膜。序列表中的SEQ ID NO :11由258个碱基组成，编码具有序列表中SEQ ID NO 1的
氨基酸残基序列的蛋白质。上述抗阿片肽99A的活性片段，可为下述氨基酸残基序列之一1)序列表中的 SEQ ID NO 2 ；2)序列表中的 SEQ ID NO 3 ；3)序列表中的 SEQ ID NO 4 ；4)将序列表中SEQ ID NO :2_4的氨基酸残基序列经过一至十个氨基酸残基的取 代、缺失或添加具有拮抗吗啡抗伤害作用的多肽。所述取代、缺失或添加的一至十个氨基酸残基可以是非结构域中的氨基酸残基， 其改变不会对该蛋白的功能产生影响。序列表中的SEQ ID NO :2由14个氨基酸残基组成，将具有SEQ ID NO 2氨基酸 残基序列的抗阿片肽命名为99A-16 ；序列表中的SEQ ID NO 3由19个氨基酸残基组成，将 具有SEQ ID N0:3氨基酸残基序列的抗阿片肽命名为99A-19 ；序列表中的SEQ ID NO :4由 14个氨基酸残基组成，将具有SEQ ID N0:4氨基酸残基序列的抗阿片肽命名为DBI-16。编码上述抗阿片肽活性片段的基因，是下述核苷酸序列之一1)序列表中 SEQ ID NO 12 的 DNA 序列；2)序列表中 SEQ ID NO 13 的 DNA 序列；3)序列表中 SEQ ID NO 14 的 DNA 序列；4)编码序列表中SEQ ID NO 2~4的DNA序列；5)与序列表中SEQ ID NO :12_14限定的核苷酸序列具有90%以上同源性且具有 拮抗吗啡抗伤害作用中起重要作用的核苷酸序列；6)在高严谨条件下可与序列表中的SEQ ID NO 12-14限定的DNA序列杂交的核 苷酸序列。所述高严谨条件为用0. IX SSPE (或0. 1XSSC)，0. 1% SDS的溶液，在65°C下杂
交并洗膜。序列表中的SEQ ID NO 12由48个碱基组成，编码具有序列表中SEQ ID NO 2的 氨基酸残基序列的蛋白质；序列表中的SEQ ID NO :13由57个碱基组成，编码具有序列表中 SEQ ID NO :3的氨基酸残基序列的蛋白质；序列表中的SEQ ID NO 14由48个碱基组成，编 码具有序列表中SEQ ID NO 4的氨基酸残基序列的蛋白质。上述抗阿片肽99A的拮抗肽也是本发明要保护的，可为下述氨基酸残基序列之1)序列表中的 SEQID NO 5 ；2)序列表中的 SEQID NO 6 ；3)序列表中的 SEQID NO 7 ；4)将序列表中SEQID NO 5~7的氨基酸残基序列经过一至十个氨基酸残基的取代、缺失或添加具有增强吗啡镇痛、逆转吗啡耐受或/和减弱或消除戒断症状作用的多肽。所述取代、缺失或添加的一至十个氨基酸残基可以是非结构域中的氨基酸残基， 其改变不会对该蛋白的功能产生影响。序列表中的SEQ ID NO 5由21个氨基酸残基组成，将具有SEQ ID NO :5氨基酸残 基序列的抗阿片肽的拮抗肽命名为CP-99A-16+5 ；序列表中的SEQ ID NO 6由19个氨基酸 残基组成，将具有SEQ ID N0:6氨基酸残基序列的抗阿片肽的拮抗肽命名为CP-99A-19;序 列表中的SEQ ID NO :7由19个氨基酸残基组成，将具有SEQ ID NO :7氨基酸残基序列的抗 阿片肽的拮抗肽命名为CP-DBI-16+5。编码本发明抗阿片肽99A拮抗肽的基因，是下述核苷酸序列之一1)序列表中SEQ ID NO 8的DNA序列；2)序列表中SEQ ID NO 9的DNA序列；3)序列表中 SEQ ID NO 10 的 DNA 序列；4)编码序列表中SEQ ID NO :5_7的DNA序列；5)与序列表中SEQ ID NO :8_10限定的核苷酸序列具有90%以上同源性且在增强 吗啡镇痛、逆转吗啡耐受或/和减弱或消除戒断症状中起重要作用的核苷酸序列；6)在高严谨条件下可与序列表中的SEQ ID NO :8_10限定的DNA序列杂交的核苷 酸序列。所述高严谨条件为用0. IX SSPE (或0. 1XSSC)，0. 1% SDS的溶液，在65°C下杂
交并洗膜。序列表中的SEQ ID NO 8由63个碱基组成，编码具有序列表中SEQ ID NO 5的 氨基酸残基序列的蛋白质；序列表中的SEQ ID NO 9由57个碱基组成，编码具有序列表中 SEQ ID NO :6的氨基酸残基序列的蛋白质；序列表中的SEQ ID NO 10由63个碱基组成，编 码具有序列表中SEQ ID NO 7的氨基酸残基序列的蛋白质。含有上述抗阿片肽99A的拮抗肽基因的表达载体、转基因细胞系和宿主菌以及扩 增该基因中任一片段的引物也属于本发明的保护范围。上述抗阿片肽99A的拮抗肽可采用常规的人工合成方法直接获得，如可用fmoc保 护的固相合成法等方法人工合成，或可委托美联(西安)生物科技有限公司或上海闪晶生 物多肽合成有限公司等生物公司合成，此外，也可用利用微生物发酵表达的方法获得。本发明还提供了一种表达上述抗阿片肽99A的拮抗肽的方法。本发明所提供的表达上述拮抗肽的方法，是将含有上述抗阿片肽99A的拮抗肽基 因的重组表达载体导入宿主细胞，表达得到抗阿片肽99A的拮抗肽。所述宿主可为大肠杆菌、酵母菌、哺乳动物细胞、昆虫细胞或枯草杆菌等，优选为 大肠杆菌。所述大肠杆菌可为E. coli BL21(DE3)、E. coli DH5 α 或 Ε. coli ToplO 等。用于构建所述含有抗阿片肽99A的拮抗肽基因的表达载体的出发载体可为任 意一种可在大肠杆菌中表达外源基因的原核表达载体，如pET-22b、pET- 11c、pET_30a、 pET-28a、pET-28b 或 pET_28c 等。以pET_22b为出发载体，构建的含有抗阿片肽99A的拮抗肽基因的表达载体为 PET-CP-99A-16、pET-CP_99A_19 或 pET_CP-DBI_16。
上述重组表达载体均可按照常规方法构建。将上述重组表达载体转化宿主菌的方法可为生物工程领域中常用的转化方法，如 热激法、电转化法、接合转化法或PEG介导的原生质体转化法等。培养含有抗阿片肽21Kd的拮抗肽基因的宿主细胞的培养基和培养条件，均可为 培养出发宿主的培养基和培养条件。其中，培养所述重组大肠杆菌宿主时需加入诱导剂， 如IPTG等，所加入IPTG的浓度可为0. 1-1. Ommol/L,优选为0. 2mmol/L,诱导温度可为 14-37°C，优选为30°C，诱导时间可为2-4小时，优选为3小时。本发明的另一个目的是提供一种增强吗啡镇痛、逆转吗啡耐受或/和减弱或消除 戒断症状的药物。本发明所提供的药物的活性成分为上述抗阿片肽99A的拮抗肽；其中，所述抗阿 片肽的拮抗肽选自以下氨基酸残基序列之一1)序列表中的 SEQ ID NO 5 ；2)序列表中的 SEQ ID NO 6 ；3)序列表中的 SEQ ID NO 7 ；4)将序列表中SEQ ID NO :5_7的氨基酸残基序列经过一至十个氨基酸残基的取 代、缺失或添加具有增强吗啡镇痛、逆转吗啡耐受或/和减弱或消除戒断症状作用的多肽。所述取代、缺失或添加的一至十个氨基酸残基可以是非结构域中的氨基酸残基， 其改变不会对该蛋白的功能产生影响。需要的时候，在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的辅料，所述辅 料包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、吸收促进剂、表面活性剂、 润滑剂和稳定剂等。本发明的药物可以制成注射液、干粉针剂、片剂或粒剂等多种形式。上述各种剂型 的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。上述药物的成人用量一般为0. 01-0. 5mg/kg体重/次，可以一次或多次使用，疗程 一般为10至20天。本发明提供从猪脑中分离纯化出一种抗阿片肽99A及其活性片段，它具有拮抗吗 啡抗伤害作用，吸毒过程伴随着毒品剂量的增加可促使该蛋白的合成增加，导致吗啡耐受 及依赖的形成。本发明是利用蛋白质分子之间存在相互作用的原理，依照三个活性片段的 序列，设计出了它们的拮抗肽。由于这些拮抗肽的分子量小于2000道尔顿，较容易通过血 脑屏障，在中枢神经系统的相关部位起到抵消内源性抗阿片肽效应的作用。实验证明人工 合成的拮抗肽可作为内源性抗阿片肽的抑制剂，通过静脉注射三个活性片段的拮抗肽，可 达到增强吗啡镇痛、逆转吗啡耐受和减弱或消除戒断症状作用。该药物具有以下优点1) 疗效显著活性成分拮抗肽是通过消除吸毒者体内多余的内源性抗阿片肽及其效应来达到 增强吗啡镇痛、逆转吗啡耐受和消除或减弱吸毒者戒断症状的目的，可从源头上消除戒断 症状；2)获得的拮抗肽都是一些氨基酸残基残基数量不超过25个的短肽，容易合成，便于 开发研究；幻这些短肽进入体内容易被降解，不具备产生抗体的副作用，安全性高；4)用药 方便，可通过静脉注射方式或舌下含片等多种方式给药，以消除或减弱吗啡戒断的症状；本 发明的抗阿片肽99A活性片段的拮抗肽将在医学及戒毒药物领域发挥重要作用，应用前景 广阔。
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下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。
图1为检测狗脑提取物对电脉冲引起小鼠输精管收缩效应的影响图2为检测侧脑室内注入狗脑粗提物(A0Q对大鼠针刺镇痛效应的影响图3A和图;3B为抗阿片肽99A对吗啡抗伤害作用的抑制效应的检测结果图4为吗啡耐受小鼠侧脑室内注入抗阿片肽99A的抗血清使对吗啡的耐受被逆转 的检测结果。图5为免疫组化检测小鼠脑片上抗阿片肽99A免疫阳性部位图6为在大鼠缰核微量注射99A对由同侧大脑导水管周围灰质微量注射吗啡所引 起的吗啡抗伤害作用影响的检测结果图 7A-图 7D 为抗阿片活性肽段 99A_14、99A-19、DBI_16 和 DBI-19 对吗啡(20mg/ kgi. P.)抗伤害作用影响的检测结果图8A和图8B为99A_14、99A_19和DBI-16拮抗吗啡抗伤害作用及DBI-19增强吗 啡抗伤害作用分别通过不同类型受体介导的鉴定结果图9为NMDA受体和NOS在抗阿片肽99A及其活性片段拮抗吗啡抗伤害作用中的 影响的检测结果图IOA-图IOC为拮抗肽CP-99A-16、CP-99A-19和CP-DBI-16对吗啡抗伤害作用 影响的检测结果
具体实施例方式下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法，具体步骤可参见 《Molecular Cloning :A Laboratory Manual》(Sambrook，J. ,Russell,DavidW.，Molecular Cloning :A Laboratory Manual,3rd edition，2001，NY，Cold SpringHarbor)。所用引物及DNA序列均由上海生工生物工程有限公司合成。下述实施例中所用实验小鼠均为8-10周龄、体重20_22g的雄性昆明小鼠(购自 科学院动物所)实施例1、抗阿片肽99A的获得及其功能验证一、猪脑抗阿片肽99A的获得及其剂量依赖效应检测1、抗阿片肽的发现在离体的小鼠输精管标本，给以方波脉冲(0. IMS波宽，1次/秒)刺激 可引起收缩(具体方法参见文献J. Hughes et al (1975) Effect of morphine on adrenergictransmission in the Mouse Vas deferens. Assessment of agonist and antagonistpotencies of Narcotic analgesics 53, 371-381),然后，先后在灌流液中力卩 入盐酸吗啡(3. 2nM)或狗脑提取物(A0S，200l·! g/mL)(为狗脑提取浓缩液先后经kphadex G-50凝胶(购自Pharmacia公司)过滤，羧甲基-纤维素(CM-C购自H. Reeve-Angel&. Co. Ltd公司)阳离子交换层析后，得到样品)，观察对电刺激小鼠输精管引起收缩效应的影 响。如图1所示(M代表给吗啡，MAP代表给狗脑提取物)，实验发现在狗脑粗提物中，存在 着可增强电刺激小鼠输精管收缩的成分，且该样品的增强收缩效应与吗啡抑制电刺激小鼠输精管收缩的效应恰恰相反，因此，将该狗脑粗提物注入小鼠侧脑室内后，可观察到吗啡的 抗伤害作用被显著地抑制。此外，将上述狗脑粗提物注入针刺镇痛有效大鼠(6只)的侧脑室g/20y 1/ 只)，以生理盐水(Saline)为对照(6只)，10分钟后开始电针诱导，30分钟后每间隔10分 钟观察大鼠对伤害刺激的嘶叫反应。结果如图2所示(I. C. V.代表通过预先埋藏于侧脑室 内的导管微量注射样品，EA代表电针诱导针刺镇痛；横坐标为狗脑粗提物注射后时间，纵 坐标为嘶叫阈的变化)，以生理盐水(Saline)为对照，经针刺诱导后，大鼠出现针刺镇痛效 应；狗脑粗提物注射后，再进行针刺诱导，大鼠的针刺镇痛效应则消失，对照组大鼠的针刺 镇痛效应仍存在，上述实验结果提示脑内存在的抗阿片物质可能是针麻镇痛不全的内在因素。2、猪脑抗阿片肽99A的获得及其剂量依赖效应检测从猪脑中分离纯化抗阿片肽-99A的方法，同样是参考杨树长等人的方法并稍做 改进(杨树长等人(1997)，猪脑抗吗啡镇痛肽的分离纯化及其抗血清对吗啡耐受影响的初 步研究，中国生物化学杂志11卷3期322-326)，具体方法为将新鲜猪全脑在0. InM乙酸中 勻浆提取，将猪脑提取物的浓缩液先后经kphadeX-G50凝胶过滤，S-sepharoseFast Flow 离子交换层析(S-s印harose Fast Flow层析柱购自Wiarmacia公司)分离后，取第1个洗 脱峰的样品，经Q-s印harose Fast Flow离子交换层析^hs印haroseFast Flow层析柱购 自Wmrmacia公司)分离，最后用HPLC纯化，得到经纯化的抗阿片肽物质。检测纯化的抗阿片物质对吗啡的抗伤害作用的效应，方法为在腹腔注入20mg/ kg吗啡后lOmin，将纯化的猪脑抗阿片物质分别经侧脑室或尾静脉途径给小鼠进行注射， 其中，侧脑室的注射剂量分别为0. 5,1. 0,2. 0ηΜ/4μ 1，尾静脉的注射剂量分别为1. 5,3. 0、 5.0mg/kg，以生理盐水(Saline)为对照，然后检测吗啡的抗伤害作用。侧脑室注射组的试 验结果如图3A所示(横坐标表示吗啡注射后时间，纵坐标表示嘶叫阈的变化(％)，n为每 组小鼠数量，i. P.表示腹腔注射，i.e. v.表示侧脑室内注射)，尾静脉注射组的试验结果如 图3B所示，与对照组相比，两组小鼠的吗啡抗伤害作用都显著地被猪脑内抗阿片物质所抑 制，且这种抑制效应与剂量密切相关。将该由猪脑内提取的具有拮抗吗啡抗伤害作用的蛋 白称为抗阿片肽99A(A0P-99A)，对该抗阿片肽进行全序列测定，测序结果表明该抗阿片肽 具有序列表中SEQ ID NO :1的氨基酸残基序列，由86个氨基酸残基组成，该序列与猪肠DBI 的序列一致。编码抗阿片肽99A的基因具有序列表中SEQ ID NO 11的核苷酸序列，由258 个碱基组成。二、抗阿片肽99A与吗啡耐受及依赖关系的检测1、制备抗阿片肽99A的单克隆抗体用步骤一提取并纯化的抗阿片肽99A，按常规方法制备其单克隆抗体(制备方
:J. Μ. Davis, J. Ε. Pennington, A. M Kubler. , J. F. Consiene (1982) Asimple, single-step technique for selecting and cloning hybridomas forproduction of monoclonal antibodies.J Immunol Methods 50 ； 141- ；Teruko Tumura, Heins Buer, Chriatian Birr and Rudiger Pipkom. (1983)Antibodies againstsynthetic peptides as a tool for function analysis of the transforming proteinPP60src Cell 34587-596 Sep. 1983 ；Xi Gou. , Ai Wang. , Xi Li. , Zh. Q. Gou and Y. Zhang (1991) Studies onmonoclonal antibody against recombinant granulocytecolony-stimulating factor. Chinese Medical Sciences Journal (6) 5 :212-214)，但由于抗阿片肽 99A 的分子量约 为10Kd，属于弱抗原，免疫原性较差，因此，在制备抗体前，需要先将其与钥孔槭血蓝蛋白 (KLH)载体偶联作为抗原，然后，对Balb/C小鼠进行免疫(进行2次皮下多点注射免疫，中 间间隔两周)，细胞融合前3天，脾内注射13-20 μ g抗原加强免疫。融合时，在无菌条件下， 取出免疫小鼠的脾细胞与小鼠的SP^1细胞融合，应用半固体培养技术，经筛选、克隆得到能 产生A0P-99A抗体的杂交瘤细胞，最后从收集的腹水中纯化出单克隆抗体。2、抗阿片肽99A与吗啡耐受及依赖关系的检测选取20只健康小鼠，每天三次，皮下注射递增剂量的盐酸吗啡，注射剂量由IOmg/ kg递增至60mg/kg，持续10天形成对吗啡耐受的小鼠。在吗啡耐受及依赖的小鼠，腹腔注射 吗啡(50mg/kg)后，将步骤1获得的含有抗阿片肽99A单克隆抗体的抗血清分别按1 100、 1 IOU 1的比例进行稀释，分别作侧脑室内注射，注射剂量为每只12μ1(约含13mg抗 体)，以非耐受小鼠作空白对照(Blank)，以未注射抗血清的吗啡耐受鼠为对照(Control)， 检测吗啡耐受小鼠侧脑室内注入抗阿片肽99A抗血清对吗啡耐受的逆转作用。检测结果如 图4所示(横坐标为不同实验组，纵坐标为吗啡抗伤害曲线下的面积(单位cm2) ；**代表 与耐受鼠对照组相比P < 0. 05，***代表与耐受鼠对照组相比P < 0. 01)，与耐受鼠对照组 相比，吗啡耐受依抗阿片肽99A抗血清浓度的不同出现不同程度的逆转，与非耐受的空白 对照组相比，侧脑室内注入99A的抗血清(1 1)可完全逆转50毫克/公斤剂量吗啡的耐 受。可见只要抗阿片肽99A抗体的剂量足以与中枢内源性抗阿片肽99A结合，降低抗阿片 肽99A水平，即可使吗啡耐受得以逆转。采用以下两种方式检测抗阿片肽99A的单克隆抗体对Naloxone (10mg/kg)诱发的 戒断效应-跳跃的治疗作用。第一种方式是以递增剂量吗啡给小鼠做皮下注射，每天2次， 持续20天形成对吗啡的耐受及依赖，在最后一次注射吗啡后6-8小时，经侧脑室内注射上 述获得的抗阿片肽99A的单克隆抗体，注射剂量为每只12 μ 1 (约含13 μ g抗体)，然后腹 腔注射阿片拮抗剂Naloxone (10mg/kg)以诱发自发跳跃症状。结果如表1所示，在对照组 (侧脑室内注射12μ1 PBS)，5只小鼠都出现自发跳跃症状；在治疗组，5只小鼠全都未出现 自发跳跃症状，说明抗阿片肽99A的单克隆抗体可消除由阿片拮抗剂Naloxone诱发的自发 跳跃症状。表1抗阿片肽99A的单克隆抗体对Naloxone (10mg/kg)诱发戒断效应-跳跃的治 疗作用的检测结果
权利要求
1.一种抗阿片肽的拮抗肽，其氨基酸残基序列为序列表中的SEQ ID NO :7。
2.编码权利要求1所述的抗阿片肽拮抗肽的基因。
3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于所述基因的核苷酸序列是序列表中的SEQ ID NO :10。
4.含有权利要求2或3所述基因的表达载体。
5.含有权利要求2或3所述基因的转基因细胞系。
6.含有权利要求2或3所述基因的宿主菌。
7.以权利要求1所述的抗阿片肽的拮抗肽为活性成分的增强吗啡镇痛、逆转吗啡耐受 和/或减弱或消除戒断症状作用的药物。
全文摘要
本发明公开了一种抗阿片肽及其拮抗肽与应用。该抗阿片肽是下述氨基酸残基序列之一1)序列表中的SEQ ID NO1；2)将序列表中SEQ ID NO1的氨基酸残基序列经过一至十个氨基酸残基的取代、缺失或添加具有拮抗吗啡抗伤害作用的多肽。其拮抗肽是下述氨基酸残基序列之一1)序列表中的SEQ ID NO5-7；2)将序列表中SEQ ID NO5-7的氨基酸残基序列经过一至十个氨基酸残基的取代、缺失或添加具有增强吗啡镇痛、逆转吗啡耐受和/或减弱或消除戒断症状作用的多肽。本发明的抗阿片肽及其活性片段与拮抗肽将在医学及戒毒药物的制备领域发挥重要作用，应用前景广阔。
文档编号A61P25/36GK102127152SQ20101058114
公开日2011年7月20日 申请日期2007年6月11日 优先权日2007年6月11日
发明者吴才宏, 曲红, 陈玉珍 申请人:北京大学