专利名称：以外泌体为基础的疏水性抗癌药物制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种以外泌体为基础的疏水性抗癌药物制剂，制剂所使用的载体是来源于动物体的外泌体，可以投递所有的疏水性药物，具体提及到阿霉素、阿司匹林、替莫唑胺、紫杉醇等药物的投递。
背景技术：
目前由高通量药物筛选而得的活性物质约有40%是疏水性的。疏水性药物因其在水中溶解度小，药物难以达到治疗所需的最低浓度、难以被机体吸收、生物利用度低，限制了临床应用，且难以实现剂型的多样化。近期的新药开发研究中，有41 %的工作量是为了提高生物利用度和水溶性。增强疏水性药物的溶解性具有十分重要的现实意义和研究价值， 是医药化学亟待解决的问题。将疏水性药物通过某些载体包裹，是对疏水性药物进行增溶的一种行之有效的方法。现在对于疏水性药物的包载主要应用了以下几种载体脂质体，环糊精，表面活性剂胶束，聚合物胶束等，虽然取得了一定的效果，但是生物相容性仍旧是这几种载体无法回避的问题。而作为来源于生物体本身的外泌体可以很好的解决生物相容性的问题。外泌体的分泌最早是由Johnstone等在1987年研究网织红细胞的成熟过程中发现的。在体外培养羊网织红细胞的上清中经过IOOOOOg离心90min后，可以收集到直径60nm 的囊性小泡，小泡中含有网织红细胞成熟过程中放出的胞膜结构。Johnstone等将这些纳米级的囊泡命名为外泌体，并认为外泌体的释放是网织红细胞成熟过程中释放细胞内“多余”膜蛋白的一种调节途径。随后发现有多种细胞能释放这种纳米泡，包括上皮细胞、肥大细胞、成纤维细胞、血小板、肿瘤细胞、抗原提呈细胞、肝细胞以及肠上皮细胞。外泌体的生物产成过程包括内涵体向内出芽生成多囊泡体、多囊泡体跟胞膜融合并将其释放到胞外这两个步骤。外泌体的研究现在主要停留在疾病监测和肿瘤疫苗上，对于其作为药物载体的研究还很少，相关专利还没有。
发明内容
本发明的目的在于提供一种以外泌体为基础的疏水性抗癌药物制剂。本发明的原理是利用外泌体的脂质双分子层存在的疏水区来包载疏水性抗癌药物，从而制备疏水性的抗癌药物制剂。本发明的一种以外泌体为基础的疏水性抗癌药物制剂，药物制剂所使用的载体为外泌体，其来源于动物体的唾液、血液等体液以及细胞培养液；疏水性抗癌药物被载体所包载。所述药物制剂的载体，从动物的体液或者细胞培养液中，通过离心法或者磁珠表面包被抗体的方法或者ExoQuick溶液分离方法，得到细胞分泌的外泌体，并将外泌体加入磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液为原体液或者细胞培养液的1/100-1/10，得到外泌体溶液。
采用本发明的以外泌体为基础的疏水性抗癌药物制剂，将疏水性抗癌药物加入到外泌体溶液中，加入比例为1 10-1000 (g/ml)，药物沉淀于底部，搅拌溶液孵化0. 5-24小时，取上清，得到包载药物的外泌体溶液，再将这种包载药物的外泌体溶液用作药物制剂。这种以外泌体为基础的疏水性抗癌药物制剂，所用载体为外泌体，其来源于动物体本身；疏水性药物被载体所包载。本发明的优点这种以外泌体为基础的疏水性抗癌药物制剂，其生物相容性好，动物体内血液循环时间长，大大提高药物的生物利用率。
图1 外泌体的扫描电镜图。
具体实施例方式下面通过例子对本发明进行进一步的阐述。实施例1 1.取大鼠血液ani，通过离心法制备得到细胞分泌的外泌体，并将外泌体加入 20 μ 1磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液的体积为原血液体积的1/100，得到外泌体溶液。2.将2yg阿霉素药物加入外泌体溶液中，药物与外泌体溶液比例为1 10 (mg/ ml)，药物沉淀于底部，搅拌溶液孵化0. 5小时，取上清，得到包载药物的外泌体溶液，再将这种包载药物的外泌体溶液用作药物制剂。3.将相同量的阿霉素与外泌体包载阿霉素的药物制剂分别注射进大鼠体内，外泌体包载阿霉素的药物制剂的血液循环时间为50小时，阿霉素的血液循环时间为4小时，外泌体包载阿霉素的药物制剂的血液循环时间显著高于阿霉素的血液循环时间。实施例2:1.取大鼠血液ani，通过磁珠表面包被抗体的方法制备得到细胞分泌的外泌体， 并将外泌体加入200 μ 1磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液的体积为原血液体积的1/10，得到外泌体溶液。2.将0.2yg阿霉素药物加入外泌体溶液中，药物与外泌体溶液比例为 1 1000 (mg/ml)，药物沉淀于底部，搅拌溶液孵化M小时，取上清，得到包载药物的外泌体溶液，再将这种包载药物的外泌体溶液用作药物制剂。3.将相同量的阿霉素与外泌体包载阿霉素的药物制剂分别注射进大鼠体内，外泌体包载阿霉素的药物制剂的血液循环时间为50小时，阿霉素的血液循环时间为4小时，外泌体包载阿霉素的药物制剂的血液循环时间显著高于阿霉素的血液循环时间。实施例3 1.取大鼠血液anl，通过ExoQuick溶液制备得到细胞分泌的外泌体，并将外泌体加入100 μ 1磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液的体积为原血液体积的1/20，得到外泌体溶液。2.将1 μ g阿霉素药物加入外泌体溶液中，药物与外泌体溶液比例为1 100 (mg/ ml)，药物沉淀于底部，搅拌溶液孵化12小时，取上清，得到包载药物的外泌体溶液，再将这种包载药物的外泌体溶液用作药物制剂。3.将相同量的阿霉素与外泌体包载阿霉素的药物制剂分别注射进大鼠体内，外泌体包载阿霉素的药物制剂的血液循环时间为50小时，阿霉素的血液循环时间为4小时，外泌体包载阿霉素的药物制剂的血液循环时间显著高于阿霉素的血液循环时间。实施例4 1.取大鼠血液anl，通过ExoQuick溶液制备得到细胞分泌的外泌体，并将外泌体加入100 μ 1磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液的体积为原血液体积的1/20，得到外泌体溶液。2.将IOyg阿司匹林药物加入外泌体溶液中，药物与外泌体溶液比例为 1 10 (mg/ml)，药物沉淀于底部，搅拌溶液孵化0.5小时，取上清，得到包载药物的外泌体溶液，再将这种包载药物的外泌体溶液用作药物制剂。3.将相同量的阿司匹林与外泌体包载阿司匹林的药物制剂分别注射进大鼠体内， 外泌体包载阿司匹林的药物制剂的血液循环时间为46小时，阿司匹林的血液循环时间为 5小时，外泌体包载阿司匹林的药物制剂的血液循环时间显著高于阿司匹林的血液循环时间。实施例5:1.取大鼠血液anl，通过ExoQuick溶液制备得到细胞分泌的外泌体，并将外泌体加入100 μ 1磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液的体积为原血液体积的1/20，得到外泌体溶液。2.将IOyg替莫唑胺药物加入外泌体溶液中，药物与外泌体溶液比例为 1 10 (mg/ml)，药物沉淀于底部，搅拌溶液孵化M小时，取上清，得到包载药物的外泌体溶液，再将这种包载药物的外泌体溶液用作药物制剂。3.将相同量的替莫唑胺与外泌体包载替莫唑胺的药物制剂分别注射进大鼠体内， 外泌体包载替莫唑胺的药物制剂的血液循环时间为40小时，替莫唑胺的血液循环时间为 6小时，外泌体包载替莫唑胺的药物制剂的血液循环时间显著高于替莫唑胺的血液循环时间。实施例6 1.取大鼠血液anl，通过ExoQuick溶液制备得到细胞分泌的外泌体，并将外泌体加入100 μ 1磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液的体积为原血液体积的1/20，得到外泌体溶液。2.将10 μ g紫杉醇药物加入外泌体溶液中，药物与外泌体溶液比例为1 10 (mg/ ml)，药物沉淀于底部，搅拌溶液孵化12小时，取上清，得到包载药物的外泌体溶液，再将这种包载药物的外泌体溶液用作药物制剂。3.将相同量的紫杉醇与外泌体包载紫杉醇的药物制剂分别注射进大鼠体内，外泌体包载紫杉醇的药物制剂的血液循环时间为42小时，紫杉醇的血液循环时间为4. 8小时， 外泌体包载紫杉醇的药物制剂的血液循环时间显著高于紫杉醇的血液循环时间。
权利要求
1.一种以外泌体为基础的疏水性抗癌药物制剂，其特征在于药物制剂采用载体负载药物的形式，制剂所使用的载体为外泌体，其来源于包括动物体的唾液、血液的体液以及细胞的培养液中。
2.如权利要求1所述药物制剂，其特征在于所述载药包括阿霉素、阿司匹林、替莫唑胺、紫杉醇、柔红霉素、秋水仙碱或长春新碱的所有的疏水性抗癌药物。
3.如权利要求1所述药物制剂，其特征在于所述载体是从动物的体液或者细胞培养液中，通过离心法或者磁珠表面包被抗体的方法或者ExoQuick溶液分离方法，得到细胞分泌的外泌体，并将外泌体加入磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液为原体液或者细胞培养液的 1/100-1/10，得到外泌体溶液。
4.如权利要求1或者2所述药物制剂，其特征在于将疏水性抗癌药物加入到外泌体溶液中，加入比例为1 10-1000 (mg/ml)，药物沉淀于底部，搅拌溶液孵化0.5-M小时，取上清，得到包载药物的外泌体溶液，再将这种包载药物的外泌体溶液用作药物制剂。。
全文摘要
本发明涉及一种以外泌体为基础的疏水性抗癌药物制剂。本发明的药物制剂所使用的载体是外泌体，其来源于动物体的唾液、血液等体液以及细胞培养液。外泌体来源于动物体本身，生物相容性毋容置疑，同时具有类似于细胞膜的脂质双分子层，具有包载疏水性抗癌药物的能力。本发明的药物制剂所使用的载体，其粒径均一，大约在100nm左右，同时来源于动物体本身，利于载体在动物体内的长循环，从而大大提高药物的生物利用率。图为外泌体的扫描电镜图片。
文档编号A61P35/00GK102349998SQ201110321620
公开日2012年2月15日 申请日期2011年10月20日 优先权日2011年10月20日
发明者亓洪昭, 原续波, 柳朝永, 钱小敏 申请人:天津大学