专利名称：一种含有蟾酥脂溶物的缓释微球及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种蟾酥缓释制剂，具体涉及一种含有蟾酥脂溶物的缓释微球及其制备方法与应用。
背景技术：
蟾酥Venenum Bufoni S，又名蟾蜍眉脂(《药性论》)、蟾蜍眉酥(《日华子本草》)， 为蟾蜍科动物中华大蟾蜍或黑眶蟾蜍等的耳后腺及皮肤腺分泌的白色浆液，经加工干燥而成，其性味甘辛、温，有毒，具有解毒、消肿、醒神、开鸾、强心和止痛等作用，在临床上被广泛应用于治疗多种癌症、结核病、心脏病、恶性血液病、周期性面神经麻痹、急性咽炎和慢性乙肝等感染病，还可以用于局部麻醉等。现代药理学研究表明，蟾酥具有抑制肿瘤细胞增生、 强心、镇痛、兴奋呼吸等生物活性。
蟾酥的主要化学成分有蟾蜍留类、吲哚碱类、醇类及多糖、氨基酸、肽类等。蟾酥甾类为脂溶性成分，约占蟾酥的20-25%。留类中已分离鉴定的蟾蜍二烯内酯类化合物 (Bufadienolides)逾40种，包括蟾毒灵(bufalin)、蟾毒它灵(bufotalin)、华蟾毒它灵 (cinobufotalin)、日蟾毒它灵(gamabufotalin)、脂蟾毒配基(resibufogenin)、华蟾毒配基(cinobufagin)、沙蟾毒精(arenobufagin)等,被认为是蟾酥的主要药效成分。
临床上应用的蟾酥注射液、活心丸、救心丸、安替可胶囊、蟾龙定喘合剂、喉症丸等50余种中成药中均含有蟾酥。在兽医临床上，蟾酥对治疗动物呼吸道疾病也有显著疗效。蒋建兵等应用蟾酥卡耳法治疗猪高热病、喘气病等，治愈率高达93%以上，疗效显著优于抗生素和其它中药制剂(蒋建兵，施洪林，马良.应用蟾酥巧治生猪高热病[J].兽医导刊2008，132 37 ;魏根根.新鲜蟾酥卡耳疗法治疗猪气喘病的疗效观察[J].浙江畜牧兽医 2008(1) :17-19.)。黄宏业利用蟾酥与多西环素配伍制备注射液，对猪喘气病的治愈率为 76.7%，显著高于多西环素注射液的治愈率(56.7% )(黄宏业，邱春媚.长效盐酸多西环素-蟾酥注射液对猪喘气病的疗效试验[J].广西畜牧兽医2007，23 (2) :15-17. )0在《中国兽药典》(2010年版)中，“喉炎净散”、“雏痢净”、“镇喘散”等多种含有蟾酥的中药复方制剂被批准用于畜禽呼吸道及消化道疾病治疗。
虽然蟾酥具有广泛的药理作用，但同时也具有显著的生物毒性。蟾蜍二烯内酯类化合物的基本结构类似强心苷，主要作用于心脏迷走神经中枢或末梢，并可直接作用于心肌，引起心率缓慢、心律不齐等缓慢心律失常症状，使房室传导阻滞，最后导致心跳停止于收缩期(Kennedy D. J. , Vetteth S. , Periyasamy S. M. , and et al. . Central role for the cardiotonic steroid marinobufagenin in the pathogenesis of experimental uremic cardiomyopathy[J]Hypertension,2006,47(3) :488-495 ；Bick R. J.，Poindexter B. J. ,Sweney R. R, and et al. . Effects of Chan Su, a traditional Chinese medicine， on the calcium transients of isolated cardiomyocytes Cardiotoxicity due to more than Na，K-ATPase blocking [J]. Life Sciences，2002，72 (6) :699-709)。蟾酥乙醇提取物及主要内酯类单体对小鼠的LD5ci是蟾酥醇提物为41. 0mg/kg (静脉)、96. 6mg/kg (皮下)、36. 2mg/kg (腹腔)，蟾毒灵为2. 2mg/kg (腹腔)，华蟾毒配基为4. 4mg/kg (腹腔)(于垂亮，侯惠民.蟾酥抗肿瘤有效成分的活性追踪分离及急性毒性研究.中草药，2011，42(2) 307-311.)。腹腔或静脉注射蟾酥注射液，小鼠急性中毒表现为呼吸急促、肌肉痉挛、心跳不整、最后麻痹而死(王浴生，等.中药药理与应用.北京学苑出版社，1992)。
蟾酥及其主要药效成分二烯内酯类化合物较大的生物毒性严重制约了其临床应用，开展以减少蟾酥及其药效成分生物毒性为目的的新型制剂研究具有重要意义。
已有的蟾酥在大鼠体内药动学研究表明，口服蟾酥乙醇提取物后，蟾蜍二烯内酯类化合物在血液中的达峰时间为0.28-0. 46小时，血药浓度半衰期(t1/2)为I. 75-3. 85 小时，吸收迅速，代谢较快，无组织蓄积性(Wen Xu, Heng Luo, Yaping Zhang, and et al.Simultaneous determination of five main active bufadienolides of Chan Su in rat plasma by liquid chromatography tandem mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography B，2007，859 :157-163)。因此，将蟾酥及其药效单体制备成缓释制剂，使其在体内缓慢释放，可望减少其生物毒性，并达到延长药物作用时间、减少给药次数的效果。
载药微球是一种应用较为广泛的新型给药体系，其以适宜的高分子材料为载体， 制成包裹药物的球形或类球形微粒，粒径一般在0. I 250 ym，可以被网状内皮系统内吞或被细胞融合或被溶酶体中的酶降解后释放出药物。使用载药微球后，可在较长时间内维持体内有效药物浓度，从而提高药效并降低药物的毒性或不良反应(Okada H，ToguchiH.Biodegradable microspheres in drug delivery[J]. Crit Rev Ther Drug Carrier Syst,1995，12(1) :1-99)。
近年来，研究报道较多的载药微球载体材料主要有两类一类是非生物可降解的载体材料，包括聚丙烯、乙基纤维素和聚苯乙烯等，用此类材料制得的微球多供口服；另一类是生物可降解的载体材料，包括天然高分子材料如白蛋白、明胶、淀粉和合成高分子材料如聚乳酸(PLA)、聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)等，用此类材料制成的微球既可供口服，也可制成注射剂或药栓。PLA的中间代谢产物是乳酸，最终代谢产物是水和CO2，无毒性和刺激性，并有良好的生物可降解性(Hyon S H. Biodegradable poly (lactic acid) microspheres for drug delivery systems[J]. Yonsei Med J，2000，41(6) :720-734 ；0h J E,Nam Y S,Lee K H,and et al. Conjugation of drug to poly (D,L-lactic-co-glycolic acid)for controlled release from biodegradable microspheres[J]. J Controlled Release, 1999，57 (3) :269-280)。因而PLA和PLGA成为目前研究最多的生物可降解材料， 已被批准用作手术缝合线、心血管支架以及注射用微囊、微球、埋植剂等制剂的载体(曹婷颖，顾月清，高向东.聚乳酸载药微球的制备和给药方法[J].药学进展，2006，30 (10) 448-451)。
目前临床上被批准使用的蟾酥注射液为水针剂，其主要成分为吲哚类生物碱(中国药典[S]. —部.2005)。而大量的研究结果表明蟾酥脂溶性成分的抗肿瘤活性较强，主要为蟾蜍二烯内酯类化合物(赵强，孟凡静，刘安西.蟾酥的研究进展[J].中草药2004， 35(10):附4-7 ;张英，邱鹰昆，刘珂.中华大蟾蜍的研究进展[J].中草药2006,37(12) 1905-1908)。为减少蟾酥脂溶性提取物及单体的毒性和刺激性，延长其药效，奉建芳等制备了蟾酥固体脂质纳米粒(CN 1951401A)，唐星等制备了含有蟾酥提取物的脂质微球注射液 (CN 1985851A)，凌昌全等制备了华蟾酥毒基白蛋白纳米粒(CN 1772290A)。三种制剂都可有效降低蟾酥脂溶性提取物或其单体的毒性及刺激性，但蟾酥脂质纳米粒和脂质微球注射液均为注射用乳液，放置一段时间后易破乳变质；而华蟾酥毒基白蛋白纳米粒则是局限于华蟾酥毒基这一单体的新剂型。发明内容
为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种含有蟾酥脂溶物的缓释微球。
本发明的另一目的在于提供上述含有蟾酥脂溶物的缓释微球的制备方法。
本发明的再一目的在于提供上述含有蟾酥脂溶物的缓释微球的用途。
本发明的目的通过下述技术方案实现
一种含有蟾酥脂溶物的缓释微球，由以下质量百分比的成分制备得到
蟾酥脂溶物0.5-30. 6%
包材69.4-99.5%;
所述的蟾酥脂溶物是以乙醇、乙酸乙酯或二氯甲烷为溶媒的蟾酥提取物，优选以乙酸乙酯或二氯甲烷为溶媒的蟾酥提取物；也可以是从蟾酥提取物种中分离得到的蟾蜍二烯内酯类单体化合物，优选日蟾毒它灵、蟾毒灵、沙蟾毒精、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基或华蟾毒配基中的一种以上；
所述的包材优选聚乳酸(PLA)或聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)；
所述聚乳酸或聚乳酸-羟基乙酸共聚物的分子量为6000_60000Da，优选 30000Da ；
所述的含有蟾酥脂溶物的缓释微球还可以加入各种添加剂，如抗氧剂和/或抑菌剂；所述的抗氧剂为维生素C、维生素E或亚硫酸氢钠；所述的抑菌剂为山梨酸及其盐、苯甲酸及其盐等，不灭菌的口服制剂需要加入抑菌剂。
上述含有蟾酥脂溶物的缓释微球可通过乳化溶剂蒸发法或喷雾干燥法制备。
乳化溶剂蒸发法包括以下步骤
(I)将包材和蟾酥脂溶物溶于有机溶剂中，作为油相溶液；
(2)以表面活性剂水溶液作为水相溶液，将油相溶液缓慢加入到水相溶液中，冰浴下高速搅拌乳化6-10分钟，然后在室温下低速搅拌4-8小时，挥发尽有机溶剂，得到混悬液；
(3)将混悬液离心取沉淀、洗涤、干燥，即得到白色或灰白色粉末状含有蟾酥脂溶物的缓释微球；所得到的微球粒径为0. 1-12 ym，成球性及分散性好；
步骤(I)所述的有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷或乙酸乙酯中的一种，优选二氯甲烷；
步骤(2)所述的表面活性剂为聚乙烯醇，优选PVA-224型聚乙烯醇。
步骤(2)中的表面活性剂起到乳化剂的作用，不作为微球的组成部分。所述水相溶液中表面活性剂的质量体积浓度为0. 5-2%，优选I %。
步骤(2)所述高速搅拌的转速为600-1500r/min，优选800_1200r/min ；
步骤(2)所述低速搅拌的转速为60-200r/min，可选用搅拌浆或磁力搅拌挥发二氯甲烷，以获得成球性较好、颗粒大小适中的微球。
喷雾干燥法包括以下步骤将蟾酥脂溶物和包材溶解于有机溶剂中，经过喷雾干燥制得含有蟾酥脂溶物的缓释微球；所得到的微球粒径为0. 5-15 ym，成球性及分散性较乳化溶剂蒸发法差，但喷雾干燥法适用于工业上规模化生产蟾酥脂溶物缓释微球；
所述的蟾酥脂溶物与包材的重量比为I : (2-200)，相应地所获得的微球载药量在0. 5-30%的范围；药材比过高，微球载药量高，但容易导致突释，缓释效果差；药材比过低，使用的包材成本增加；
所述的有机溶剂为乙酸乙酯、二氯甲烷或三氯甲烷中的一种以上，优选乙酸乙酯， 因为乙酸乙酯的毒性较低、成球性较好；
所述包材在有机溶剂中的质量体积浓度为2-20%，优选10-15%。包材浓度较低， 得到的微球颗粒较小；包材浓度较高，得到的微球颗粒较大；
所述喷雾干燥的进风温度为20_70°C，优选40_50°C，在这个温度下获得的微球成球性较好，不易粘连，质量较好；
所述喷雾干燥的出口温度为25_35°C ；
在喷雾干燥过程中，微颗粒易粘连凝聚，影响产品的成球性和流散性。同时，微颗粒还容易黏着在喷雾干燥器的内壁上，使产品的回收率降低。为解决这些问题，可使用双喷口喷雾干燥技术，其中一个喷口喷雾含包材、蟾酥脂溶物和表面活性剂的溶液，另一喷口喷雾甘露醇水溶液作阻聚剂，得到的微球不易粘连、不易黏着在内壁。
上述含有蟾酥脂溶物的缓释微球在医学临床上可用于治疗肿瘤，兽医临床上可用作抗炎药物，与化药配合应用治疗动物呼吸道及消化道感染性疾病。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果
I、本发明的含有蟾酥脂溶物的缓释微球载药量和包封率高、稳定性好，具有缓释效果，可降低药物毒性、减少药物刺激性、延长药效时间、减少给药次数。
2、本发明的含有蟾酥脂溶物的缓释微球中的药物既可以是蟾酥脂溶性提取物，也可以是蟾酥脂溶性提取物中的蟾蜍二烯内酯类单体。制备的缓释微球可用于制备粉针注射，可以口服，也可以与其它药物配伍制成粉针剂或口服制剂，可采用静脉注射、肌肉注射和口服等多种方式给药，医学临床上可用于直接治疗肿瘤，或与其它中药配伍后治疗多种疾病。
图I是实施例I的蟾酥脂溶物聚乳酸缓释微球的电镜照片图。
图2是实施例I的蟾酥脂溶物聚乳酸缓释微球的体外释药试验结果图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例I
乳化溶剂蒸发法制备蟾酥脂溶物聚乳酸缓释微球，包括以下步骤
蟾酥饼粉粹后，以二氯甲烷提取，减压蒸馏去除溶剂，真空干燥，得到蟾酥脂溶物。 称取0. 50g蟾酥脂溶物和2. 85g平均分子量为30000Da的聚乳酸，溶于33mL 二氯甲烷中，待完全溶解，将上述溶液逐滴加入到667mL 1% (w/v)的聚乙烯醇(PVA-224)水溶液(含量 I %即表明聚乙烯醇的量为6. 67g)中，同时,低温下(冰浴)高速(1200r/min)搅拌8min, 所得乳液低速(200r/min)搅拌6h, 15000r/min离心IOmin,取沉淀,洗漆3次,真空干燥得到2. 90g的蟾酥脂溶物聚乳酸缓释微球。
取微球粉末进行扫描电镜测定、载药量测定、体外释药特性测定及小鼠急性毒性试验。
微球形态观察取蟾酥脂溶物微球干粉适量，置双面胶带上，均匀撒布，离子镀膜仪喷金后，XL-30扫描电子显微镜观察微球的表面形态,可见微球光滑、球形圆整、均勻、分散性好，微球粒径在0. 5 8. O ii m之间，大部分微球粒径在1.5 5.011111的范围。图I为放大5000倍的蟾酥脂溶物聚乳酸缓释微球电镜照片图。
载药量测定准确称取3份5mg蟾酥脂溶物缓释微球，分别加入适量二氯甲烷完全溶解，在297nm波长处测定其吸光度，通过系列蟾酥脂溶物标准溶液在该波长的吸光度获得的回归方程求出蟾酥脂溶物含量，根据下式求得载药量为13. 9%。
井Ki,。/、微球中蟾酥脂溶物质量inn()/载药里(％)=~WMi~xl00%
体外释药试验称取IOOmg蟾酥脂溶物缓释微球置于透析袋(截留分子量 8000Da)中，加入pH值为7. 4的磷酸盐缓冲溶液2mL，夹紧透析袋两端，置于IOOmL磷酸盐缓冲溶液中，于恒温(37. 0±1.0)°C水浴中，磁力搅拌器低速搅拌。分别在10、20、30、40min，I、I. 25、2、3、4、6、8、10、12、24h，2、3、4、5、6、7、8、9、10d 等时间点，各取 2mL 样品，测定其吸收度A，由回归方程计算各时间点蟾酥脂溶物的浓度。测定后的溶液倒回原释放体系中，每个时间点测3次，取平均值得该时间点的药物浓度。蟾酥脂溶物聚乳酸缓释微球体外释药特性见图2，蟾酥脂溶物聚乳酸微球4h内快速释放15. 45%，之后缓慢释放，24h释放共计 30. 46%。2d后，药物进入平稳释放状态，缓释效果明显。
小鼠急性毒性试验
(I)灌胃急性毒性56只重量为18_22g的昆明鼠分为7组，每组8只，雌雄各半。 蟾酥脂溶物分散于5%丙二醇水溶液中，涡旋混匀、超声。分别按31. 5,39. 3,49. 2,61. 4、 76. 8、96. 0、120mg/kg (体重)的剂量灌胃各组小鼠,记录各组小鼠死亡情况,在给药后24小时内各组的死亡数分别为0、1、2、2、4、6、8只，给药24小时后存活小鼠不再死亡。根据Bliss 法计算出蟾酥脂溶物灌喂对小鼠的半数致死剂量(LD5tl)为70.6mg/kg。
56只重量为18_22g的昆明鼠分为7组，每组8只，雌雄各半。蟾酥脂溶物含量为 13. 9%的聚乳酸微球分散于生理盐水中，涡旋混匀。分别按262. 1,327. 7,409. 6、512、640、 800、1000mg/kg(体重)的剂量灌胃各组小鼠，记录各组小鼠死亡情况，在给药后24小时内各组的死亡数分别为0、0、0、1、3、4、6只，给药24小时后存活小鼠不再死亡。根据Bliss法计算出蟾酥脂溶物聚乳酸微球灌喂对小鼠的半数致死剂量(LD5tl)为952. lmg/kg，折算为蟾酥脂溶物的LD5tl为132. 3mg/kg,为蟾酥脂溶物直接灌喂LD5tl的I. 88倍。
(2)肌肉注射急性毒性48只重量为18_22g的昆明鼠分为6组，每组8只，雌雄各半。蟾酥脂溶物分散于5%丙二醇水溶液中，涡旋混匀、超声。分别按5. O、6. 3、7. 9、9. 8、 12. 3,15. 4mg/kg(体重)的剂量肌注各组小鼠，记录各组小鼠死亡情况，在给药后24小时内8各组的死亡数分别为0、2、4、5、6、8只，给药24小时后存活小鼠不再死亡。根据Bliss法计算出蟾酥脂溶物肌注对小鼠的半数致死剂量(LD5tl)为8.6mg/kg。
48只重量为18_22g的昆明鼠分为6组，每组8只，雌雄各半。蟾酥脂溶物含量为13. 9%的聚乳酸微球分散于生理盐水中，涡旋混匀。分别按61. 4,76. 8,96. O、120、150、 187mg/kg (体重)的剂量肌注各组小鼠，记录各组小鼠死亡情况，在给药后24小时内各组的死亡数分别为0、2、2、5、6、8只，给药24小时后存活小鼠不再死亡。根据Bliss法计算出蟾酥脂溶物聚乳酸微球肌注对小鼠的半数致死剂量(LD5tl)为113. 5mg/kg，折算为蟾酥脂溶物的LD5tl为15. 8mg/kg,为蟾酥脂溶物直接肌注LD5tl的I. 84倍。
蟾酥脂溶物制备成聚乳酸微球后，其对小鼠的急性毒性明显降低。
实施例2
乳化溶剂蒸发法制备华蟾酥毒基聚乳酸-羟基乙酸缓释微球，包括以下步骤
称取25mg华蟾酥毒基和4. OOg平均分子量为30000Da的聚乳酸-羟基乙酸共聚物，溶于40mL 二氯甲烷中，待完全溶解，将上述溶液逐滴加入到SOOmLl % (w/v)的聚乙烯醇(PVA-224)水溶液中，同时，低温下(冰浴)高速(1200r/min)搅拌8min，所得乳液低速 (200r/min)搅拌6h, 15000r/min离心lOmin，取沉淀，洗漆3次,真空干燥得到3. 62g的华蟾酥毒基聚乳酸-羟基乙酸缓释微球。
按实施例I中载药量测定方法，测得本实施例缓释微球华蟾酥毒基的含量为0.50 %。扫描电子显微镜观察微球,可见微球光滑、圆整、分散性好，微球粒径在0. 5 8.Oiim之间。按实施例I中体外释药实验方法，测得其4h内释药量为7. 20%，24h释药量为18. 36%，证明本实施例的缓释微球缓释效果明显。
实施例3
喷雾干燥法制备蟾酥脂溶物聚乳酸缓释微球，包括以下步骤
蟾酥饼粉粹后，以乙酸乙酯提取，减压蒸馏去除溶剂，真空干燥，得到蟾酥脂溶物。 称取10. OOg蟾酥脂溶物和90. OOg平均分子量为30000Da的聚乳酸，溶于800mL乙酸乙酯中，溶液摇匀后喷雾干燥制备载药微球。喷雾干燥机进口温度控制为50°C，出口温度为 30 0C，液体流速为5mL/min。收集干燥微粉，称重为83. 50g。
本实施例获得缓释微球中蟾酥脂溶物的含量为9. 92%。扫描电子显微镜观察微球，可见微球球形圆整、光滑、分散性好，微球粒径在I. 3 12. O ii m之间。其体外释药试验结果和小鼠急性毒性试验结果与实施例I的缓释微球接近，证明本实施例的缓释微球缓释性好、毒性弱。
实施例4
喷雾干燥法制备蟾酥脂溶物聚乳酸-羟基乙酸缓释微球，包括以下步骤
取实施例3中蟾酥乙酸乙酯提取物10. OOg和23. OOg平均分子量为30000Da的聚乳酸-羟基乙酸共聚物，溶于400mL乙酸乙酯中，溶液摇匀后喷雾干燥制备载药微球。喷雾干燥机进口温度控制为50°C，出口温度为30°C，液体流速为5mL/min。收集干燥微粉，称重为 27. 80g。
本实施例获得缓释微球中蟾酥脂溶物的含量为30. 6%。扫描电子显微镜观察微球，可见球形圆整、光滑、分散性好，微球粒径在0. 9 11. O 之间。体外释药试验，测得其4h内释药量为21. 65%，呈明显的突释效应；24h内释药量为33. 48% ;2d后，药物进入平稳释放状态，有较明显的缓释效果。小鼠急性毒性试验，本实施例微球灌喂对小鼠的半数致死剂量(LD5tl)为343. 7mg/kg，折算为蟾酥脂溶物的LD5tl为103. 5mg/kg ;本实施例微球肌注对小鼠的半数致死剂量(LD5tl)为37. 7mg/kg，折算为蟾酥脂溶物的LD5tl为11. 4mg/kg。微球的毒性比蟾酥脂溶物直接给药明显降低。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化， 均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
权利要求
1.一种含有蟾酥脂溶物的缓释微球，其特征在于是由以下质量百分比的成分制备得到蟾酥脂溶物0. 5-30.6%包材69.4-99.5%。
2.根据权利要求I所述的含有蟾酥脂溶物的缓释微球，其特征在于所述的蟾酥脂溶物是以乙醇、乙酸乙酯或二氯甲烷为溶媒的蟾酥提取物，或是蟾蜍二烯内酯类单体化合物；所述的包材为聚乳酸或聚乳酸-羟基乙酸共聚物；所述聚乳酸或聚乳酸-羟基乙酸共聚物的分子量为6000-60000Da。
3.根据权利要求2所述的含有蟾酥脂溶物的缓释微球，其特征在于所述的蟾酥提取物是以乙酸乙酯或二氯甲烷为溶媒的蟾酥提取物；所述的蟾蜍二烯内酯类单体化合物为日蟾毒它灵、蟾毒灵、沙蟾毒精、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基或华蟾毒配基中的一种以上；所述聚乳酸或聚乳酸-羟基乙酸共聚物的分子量为30000Da。
4.权利要求1-3任一项所述的含有蟾酥脂溶物的缓释微球的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)将包材和蟾酥脂溶物溶于有机溶剂中，作为油相溶液；(2)以表面活性剂水溶液作为水相溶液，将油相溶液加入到水相溶液中，冰浴下高速搅拌乳化6-10分钟，然后在室温下低速搅拌4-8小时，得到混悬液；(3)将混悬液离心取沉淀、洗涤、干燥，得到含有蟾酥脂溶物的缓释微球；步骤(2)所述的表面活性剂为聚乙烯醇。
5.根据权利要求4所述的含有蟾酥脂溶物的缓释微球的制备方法，其特征在于步骤(I)所述的有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷或乙酸乙酯中的一种；步骤(2)所述水相溶液中表面活性剂的质量体积浓度为0. 5-2% ；步骤(2)所述高速搅拌的转速为600-1500r/min ；步骤(2)所述低速搅拌的转速为60-200r/min。
6.根据权利要求4所述的含有蟾酥脂溶物的缓释微球的制备方法，其特征在于步骤(I)所述的有机溶剂为二氯甲烷；步骤(2)所述水相溶液中表面活性剂的质量体积浓度为1% ；步骤(2)所述高速搅拌的转速为800-1200r/min。
7.权利要求1-3任一项所述的含有蟾酥脂溶物的缓释微球的制备方法，其特征在于包括以下步骤将蟾酥脂溶物和包材溶解于有机溶剂中，经过喷雾干燥制得含有蟾酥脂溶物的缓释微球。
8.根据权利要求7所述的含有蟾酥脂溶物的缓释微球的制备方法，其特征在于所述的蟾酥脂溶物与包材的重量比为I : (2-200)；所述的有机溶剂为乙酸乙酯、二氯甲烷或三氯甲烷中的一种以上；所述包材在有机溶剂中的质量体积浓度为2-20% ；所述喷雾干燥的进风温度为20-70°C ；所述喷雾干燥的出口温度为25-35°C。
9.根据权利要求7所述的含有蟾酥脂溶物的缓释微球的制备方法，其特征在于 所述的有机溶剂为乙酸乙酯；所述喷雾干燥的进风温度为40-50°C。
10.权利要求1-3任一项所述的含有蟾酥脂溶物的缓释微球在抗癌药剂或抗炎剂中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种含有蟾酥脂溶物的缓释微球及其制备方法与应用，该缓释微球是由0.5-30.6％的蟾酥脂溶物和69.4-99.5％的包材制备得到，所用的蟾酥脂溶物是以乙醇、乙酸乙酯或二氯甲烷为溶媒的蟾酥提取物，或从蟾酥脂溶物中得到的二烯内酯类单体；所用的包材优选聚乳酸或聚乳酸-羟基乙酸共聚物。本发明获得的蟾酥脂溶物缓释微球载药量和包封率高、稳定性好，缓释效果明显，可降低药物毒性、减少药物刺激性、延长药效时间、减少给药次数。可采用静脉注射、肌肉注射和口服等多种方式给药，医学临床上可用于直接治疗肿瘤，或与其它中药配伍后治疗多种疾病；兽医临床上可用于治疗炎症，或与化疗药物联合应用治疗感染性疾病。
文档编号A61K31/585GK102526111SQ201210024978
公开日2012年7月4日 申请日期2012年2月6日 优先权日2012年2月6日
发明者刘雅红, 张晓丽, 方炳虎, 曾振灵, 杨耀智, 王文佳, 陈建新 申请人:华南农业大学