专利名称：路路通总鞣质提取物的制备方法及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及总鞣质提取物的医药技术。
背景技术：
随着全球经济的快速发展以及人口老龄化问题的不断加重，现代人们的生活压力越来越大，抑郁症和帕金森病的患者越来越多。因此治疗抑郁症和帕金森病药物(单胺氧化酶抑制剂类药物)的研究引起了人们的广泛兴趣。路路通是金缕梅科(Hamanmeidaceae)植物枫香树(LiquidambarforraosanaHance)的干燥成熟果实，始载于《本草纲目拾遗》。路路通为常用中药，主要用于治疗风湿痹痛，肢体麻木，湿疹，乳少经闭，脘腹疼痛(国家中医药管理局中华本草编委会，中华本 草.精选本.上册.上海上海科学技术出版社，1998. 719.)。但到目前为止，尚未见路路通总鞣质提取物对单胺氧化酶抑制的活性报道。
发明内容
本发明的目的在于提供路路通总鞣质提取物的制备方法及其用途。路路通总鞣质提取物的制备方法，其步骤为
(1)首先将路路通药材粉碎成粉末状；
(2)第一次按照药材质量的5-8倍的比例，向药材中加入95%乙醇热回流提取l_2h;
(3)第二次按照药材质量的5-8倍的比例，向药材中加入95%乙醇热回流提取Ih；
(3)将上述两次的提取液合并浓缩至干，加适量的水溶解，用浓氨水或氢氧化钠水溶液调pH值到9-11，静置12-18h后抽滤；
(4)滤液用2M的盐酸调pH值到1-2，然后用有机溶剂萃取2-4次，萃取液合并浓缩至干，得到路路通总鞣质提取物。路路通总鞣质提取物的用途，用于制备抗单胺氧化酶药物。本发明采用酶标法研究了路路通总鞣质提取物的抗单胺氧化酶活性，并且研究了路路通总鞣质提取物对绝望行为所致抑郁小鼠的应激行为能力(张均田.现代药理实验方法(上册)[M].北京医科大学，中国协和医科大学联合出版社，1998. 1061)和6-0HDA所致帕金森大鼠的行为能力(吴凌波等.现代中西医结合杂志，2009，18(3) :251-252)
的影响。结果显示，路路通总鞣质提取物是良好的天然单胺氧化酶抑制剂；路路通总鞣质提取物能明显改善抑郁小鼠和帕金森大鼠的行为能力。路路通总鞣质提取物与药学上可以接受的载体或其它赋型剂相结合，按照常规方法制成经口服给药的内用型和非口服给药的注射剂或其它剂型，可以在临床上用于开发抗单胺氧化酶活性药物和治疗抑郁症，帕金森病等。
具体实施例方式路路通总鞣质提取物的制备方法，其步骤为(1)首先将路路通药材粉碎成粉末状；
(2)第一次按照药材质量的5-8倍的比例，向药材中加入95%乙醇热回流提取l_2h;
(3)第二次按照药材质量的5-8倍的比例，向药材中加入95%乙醇热回流提取Ih；
(3)将上述两次的提取液合并浓缩至干，加适量的水溶解，用浓氨水或氢氧化钠水溶液调pH值到9-11，静置12-18h后抽滤；
(4)滤液用2M的盐酸调pH值到1-2，然后用有机溶剂萃取2-4次，萃取液合并浓缩至干，得到路路通总鞣质提取物。路路通总鞣质提取物的用途，用于制备抗单胺氧化酶药物。本发明提供的具体技术方案·
I、路路通总鞣质的制备
通常提取路路通总鞣质采用“碱提酸沉”法，但又有水提和醇提两种工艺。为了兼顾得率和纯度，本发明采用了醇提取的方法。具体的工艺路线如下首先将路路通药材粉碎成粉末状。第一次采用药材质量5-8倍的比例加入95%乙醇热回流提取l_2h;第二次按照药材质量5-8倍的比例加入95%乙醇热回流提取lh。两次的提取液合并浓缩至干，加适量的水溶解，用浓氨水或氢氧化钠水溶液调pH值到9-11，静置12-18h后抽滤。滤液用2M的盐酸调PH值到1-2，然后用有机溶剂(氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚中的一种或几种混合)萃取2-4次，萃取液合并浓缩至干，得到路路通总鞣质提取物。2、路路通总鞣质提取物的抗抑郁和抗帕金森体内、外药理学实验。近年来的研究表明，对单胺氧化酶有抑制作用的药物，可显著提高抑郁症和帕金森病人脑内的单胺氧化酶水平，发挥预防和治疗抑郁症和帕金森的作用。因此本发明首先采用酶标法研究了路路通总鞣质提取物在体外对单胺氧化酶的抑制活性，结果表明，路路通总鞣质提取物具有良好单胺氧化酶抑制活性。为了进一步证实路路通总鞣质提取物的抗抑郁和抗帕金森作用，本发明研究了路路通总鞣质提取物对绝望行为所致抑郁小鼠的应激行为能力的影响(张均田.现代药理实验方法(上册KM].北京医科大学，中国协和医科大学联合出版社，1998. 1061)和对6-0HDA所致帕金森大鼠的行为能力的影响(吴凌波等.现代中西医结合杂志，2009，18(3):251-252)。结果显示，路路通总鞣质提取物能明显改善抑郁小鼠和帕金森大鼠的行为能力。以上结果提示，路路通总鞣质提取物可以用于制备预防、治疗抑郁症和帕金森病的药物。下面结合具体实例进一步对本发明进行描述，但不限制本发明。实施例I路路通总鞣质提取物的制备
称取路路通粉末Ikg置于圆底烧瓶中，加入95%乙醇7L热回流提取2h，抽滤得滤液；再加入95%乙醇7L热回流提取lh，再抽滤，得滤液。两次的滤液合并浓缩至干，加IL蒸馏水溶解，用IM氢氧化钠水溶液或浓氨水调pH至9-11,静置12-18h后抽滤,滤液用2M盐酸调pH至1-2。每次加入2L乙酸乙酯萃取，共萃取3次，萃取液合并浓缩至干，得到路路通总鞋质65g。实施例2酶标法测定路路通总鞣质提取物的抗单胺氧化酶活性。利用酶标法测定了路路通总鞣质提取物的抑制率，磷酸异丙烟肼为阳性对照药。具体实验过程如下
(I)单胺氧化酶的制备将I只雌性wistar大鼠脱颈椎处死，取出其肝脏，将肝脏剪碎，用磷酸缓冲液(pH=7. 6)洗涤数次，待洗涤干净后，加入20ml, 0. 3M蔗糖缓冲液进行匀浆，充分匀浆后，各取IOml倒入两个50ml离心管中。用20ml，0. 3M蔗糖缓冲液洗涤匀浆器后，各取IOml倒入前面所述的离心管中。经托盘天平配平后，在_4°C下，1000\8离心10!^11。吸取上清液，将上清液配平，1200 Xg离心15min，吸取上清液，将上清液配平，IOOOOXg离心30min，弃去上清液，沉淀加4ml的磷酸缓冲液混匀，得到Wistar大鼠肝脏线粒体浓缩物，即为实验用单胺氧化酶。(2)样品对单胺氧化酶抑制活性的测定
运用96孔酶标板测定样品对单胺氧化酶的抑制活性。在96孔酶标板中依次加入40 u I单胺氧化酶(Wistar大鼠肝脏线粒体)，40iU样品溶液，40 Ul磷酸异丙烟肼溶液(阳性药)，37°C孵育20min后，加120yl底物(2. 5mM的酪胺)及40 yl显色液(0. 5mM的4-氨基安替吡啉，ImM的香草酸，4U/ml的辣根过氧化酶的混合物)。37°C孵育60min后，用酶标仪在490nm下测定各孔OD值。其中，空白组(包含单胺氧化酶40 yl，磷酸缓冲液40 yl，底物120iU，显色剂40 yl)，空白本底组，样品本底组和磷酸异丙烟肼本底组用120 ill磷 酸缓冲液(PH=7. 6)代替120 Ul底物。每组实验重复三次，并以下面公式计算样品对单胺氧化酶的抑制率。根据量效关系和直线回归法可以计算出样品对单胺氧化酶的半数抑制浓度值(IC50)结果表明路路通总鞣质对单胺氧化酶具有明显的抑制活性。其半数抑制浓度值(IC50)为5. 9ug/ml。实验数据见表I。表I分光光度法测试结果
权利要求
1.路路通总鞣质提取物的制备方法，其步骤为 (1)首先将路路通药材粉碎成粉末状； (2)第一次按照药材质量的5-8倍的比例，向药材中加入95%乙醇热回流提取l_2h; (3)第二次按照药材质量的5-8倍的比例，向药材中加入95%乙醇热回流提取Ih； (3)将上述两次的提取液合并浓缩至干，加适量的水溶解，用浓氨水或氢氧化钠水溶液调pH值到9-11，静置12-18h后抽滤； (4)滤液用2M的盐酸调pH值到1-2，然后用有机溶剂萃取2-4次，萃取液合并浓缩至干，得到路路通总鞣质提取物。
2.根据权利要求I所述的路路通总鞣质提取物的制备方法，其特征在于有机溶剂为氯仿，或者二氯甲烷，或者乙酸乙酯，或者乙醚，或者上述几种的混合。
3.路路通总鞣质提取物的用途，用于制备抗单胺氧化酶药物。
4.根据权利要求3所述的路路通总鞣质提取物的用途，其特征在于单胺氧化酶抑制剂是指用于抑郁症，帕金森症的药物。
5.根据权利要求3所述的路路通总鞣质提取物的用途，其特征在于与药学上可以接受的载体，或其它赋型剂相结合，按照常规方法制成经口服给药的内用型剂型，或非口服给药的注射剂，或其它剂型。
全文摘要
路路通总鞣质提取物的制备方法及其用途，其步骤为(1)路路通用95%乙醇回流提取得到乙醇提取物；(2)乙醇提取物用水溶解，然后用浓氨水或氢氧化钠水溶液调pH值到9-11，过滤；(3)过滤的滤液用浓盐酸调pH值到1-2，然后用有机溶剂萃取，得到上述路路通的总鞣质提取物；路路通总鞣质提取物在制备抗单胺氧化酶药物中的应用。
文档编号A61P25/24GK102743419SQ20121017593
公开日2012年10月24日 申请日期2012年5月31日 优先权日2012年5月31日
发明者杨中铎, 梁冀北 申请人:兰州理工大学