专利名称：一种盐酸吉西他滨脂质体注射剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种脂质体注射剂及其制法，具体涉及ー种盐酸吉西他滨脂质体注射剂及其制备方法，属于医药技术领域。
背景技术：
盐酸吉西他滨化学名称为(+) 2’ -脱氧-2’，2’ - ニ氟胞嘧啶盐酸盐，分子式C9H11F2N3O4 · HCl，分子量299. 70，结构式如下
盐酸吉西他滨本品为白色结晶性粉末；无臭。本品在水中溶解，在こ醇中极微溶解，在氯仿或丙酮中几乎不溶。肺癌是目前全球中导致肿瘤患者死亡的最常见的恶性肿瘤，其死亡人数相当于乳腺癌、前列腺和结肠癌死亡人数的总和，其中非小细胞肺癌(NSCLC)患者占了相当的比例。据美国1999年统计，美国NSCLC的新发病人数达180000之多。由于目前早期诊断技术的局限，约75% 80%的患者在就诊时已属晚期，有效的综合治疗尤其是提高全身化疗的疗效十分必要的。吉西他滨是1996年美国FDA批准的新的抗代谢类抗癌药物。并首次注明为一线治疗晩期NSCLC和胰腺癌的药物。吉西他滨的化学结构为盐酸双氟脱氧胞苷，类似于阿糖胞苷，为脱氧嘧啶的类似物。作为细胞周期特异性药物，吉西他滨主要作用于DNA合成期，即S期细胞，在一定条件下，也可以阻止Gl期向S期的进展。吉西他滨被认为是细胞前体药物，被细胞摄入后，在细胞内产生活性代谢产物-吉西他滨ニ磷酸盐和三磷酸盐，其通过竞争嵌入DNA双链。引起DNA双链错误识别(称为掩蔽链终止作用)，同时也通过“自我增強”作用，使吉西他滨三磷酸盐在细胞内代谢时间延长，从而发挥其独特的细胞毒作用，抑制肿瘤细胞，引起细胞死亡。吉西他滨是近年来被临床证明治疗NSCLC的高效、低毒的化疗药物。目前上市的盐酸吉西他滨剂型主要为冻干粉针，普通エ艺所制备的盐酸吉西他滨注射剂，物理和化学性质稳定性差，长期存放药品质量会下降而且还会生成ー些杂质，带来毒副作用，给临床使用留下了隐患。冻干粉针制作周期长，费用高，价格贵。专利文献CN102302462A公开了ー种盐酸吉西他滨冻干制剂及制备过程，其由盐酸吉西他滨、冻干保护剂甘露醇及抗氧剂焦亚硫酸氢钠组成，其中盐酸吉西他滨占20 70重量份，冻干保护剂占15 60份，抗氧剂占O. 005 O. 5重量份。虽然该处方中加入了抗氧剂，在一定程度上増加了药物的稳定性，但是该方法制备的药物稳定性依然不够好，抗氧化剂的加入也会影响人体对药物的吸收，增加对人体的不利风险。专利文献CN101564381A公开了ー种盐酸吉西他滨冻干粉针剂及其制备过程。其由盐酸吉西他滨、甘露醇和醋酸钠组成，其中盐酸吉西他滨与甘露醇重量配比是1:0. 5 5，盐酸吉西他滨与醋酸钠重量比是1:0. 01 O. I。但是该申请中辅料的用量过大，因此主药含量低，拉低了制剂的疗效。专利文献CN101606947A公开ー种盐酸吉西他滨组合物及其制备方法。所述组合物为盐酸吉西他滨57份、甘露醇20 50份，醋酸钠适量，采用冻干方法准备。但是这种制备方法冻干周期太长，导致成本増加，不适合大生产使用。专利文献CN102144981A公开了ー种盐酸吉西他滨冻干粉针剂及其制备方法。其粉针剂包括盐酸吉西他滨20-30份、甘露醇5-9份、醋酸钠3-10份，乳糖5-9份。但这种方法在增加辅料的同时，冻干时间却減少，导致冻干药物的不合格率会有所増加，増加人体的风险。专利文献CN1650883A公开了ー种盐酸吉西他滨溶液型注射剂及其制备方法，该注射剂添加碱性物质或弱酸盐作为稳定剂来提高药物的稳定性，但是这种稳定剂的稳定作用微乎其微，药物的不稳定性依然很高，生物利用度也不高。
在药物载体输送系统中，微乳、微球、纳米粒、脂质体、药质体等亚微粒的研究已经成为药物新剂型研究中非常活跃的领域。将药物包封于这些亚微粒中可以改变药物在体内的分布，增加药物在靶器官的分布量，从而提高疗效，减轻毒副作用。在靶向给药系统中，脂质体的研究较为广泛，脂质体在体内具有良好的靶向性和生物相容性。作为ー种新型药物制剂，脂质体制剂具有以下优点(I)具有缓释作用活性成分缓慢释放，延缓肾排泄和代谢，从而延长作用时间，提高质量效果；(2)降低药物毒性；(3)增加药物的溶解性，提高制剂质量；(4)具有靶向性脂质体所载的药物在肝、脾网状内皮系统脏器局部維持高浓度，从而起到药物器官靶向性作用；(5)具有对活性药物成分的保护作用。脂质体(Liposome)最初是由英国学者Bangham和Standlish将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现的。磷脂分散在水中自然形成多层囊泡，每层均未脂质的双分子层；囊泡中央和各层之间被水相隔开，双分子层厚度约为4nm。后来，将这种具有类似生物膜结构的双分子小囊称为脂质体。脂质体可分为多室脂质体和胆识脂质体。单室脂质体又分为小单室脂质体和大单室脂质体。小单室脂质体为球形，尺寸一般为20-50纳米；大单室脂质体的尺寸为微米数量级。1971年英国莱门等人开始将脂质体用于药物载体，主要作用机理是将药物粉末或溶液包裹在脂质体双层脂质膜所封闭的水相中或嵌入脂质体双层脂质膜中，这种微粒具有类细胞结构，进入人体内主药被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。近年来，随着生物技术的不断进展，脂质体制备エ艺逐步完善，脂质体作用机制进ー步阐明，加之脂质体适合体内降解、无毒性和无免疫原性，特别是大量试验数据证明脂质体作为药物载体可以提高药物治疗指数、降低药物毒性和减少药物副作用，并减少药物剂
量等优点。
发明内容
为了形成品质优良的盐酸吉西他滨脂质体注射剂，重要的是寻找能与盐酸吉西他滨良好相容从而将其良好包封且不渗漏的成膜材料，以及寻找能使脂质体形成稳定注射剂的赋形剂成分。为了实现上述目的，本发明人进行的大量研究和实现，发现特定重量配比的盐酸吉西他滨、胆固醇、蛋黄磷脂酰肌醇、卵磷脂、吐温80、海藻糖和PVP能制成盐酸吉西他滨脂质体注射剂，其中，作为药物活性成分的盐酸吉西他滨的包封率高，脂质体粒径小且分布均匀，与现有技术中的盐酸吉西他滨注射剂相比，本发明制剂的药物活性成分在体循环中的保留时间显著延长，药物的生物相容性高，生物利用度明显提高，疗效明显提高。一方面，本发明提供一种盐酸吉西他滨脂质体注射剂，其主要由以下重量配比的成分制成
盐酸吉西他滨(以吉西他滨计) ·1份 胆固醇4-20份
蛋黄磷脂酼肌醇5-90份
部鱗月旨1-10份
吐温801-60份
海藻糖2-50份
甘露醇5-50份
PVP0.1-4 份。优选地，胆固醇与卵磷脂的重量之和与蛋黄磷脂酰肌醇之间的重量比为1:1-1:3之间。进ー步优选地，本发明的盐酸吉西他滨脂质体注射剂主要由以下重量配比的成分制成盐酸吉西他滨(以吉西他滨计) 2份
胆固醇8 15份
蛋黄磷脂酰肌醇10-40份
卵磷脂2-5份
吐温803-40份
海藻糖3-40份
甘露醇6-40份
P\ P0J-4 ィ分.'进ー步优选地，胆固醇与卵磷脂的重量之和与蛋黄磷脂酰肌醇之间的重量比为1:1-1:2 之间。再进ー步优选地，根据本发明的盐酸吉西他滨脂质体注射剂由包括以下重量配比的药物和赋形剂成分制成
盐酸吉西他滨(以吉西他滨计)2份
胆固醇10-20份
蛋黄磷脂酰肌醇15-30份
卵磷脂5-10份
吐温8010-30份
海藻糖4-30份
甘露醇8-30份
PVP0.5-4 份，再进ー步优选地，胆固醇与卵磷脂的重量之和与蛋黄磷脂酰肌醇之间的重量比为1:1。作为用于形成脂质体的磷脂，可以使用天然磷脂和合成磷脂。在本发明中，作为药物活性成分的盐酸吉西他滨，其水溶性良好，脂溶性差。针对盐酸吉西他滨的特点，本发明人通过研究发现蛋黄磷脂酰肌醇特别适于作为基础磷脂成膜材料。蛋黄磷脂酰肌醇(PI)作为ー种天然磷脂，其含量非常高，容易获得，价格低廉。蛋黄磷脂酰肌醇的相变温度较高，易于形成稳定的脂质体膜。在本发明的盐酸吉西他滨脂质体注射剂中，相对于2重量份的盐酸吉西他滨(以吉西他滨计)而言，蛋黄磷脂酰肌醇的用量为5-90重量份。如果蛋黄磷脂酰肌醇的用量低于5重量份，则无法形成稳定的脂质体；反之，如果蛋黄磷脂酰肌醇的用量的用量高于90重量份，则作为药物活性成分的盐酸吉西他滨的包封率下降，注射剂的品质以及疗效降低。在本发明的盐酸吉西他滨脂质体注射剂中，胆固醇和卵磷脂协同用于调节脂质体的膜稳定性。本发明人经过研究发现，当胆固醇与卵磷脂的重量之和与蛋黄磷脂酰肌醇重量比为1:1-1:3时，能形成稳定的盐酸吉西他滨脂质体。当胆固醇与卵磷脂的重量之和与蛋黄磷脂酰肌醇重量比低于1:1时，膜稳定性降低，盐酸吉西他滨易于渗漏；当胆固醇与卵磷脂的重量之和与蛋黄磷脂酰肌醇重量比高于1:3吋，盐酸吉西他滨脂质体膜流动性过高，被包裹在脂质体内的盐酸吉西他滨易于释放。此外，研究发现，当胆固醇与卵磷脂的重量之和与蛋黄磷脂酰肌醇重量比为1:1-1:3时，所形成的脂质体毒性低。研究表明，脂质体的稳定性与生物利用度有密切的对应关系。稳定性越高，生物利用度越高。因此，本发明的盐酸吉西他滨脂质体注射剂的稳定性高，是导致药物生物利用度高的因素之一。另ー方面，本发明人研究发现，在本发明的盐酸吉西他滨脂质体注射剂中，相对于2重量份的盐酸吉西他滨(以吉西他滨计)而言，蛋黄磷脂酰肌醇的用量为5-90重量份，胆 固醇为4-20重量份，卵磷脂为1-10重量份，且胆固醇与卵磷脂的重量之和与蛋黄磷脂酰肌醇重量比为1:1-1:3时，所形成的盐酸吉西他滨脂质体注射剂的包封率高。在本发明的盐酸吉西他滨脂质体注射剂中，使用吐温-80来进ー步改进脂质体膜的稳定性。吐温-80 (聚山梨醇-80)是ー种非离子表面活性剤，当用于蛋黄磷脂酰肌醇双层膜中时，能提高该双层膜之间的化学能，从而提高脂质体在水性液体中的化学稳定性，进而提高盐酸吉西他滨脂质体注射剂的稳定性。在本发明的盐酸吉西他滨脂质体注射剂中，相对于2重量份的盐酸吉西他滨(以吉西他滨计)而言，吐温-80的用量为1-60重量份。如果吐温-80的用量低于I重量份，则由于其用量过低导致对盐酸吉西他滨脂质体注射剂的稳定性改进不够，反之，如果吐温-80的用量高于60重量份，则用于其用量过高而导致脂质体膜易于泄露。研究发现，当使用上述特定量的盐酸吉西他滨、蛋黄磷脂酰肌醇、胆固醇、卵磷脂和吐温-80时，可以得到品质优良的盐酸吉西他滨脂质体，其包封率和稳定性都很高，毒性低，生物利用度高。在本发明的盐酸吉西他滨脂质体注射剂中，使用海藻糖、甘露醇和聚こ烯吡咯烷酮作为赋形剂，进ー步用于形成稳定的注射剂。海藻糖是由两个葡萄糖分子以α，α，1，I-糖苷键构成的非还原性糖，自身性质非常稳定，它最明显的性质是在无水的条件下有保护生物膜的能力，使脂质体即使在脱水的情况下也保持形态完整。在本发明的盐酸吉西他滨脂质体注射剂中，海藻糖能有效保护脂质体颗粒的形态和稳定性，进一步提闻脂质体注射剂的稳定性。聚こ烯吡咯烷酮(PVP)是高分子化合物，熔点高，在水和有机溶剂中的溶解性均良好，毒性低，生理相容性良好，具有分散药物的作用，由于它的存在可使水相粘稠度増加，包封在脂质体中间的水膜中使水溶性药物具有较高的包封率，并且能使药物在储存中稳定。甘露醇在医药上是良好的利尿剤，降低颅内压、眼内压及治疗肾药、脱水剂、食糖代用品、也用作药片的赋形剂及固体、液体的稀释剂，尤其能为冻干粉针剂提供良好的成型支撑。本发明的盐酸吉西他滨脂质体注射剂，其盐酸吉西他滨(以吉西他滨计)的规格可以为O. 2g或l.Og。另ー方面，本发明还提供一种盐酸吉西他滨脂质体注射剂的制备方法，具体包括如下制备步骤(I)将胆固醇、蛋黄磷脂酰肌醇、卵磷脂、吐温80溶于适量的缓冲盐溶液中，制成空白脂质体；(2)将上述制备的空白脂质体经流通蒸汽灭菌处理，然后超声处理两次，毎次15分钟；(3)无菌条件下，向溶液状态的脂质体中加入盐酸吉西他滨，不断搅拌下加入海藻糖，甘露醇和PVP ;
(4)0. 45 μ m微孔滤膜过滤，灌装，然后进行冻干，即得盐酸吉西他滨脂质体注射齐 。上述所述的制备方法，其中所述的缓冲盐溶液选自磷酸盐缓冲溶液、枸櫞酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液中的ー种，优选为pH为7. 2的磷酸盐缓冲溶液。上述所述的制备方法，其中步骤(3)中所述的溶液状态脂质体的温度为60°C。上述所述的制备方法，其中步骤(4)中所述的冻干时预冻温度为-20'65°C，预冻时间为2 24小吋，升华时间为12 48小吋，再干燥温度为(T35°C，再干燥时间为2 12小吋。制备脂质体的挑战在于如何使脂质体膜形成适当大小、适当结构材料的包封率高的囊泡。而且这些材料在形成脂质体不漏出。本发明人通过选择适当的材料成分、采用合适的制备エ艺，获得了品质优良的盐酸吉西他滨脂质体注射剂，脂质体粒径小，粒径分布均匀，包封率高，稳定性高。本发明的脂质体注射剂减少了毒副作用，提高了制剂产品质量，具有良好的制剂稳定性，冷冻过程中脂质体不会因脱水、融合、冰晶等发生破裂，长期储存后，脂质体同样保持良好的包封率。通过本发明方法制得的盐酸吉西他滨脂质体注射剂，提高了盐酸吉西他滨的溶解度，提高了制剂产品的质量，減少了毒副作用，増加了药物在体循环中的保留时间，提高了药物的生物利用度，疗效明显提高；并且制备方法简单，适合于エ业化大生产。
图I是盐酸吉西他滨脂质体注射剂的血药浓度-时间曲线。其中
一 —买施例I ~·一买施例3 a -对比例I X 1对比例3 对比例4 —·_ Jl市制剂
具体实施例方式以下通过具体优选的实施例对本发明进行进ー步说明。这些实施例仅是说明性的，并不应理解为对本发明的限制。实施例I盐.酸吉西他滨脂质体注射剂的制备所用成分及其重量如下盐酸吉西他滨(以吉西他滨计)200g
胆固醇400g
蛋黄磷脂酰肌醇5OOg
卵磷脂IOOg
吐温80iOOg
海藻糖200g
甘露醇500g
P\P40g采用如下エ艺制备盐酸吉西他滨脂质体注射剂(I)将400g胆固醇、500g蛋黄磷脂酰肌醇、IOOg卵磷脂和IOOg吐温80溶于2000mlpH为7. 2的磷酸盐缓冲盐溶液中，制成空白脂质体；(2)将上述制备的空白脂质体经流通蒸汽灭菌处理，然后超声处理两次，毎次15分钟；(3)无菌条件下，向60°C溶液状态的脂质体中加入200g盐酸吉西他滨，不断搅拌下加入IOOg海藻糖、200g甘露醇和40g PVP ；(4)0. 45 μ m微孔滤膜过滤，灌装，然后进行冻干，冻干时预冻温度为_45°C，预冻时间为22小吋，升华时间为40小吋，再干燥温度为35°C。再干燥时间为12小吋，即得盐酸吉西他滨脂质体注射剂。实施例2盐酸吉西他滨脂质体注射剂的制备所用成分及其重量如下
盐酸吉西他滨(以吉西他滨计) 200g 胆固醇800g
蛋黄磷脂酰肌醇IOOOg
卵磷脂200，
吐温80300g
海藻糖3 OOg
甘露醇600g
PVPGOb采用如下エ艺 制备盐酸吉西他滨脂质体注射剂(I)将800g胆固醇、IOOOg蛋黄磷脂酰肌醇、200g卵磷脂和300g吐温80溶于3000ml的pH为7. 2的磷酸盐缓冲盐溶液中，制成空白脂质体；(2)将上述制备的空白脂质体经流通蒸汽灭菌处理，然后超声处理两次，毎次15分钟；(3)无菌条件下，向60°C溶液状态的脂质体中加入200g盐酸吉西他滨，不断搅拌下加入300g海藻糖、600g甘露醇和60g PVP ；(4)0. 45 μ m微孔滤膜过滤，灌装，然后进行冻干，冻干时预冻温度为_45°C，预冻时间为22小吋，升华时间为40小吋，再干燥温度为35°C。再干燥时间为12小吋，即得盐酸吉西他滨脂质体注射剂。实施例3盐.酸吉西他滨脂质体注射剂的制备所用成分及其重量如下·· 盐酸吉西他滨(以吉西他滨计) IOOOg 胆固醇2000g·
蛋黄磷脂酰肌醇2500g
卵磷脂500g
吐温80500g
海藻糖IOOOg
甘露醇2500g
P\P50g采用如下エ艺制备盐酸吉西他滨脂质体注射剂(I)将2000g胆固醇、2500g蛋黄磷脂酰肌醇、500g卵磷脂和500g吐温80溶于5000ml的pH为7. 2的磷酸盐缓冲盐溶液中，制成空白脂质体；(2)将上述制备的空白脂质体经流通蒸汽灭菌处理，然后超声处理两次，毎次15分钟；(3)无菌条件下，向60°C溶液状态的脂质体中加入IOOOg盐酸吉西他滨，不断搅拌下加入IOOOg海藻糖、2500g甘露醇和50g PVP ；(4)0. 45 μ m微孔滤膜过滤，灌装，然后进行冻干，冻干时预冻温度为_45°C，预冻时间为22小吋，升华时间为40小吋，再干燥温度为35°C。再干燥时间为12小吋，即得盐酸吉西他滨脂质体注射剂。对比例1-4盐.酸吉西他滨脂质体注射剂的制备采用与分别与实施例I相同的生产エ艺，将如下表I中所示的对比例1-4中的成分分别制成盐酸吉西他滨脂质体注射剂；对比例I的制备エ艺与实施例I的不同之处在于，步骤(5)为将上述的混悬液用
O.45 μ m的微孔滤膜过滤，将滤液置于-40°c条件下冷冻4小时，再以2°C /小时的速度升温至25°C，保温3小时至干燥，得到脂质体冻干粉末表I对比例1-3中所用成分
权利要求
1.一种盐酸吉西他滨脂质体注射剂，其主要由以下重量配比的成分制成盐酸吉西他滨(以吉西他滨计)2份胆固醇4-20份 蛋黄磷脂酰肌醇5-90份卵磷脂1-10份吐温801-60份海藻糖2-50份甘露醇5-50份 PVP0.1-4 ィ分， 优选地，胆固醇与卵磷脂的重量之和与蛋黄磷脂酰肌醇之间的重量比为1:1-1:3。
2.根据权利要求I所述的盐酸吉西他滨脂质体注射剂，其主要由以下重量配比的成分制成盐酸吉西他滨(以吉西他滨计)2份胆固醇8-15儉 蛋黄磷脂酰肌醇10-40份卵磷脂2-5份吐温803-40份海藻糖3-40份甘露醇6-40份 P\ P0.3-4 份， 优选地,胆固醇与卵磷脂的重量之和与蛋黄磷脂酰肌醇之间的重量比为1:1-1:2。
3.根据权利要求I所述的盐酸吉西他滨脂质体注射剂，其主要由以下重量配比的成分制成盐酸吉西他滨(以吉西他滨计)2份胆固醇10-20份 蛋黄磷脂酰肌醇15-30份卵磷脂5-10份吐温8010-30份海藻糖4-30份甘露醇8-30份PVP0.5-4 份.优选地，胆固醇与卵磷脂的重量之和与蛋黄磷脂酰肌醇之间的重量比为1:1。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的盐酸吉西他滨脂质体注射剂，其特征在于盐酸吉西他滨(以吉西他滨计)的规格为O. 2g或I. 0g。
5.一种制备盐酸吉西他滨脂质体注射剂的方法，其特征在于包括如下步骤 (1)将胆固醇、蛋黄磷脂酰肌醇、卵磷脂和吐温80溶于缓冲盐溶液中，制成空白脂质体； (2)将上述制备的空白脂质体经流通蒸汽灭菌处理，然后超声处理两次，毎次15分钟； (3)无菌条件下，向溶液状态的脂质体中加入盐酸吉西他滨，不断搅拌下加入海藻糖，甘露醇和PVP ； (4)O. 45 μ m微孔滤膜过滤，灌装，然后进行冻干，即得盐酸吉西他滨脂质体注射剂。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的缓冲盐溶液是选自磷酸盐缓冲溶液、枸櫞酸盐缓冲溶液、碳酸盐缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液中的ー种。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的缓冲盐溶液为pH为7.2的磷酸盐缓冲溶液。
8.根据权利要求5所述的盐酸吉西他滨脂质体注射剂的制备方法，其特征在于步骤(3)中所述的溶液状态脂质体的温度为60°C。
9.根据权利要求5所述的盐酸吉西他滨脂质体注射剂的制备方法，其特征在于步骤(4 )中所述的冻干时预冻温度为-2(T-65 °C，预冻时间为2 24小时，升华时间为12^48小时，再干燥温度为(T35°C ;再干燥时间为2 12小吋。
10.根据权利要求I所述盐酸吉西他滨脂质体注射剂在制备抗肿瘤药中的用途。
全文摘要
本发明公开一种盐酸吉西他滨脂质体注射剂及其制法。该脂质体注射剂由特定重量配比的盐酸吉西他滨、胆固醇、蛋黄磷脂酰肌醇、卵磷脂、吐温80、海藻糖、甘露醇和聚乙烯吡咯烷酮制成。本发明的脂质体注射剂具有良好的制剂稳定性，冷冻过程中脂质体不会因融合、冰晶等发生破裂，长期储存后，脂质体同样保持良好的包封率；本发明提高了盐酸吉西他滨的溶解度，提高了制剂产品的质量，减少了毒副作用，增加了药物在体循环中的保留时间，提高了药物的生物利用度，疗效明显提高；并且制备方法简单，适合于工业化大生产。
文档编号A61K9/14GK102716089SQ201210222109
公开日2012年10月10日 申请日期2012年6月29日 优先权日2012年6月29日
发明者陶灵刚 申请人:海南灵康制药有限公司