专利名称：冷冻干燥技术制备壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维复合膜的方法
技术领域：
本发明涉及壳聚糖/透明质酸衍生物的制备和用冷冻干燥技术制备基于氢键作用的壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维复合膜及其药物缓释用途。
背景技术：
纳米纤维(nanofiber)通常具有很高的表面积-体积比，并且由于纳米效应往往具有普通材料不具备的独特的性能，较高的表面能、高表面活性等，因而在医药、电子、环境保护等方面得到广泛的应用。目前制备纳米纤维的方法主要有静电纺丝法、模板法、自主装、拉伸法和相分离法。静电纺丝法是一种比较容易制备出连续的各种形貌的纳米纤维的一种方法，Audrey Frenot等人用电纺丝法制备了聚合物纳米纤维，纤维的直径小于lOOnm，长度可以达到几千米，其缺点是很难进行大规模生产。模板聚合法是用纳米多孔膜 作为模板来制备纳米纤维或中空纳米纤维的方法，其中，申请号为200510123562. 6的中国发明专利申请公开以溶致液晶为模板制备苯胺纳米纤维的方法，聚合条件易于控制，聚合影响因素少，可以获得各种结构的纳米尺寸聚合物产物，反应完成后模板容易去除，主要缺点就是非常耗时。拉伸工艺法类似于纤维工业中的干法纺丝，该法能制得很长的单根纳米纤维。其缺点是只有能够承受巨大的应力牵引形变的粘弹性材料才可能拉伸成纳米纤维。相分离法是溶解、凝胶化、萃取、冷凝和干燥得到纳米多孔泡沫的过程，其中，申请号为201110375234. O的中国专利申请公开一种混合相分离制备聚合物多孔纳米纤维的方法，得到的聚合物多孔纳米纤维直径在300 900nm之间，孔径为I 120nm。其缺点是需要花费很长的时间使聚合物转化为纳米多孔泡沫。冷冻干燥法是制备纳米纤维一种方法。这种方法制备纳米纤维有以下优点(I)操作过程简单、易于控制，成本低廉；(2)可以制备出极细天然高分子纳米纤维；(3)并且可以大批量、连续制备天然高分子基纳米纤维；(4)利用冻干法制备的天然高分子纳米纤维具有良好的生物相容性。利用冷冻干燥技术制备人工合成聚合物纳米纤维的方法已经得到普遍推广，其中，公开号为CN101927033A的中国专利公开了 PHBV纳米纤维支架材料及其制备方法和应用，此发明利用冻干技术，制备了 PHBV纳米纤维支架，其价格低廉，制备工艺简单，生物相容性好，孔隙率高，支架结构及纤维形态可控，其形态结构类似人体软骨组织细胞外基质，能够更好的促进软骨细胞的粘附、增殖和分化，非常适合于软骨组织的修复和重建。申请号为200910045769. 4的中国专利申请公开了丝束蛋白/P(LLA-CL)复合纳米纤维组织修复支架的制备方法，该制备方法采用了冻干的技术，简单易行，原材料资源丰富，易实现工业化生产；制得的纳米纤维具有良好的生物相容性、良好的机械性能及较高的孔隙率。目前利用冷冻干燥技术制备天然生物高分子纳米纤维的报道还很少，而天然生物高分子具有一般高分子不具备的优点不需要合成，即生成过程无污染；一般无毒，生物相容性、降解性好。
壳聚糖和透明质酸作为天然生物高分子材料，被广泛用于生物医学领域，它们具有易制备，无毒，易降解和生物相容性好的特性。壳聚糖上的氨基、羟基性质比较活泼，在这些官能团上可发生多种类型的衍生化反应，通过化学修饰制备各种功能性(水溶性，有机溶剂溶解性或可光聚合性)的壳聚糖衍生物。壳聚糖的衍生化反应包括酰化反应、酯化反应、醚化反应等扩大壳聚糖用途，来改性后的壳聚糖可以用做基因载体，抗菌剂等，而且可以提高它在中性PH中的生物降解性能。基于氢键作用制备多层膜和微球的方法备受关注，Uttam Manna等人报道了基于氢键作用在胶体粒子表面形成生物高分子自组装结构，这些材料在药物载体和基因传递方面有重要作用；Caruso等报道了基于氢键作用制备的聚丙烯酸/聚酰胺(PAA/PNIPAAM)多层膜，这种多层膜在升高温度时可以释放胶囊。
发明内容
本发明的目的是提供一种不使用交联剂，基于氢键作用的壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维复合膜的制备方法。 本发明是以壳聚糖和透明质酸为原料，利用DNA碱基对(鸟嘌呤和胞嘧啶之间形成氢键)的模型，制备了壳聚糖和透明质酸的衍生物(鸟嘌呤改性壳聚糖和胞嘧啶改性透明质酸)，采用冷冻干燥技术制备了基于氢键作用的壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜，并对膜做了药物释放研究。该制备方法包括以下步骤(I)鸟嘌呤改性壳聚糖鸟嘌呤溶解在二甲基甲酰胺中，同时加入HCl，搅拌，得到鸟嘌呤溶液；将壳聚糖溶解在二甲基甲酰胺中，同时加入聚磷酸酯，然后再逐滴加入鸟嘌呤溶液，混合溶液在30 80°C，加热时间为10 25h，回流，经后处理得到纯净的鸟嘌呤改性的壳聚糖产物；(2)胞嘧啶改性透明质酸将胞嘧啶溶解在水中，并加入HC1，得到胞嘧啶溶液；将透明质酸溶解在水中，同时加入聚磷酸酯，然后逐滴加入胞嘧啶溶液，混合液在30 80°C温度下加热，加热时间为10 25h，回流，经后处理得到纯净的胞嘧啶改性的透明质酸产物；(3)壳聚糖衍生物溶液的配制将步骤(I)中制备的鸟嘌呤改性的壳聚糖溶解在水中，配成溶液，然后将溶液充分搅拌，以致完全溶解，即得到壳聚糖衍生物溶液；(4)透明质酸衍生物溶液的配制将步骤(2)中制备的胞嘧啶改性的透明质酸溶解在水中，配成溶液，然后将溶液充分搅拌，以致完全溶解，即得到透明质酸衍生物溶液；(5)冷冻干燥法制备基于氢键作用的壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜分别取步骤(3)、(4)中配制的壳聚糖和透明质酸衍生物溶液混合，制备成壳聚糖/透明质酸衍生物混合溶液；将抗癌药物阿霉素DOX或紫杉醇PTX药物分别加入到配好的壳聚糖/透明质酸衍生物混合溶液中，搅拌，得到均一溶液，并转移到液氮冷冻装置中，开启冷冻装置，在液氮环境中急速冻结，然后在I 600Pa的真空度范围，-80 _10°C的冷冻温度范围，冷冻时间为12 48h得到冻结的壳聚糖/透明质酸衍生物溶液；将冻结的壳聚糖/透明质酸衍生物溶液在冷冻干燥机中进行冻干处理，得到载有药物壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜。药物控释实验将载有药物的壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜分别放入PBS缓冲液和水中，随着时间的变化，壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜的药物释放量由UV可见光谱监测得到。进一步，步骤(3)中所述的壳聚糖分子量为I万 100万，脱乙酰度为80 92% ；配制的鸟嘌呤改性壳聚糖溶液，其重量百分比为O. 01 O. 25 Wt%0进一步，步骤(4)中所述的透明质酸分子量为8000 100万；配制的胞嘧啶改性透明质酸溶液，其重量百分比为O. 01 O. 25 wt%o进一步，步骤(5)中配制的壳聚糖和透明质酸衍生物混合溶液，其重量百分比为O. 01 O. 25 wt%0基于氢键作用制备纳米纤维复合膜具有以下优点I.对环境刺激如pH变化、温度变化和溶剂等很敏感；·2.在确定各种生物分子包括蛋白质和核酸的二级结构方面起到重要作用，Hyunmin Yi等人证明溶液pH改变时，壳聚糖的带电状态会改变，蛋白质、核酸和病毒粒子可以在壳聚糖的带电位置进行组装。3.不需使用交联剂，无药物残留；4. 一步法就可以得到纳米纤维复合膜。
图I.为室温下，壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜对抗癌药物阿霉素(DOX)分别在PBS缓冲溶液和水中的释放量比较；图2.为室温下，壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜对抗癌药物阿霉素(DOX)和紫杉醇(PTX)药物的释放量比较；图3.为壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜的扫描电镜图。这种壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜形成的条件是冻干机的冷冻温度为_80°C、真空度降到600Pa，在该条件下将冻结的壳聚糖/透明质酸衍生物溶液在冷冻干燥机中进行冻干处理48h，得到壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜。
具体实施例方式实施例I :(I)将O. Olmmol的鸟嘌呤溶解在50ml 二甲基甲酰胺中，同时加入O. 25mL36%的HC1，磁石搅拌，得到鸟嘌呤溶液。将分子量为5万，脱乙酰度为82%的壳聚糖O. 0006mmol溶解在30mL 二甲基甲酰胺中，同时加入O. 0004mmol聚磷酸酯，然后再逐滴加入鸟嘌呤溶液，混合溶液在50°C下加热回流20h。反应在室温下冷却，二甲基甲酰胺可由减压蒸馏除去。残留物溶解在水中，冰水浴I小时除去未反应的鸟嘌呤。加入氨水，调节pH到10。然后用乙酸乙酯除去氨水层，溶液中的有机层再由蒸发除去，最终得到纯净的鸟嘌呤改性壳聚糖产物；(2)将O. 0075mmol胞嘧啶溶解在50ml水中，并加入O. 25ml36%的HC1，得到胞嘧啶溶液。将分子量为8000的透明质酸O. 00375mmol溶解在50ml水中，同时加入O. 0003mmol聚磷酸酯，然后再逐滴加入胞嘧啶溶液，混合物油浴50°C加热回流20h。产物溶解在水中，冰水浴I小时除去未反应的胞嘧啶。然后加入一定量的氨水来中和酸层，调节PH到7。再用乙酸乙酯除去多余的氨水层，最后蒸发除去有机层得到纯净的胞嘧啶改性透明质酸产物；(3)取(I)中得到的O.Olg壳聚糖衍生物溶解在IOOmL水中，配成重量百分比为
O.01%的溶液，然后将溶液充分搅拌，以致完全溶解，即得到壳聚糖衍生物溶液。取(2)中得到的O. Olg透明质酸衍生物溶解在IOOmL水中，配成重量百分比为O. 01%的溶液，然后将溶液充分搅拌，以致完全溶解，即得到透明质酸衍生物溶液。将两种配好的溶液各取30g，混合，搅拌半小时，得到重量百分比为O. 01%的壳聚糖/透明质酸衍生物混合液。(4)将O. 6mg抗癌药物阿霉素(DOX)加入到(3)中配制的壳聚糖/透明质酸衍生物溶液中，搅拌半小时，得到均一溶液；将该溶液转移到液氮冷冻装置中，开启，在液氮环境中急速冻结；然后在20min内将冷冻干燥机的冷冻温度降到_80°C、真空度降到600Pa，在该条件下将冻结的壳聚糖/透明质酸衍生物溶液在冷冻干燥机中进行冻干处理48h，得到壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜，其扫描电镜图如图3所示。(5)室温下，将冻干载有抗癌药物阿霉素(DOX)的壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜放入水中一段时间，随着时间 的变化，壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜在水中的释放量较少(如图I)。实施例2 (I)将O. Olmmol的鸟嘌呤溶解在50ml 二甲基甲酰胺中，同时加入O. 25mL36%的HC1，磁石搅拌，得到鸟嘌呤溶液。将分子量为10万，脱乙酰度为85%的壳聚糖O. 0045mmol溶解在30mL 二甲基甲酰胺中，同时加入O. 003mmol聚磷酸酯，然后再逐滴加入鸟嘌呤溶液，混合溶液在50°C下加热回流20h。反应在室温下冷却，二甲基甲酰胺可由减压蒸馏除去。残留物溶解在水中，冰水浴I小时除去未反应的鸟嘌呤。加入氨水，调节pH到10。然后用乙酸乙酯除去氨水层，溶液中的有机层再由蒸发除去，最终得到纯净的鸟嘌呤改性壳聚糖产物；(2)将O. 0075mmol胞嘧啶溶解在50ml水中，并加入O. 25ml36%的HC1，得到胞嘧啶溶液。将分子量为2万的透明质酸O. 00125mmol溶解在50ml水中，同时加入O. 0008mmol聚磷酸酯，然后再逐滴加入胞嘧啶溶液，混合物油浴50°C加热回流20h。产物溶解在水中，冰水浴I小时除去未反应的胞嘧啶。然后加入一定量的氨水来中和酸层，调节PH到7。再用乙酸乙酯除去多余的氨水层，最后蒸发除去有机层得到纯净的胞嘧啶改性透明质酸产物；(3)取(I)中得到的O. 05g壳聚糖衍生物溶解在IOOmL水中，配成重量百分比为
O.05%的溶液，然后将溶液充分搅拌，以致完全溶解，即得到壳聚糖衍生物溶液。取(2)中得到的O. 05g透明质酸衍生物溶解在IOOmL水中，配成重量百分比为O. 05%的溶液，然后将溶液充分搅拌，以致完全溶解，即得到透明质酸衍生物溶液。将两种配好的溶液各取30g，混合，搅拌半小时，得到重量百分比为O. 05%的壳聚糖/透明质酸衍生物混合液。(4)将3mg抗癌药物阿霉素(DOX)加入到(3)中配制的壳聚糖/透明质酸衍生物溶液中，搅拌半小时，得到均一溶液；将该溶液转移到液氮冷冻装置中，开启，在液氮环境中急速冻结；然后在25min内将冷冻干燥机的冷冻温度降到_60°C、真空度降到200Pa，在该条件下将冻结的壳聚糖/透明质酸衍生物溶液在冷冻干燥机中进行冻干处理48h，得到壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜。(5)室温下，将冻干载有抗癌药物阿霉素(DOX)的壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜放入PBS缓冲液中(pH为7. 2) 一段时间，随着时间的变化，壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜的药物释放量可由UV可见光谱监测得到(如图I)。实施例3
(I)将O. Olmmol的鸟嘌呤溶解在50ml 二甲基甲酰胺中，同时加入O. 25mL36%的HCl，磁石搅拌，得到鸟嘌呤溶液。将分子量为20万，脱乙酰度为87%的壳聚糖O. 003mmol溶解在60mL 二甲基甲酰胺中，同时加入O. 002mmol聚磷酸酯，然后再逐滴加入鸟嘌呤溶液，混合溶液在50°C下加热回流20h。反应在室温下冷却，二甲基甲酰胺可由减压蒸馏除去。残留物溶解在水中，冰水浴I小时除去未反应的鸟嘌呤。加入氨水，调节pH到10。然后用乙酸乙酯除去氨水层，溶液中的有机层再由蒸发除去，最终得到纯净的鸟嘌呤改性壳聚糖产物；(2)将O. 0075mmol胞嘧啶溶解在50ml水中，并加入O. 25ml36%的HCl，得到胞嘧啶溶液。将分子量为5万的透明质酸O. 006mmol溶解在80ml水中，同时加入O. 004mmol聚磷酸酯，然后再逐滴加入胞嘧啶溶液，混合物油浴50°C加热回流20h。产物溶解在水中，冰水浴I小时除去未反应的胞嘧啶。然后加入一定量的氨水来中和酸层，调节PH到7。再用乙酸乙酯除去多余的氨水层，最后蒸发除去有机层得到纯净的胞嘧啶改性透明质酸产物；(3)取(I)中得到的O. 075g壳聚糖衍生物溶解在IOOmL水中，配成重量百分比为·O.075%的溶液，然后将溶液充分搅拌，以致完全溶解，即得到壳聚糖衍生物溶液。取(2)中得到的O. 075g透明质酸衍生物溶解在IOOmL水中，配成重量百分比为O. 075%的溶液，然后将溶液充分搅拌，以致完全溶解，即得到透明质酸衍生物溶液。将两种配好的溶液各取30g，混合，搅拌半小时，得到重量百分比为O. 075%的壳聚糖/透明质酸衍生物混合液。(4)将4. 5mg抗癌药物阿霉素(DOX)加入到(3)中配制的壳聚糖/透明质酸衍生物溶液中，搅拌半小时，得到均一溶液；将该溶液转移到液氮冷冻装置中，开启，在液氮环境中急速冻结；然后在30min内将冷冻干燥机的冷冻温度降到_40°C、真空度降到50Pa，在该条件下将冻结的壳聚糖/透明质酸衍生物溶液在冷冻干燥机中进行冻干处理36h，得到壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜。(5)室温下，将冻干载有抗癌药物阿霉素(DOX)的壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜放入PBS缓冲液中(pH为7. 4) 一段时间，随着时间的变化，壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜的药物释放量由UV可见光谱监测得到(如图I)。实施例4 (I)将O. Olmmol的鸟嘌呤溶解在50ml 二甲基甲酰胺中，同时加入O. 25mL36%的HCl，磁石搅拌，得到鸟嘌呤溶液。将分子量为90万，脱乙酰度为92%的壳聚糖O. 003mmol溶解在60mL 二甲基甲酰胺中，同时加入O. 002mmol聚磷酸酯，然后再逐滴加入鸟嘌呤溶液，混合溶液在50°C下加热回流20h。反应在室温下冷却，二甲基甲酰胺可由减压蒸馏除去。残留物溶解在水中，冰水浴I小时除去未反应的鸟嘌呤。加入氨水，调节pH到10。然后用乙酸乙酯除去氨水层，溶液中的有机层再由蒸发除去，最终得到纯净的鸟嘌呤改性壳聚糖产物；(2)将O. 0075mmol胞嘧啶溶解在50ml水中，并加入O. 25ml36%的HC1，得到胞嘧啶溶液。将分子量为60万的透明质酸O. 004mmol溶解在80ml水中，同时加入O. 0027mmol聚磷酸酯，然后再逐滴加入胞嘧啶溶液，混合物油浴50°C加热回流20h。产物溶解在水中，冰水浴I小时除去未反应的胞嘧啶。然后加入一定量的氨水来中和酸层，调节PH到7。再用乙酸乙酯除去多余的氨水层，最后蒸发除去有机层得到纯净的胞嘧啶改性透明质酸产物；(3)取(I)中得到的O. Ig壳聚糖衍生物溶解在IOOmL水中，配成重量百分比为O.1%的溶液，然后将溶液充分搅拌，以致完全溶解，即得到壳聚糖衍生物溶液。取(2)中得到的O. Ig透明质酸衍生物溶解在IOOmL水中，配成重量百分比为O. 1%的溶液，然后将溶液充分搅拌，以致完全溶解，即得到透明质酸衍生物溶液。将两种配好的溶液各取30g，混合，搅拌半小时，得到重量百分比为O. 1%的壳聚糖/透明质酸衍生物混合液。(4)将6mg抗癌药物阿霉素(DOX)加入到(3)中配制的壳聚糖/透明质酸衍生物溶液中，搅拌半小时，得到均一溶液；将该溶液转移到液氮冷冻装置中，开启，在液氮环境中急速冻结；然后在35min内将冷冻干燥机的冷冻温度降到_80°C、真空度降到IPa，在该条件下将冻结的壳聚糖/透明质酸衍生物溶液在冷冻干燥机中进行冻干处理48h，得到壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜。(5)室温下，将冻干载有抗癌药物阿霉素(DOX)的壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜放入PBS缓冲液中(pH为7. 6) 一段时间，随着时间的变化，壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜的药物释放量由UV可见光谱监测得到(如图I)。实施例5 (I)将O. Olmmol的鸟嘌呤溶解在50ml 二甲基甲酰胺中，同时加入O. 25mL36%的HCl，磁石搅拌，得到鸟嘌呤溶液。将分子量为90万，脱乙酰度为92%的壳聚糖O. 003mmol溶解在60mL 二甲基甲酰胺中，同时加入O. 002mmol聚磷酸酯，然后再逐滴加入鸟嘌呤溶液，混合溶液在50°C下加热回流20h。反应在室温下冷却，二甲基甲酰胺可由减压蒸馏除去。残留物溶解在水中，冰水浴I小时除去未反应的鸟嘌呤。加入氨水，调节pH到10。然后用乙酸乙酯除去氨水层，溶液中的有机层再由蒸发除去，最终得到纯净的鸟嘌呤改性壳聚糖产物；(2)将O. 0075mmol胞嘧啶溶解在50ml水中，并加入O. 25ml的HC1，得到胞嘧啶溶液。将分子量为60万的透明质酸O. 004mmol溶解在80ml水中，同时加入O. 0027mmol聚磷酸酯，然后再逐滴加入胞嘧啶溶液，混合物油浴50°C加热回流20h。产物溶解在水中，冰水浴I小时除去未反应的胞嘧啶。然后加入一定量的氨水来中和酸层，调节PH到7。再用乙酸乙酯除去多余的氨水层，最后蒸发除去有机层得到纯净的胞嘧啶改性透明质酸产物；(3)取(I)中得到的O. Ig壳聚糖衍生物溶解在IOOmL水中，配成重量百分比为
O.1%的溶液，然后将溶液充分搅拌，以致完全溶解，即得到壳聚糖衍生物溶液。取(2)中得到的O. Ig透明质酸衍生物溶解在IOOmL水中，配成重量百分比为O. 1%的溶液，然后将溶液充分搅拌，以致完全溶解，即得到透明质酸衍生物溶液。将两种配好的溶液各取30g，混合，搅拌半小时，得到重量百分比为O. 1%的壳聚糖/透明质酸衍生物混合液。(4)将6mg抗癌药物阿霉素(DOX)和6mg紫杉醇(PTX)分别加入到(3)中配制的壳聚糖/透明质酸衍生物溶液中，各搅拌半小时，得到两种含不同药物的均一溶液；将这两种溶液转移到液氮冷冻装置中，开启，在液氮环境中急速冻结；然后在35min内将冷冻干燥机的冷冻温度降到-80°C、真空度降到IPa，在该条件下将冻结的两种壳聚糖/透明质酸衍生物溶液在冷冻干燥机中进行冻干处理48h，得到含有两种不同药物的壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜。(5)室温下，将冻干载有抗癌药物阿霉素(DOX)和紫杉醇(PTX)的壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜放入PBS缓冲液中(pH为7. 5)—段时间，随着时间的变化，壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜的两种药物释放量由UV可见光谱监测得到(如图2)。
权利要求
1.冷冻干燥技术制备壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维复合膜的方法，其特征在于包括以下步骤 (1)鸟嘌呤改性壳聚糖鸟嘌呤溶解在二甲基甲酰胺中，同时加入HC1，搅拌，得到鸟嘌呤溶液；将壳聚糖溶解在二甲基甲酰胺中，同时加入聚磷酸酯，然后再逐滴加入鸟嘌呤溶液，混合溶液在30 80°C，加热时间为10 25h，回流，经后处理得到纯净的鸟嘌呤改性的壳聚糖产物； (2)胞嘧啶改性透明质酸将胞嘧啶溶解在水中，并加入HC1，得到胞嘧啶溶液；将透明质酸溶解在水中，同时加入聚磷酸酯，然后逐滴加入胞嘧啶溶液，混合液在30 80°C温度下加热，加热时间为10 25h，回流，经后处理得到纯净的胞嘧啶改性的透明质酸产物； (3)壳聚糖衍生物溶液的配制将步骤(I)中制备的鸟嘌呤改性的壳聚糖溶解在水中，配成溶液，然后将溶液充分搅拌，以致完全溶解，即得到壳聚糖衍生物溶液； (4)透明质酸衍生物溶液的配制将步骤(2)中制备的胞嘧啶改性的透明质酸溶解在水中，配成溶液，然后将溶液充分搅拌，以致完全溶解，即得到透明质酸衍生物溶液； (5)冷冻干燥法制备基于氢键作用的壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜分别取步骤(3)、(4)中配制的壳聚糖和透明质酸衍生物溶液混合，制备成壳聚糖/透明质酸衍生物混合溶液；将抗癌药物阿霉素DOX或紫杉醇PTX药物分别加入到配好的壳聚糖/透明质酸衍生物混合溶液中，搅拌，得到均一溶液，并转移到液氮冷冻装置中，开启冷冻装置，在液氮环境中急速冻结，然后在I 600Pa的真空度范围，-80 _10°C的冷冻温度范围，冷冻时间为12 48h得到冻结的壳聚糖/透明质酸衍生物溶液；将冻结的壳聚糖/透明质酸衍生物溶液在冷冻干燥机中进行冻干处理，得到载有药物壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜。
2.根据权利要求I的制备方法，其特征在于将载有药物的壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜分别放入PBS缓冲液和水中，随着时间的变化，壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜的药物释放量由UV可见光谱监测得到。
3.根据权利要求I的制备方法，其特征在于步骤(3)中所述的壳聚糖分子量为I万 100万，脱乙酰度为80 92% ;配制的鸟嘌呤改性壳聚糖溶液，其重量百分比为O. 01 O. 25Wt%o
4.根据权利要求I的制备方法，其特征在于步骤(4)中所述的透明质酸分子量为8000 100万；配制的胞嘧啶改性透明质酸溶液，其重量百分比为O. 01 O. 25 wt%。
5.根据权利要求I的制备方法，其特征在于步骤(5)中配制的壳聚糖和透明质酸衍生物混合溶液，其重量百分比为O. 01 O. 25 wt%o
全文摘要
冷冻干燥技术制备壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维复合膜的方法涉及壳聚糖/透明质酸衍生物的制备领域。本发明将制备的水溶性壳聚糖/透明质酸衍生物混合溶液在液氮环境中急速冻结，然后用冷冻干燥机进行冻干处理，得到壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维复合膜。对得到的纳米纤维膜进行药物缓释实验，结果表明所得的纤维膜对环境刺激(pH变化)敏感，可以在药物缓释方面得到应用。本发明制备的纳米纤维膜不需使用交联剂，一步法就可以得到复合膜，操作过程简单，成本低廉，并且可以通过本发明可以大批量、连续制备基于氢键作用的壳聚糖/透明质酸衍生物纳米纤维膜。
文档编号A61P35/00GK102908626SQ20121044234
公开日2013年2月6日 申请日期2012年11月7日 优先权日2012年11月7日
发明者马贵平, 王志亮, 聂俊, 方大为 申请人:北京化工大学