专利名称：川贝母地上部分提取物及其提取纯化方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及川贝母地上部分提取物，及其提取纯化方法和用途。
背景技术：
川贝母，为百合科(Lili aceae)川贝母 FritillariacirrhosaD.Don、暗紫贝母FritillariaunibracteataHsiaoetK.C.Hsia、甘肃贝母 FritillariaprzewalskiiMaxim.、梭砂贝母 FritillariadelavayiFtanch.或太白贝母 Fritillaria taipaiensis P.Y.L1、瓦布贝母 Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsia var.wabuensis (S.Y.Tang etS.C.Yue) Z.D.Liu, S.Wang et S.C.Chen的干燥鳞茎，具有止咳化痰、清热散结的功效。目前川贝母的入药部位习用鳞茎，其有效部位为异留类的生物碱成分。由于长期形成的用药习惯，川贝母的地上部分基本弃之不用，导致了贝母药材资源的浪费。随着川贝母栽培面积的迅速扩大，其地上部位的开发利用价值迅速受到关注。
发明内容
本发明的目的在于提供一种川贝母地上部分提取物及其提取纯化方法和用途。本发明提供了川贝母地上部分的提取纯化方法，它包括如下步骤:(I)取川贝母地上部分，加入30-95%乙醇提取后，提取液调节pH至2-5，取上清液，浓缩，再调节PH至7-12，即得上样液；(2)将步骤(I)制备的上样液上大孔吸附树脂，先用水洗至洗脱液无色，弃去水洗液，再用乙醇、酸性水溶液或酸性醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，即得川贝母地上部分提取物。其中，所述川贝母为瓦布贝母Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsiavar.wabuensis (S.Y.Tang et S.C.Yue) Z.D.Liu, S.Wang et S.C.Chen。进一步地，步骤(I)中采用70-75%v/v乙醇提取，提取液调节pH至2_3，取上清液，浓缩，再调节pH至8.5-9。更进一步地，步骤(I)中，乙醇提取物的具体操作如下:以川贝母地上部分25倍量v/w的75%v/v乙醇浸泡药材1.5h后，85°C提取2次，每次1.0h0进一步地，步骤(2)中，所述大孔吸附树脂为非极性或中极性树酯，用pH2.5-3.5且含醇量45%或75%v/v的酸性醇溶液、或45-55%v/v乙醇进行洗脱。更进一步地，步骤(2)中，所述大孔吸附树脂为D101、X-5或D-301型树酯；酸性醇溶液的PH为3，含醇量为70%v/v。其中，所述酸性醇溶液的用量为50倍柱体积。本发明还提供了一种川贝母地上部分提取物，该提取物中，总生物碱含量大于15%w/w。
进一步地，所述提取物是以上述方法制备得到的。
本发明还提供了上述川贝母地上部分提取物在制备止咳化痰、平喘、清热散结的药物或保健品中的用途。本实验通过药理学实验验证川贝母地上茎叶提取物具有同地下鳞茎部位相同甚至更好的止咳、祛痰、平喘功效，这对开发瓦布贝母的非药用部位，增加川贝母的药用范围提供了有效的理论依据，为扩大川贝母的药源提供了可能，降低了对贝母植物资源的浪费，带来巨大的经济效益和社会效益同时，极大促进生态环境保护和资源的持续利用；本发明川贝母地上部分提取物的制备方法，能够有效富集贝母生物碱类化合物，操作简便，方法稳定，具有良好的工业应用前景。
图1乙醇浓度对提取率的影响图2乙醇用量对提取率的影响图3提取时间对提取率的影响图4提取温度对提取率的影响图5动态吸附量考察图6上样pH值考察图7洗脱液浓度考察图8洗脱液用量的考察
图9洗脱液pH值的考察
具体实施例方式实施例1本发明瓦布贝母地上部分提取物制备方法用瓦布贝母地上部位，加入25倍量浓度为75%的乙醇溶液浸泡药材1.5h后提取2次，每次1.0h，过滤，合并滤液，减压回收溶剂，得浓缩液。浓缩液中加入lmol/L的NaOH溶液调节PH值为8.5，X-5型号的大孔树脂进行吸附，再用浓度为75%、pH值=3的酸性乙醇溶液50倍量洗脱。经测定，该提取物中总生物碱含量为18%。实施例2本发明瓦布贝母地上部分提取物制备方法的筛选I仪器与材料1.1 仪器超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，UVllOO紫外分光光度计(上海天美科学仪器有限公司)，高效液相色谱仪1200型(美国安捷伦公司)，UPT-1-10T型优谱UPT系列超纯水器(成都超纯科技有限公司)，BS124S型电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司)，旋转蒸发仪R-201恒温水浴锅W201B (上海申胜生物技术有限公司)，循环水式多用真空泵SHB-1II (郑州长城科技工贸有限公司)，便携式酸度计pHB-1型(杭州奥立利龙仪器有限公司)1.2 材料贝母地上部位(成都新荷花饮片有限公司提供)，贝母乙素对照品(四川省食品药品检验所，批号:MUST-11012001)色谱甲醇(迪马公司)DlO1、D301、S_8、X-5型大孔吸附树月旨(成都科龙化工试剂厂)溴甲酚绿、重蒸水、95%乙醇、甲醇、三氯甲烷，浓盐酸，浓硫酸，氢氧化钠等，以上分析醇试剂均购自成都科龙化工试剂厂。2.实验步骤2.1总生物的含量测定2.1.1标准曲线的绘制取贝母乙素对照品约2.5mg，精密称定，用三氯甲烷溶解并定容至50ml的容量瓶中，精密吸取对照品母液3.0ml,3.5ml,4.0ml,4.5ml,5.0ml，分别置于60ml分液漏斗中，补加三氯甲烷至10.0ml，精密加水5ml，再精密加0.05%溴甲酚绿缓冲液(取溴甲酚绿0.05g,用0.2mol/L氢氧化钠溶液6ml使溶解,加磷酸二氢钾lg，加水使溶解并稀释至100ml，即得)2ml，剧烈振摇，静置30min，三氯甲烷层通过干滤纸过滤于IOml容量瓶中，水层再用三氯甲烷洗涤，合并三氯甲烷层，定容至刻度。随行空白试验，在200-800nm范围内进行全波长扫描，扫描结果在414nm处有最大吸光度，因此在414nm处分别测定其吸光度。得回归方程:y=6.5182x+0.1546，r=0.9991，贝母乙素在0.1482-0.247mg范围内线性关系良好。2.1.2提取液中总生物碱含量的测定 提取液回收溶剂至干后，用2%的HCl溶解，过滤，滤液用NaOH溶液调PH至11，用三氯甲烷每次20ml萃取滤液至透明，收集三氯甲烷层，减压回收溶剂，浸膏转移至IOml的容量瓶中，再用三氯甲烷定容至刻度，得供试品，备用。吸取Iml供试品溶液至分液漏斗中，按标准曲线项下操作，测定吸光度，按回归方程计算总生物碱的含量。2.2提取工艺研究2.2.1浸泡时间的考察称取5份药材，每份约10g，置于圆底烧瓶中，分别加入25倍量75%的乙醇后浸泡1.0h、l.5h、2.0h、2.5h、3.0h后，85°C回流提取2次，每次2h，过滤，收集滤液，按照2.1.2项下提取液中总生物碱含量的测定方法测定总生物碱的含量。结果如表1，药材浸泡1.0h后的吸光度最大，选择浸泡药材1.5h进行试验。表I浸泡时间对提取率的影响
权利要求
1.川贝母地上部分的提取纯化方法，其特征在于:它包括如下步骤: (1)取川贝母地上部分，加入30-95%乙醇提取后，提取液调节pH至2-5，取上清液，浓缩，再调节PH至7-12，即得上样液； (2)将步骤(1)制备的上样液上大孔吸附树脂，先用水洗至洗脱液无色，弃去水洗液，再用乙醇、酸性水溶液或酸性醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，即得川贝母地上部分提取物。
2.根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于:所述川贝母为瓦布贝母Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsia var.wabuensis(S.Y.Tang et S.C.Yue)Z.D.Liuj S.Wang et S.C.Chen。
3.根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于:步骤(1)中采用70-75%v/v乙醇提取，提取液调节PH至2-3，取上清液，浓缩，再调节pH至8.5-9。
4.根据权利要求3所述的提取纯化方法，其特征在于:步骤(1)中，乙醇提取物的具体操作如下: 以川贝母地上部分25倍量v/w的75%v/v乙醇浸泡药材1.5h后，85°C提取2次，每次1.0h。
5.根据权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于:步骤(2)中，所述大孔吸附树脂为非极性或中极性树酯，用PH2.5-3.5且含醇量45%或75%v/v的酸性醇溶液、或45_55%v/V乙醇进行洗脱。
6.根据权利要求5所述的提取纯化方法，其特征在于:步骤(2)中，所述大孔吸附树脂为DlOl、X-5或D-301型树酯；酸性醇溶液的pH为3，含醇量为70%v/v。
7.根据权利要求4-6任意一项所述的提取纯化方法，其特征在于:所述酸性醇溶液的用量为50倍柱体积。
8.—种川贝母地上部分提取物，其特征在于:该提取物中，总生物碱含量大于15%w/w。
9.根据权利要求8所述的川贝母地上部分提取物，其特征在于:所述提取物是以权利要求1-7任意一项所述方法制备得到的。
10.权利要求8或9所述川贝母地上部分提取物在制备止咳化痰、平喘、清热散结的药物或保健品中的用途。
全文摘要
本发明提供了一种川贝母地上部分提取物及其提取纯化方法和用途。本实验通过药理学实验验证川贝母地上茎叶提取物具有同地下鳞茎部位相同甚至更好的止咳、祛痰、平喘功效，这对开发瓦布贝母的非药用部位，增加川贝母的药用范围提供了有效的理论依据，为扩大川贝母的药源提供了可能，降低了对贝母植物资源的浪费，带来巨大的经济效益和社会效益同时，极大促进生态环境保护和资源的持续利用；本发明川贝母地上部分提取物的制备方法，能够有效富集贝母生物碱类化合物，操作简便，方法稳定，具有良好的工业应用前景。
文档编号A61P11/10GK103110801SQ20131007532
公开日2013年5月22日 申请日期2013年3月8日 优先权日2012年3月14日
发明者董小萍, 任波, 赵高琼, 谭玉柱, 谢运飞, 童婷婷 申请人:成都中医药大学