菊糖和菊糖乙酸酯制剂的制作方法

菊糖和菊糖乙酸酯制剂的制作方法
【专利摘要】本公开内容提供了包含β-菊糖或菊糖乙酸酯和活性剂的微粒或纳米颗粒的组合物，其中活性剂被包含在单独微粒或纳米颗粒内。活性剂可以是，例如，疫苗接种抗原、抗原肽序列、或免疫球蛋白。可将组合物掺入各种制剂中用于向受试者诸如人或动物施用。本发明还提供了使用组合物和制剂的方法，包括为了治疗、预防、或抑制传染病、自身免疫性疾病、免疫缺陷紊乱、肿瘤性疾病、退行性疾病、老化疾病，或其组合的目的刺激受试者中的免疫应答，或增强受试者中的免疫应答的方法。
【专利说明】菊糖和菊糖乙酸酯制剂
[0001] 发明背景 发明领域
[0002] 本发明一般涉及疫苗和佐剂，并且更具体地涉及包含β -菊糖和β -菊糖衍生物 的疫苗和佐剂，其中所述β-菊糖和β-菊糖衍生物用作递送装置以及佐剂，包括包含其的 纳米颗粒和微粒组合物以及使用所述组合物治疗的方法。
[0003] 背景咨料
[0004] 接种疫苗的目的是通过产生对施用抗原的强免疫应答，以提供针对感染的长期保 护。疫苗通常需要加入称为佐剂的免疫刺激剂，以提高对抗原的特异性免疫应答的效力和 寿命。理想的疫苗佐剂应刺激对共注射的抗原的体液（Th2型）和细胞（Thl型）两种免疫 应答。需要体液应答以清除细胞外的病原体。细胞应答对消除细胞内的病原体是至关重要 的。
[0005] 在美国用于人类使用的唯一被批准的佐剂明矾（铝盐），仅刺激体液免疫应答。虽 然已成功地开发了仅使用明矾作为佐剂引起保护性抗体应答的一些基于重组蛋白的疫苗， 包括用于乙型肝炎和人乳头状瘤病毒的那些疫苗，但针对疾病诸如癌症、疟疾、疱疹、流感、 结核、HIV和/或AIDS的下一代的重组疫苗，将不仅需要非常强且持久的抗体应答，而且需 要有效的细胞介导的免疫应答。
[0006] 因此，对可促进受试者中抗体应答的新组合物存在需要。还对可促进体液和细胞 两种免疫应答的新颖疫苗佐剂、抗原递送系统、和组合物存在需要。
[0007] 发明概沭
[0008] 本发明提供了当作为微粒或纳米颗粒递送时刺激免疫系统的可溶性或不溶性的 多糖聚合物。当作为微粒或纳米颗粒配制时，菊糖的亚型菊糖）及其半合成衍生 物菊糖乙酸酯（InAc)可作为新颖疫苗佐剂和抗原递送系统起作用。颗粒可被用于为了预 防或抑制传染病、自身免疫性疾病、免疫缺陷紊乱、肿瘤性疾病、退行性疾病、或老化疾病的 目的刺激受试者中的免疫应答。
[0009] 在实施方案中，公开了包含菊糖或菊糖乙酸酯和活性剂的微粒或纳米颗粒的 组合物，其中活性剂可被包含在单独微粒或纳米颗粒内。活性剂可包括抗原、抗原肽或其序 列、免疫原、免疫球蛋白、或其组合。在相关的方面中，活性剂可以是期望针对其的免疫应答 的半抗原或任何剂。
[0010] 在实施方案中，公开了包含菊糖或菊糖乙酸酯颗粒和活性剂的组合物，其中 活性剂可被包含在单独颗粒内，或在物理上与β-菊糖或菊糖乙酸酯的颗粒缔合，其中当 向人或动物施用时，组合物有效地在人或动物中刺激针对活性剂的免疫应答。
[0011] 在一个方面，疫苗组合物包含抗原和有效佐剂量的菊糖乙酸酯，其中对菊糖乙酸 酯的乙酰化的程度为约0. 1 %至100%。
[0012] 在另一个方面，组合物包含β-菊糖或菊糖衍生物和活性剂的微粒或纳米颗粒， 活性剂包括抗原、抗原肽序列、或免疫球蛋白，并且组合物包含有效佐剂量的β-菊糖或菊 糖衍生物，其中菊糖衍生物包括在颗粒制剂形式中的酯化的菊糖、醚化的菊糖、二醛菊糖、 菊糖氨基甲酸酯、菊糖碳酸酯、菊糖的氧化或还原形式、菊糖或其氧化或还原形式与另外的 活性剂的络合、菊糖的阳离子/阴离子/非离子的修饰、或菊糖的磷酸酯，其中将抗原包封 在颗粒内，涂覆或缀合至颗粒上或可包括其组合。
[0013] 在实施方案中，公开了为了治疗或抑制传染病、自身免疫性疾病、免疫缺陷紊乱、 肿瘤性疾病、遗传性疾病、退行性疾病或老化疾病的目的刺激受试者中免疫应答的方法，其 中方法包括向需要其的受试者施用有效量的本文描述的组合物。
[0014] 在实施方案中，公开了提供为了治疗或抑制传染病、自身免疫性疾病、免疫缺陷紊 舌U肿瘤性疾病、遗传性疾病、退行性疾病或老化疾病的目的增强受试者中免疫应答的方 法，其中方法包括向需要其的受试者施用有效量的本文描述的组合物。
[0015] 在实施方案中，公开了诱导受试者中免疫原性应答的方法，包括对所述受试者施 用有效量的本文描述的组合物。
[0016] 在另一个实施方案中，公开了治疗感染的方法，包括向需要其的受试者施用有效 量的本文描述的组合物。感染可由细菌、支原体、真菌、病毒、原生动物、或其他微生物、或其 组合引起。
[0017] 在实施方案中，公开了治疗动物或人中侵染的方法，包括向患有侵染的动物或人 施用有效量的本文描述的组合物。侵染可由微生物、蠕虫、寄生物、或其组合引起。
[0018] 在实施方案中，公开了用于产生抗体或用于刺激免疫细胞的方法，包括用包含本 文描述的组合物的制剂免疫动物或人，并从被免疫的动物或人收集抗体或免疫细胞。抗体 可以是，例如，单克隆抗体或多克隆抗体或其功能片段（例如，Fab、scFv、抗体缀合物或类 似的抗体片段）。
[0019] 在实施方案中，公开了用于生产抗血清的方法，包括用具有本文描述的组合物的 制剂免疫动物或人，并从免疫的动物或人、或从免疫的动物或人的产物（诸如动物的卵） 收集抗血清。抗血清可包含抗体，其中抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体。动物可以 是灵长类动物（primate)、狗（dog)、猫（cat)、奶牛（cow)、小羊（lamb)、猪（pig)、阉猪 (hog)、家禽（poultry)、马（horse)、母马（mare)、骤（mule)、雄性动物（jack)、雌性动物 (jenny)、驹（colt)、犊（calf)、一岁动物（yearling)、公牛（bull)、牛（ox)、绵羊（sheep)、 山羊（goat)、美洲能（llama)、野牛（bison)、水牛（buffalo)、盖羊（lamb)、小山羊（kid)、 小猪（shoat)、母鸡（hen)、小鸡（chicken)、火鸡（turkey)、鸭（duck)、鹅（goose)、能鸟 (ostrich)、鸟（fowl)、兔（rabbit)、野兔（hare)、豚鼠 （guinea pig)、仓鼠（hamster)、小 鼠（mouse)、大鼠（rat)、卩齿齿动物（rodents)、鱼（fish)、水生动物（aquatic animal)或两 栖动物（amphibian)。
[0020] 组合物可通过注射、吸入、口服、直肠、阴道、鼻、或局部施用。在与颗粒包封或缔合 前，活性剂可与生理上可接受的无毒媒介物组合来制备，或在与活性剂包封或缔合后，颗粒 可与生理上可接受的无毒媒介物组合。
[0021] 在一个方面，本文描述的微粒或纳米颗粒可被用作佐剂。在一个相关方面，本文描 述的组合物的颗粒可以是微粒。微粒可具有约lgm至约30 μ m、约1. 5gm至约25 μ m、或约 2 μ m至约20 μ m的直径。颗粒还可以是纳米颗粒。纳米颗粒可具有约10nm至约lOOOnrn、约 10nm 至约 950nm、约 10nm 至 5 约 900nm、约 50nm 至约 900nm、约 100nm 至约 800nm、约 10nm 至约400nm、约400nm至约900nm、或约20nm至约750nm的直径。
[0022] 在另一个方面，β -菊糖或菊糖乙酸酯可具有约4kDa至约25kDa的分子量。
[0023] 在一个方面，组合物还可包括一种或更多种免疫调节因子，诸如淋巴因子、细胞 因子、胸腺细胞刺激因子、单核细胞或巨噬细胞刺激因子、内毒素、病原体相关分子模式 (PAMS)、模式识别受体的配体（PRR)、或其组合。
[0024] 在另一个方面，活性剂可以是抗原、抗原肽、或抗原序列、或免疫球蛋白。在相关 的方面，抗原可以是，例如，DNA或RNA，或包含DNA或RNA的生物组分。在另外的相关方 面，活性剂还可包括细菌的溶解产物或病毒病原体、癌细胞、或与病原体或疾病相关的其 他生物组分（a lysate of a bacterial or a viral pathogen, cancer cell, or other biological component associated with a pathogen or a disease) 〇 例如，生物组分可 以是肽、蛋白、脂质、DNA、或单独的多糖。
[0025] 在一个方面，组合物还可包括有效量的与颗粒包封或缔合的或与颗粒一起被包含 在制剂中的第二活性剂。
[0026] 在另一个方面，本文描述的组合物的施用可刺激免疫应答。免疫应答可包括 Thl(IgG-2a、细胞毒性T细胞）或Th2(IgG-l、IgA)类型的免疫应答、或其组合。在相关的 方面，向动物或人的施用可减少由活性剂、或与活性剂相关的疾病或状况引起的症状的至 少一个。
[0027] 在一个方面，免疫组合物包括，与药学上可接受的载体、稀释剂、或赋形剂组合的 本文描述的组合物。在相关的方面，可将免疫组合物配制为液体、半固体、胶体或固体剂型。 在另外的相关方面，载体可以是液体媒介物或稀释剂可以是固体稀释剂，例如，用于干粉吸 入的固体稀释剂。
[0028] 在实施方案中，公开了 β -菊糖或β -菊糖衍生物，诸如菊糖乙酸酯的微粒和纳米 颗粒制剂，以及其用作免疫刺激剂的用途。在相关的方面，向受试者施用后的前30分钟，制 剂可具有小于约30wt. %的包封的或物理上缔合的分子的突释。
[0029] 在实施方案中，在向受试者施用后的前30分钟，制剂可具有小于约20wt. %的突 释、小于约15wt. %的突释、或小于约10wt. %的突释。在相关的方面，包封的材料的〉约 90wt. %的释放是〉约20天。
[0030] 在实施方案中，公开了本文描述的组合物用于疾病的医疗、兽医、和人畜共患病的 (zoonotic)治疗或预防的用途。在一个方面，药物治疗可以是预防和治疗癌症或其他恶性 肿瘤，包括，但不限于乳腺癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、脑癌、或结肠癌、以及淋巴瘤和白血 病、和骨骼、血液、或淋巴系统的癌症。
[0031] 在实施方案中，公开了如本文描述的组合物用于制造治疗哺乳动物中疾病，例如 人的癌症的药剂的用途。在一个方面，公开了如本文描述的组合物用于制造治疗非哺乳动 物物种中疾病的药剂的用途。在相关的方面，药剂可包括药学上可接受的稀释剂、赋形剂或 载体。
[0032] 在实施方案中，公开了试剂盒，包括包含菊糖或菊糖乙酸酯的微粒或纳米颗 粒的组合物；任选地活性剂；容器；一种或更多种缓冲液，用于活性剂与所述组合物缔合的 说明书；以及标签。
[0033] 附图简沭
[0034] 以下附图构成本说明书的一部分，并且被包括以进一步说明本公开内容的某些实 施方案或各个方面。在一些情况下，本公开内容的实施方案可通过参照附图结合本文提供 的详细说明书被最好地理解。
[0035] 说明书和附图可突出显示本公开内容的某些具体实施例、或某些方面。然而，本领 域技术人员将理解，该实施例或方面的部分可与本公开内容的其他实施例或方面结合来使 用。
[0036] 图1示出由FTIR光谱学对β-菊糖和菊糖乙酸酯的IR光谱的比较。
[0037] 图2示出卵白蛋白从InAc微粒的体外释放曲线。释放研究用在pH 7. 4下的lmL 的lOOmM PBS中分散的10mg的微粒以约lOOrpm震动在37°C下来进行。在不同时间间隔取 样，并用等体积的新鲜PBS来代替。卵白蛋白浓度通过二辛可宁酸（BCA)蛋白质测定法来 测量（η = 3)。
[0038] 图3示出树突状细胞对抗原（ova)的摄取。㈧将DC2. 4细胞与在溶液中或在菊 糖微粒中的FITC ova温育后的流式细胞术。（B)由荧光显微镜示出如与3A中的相同的结 果，DC2. 4细胞的细胞核用DAPI来染色。
[0039] 图4示出了（A) InAc通过MyD88或Mai依赖性TLR激活巨噬细胞，且⑶InAc微 粒与TLR-4相互作用。*指示使用student t检验，结果在统计上是显著的（P〈0. 05)。
[0040] 图5示出了免疫的小鼠血清中ova-特异性总IgG、IgG-l和IgG-2a抗体滴度。在 第1天和第21天将小鼠 （η = 4-5/组）皮内注射单独ova(100 μ g)、ova与明研^ (200 μ g)、 ova与空白的β -菊糖微粒、或在β -菊糖微粒中装载的ova，作为初次剂量和加强剂量。在 免疫接种后1周和3周时，收集血清，用于使用间接ELISA分析抗-ova抗体滴度。
[0041] 图6示出卵白蛋白（ova)从β -菊糖微粒的释放曲线。释放研究用在pH7. 4下的 lmL的lOOmM PBS (磷酸盐缓冲盐水）中分散的10mg的微粒以约lOOrpm震动在37°C下来 进行。在不同时间间隔取样，并用等体积的新鲜PBS来代替。FITC-Ova浓度由荧光比色分 析来测量（η = 3)。
[0042] 图7示出了免疫的小鼠血清中ova-特异性总IgG、IgG-Ι和IgG_2a抗体滴度。 在10,第1天和第21天将小鼠 （η = 4-5只/组）皮内注射单独ova(100 μ g)、ova与明研^ (200 μ g)、ova与空白InAc微粒、或在InAc微粒中装载的ova，作为初次免疫和加强免疫。 在初次免疫和加强免疫后1周和3周时，收集血清，用于使用间接ELISA分析IgG滴度。
[0043] 图8示出响应于抗原（Ova)的脾细胞体外增殖。从用单独ova、ova与明研 或在β-菊糖或InAc微粒中装载的ova免疫的小鼠制备脾细胞，并且在伴刀豆球蛋白 A(ConA，2. 5yg/mL)或ova(100yg/mL)或RPMI1640培养基的存在下培养72小时。脾细胞 增殖通过MTT测定法来测量并显示为刺激指数（SI)。SI =抗原（ova)或有丝分裂原（ConA) 处理的培养物的吸光度值除以未刺激的培养物（RPMI处理）的吸光度值。ConA是增殖的阳 性对照。*指示使用student t检验与ova免疫的组相比，值是统计学显著的（P〈0. 001)。
[0044] 图9示出Thl (IFN-g和IL-2)和Th2 (IL-4和IL-10)细胞因子的测量。从用单独 ova、ova与明研^、或装载ova的InAc微粒免疫的小鼠制备脾细胞，并且在0va(100 μ g/mL) 的存在下培养72小时。72小时后，从不同处理组收集上清液，并且不同细胞因子的浓度使 用夹心ELISA来测量。*指示使用student t检验与ova免疫的组相比，值是显著更高的 (P〈0. 001)。
[0045] 图10示出免疫的小鼠中的DTH应答。将Ova(5 μ g)注射在每个免疫的小鼠的左 足垫并且PBS注射在右足垫。足垫肿胀程度在Ova和PBS处理后24小时来测量。数据表 示来自每组的3-4只免疫的小鼠的肿胀的平均程度+标准偏差。*指示使用student t检 验与ova免疫的组相比，值是统计学显著的（P〈0. 001)。
[0046] 图11示出菊糖乙酸酯颗粒的大小对免疫的小鼠血清中ova-特异性总IgG滴度的 产生的效应。在第1天和第21天将小鼠 （η = 4-5只/组）用单独或连同CFA(完全弗氏 佐剂）或在InAc微粒或纳米颗粒中装载的ova (100、10或1 μ g)皮下注射，作为初次免疫 和加强免疫。在初次免疫和加强免疫后1周和3周时收集血清用于使用间接ELISA分析总 IgG滴度。CFA被用作阳性对照（最强佐剂）。
[0047] 图12示出菊糖乙酸酯颗粒的大小对免疫的小鼠血清中血清ova-特异性IgG-Ι滴 度的产生的效应。在第1天和第21天时，将小鼠 （η = 4-5只/组）用单独或连同CFA或 在InAc微粒或纳米颗粒中装载的ova (100 μ g、10 μ g或1 μ g)皮下注射。在初次和加强免 疫后1周和3周时收集血清用于使用间接ELISA分析IgG-Ι滴度。
[0048] 图13示出菊糖乙酸酯颗粒的大小对免疫的小鼠血清中的ova-特异性IgG_2a滴 度的产生的效应。在第1天和第21天时，将小鼠 （η = 4-5只/组）用单独或连同CFA或 在InAc微粒或纳米颗粒中装载的ova (100 μ g、10 μ g或1 μ g)皮下注射。在初次免疫和加 强免疫后1周和3周时收集血清用于使用间接ELISA分析IgG-2a滴度。
[0049] 图14示出InAc微粒中装载的抗原的量对免疫的小鼠血清中的ova-特异性IgG滴 度的产生的效应。在第1天和第21天时，将小鼠 （η = 4-5只/组）用单独或连同CFA或 装载在InAc微粒中的ova (100 μ g、10 μ g或1 μ g)皮下注射。在初次免疫和加强免疫后1 周和3周时收集血清用于使用间接ELISA分析总IgG、IgG-Ι和IgG-2a滴度。
[0050] 图15示出InAc纳米颗粒中装载的抗原的量对免疫的小鼠血清中的ova-特异性 IgG滴度的产生的效应。在第1天和第21天时，将小鼠 （η = 4-5只/组）用单独或连同 CFA或装载在InAc纳米颗粒中的ova (100 μ g、10 μ g或1 μ g)皮下注射。在初次免疫和加 强免疫后1周和3周时收集血清用于使用间接ELISA分析总IgG、IgG-Ι和IgG-2a滴度。
[0051] 图16示出补体旁路路径（APC)激活测定的结果。人血清引起兔RBC溶解，其通过 在700nm处确定0D值来分析。在与RBC温育以溶解之前，人血清用各种样品来处理。通过 将未处理的人血清的RBC溶解视为100 %，计算％ RBC溶解。酵母聚糖（阳性对照）激活 APC，并因此抑制了兔RBC溶解。
[0052] 图17示出了佐剂注射部位处的皮肤组织的H&E染色。（A)示出了在低放大率下来 自InAc纳米颗粒注射（左）、InAc微粒注射（中）、和完全弗氏佐剂注射（CFA)(右）的部 位的三幅图，且（B)示出了在较高的放大率下InAc微粒（左）和CFA(右）的两幅图。
[0053] 发明详沭
[0054] 定义
[0055] 如本文中使用，列举的术语具有以下含义。本说明书中使用的所有其他术语 和短语具有其如本领域技术人员将理解的普通含义。此类通常含义可通过参考技术词 典，诸如由 R. J. Lewis 的 Hawley? s Condensed Chemical Dictionary,第 14 版，John Wiley&Sons, New York, Ν· Υ·，2001 来获得。
[0056] 在说明书中提及" 一个实施方案（one embodiment) "、" 一个实施方案（an embodiment) "等指示描述的实施方案可包括特定方面、特征、结构、部分、或特性，但不是每 个实施方案都必定包括该方面、特征、结构、部分或特性。此外，这样的短语可，但不一定，是 指在本说明书的其他部分所提到的相同的实施方案。此外，当特定方面、特征、结构、部分 或特性在结合实施方案描述时，影响或连接无论是否明确描述的其他实施方案的这样的方 面、特征、结构、部分或特性在本领域技术人员的知识范围内。
[0057] 除非上下文另外明确指示，否则单数形式"一个（a) "、"一个（an) "和"该（the) " 包括复数指代对象。因此，例如，提及"一种化合物"包括多个此类化合物，使得化合物X包 括多个化合物X。还应注意，权利要求书可撰写成排除任何任选的要素。因此，这一声明旨 在充当使用与权利要求要素或使用的"否定"限制的列举有关的排他术语，诸如"单独地"、 "仅"以及类似的术语的前提基础。
[0058] 术语"和/或"意指项目的任何一个、项目的任何组合、或与该术语相关的全部项 目。短语"一个或更多个"由本领域技术人员，特别是当阅读使用其的上下文时容易地理解。 例如，一种或更多种任选的成分可被包括在特定制剂中，因此一个或更多个可指一至约四、 或一至约五、或作为在特定制剂中被需要的许多组分。
[0059] 术语"约"可指指定的值的±5%、±10%、±20%、或±25%的变化。例如，"约 50"百分数可在一些实施方案中进行从45%至55%的变化。对于整数范围，术语"约"可包 括比在范围的每个端点处列举的整数更大和/或更小的一个或两个整数。除非本文另外指 明，否则术语"约"旨在包括在单独成分、组合物、或实施方案的功能性方面等同的值，例如， 邻近列举的范围的重量百分比。
[0060] 如本领域技术人员应当理解，所有数字，包括表示成分的数量、性质，诸如分子量、 反应条件等等的那些，都是近似值，并且被理解为在所有情况下任选地被术语"约"修饰。这 些值可取决于本领域技术人员利用本文说明书的教导追求获得的期望的特性而发生变化。 还应理解，这些数值固有地包含必然地由其各自的测试测量中发现的标准偏差而引起的可 变性。
[0061] 如本领域技术人员应理解，为了任何和所有目的，特别是在提供书面描述的方面， 本文中列举的所有范围还包括任何及所有可能的子范围和子范围的组合，以及组成范围的 单独数值，特别是整数值。列举的范围（例如，重量百分比或碳基团数）包括范围内的每一 个具体的值、整数、小数或恒等式（identity)。任何列出的范围可被容易地认为充分描述 并使相同的范围被分解为至少相等的两份、三份、四份、五份、或十份成为可能。作为非限制 性实例，本文讨论的每个范围可容易地被分解为下三分之一、中间三分之一和上三分之一 等。如本领域技术人员还应理解，所有措辞，诸如"多达"、"至少"、"大于"、"小于"、"多于"、 "或以上"，以及类似的措辞，包括列举的数字，并且这样的术语是指可随后被分解为如以上 讨论的子范围的范围。以相同的方式，本文列举的所有比率还包括落入更宽比率内的所有 子比率。因此，对原子团、取代基和范围列举的具体值仅用于说明；其不排除在用于原子团 和取代基的限定的范围内的其他限定的值或其他值。
[0062] 本领域技术人员还将容易地认识到，当成员被以共同的方式分组在一起，诸如马 库什组（Markush group)时，本发明不仅包括总体上列出的整个组，还单独地包括组的每个 成员以及主要组的所有可能的亚组。另外，对于所有的目的，本发明不仅包括了主要组，还 包括了缺失一个或更多个组员的主要组。因此，本发明设想，明确排除列举的组的成员中的 任何一个或更多个。
[0063] 因此，附带条件可以适用于任何公开的类别或实施方案，由此列举的要素、种类、 或实施方案的任何一个或更多个，可被排除在这样的类别或实施方案之外，例如，如用于明 确否定性限制。
[0064] 术语"接触"是指触碰、使接触、或使直接或紧密靠近的行为，包括例如，在细胞或 分子水平引起生理反应、化学反应或物理变化，例如，在溶液中、在反应混合物中、在体外或 体内。
[0065] "有效量"是指有效治疗疾病、紊乱和/或状况，或导致列举的效果的量。例如，有 效量可以是有效减少被治疗的状况或症状的进展或严重程度的量。
[0066] 治疗有效量的确定在本领域熟练技术人员的能力范围内。术语"有效量"是指包 括本文中描述的化合物、或本文描述的化合物的组合，例如，有效治疗或预防疾病或状况， 或治疗宿主中疾病或状况的症状的量。因此，"有效量"通常意指提供期望的效果的量。
[0067] 术语"治疗（treating) "、"治疗（treat) " 和"治疗（treatment) " 包括：（i)预防 疾病、病理或医学状况发生（例如，预防）；（ii)抑制疾病、病理或医学状况或阻止其发展； (iii)缓解疾病、病理或医学状况；和/或（iv)减少与疾病、病理或医学状况相关的症状。 因此，术语"治疗"、"治疗"和"治疗"扩展至预防（prophylaxis)并包括预防（prevent)、预 防（prevention)、预防（preventing)、降低、停止或逆转被治疗的状况或症状的进展或严 重程度。因此，术语"治疗"适当地包括医学、治疗两者和/或预防施用。
[0068] 术语"抑制（inhibit) "、"抑制（inhibiting) "和"抑制（inhibition) "是指减慢、 停止、或逆转疾病、感染、状况或细胞的组的生长或进展。例如，与治疗或接触的不存在下发 生的生长或进展相比，抑制可以大于约20%、40%、60%、80%、90%、95%或99%。
[0069] 术语"菊糖"是本领域熟知的，并且是指a -D-吡喃葡糖基-[a -D-呋喃果糖基] (n-l)-D-呋喃果糖苷，由线性β-?(2->1)聚呋喃果糖基α-D-葡萄糖的家族组成的多糖 类，其中将典型多达约1〇〇果糖部分的无支链的链（对于植物衍生的材料η =约5至约100 且对于微生物衍生的材料约5至约100, 000)连接至单一末端葡萄糖单元。
[0070]
【权利要求】
1. 一种组合物，所述组合物包含β-菊糖或菊糖乙酸酯（InAc)和活性剂的微粒或纳米 颗粒，其中所述活性剂被包含在单独微粒或纳米颗粒内。
2. 如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包括微粒。
3. 如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包括具有约1 μ m至约30 μ m的直径的 微粒。
4. 如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包括纳米颗粒。
5. 如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包括具有约10nm至约lOOOnm的直径 的纳米颗粒。
6. 如权利要求1所述的组合物，其中所述β -菊糖或InAc具有约4kDa至约16kDa的 分子量。
7. 如权利要求1所述的组合物，所述组合物还包括一种或更多种免疫调节因子，其中 所述一种或更多种免疫调节因子是淋巴因子、细胞因子、胸腺细胞刺激因子、单核细胞或巨 噬细胞刺激因子，内毒素、或其组合。
8. 如权利要求1所述的组合物，其中所述活性剂包括抗原、DNA、RNA、抗原肽或抗原序 列、免疫原、或免疫球蛋白。
9. 如权利要求1所述的组合物，其中所述活性剂包括细菌的溶解产物或病毒病原体、 癌细胞、或与病原体或疾病相关的其他生物组分。
10. 如权利要求9所述的组合物，其中所述生物组分包括肽、蛋白、脂质、DNA或多糖。
11. 如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物还包括有效量的第二活性剂。
12. 如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物体内或原位刺激免疫应答，并且所述 免疫应答包括Thl (IgG-2a)型或Th2 (IgG-Ι)型免疫应答、或其组合。
13. -种组合物，所述组合物包含β-菊糖或菊糖乙酸酯（InAc)颗粒和活性剂，其中所 述活性剂被包含在单独颗粒中或物理上与β -菊糖或InAc的颗粒缔合，并且其中所述组合 物在人或动物中刺激针对活性剂的免疫应答。
14. 如权利要求1所述的组合物，其中所述组合物是包含菊糖乙酸酯的疫苗，并且其中 对所述菊糖乙酸酯的乙酰化作用的程度为约〇. 1%至100%。
15. 如权利要求1所述的组合物，其中所述β-菊糖是选自由以下组成的组的菊糖衍生 物：酯化的菊糖、醚化的菊糖、二醛菊糖、菊糖氨基甲酸酯、菊糖碳酸酯、菊糖的氧化或还原 形式、和菊糖磷酸酯。
16. -种组合物，所述组合物包含β-菊糖或菊糖乙酸酯（InAc)和活性剂的微粒或纳 米颗粒，其中所述活性剂被包含在单独微粒或纳米颗粒中，所述组合物用于在传染病、自身 免疫性疾病、遗传性疾病、过敏症、糖尿病、免疫缺陷紊乱、肿瘤性疾病、退行性疾病或老化 疾病的治疗中使用。
17. 如权利要求16所述的组合物，其中所述β-菊糖是选自由以下组成的组的菊糖衍 生物：酯化的菊糖、醚化的菊糖、二醛菊糖、菊糖氨基甲酸酯、菊糖碳酸酯、菊糖的氧化或还 原形式、和菊糖磷酸酯。
18. 如权利要求16或17所述的组合物，其中所述组合物在动物中经由TLR诱导免疫原 性应答。
19. 如权利要求16、17或18所述的组合物，其中所述组合物是疫苗。
20. 如权利要求19所述的组合物，其中所述组合物包括InAc微粒。
21. -种用于产生抗体的方法，所述方法包含用包含根据权利要求1-20的任一项的组 合物的制剂免疫动物或人，并且从所免疫的动物或人收集所述抗体。
22. 如权利要求21所述的方法，所述方法还包括刺激免疫细胞，其中所述免疫细胞是 巨噬细胞，其中所述抗体是单克隆抗体或来自多克隆血清的抗体，并且其中所述细胞在所 述刺激后收集。
23. -种用于产生抗血清的方法，所述方法包含用包含根据权利要求1-20的任一项的 组合物的制剂免疫动物或人，并从所免疫的动物或人，或从所免疫的动物或人的产物收集 所述抗血清，其中所述组合物递送抗原至构成所述动物或人的免疫细胞作为TLR激动剂。
24. 如权利要求23所述的方法，其中所述抗血清包含抗体。
25. 如权利要求24所述的方法，其中所述抗体是单克隆抗体或来自多克隆血清的抗 体。
26. 如权利要求24或25所述的方法，其中所述动物是灵长类动物、狗、猫、奶牛、小羊、 猪、阉猪、家禽、马、母马、骡、雄性动物、雌性动物、驹、犊、一岁动物、公牛、牛、绵羊、山羊、美 洲鸵、野牛、水牛、羔羊、小山羊、小猪、母鸡、小鸡、火鸡、鸭、鹅、鸵鸟、鸟、兔、野兔、豚鼠、仓 鼠、小鼠、大鼠、啮齿动物、鱼、水生动物或两栖动物。
27. 如权利要求23-36的任一项所述的方法，其中所组合物通过注射、吸入、口服、直 肠、阴道、鼻、或局部来施用。
28. 权利要求1-18的任一项的微粒或纳米颗粒作为佐剂的用途。
29. -种试剂盒，所述试剂盒包括： a) 包含β-菊糖或菊糖乙酸酯（InAc)的微粒或纳米颗粒的组合物； b) 任选的活性剂； c) 容器； d) -种或更多种缓冲液， e) 用于将活性剂与所述组合物缔合的说明书；以及 f) 标签。
30. 如权利要求29所述的试剂盒，其中所述活性剂选自由以下组成的组：抗原、DNA、 RNA、抗原肽、或抗原序列、免疫原、或免疫球蛋白。
31. 如权利要求29所述的试剂盒，所述试剂盒还包括用于在动物或人中产生抗血清的 说明书。
32. 如权利要求29所述的试剂盒，其中所述β-菊糖是选自由以下组成的组的菊糖衍 生物：酯化的菊糖、醚化的菊糖、二醛菊糖、菊糖氨基甲酸酯、菊糖碳酸酯、菊糖的氧化或还 原形式、和菊糖磷酸酯。
33. 如权利要求30所述的试剂盒，其中所述活性剂包括细菌的溶解产物或病毒病原 体、癌细胞、或与病原体或疾病相关的其他生物组分。
34. 如权利要求33所述的试剂盒，其中所述生物组分包括肽、蛋白、脂质、DNA或多糖。
35. 如权利要求29所述的试剂盒，其中所述组合物包括InAc的微粒。
【文档编号】A61P17/00GK104203218SQ201380015232
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2013年1月22日 优先权日:2012年1月20日
【发明者】海马钱德·图马拉, 桑尼·库马尔 申请人:南达科他州立大学