一种塔黄提取物及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种具有抑制肝癌细胞活性的塔黄提取物，该提取物至少含有如下活性成分：大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄酚葡萄糖苷、大黄素葡萄糖苷以及1,8-二羟基-2,3-甲氧基-6-甲基蒽醌。本发明还公开了上述塔黄提取物在制备抑制SMMC-7721和HEPG2肝癌细胞活性药物上的应用。本发明的塔黄提取物对SMMC-7721肝癌细胞和HEPG2肝癌细胞活性具有极好的抑制作用，将该塔黄提取物作为活性成分，与适宜的赋形剂相结合，可制成各种药物制剂，用于抑制肝癌细胞活性，因此本发明的塔黄提取物具有广阔的应用前景。
【专利说明】一种塔黄提取物及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种具有抑制肝癌细胞活性的塔黄提取物，还涉及上述塔黄提取物的应用，属于医药【技术领域】。
【背景技术】
[0002]肝癌发生于肝脏，可分为原发性肝癌及转移性肝癌。在原发性肝癌中，肝细胞癌最为多见(常简称为肝癌)，约占95%。肝癌是全球第五常见的癌症，占所有癌症的5.6%。肝癌亦是我国癌症中的第二号杀手，全球50%以上的肝癌发生在我国。罹患肝癌的高危险群以35~65岁的中年人为主，尤其以男性患者较多。高达80%~90%的肝癌患者同时有肝硬化。肝癌是高侵袭性的恶性肿瘤，早期症状不明显，导致大多数患者就诊较晚。中、晚期主要病征为右上腹疼痛、上腹胀满、发热、乏力、消瘦，晚期常有腹水、黄疸。在确诊时往往已属晚期，只有10%~30%患者能接受根治性切除手术，导致整体预后很差，一般平均存活时间只有3个月左右。这些患者大部分都是家庭经济支柱。因此，肝癌对个人、家庭及社会有很大影响，有效的预防、及早的诊断和有效的治疗十分重要。所以寻找一种能抑制肝癌细胞活性的药物或天然提取物对于肝癌的治疗具有重大的现实意义。
【发明内容】
[0003]发明目的:本发明所要解决的技术问题是提供一种具有抑制肝癌细胞活性的塔黄提取物。
[0004]本发明还要 解决的技术问题是提供上述塔黄提取物的应用。
[0005]
【发明内容】
:为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为:
[0006]一种塔黄提取物，至少含有如下活性成分:大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄酚葡萄糖苷、大黄素葡萄糖苷以及1，8- 二羟基-2，3-甲氧基-6-甲基蒽醌。
[0007]其中，所述活性成分占塔黄提取物干重的重量百分比为5%_55%，
[0008]更进一步的，在活性成分中，所述大黄素占活性成分的重量百分比为8.51%，所述大黄素甲醚占活性成分的重量百分比为8.51%，所述大黄酚占活性成分的重量百分比为21.28%，所述大黄酚葡萄糖苷占活性成分的重量百分比为29.79%，所述大黄素葡萄糖苷占活性成分的重量百分比为14.89%，所述1，8-二羟基-2，3-甲氧基-6-甲基蒽醌占活性成分的重量百分比为17.02%。
[0009]上述塔黄提取物在制备抑制SMMC-7721肝癌细胞和HEPG2肝癌细胞药物上的应用。
[0010]有益效果:相比于现有技术，本发明的塔黄提取物至少含有六种活性成分，并且该六种活性成分在抑制肝癌细胞活性上相互协同，对SMMC-7721肝癌细胞和HEPG2肝癌细胞活性具有极好的抑制作用，因此该提取物在抑制SMMC-7721肝癌细胞和HEPG2肝癌细胞活性上的作用对肝病的治疗起到了良好的效果，将该塔黄提取物作为活性成分，与适宜的赋形剂相结合，可制成各种药物制剂，用于抑制肝癌细胞活性，因此本发明的塔黄提取物具有广阔的应用前景。
【专利附图】
【附图说明】
[0011]图1为不同浓度的塔黄提取物对人肝癌细胞SMMC-7721活力(0D值)的影响；
[0012]图2为不同浓度的塔黄提取物对人肝癌细胞HEPG2活力(0D值)的影响。
【具体实施方式】
[0013]下面结合【具体实施方式】对本发明作进一步说明。
[0014]本发明所述的塔黄提取物，以及提取物药理活性都是按如下实施例1~5所描述的方法制造的。
[0015]实施例1:塔黄提取物的制备方法
[0016]取干燥的塔黄根部3kg，用甲醇或乙醇在90°C下回流提取3次，每次回流2小时；将每次回流后的溶液进行过滤，合并三次回流的滤液；对合并后的滤液进行减压除去甲醇；往滤液中加入适量热蒸馏水和石油醚，再次进行充分提取；将石油醚提取后的石油醚不溶物进行减压浓缩、并冷冻干燥以除尽溶剂，即得到塔黄干燥提取物，干燥的塔黄提取物的重量为200g，活性成分占塔黄提取物干重 的重量百分比为5%-55%，在活性成分中，大黄素占活性成分的重量百分比为8.51%，大黄素甲醚占活性成分的重量百分比为8.51%，大黄酚占活性成分的重量百分比为21.28%，大黄酚葡萄糖苷占活性成分的重量百分比为29.79%，大黄素葡萄糖苷占活性成分的重量百分比为14.89%，I, 8-二羟基-2，3-甲氧基-6-甲基蒽醌占活性成分的重量百分比为17.02%。将该塔黄提取物粉碎，过80目筛，待用。
[0017]实施例2:塔黄提取物的制备方法
[0018]取干燥的塔黄根部3kg，加水，煎煮3次，第一次4小时，第二次2.5小时，第三次
1.5小时，合并提取液，高速(12000rpm)离心除去不溶物，上清液经减压浓缩、冷冻干燥除尽溶剂，得到干燥的塔黄提取物。将该塔黄提取物粉碎，过80目筛，待用。
[0019]实施例3:塔黄提取物的制备方法
[0020]取干燥的塔黄根部3kg，用超临界二氧化碳流体(内含7%乙醇作为夹带剂)，在45°C、压力IOMpa的条件下，在超临界二氧化碳流体萃取釜内循环提取，提取2.5小时后，在室温下，调整解析釜温度压力2Mpa释放出二氧化碳，所得浸膏为粗提物，加入石油醚充分脱脂脱色，将石油醚不溶物减压浓缩、冷冻干燥除尽溶剂，得到干燥的塔黄提取物。将该塔黄提取物粉碎，过80目筛，待用。
[0021]实施例4:塔黄提取物的制备方法
[0022]准确称取60目适量塔黄粉末(根据微波萃取器最大进样量而定)，用70%乙醇，微波功率中高火，微波累积辐射时间5min，料液比1:8，提取2次，所得浸膏为粗提物，加入石油醚充分脱脂脱色，将石油醚不溶物部分减压浓缩、冷冻干燥除尽溶剂，得到干燥的塔黄提取物。将该塔黄提取物粉碎，过80目筛，待用。
[0023]实施例5:塔黄提取物的制备方法
[0024]取适量干燥的塔黄根部(根据超声波仪器最大提取量而定)，研细，置锥形瓶中，加适量甲醇，密塞，置超声清洗器中超声20min (超声功率为400W，超声频率为40kHz)，放冷，滤过，重复2次，每次更换甲醇，醇提液浓缩，所得浸膏为粗提物，加入石油醚充分脱脂脱色，将石油醚不溶物部分减压浓缩、冷冻干燥除尽溶剂，得到干燥的塔黄提取物。将该塔黄提取物粉碎，过80目筛，待用。
[0025]实施例6:塔黄提取物中活性成分的分离鉴定
[0026]取实施例1所得的石油醚不溶物，加适量水，依次加乙酸乙酯和正丁醇充分提取，减压蒸干，得乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物。
[0027]取乙酸乙酯部位(100g)用甲醇溶解，分散于适量硅胶，干法装硅胶(200— 300目)柱。依次用石油醚-乙酸乙酯(50:1-1:1)洗脱，收集馏分(每份150ml)。用TLC监测，合并相同组成的馏分。从30:1洗脱液中得2个单一成分大黄素甲醚、大黄酚，从石油醚-乙酸乙酯(4:1)洗脱馏分中得2个单一成分大黄素、1，8_ 二羟基-2，3-甲氧基-6-甲基蒽醌。其中，1，8-二羟基-2，3-甲氧基-6-甲基蒽醌的化学结构式为
【权利要求】
1.一种塔黄提取物，其特征在于:至少含有如下活性成分:大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、大黄酚葡萄糖苷、大黄素葡萄糖苷以及1，8- 二羟基-2，3-甲氧基-6-甲基蒽醌。
2.根据权利要求1所述的塔黄提取物，其特征在于:所述活性成分占塔黄提取物干重的重量百分比为:5%-55%。
3.根据权利要求2所述的塔黄提取物，其特征在于:在活性成分中，所述大黄素占活性成分的重量百分比为8.51%，所述大黄素甲醚占活性成分的重量百分比为8.51%，所述大黄酚占活性成分的重量百分比为21.28%，所述大黄酚葡萄糖苷占活性成分的重量百分比为29.79%，所述大黄素葡萄糖苷占活性成分的重量百分比为14.89%，所述1，8-二羟基-2，3-甲氧基-6-甲基蒽醌占活性成分的重量百分比为17.02%。
4.一种权利要求1所述塔黄提取物在制备抑制SMMC-7721和HEPG2肝癌细胞活性药物上的应用。`
【文档编号】A61P35/00GK103845420SQ201410065237
【公开日】2014年6月11日 申请日期:2014年2月26日 优先权日:2014年2月26日
【发明者】廖志新, 施天一, 胥廉谦, 叶润 申请人:东南大学