一种水辣蓼总黄酮的提取工艺的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种水辣蓼总黄酮的提取工艺，包括以下步骤：1）将水辣蓼药材粉碎与水混合，再加入复合酶混匀（为纤维素酶、果胶酶和木瓜蛋白酶中至少两种），调节pH值为3.0～8.0后进行酶解，再对酶解液过滤、浓缩；2）调节浓缩液的pH值为3.0～8.0后加入膨润土悬浮液，混匀，在30～70℃条件下进行絮凝澄清，然后离心取上清液即为水辣蓼总黄酮提取液。本工艺通过复合酶使得植物细胞壁疏松、破裂、减小传质阻力，加速有效成分的释放，从而提高提取效率。并将膨润土用于水辣蓼总黄酮酶解液的絮凝和精制，在有效降低总固形物含量的同时可以较好的保留水辣蓼中黄酮类成分。本工艺具有条件温和、稳定可控、绿色环保、成本较低等优点。
【专利说明】一种水辣蓼总黄酮的提取工艺
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种水辣寥总黄酮的提取工艺，属于中药提取【技术领域】。
【背景技术】
[0002]水辣寥为寥科植物水辣寥hydropiper L.)的干燥全草,别名水寥、辣寥、虞寥等。本品辛，温；具有祛风利湿、散瘀止痛、解毒消肿、杀虫止痒等功效。主要用于治疗痢疾、胃肠炎、腹泻、风湿性关节痛、跌打肿痛等症。水辣寥在我国分布广泛，植物资源丰邑O
[0003]水辣寥的主要化学成分有黄酮、挥发油、鞣质、三萜、糖苷等。现代药理研究证实:水辣寥具有抗微生物、杀虫、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性，其中黄酮类化合物是其抗氧化作用的物质基础，也是控制药材质量的指标成分。
[0004]水辣寥在临床使用时多采用传统的水煎煮方式，提取条件剧烈。不利于保持天然产物的构象及生物活性。中药水提液在制剂生产过程中常采用水提醇沉澄清工艺，需要消耗大量乙醇，生产成本高，有效成分损失大。
【发明内容】
[0005]为了解决上述现有水辣寥化学成分提取与絮凝工艺的不足，本发明提供了一种操作简单、条件温和、提取率高、成本较低的水辣寥总黄酮提取和絮凝的工艺方法。
[0006]本发明的目的在于提供一种水辣寥总黄酮的提取工艺。
[0007]本发明所采取的技术方案是:
一种水辣寥总黄酮的提取工艺，包括以下步骤:
1)将水辣寥药材粉碎，往水辣寥药材粉末中加入水混合均匀，再加入重量为水辣寥药材0.1~0.5%的复合酶，混合均匀，调节pH值为3.0~8.0后，在40~80°C条件下进行酶解，酶解后在90~100°C处理2~5min使酶失活；
2)对酶解液进行过滤和减压浓缩处理，得到水辣寥总黄酮的浓缩液；
3)调节浓缩液的pH值为3.0~8.0后，向其中按0.1~0.7 mL/g (膨润土悬浮液体积/水辣寥药材质量)加入膨润土悬浮液，混合均匀，在30~70°C条件下进行絮凝澄清，然后离心取上清液即为水辣寥总黄酮提取液；
其中，所述的复合酶选自纤维素酶、果胶酶和木瓜蛋白酶中的至少两种。
[0008]进一步的，在步骤I)中，水的体积与水辣寥药材质量的比为(20~100) mL:lg。
[0009]进一步的，在步骤I)中，酶解的时间为1.0~3.0 h。
[0010]进一步的，在步骤2)中，所述浓缩液的体积与水辣寥药材质量的比为(2~20)mL:1g0
[0011]进一步的，在步骤3)中，膨润土悬浮液的浓度为50g/L。
[0012]进一步的,在步骤3)中，絮凝时间为20~60 min。
[0013]本发明的有益效果是:I)本工艺通过复合酶使得植物细胞壁疏松、破裂、减小传质阻力，加速有效成分的释放，从而提高提取效率；同时调节适宜的温度和pH值，在温和的提取条件下即可使水辣寥有效成分快速浸出，提取效率较高；通过絮凝剂膨润土的吸附作用，可有效去除水辣寥酶解液中的大分子杂质，对水辣寥总黄酮酶解液进行澄清和精制，在有效降低总固形物含量的同时可以较好的保留水辣寥中黄酮类成分。
[0014]2)与传统的水提醇沉法相比，本发明所述的工艺提取条件温和，有利于保持天然产物的构象及生物活性，且提取率较高；以膨润土作为絮凝剂，无需消耗有机试剂，在有效降低总固形物含量的同时，可以较好的保留水辣寥中黄酮类成分。
[0015]3)采用本发明所述的酶解和絮凝工艺提取水辣寥有效成分，提取率可达2.22%，絮凝澄清后黄酮类成分的保留率可达92.5%。由此可见，本发明所述的工艺用于水辣寥总黄酮的提取与絮凝，具有条件温和、稳定可控、绿色环保、成本较低等优点。
【具体实施方式】
[0016]下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
[0017]实施例1:
1)将水辣寥药材粉碎，取20目以上的粉末，将50g水辣寥药材粉末加入2000 mL蒸馏水中，混合均匀，再加入25 mg纤维素酶和25 mg果胶酶,充分混匀,调pH值为4.5,在45°C水浴条件下酶解2 h，沸水浴灭酶2 min ；
2)将酶解液趁热过滤，取滤液进行减压浓缩，使浓缩液的体积与水辣寥药材质量的比为20mL:lg,即浓缩液的体积为100mL ；
3)调节浓缩液pH值为6.0,向浓缩液中按0.2 mL/g (膨润土悬浮液体积/水辣寥药材质量)加入浓度为50g/L的膨润土悬浮液，磁力搅拌10 min，于45°C水浴条件下絮凝I h，离心后取上清液即为水辣寥总黄酮提取液；吸取适量上清液测定固形物收率、总黄酮含量及总黄酮保留率分别为:40.3%、16.1 mg/g、82.4%。
[0018]实施例2:
1)将水辣寥粉碎，取20目以上的粉末，将50g水辣寥粉末加入2000 mL蒸馏水中，混合均匀，再加入25 mg纤维素酶和25 mg木瓜蛋白酶，充分混匀，调pH值为4.5，在45°C水浴条件下酶解2 h，沸水浴灭酶2 min ；
2)将酶解液趁热过滤，取滤液进行减压浓缩，使浓缩液的体积与水辣寥药材质量的比为20mL:lg,即浓缩液的体积为100mL ；
3)调节浓缩液pH值为6.0,向浓缩液中按0.2 mL/g (膨润土悬浮液体积/水辣寥药材质量)加入浓度为50g/L的膨润土悬浮液，磁力搅拌10 min，于45°C水浴条件下絮凝I h，离心后吸取适量上清液测定固形物收率、总黄酮含量及总黄酮保留率分别为:37.1%、11.5mg/g、77.2%。
[0019]实施例3:
1)将水辣寥粉碎，取20目以上的粉末，将50g水辣寥粉末加入2000 mL蒸馏水中，混合均匀，再加入25 mg果胶和25 mg木瓜蛋白酶,充分混匀,调pH值为4.5,在45°C水浴条件下酶解2 h，沸水浴灭酶2 min ；
2)将酶解液趁热过滤，取滤液进行减压浓缩，使浓缩液的体积与水辣寥药材质量的比为20mL:lg,即浓缩液的体积为100mL ；
3)调节浓缩液pH值为6.0,向浓缩液中按0.2 mL/g (膨润土悬浮液体积/水辣寥药材质量)加入浓度为50g/L的膨润土悬浮液，磁力搅拌10 min，于45°C水浴条件下絮凝I h，离心后吸取适量上清液测定固形物收率、总黄酮含量及总黄酮保留率分别为:42.7%、13.6mg/g、79.2%。
[0020]实施例4:
1)将水辣寥粉碎，取20目以上的粉末，将50g水辣寥粉末加入2000 mL蒸馏水中，混合均匀，再加入20 mg果胶、10 mg纤维素酶和20 mg木瓜蛋白酶加入其中，充分混匀,调pH值为4.5，在45°C水浴条件下酶解2 h，沸水浴灭酶2 min ；
2)将酶解液趁热过滤，取滤液进行减压浓缩，使浓缩液的体积与水辣寥药材质量的比为20mL:lg,即浓缩液的体积为100mL ；
3)调节浓缩液pH值为6.0,向浓缩液中按0.2 mL/g (膨润土悬浮液体积/水辣寥药材质量)加入浓度为50g/L的膨润土悬浮液，磁力搅拌10 min，于45°C水浴条件下絮凝I h，离心后吸取适量上清液测定固形物收率、总黄酮含量及总黄酮保留率分别为:36.4%、14.1mg/g、81.8%。
[0021]实施例5:
1)将水辣寥粉碎，取20目以上的粉末，将50g水辣寥粉末加入2000 mL蒸馏水中，混合均匀，再加入10 mg果胶、20 mg纤维素酶和20 mg木瓜蛋白酶加入其中，充分混匀,调pH值为4.5，在45°C水浴条件下酶解2 h，沸水浴灭酶2 min ；
2)将酶解液趁热过滤，取滤液进行减压浓缩，使浓缩液的体积与水辣寥药材质量的比为20mL:lg,即浓缩液的体积为100mL ；
3)调节浓缩液pH值为6.0,向浓缩液中按0.2 mL/g (膨润土悬浮液体积/水辣寥药材质量)加入浓度为50g/L的膨润土悬浮液，磁力搅拌10 min，于45°C水浴条件下絮凝I h，离心后吸取适量上清液测定固形物收率、总黄酮含量及总黄酮保留率分别为:43.6%、12.2mg/g、83.9%。
[0022]实施例6:
1)将水辣寥药材粉碎，取20目以上的粉末，将50g水辣寥药材粉末加入1000 mL蒸懼水中，混合均匀，再加入100 mg纤维素酶、75mg果胶酶和75mg木瓜蛋白酶,充分混匀,调pH值为8，在80°C水浴条件下酶解3 h，沸水浴灭酶5min ；
2)将酶解液趁热过滤，取滤液进行减压浓缩，使浓缩液的体积与水辣寥药材质量的比为2mL:lg,即浓缩液的体积为10mL ；
3)调节浓缩液pH值为8,向浓缩液中按0.1 mL/g (膨润土悬浮液体积/水辣寥药材质量)加入浓度为50g/L的膨润土悬浮液,磁力搅拌10 min,于70°C水浴条件下絮凝20min,离心后取上清液即为水辣寥总黄酮提取液。
[0023]实施例7:
1)将水辣寥药材粉碎，取20目以上的粉末，将50g水辣寥药材粉末加入5000 mL蒸馏水中，混合均匀，再加入50 mg纤维素酶、50mg果胶酶和25mg木瓜蛋白酶,充分混匀，调pH值为3，在40°C水浴条件下酶解I h，沸水浴灭酶2min ；
2)将酶解液趁热过滤，取滤液进行减压浓缩，使浓缩液的体积与水辣寥药材质量的比为1mL:lg,即浓缩液的体积为500mL ；
3)调节浓缩液pH值为3,向浓缩液中按0.1mL/g (膨润土悬浮液体积/水辣寥药材质量)加入浓度为50g/L的膨润土悬浮液,磁力搅拌10 min,于30°C水浴条件下絮凝40min,离心后取上清液即为水辣寥总黄酮提取液。
【权利要求】
1.一种水辣寥总黄酮的提取工艺，其特征在于:包括以下步骤: 1)将水辣寥药材粉碎，往水辣寥药材粉末中加入水混合均匀，再加入重量为水辣寥药材0.1~0.5%的复合酶，混合均匀，调节pH值为3.0~8.0后，在40~80°C条件下进行酶解，酶解后在90~100°C处理2~5min使酶失活； 2)对酶解液进行过滤和减压浓缩处理，得到水辣寥总黄酮的浓缩液； 3)调节浓缩液的pH值为3.0~8.0后，向其中按0.1~0.7 mL/g (膨润土悬浮液体积/水辣寥药材质量)加入膨润土悬浮液，混合均匀，在30~70°C条件下进行絮凝澄清，然后离心取上清液即为水辣寥总黄酮提取液； 其中，所述的复合酶选自纤维素酶、果胶酶和木瓜蛋白酶中的至少两种。
2.根据权利要求1所述的一种水辣寥总黄酮的提取工艺，其特征在于:在步骤I)中，水的体积与水辣寥药材质量的比为(20~100) mL:lg。
3.根据权利要求1所述的一种水辣寥总黄酮的提取工艺，其特征在于:在步骤I)中，酶解的时间为1.0~3.0 h。
4.根据权利要求1所述的一种水辣寥总黄酮的提取工艺，其特征在于:在步骤2)中，所述浓缩液的体积与水辣寥药材质量的比为(2~20) mL:lg。
5.根据权利要 求1所述的一种水辣寥总黄酮的提取工艺，其特征在于:在步骤3)中，膨润土悬浮液的浓度为50g/L。
6.根据权利要求1所述的一种水辣寥总黄酮的提取工艺，其特征在于:在步骤3)中，絮凝时间为20~60 min。
【文档编号】A61K36/704GK104069191SQ201410303473
【公开日】2014年10月1日 申请日期:2014年6月30日 优先权日:2014年6月30日
【发明者】潘育方, 程轩轩, 张旭红 申请人:广东药学院