独一味总环烯醚萜苷提取物在制备治疗便秘药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种独一味总环烯醚萜苷提取物在制备治疗便秘药物中的应用，该独一味总环烯醚萜苷提取物是指独一味经回流提取并利用对环烯醚萜苷类成分具有选择性吸附作用的大孔树脂进行分离和富集所获得的提取物，其在按常规方法制备治疗便秘药物的各种剂型中至少包含有该独一味总环烯醚萜苷提取物。本发明所述的独一味总环烯醚萜苷提取物质量可控，制剂方法成熟，并经药效学动物实验和临床实验表明，具有显著的润肠通便能力，可以作为治疗便秘药物的有效活性成分用于制备润肠通便药物。
【专利说明】独一味总环烯醚萜苷提取物在制备治疗便秘药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及中药领域，尤其涉及独一味总环烯醚萜苷提取物在制备治疗便秘药物中的应用。
【背景技术】
[0002]独一味为藏、蒙、纳西等民族常用药材之一，其主要含有黄酮、苯乙醇苷和环烯醚萜苷类化合物。据2010版《中国药典》记载其功能与主治:活血止血、祛风止痛，用于跌打损伤、外伤出血、风湿痹痛、黄水病。近年来随着药物分离水平的不断提高和对独一味的深入研究，已获得相对纯度较高的独一味总环烯醚萜苷、总黄酮、大极性成份等各药用部位，并且已取得制备独一味总环烯醚萜苷工艺的国家发明专利(200410011679.0)，其纯度可达509^95%。
[0003]独一味中的环烯醚萜苷类化合物，以异戊二烯为基本单元，基本母核为环烯醚萜醇，具有半缩醛及环戊烷环的结构，是许多植物药材中苦味成分，传统中医理论认为:味苦微寒者具泻下作用。四川大学华西医院循证医学与临床流行病学教研室采用70例合格随机对照试验(RCT)，文献对独一味临床疗效及安全性进行了 META分析表明:以独一味水提取物为物质基础的独一味相关制剂具有良好的镇痛、止血及抗炎活性，治疗过程中部分患者伴有轻度腹泻、胃部不适等不良反应。同时在前期有关独一味总环烯醚萜苷提取物的研究中，也发现实验动物经长期灌胃给予独一味总环烯醚萜苷提取物后出现粪便颗粒湿润、颗粒相对变大变长，含水量提升等现象。综上所述，独一味总环烯醚萜苷提取物可能具有导泻作用。
[0004]而目前独一味的相关研究发现，国内外尚无关于独一味导泻作用的研究和专利报道。
【发明内容】
[0005]本发明所要解决的技术问题是提供一种独一味总环烯醚萜苷提取物在制备治疗便秘药物中的应用。
[0006]为解决上述问题，本发明所述的独一味总环烯醚萜苷提取物在制备治疗便秘药物中的应用，其特征在于:该独一味总环烯醚萜苷提取物是指独一味经回流提取并利用对环烯醚萜苷类成分具有选择性吸附作用的大孔树脂进行分离和富集所获得的提取物，其在按常规方法制备治疗便秘药物的各种剂型中至少包含有该独一味总环烯醚萜苷提取物。
[0007]所述剂型是指口服片剂、胶囊剂、软胶囊、颗粒剂、分散片、滴丸中的任意一种。
[0008]所述独一味总环烯醚萜苷提取物的纯度以8-乙酰氧基山桅子苷甲酯计为20.0?100 %。
[0009]本发明与现有技术相比具有以下优点:
1、本发明所述的独一味总环烯醚萜苷提取物质量可控，制剂方法成熟。
[0010]2、本发明经药效学动物实验和临床实验表明，独一味总环烯醚萜苷提取物具有显著的润肠通便能力，可以作为治疗便秘药物的有效活性成分，用于制备润肠通便药物。
[0011]⑴独一味总环烯醚萜苷提取物的制备，其制备方法参考国家发明专利(200410011679.0)，具体操作如下:
a药材、试剂及仪器:独一味药材(购自玛曲县黄河首曲药源开发有限公司，批号:20030812)，旋转蒸发仪(RE-52AA型，上海亚荣生化仪器厂)，真空干燥箱(BPZ-6033LC型，上海一恒科学仪器有限公司)，聚酰胺(20-40目，浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂，批号:20111228)，大孔吸附脂(D-101净品型，天津市海光化工有限公司，批号:070305)，95%乙醇(德州家益康消毒制品有限公司，批号:130302)，水为蒸馏水。
[0012]b制备方法:
称取独一味药材10 kg，加20倍量蒸馏水煎煮3次，合并滤液冷却后，母液注入已预处理好的聚酰胺色谱柱中，蒸馏水洗脱。上述水洗脱液注入已处理好的大孔树脂柱中，并以蒸馏水洗至流出液为无色，改用70%乙醇继续洗脱，流出液每50 ml收集一份，监测至无环烯醚萜苷类成份流出，合并乙醇洗脱物50 °C旋转蒸发浓缩，浓缩液放置于真空干燥箱内50°〇减压干燥，得总环烯醚萜苷提取物(以8-乙酰氧基山桅子苷甲酯为对照品，在252 nm下采用一阶导数法测得总环烯醚萜苷含量为90.6%)。
[0013]⑵药效学实验(动物实验参考《中药药理试验方法学》“攻下药物药理学动物实验方法”):
①实验对象:BALB/c雌性小鼠104只，体重20±2 g，由兰州军区兰州总医院动物实验中心提供，合格证号:SYXK (军)2012-0029。
[0014]②药材及仪器:复方地芬诺酯片(新乡市常乐制药有限责任公司，批号:1305265)，麻仁丸(湖北诺得胜制药有限公司，批号:120906)，酚酞片(山东仁和堂药业有限公司，批号:130121)，自制独一味总环烯醚萜苷，阿拉伯树胶粉(天津市光复精细化工研究所)，活性炭细粉，BP210S电子天平(Sartorius AG,德国)，带刻度卷尺，小鼠所用饮水瓶均采用高温煮沸灭菌处理，药物溶液现用现配，实验温度2(T25 °C ,空调恒温，相对湿度:40% ?70%。
[0015]③实验方法:
a墨汁配制:准确称量阿拉伯树胶10 g加水80 ml，煮沸至溶液透明，称取活性炭细粉
5g加至上述溶液中并煮沸3次，待溶液常温后加水定容至100 ml，备用(造模前一天配制，并放置于4°C冰箱冷藏备用)。
[0016]b独一味总环烯醚萜苷提取物对复方地芬诺酯便秘小鼠排便的影响:
BALB/c雌性小鼠48只，按体重随机分为6组，即空白组、阳性对照组、复方地芬诺酯便秘模型组、独一味总环烯醚萜苷高、中、低剂量组，实验采用灌胃法给予受试药物，灌胃量为
0.5 mL /20 g.bw.d。空白对照组、复方地芬诺酯便秘模型组均给予灭菌注射用水灌胃；阳性对照组给予麻仁丸1.0 g/kg.bw;独一味总环烯醚職苷高、中、低剂量组分别给予0.3 g/kg.bw、0.15 g/kg.bw、0.05 g/kg.bw的独一味总环烯醚職苷提取物(总环烯醚職苷含量为90.6%)。以上各组连续给药7 d，禁食20 h，空白对照组给予等容积蒸馏水，其余各组动物分别给予复方地芬诺酯(10 mg /kg)，复制小鼠便秘模型,给药体积为0.5 mL /20 g.bw。造模30 min后，药物各剂量组与阳性对照组按相应剂量给予含相应药物的炭末混悬液(含炭末0.05 g/mL)，空白对照组和模型组给予等容积墨汁(含炭末0.05 g/mL)，灌胃体积均为0.5 mL/20 g.bw。各组小鼠给药后单笼饲养，禁食给水，观察并记录每只小鼠首次排黑便时间、6 h内排便粒数及排便时间点，并收集每组小鼠前20粒粪便。
[0017]c独一味总环烯醚萜苷提取物对小鼠小肠推进率的影响:
BALB/c雌性小鼠56只，按体重随机分为7组，即空白组、两组阳性对照(麻仁丸、酚酞)组、复方地芬诺酯便秘模型组、独一味总环烯醚萜苷提取物高、中、低剂量组，实验采用灌胃法给予受试物，灌胃量为0.5 mL /20 g.bw.d，结果见图2、表3。空白对照组、复方地芬诺酯便秘模型组，给予灭菌注射用水灌胃；阳性对照麻仁丸组给予1.0 g/kg.bw麻仁丸、酚酞组给予0.04 g/kg.bw酚酞片；独一味总环烯醚萜苷提取物高、中、低剂量组分别给予0.3g/kg.bw、0.15 g/kg.bw、0.05 g/kg.bw的独一味总环烯醚職苷提取物(总环烯醚職苷含量为90.6%)，以上各组连续给药7 d，禁食20 h，空白对照组给予等容积蒸馏水，其余各组动物分别灌胃给予复方地芬诺酯(10 mg /kg)，给药体积为0.5 mL /20 g.bw。造模30min后，药物各剂量组与阳性对照组按相应剂量给予含相应药物的炭末混悬液(含炭末0.05 g/mL)，空白对照组和模型组给予等容积墨汁(含炭末0.05 g /mL)，灌胃体积均为0.5 mL/20g.bw。上述给药30 min后用颈椎脱白法处死小鼠，剪取上端自幽门下端至回盲部的肠管，不加牵引并平铺成直线测量肠管长度为小肠总长度，从幽门至墨汁前沿为墨汁推进长度。
[0018]④实验结果:
a小鼠首次排黑便时间、6 h排便次数以t检验统计处理数据，结果见表I。
[0019]表I小鼠首次排黑便时间、6 h排便次数组另j 首便时间..'+mill__排黑便次数_
空白组90,8±lCi4 -J±1J
^ 型组]0.6±1SJ_5.6±1.3_
麻仁丸组__S.8±2.2#_
低剂量组 KKK 5 ±8 J #__8.1±1.6##_
中剂量组.156.6 土 14.0鮮__S.2±2.2#_
高剂量组 157jS±12jO##__9S±1.6#ff_
注广表示模型与空白组相比/X0.01 ;#表示模型与给药组相比/X0.05，#V〈0.01。
[0020]从表I可以得出，复方地芬诺酯模型组小鼠首次排黑便时间与空白组间存在显著性差异(/X 0.01)，证明本实验采用复方地芬诺酯成功获得便秘小鼠模型；独一味总环烯醚萜苷剂量组及阳性组小鼠首次排黑便时间较模型组明显缩短，与复方地芬诺酯模型组相比均具有显著性差异0°〈 0.01)，且独一味总环烯醚萜苷剂量组与阳性组间不存在差异性。
6h内复方地芬诺酯模型组小鼠排黑便次数较少，与空白组正常小鼠相比具有显著性差异CP< 0.01)，独一味总环烯醚萜苷给药组小鼠排黑便次数增加，高、低剂量与模型组相比均具有显著性差异0°〈 0.01)，且高剂量组(0.3 g/kg.bw)排黑便次数优于阳性药物组和空白组。
[0021]b收集得到的每组小鼠前20粒粪便置于100 °C烘箱中干燥至恒重，并计算含水量，结果见表2。
[0022]表2小鼠粪便含水量
【权利要求】
1.独一味总环烯醚萜苷提取物在制备治疗便秘药物中的应用，其特征在于:该独一味总环烯醚萜苷提取物是指独一味经回流提取并利用对环烯醚萜苷类成分具有选择性吸附作用的大孔树脂进行分离和富集所获得的提取物，其在按常规方法制备治疗便秘药物的各种剂型中至少包含有该独一味总环烯醚萜苷提取物。
2.如权利要求1所述的独一味总环烯醚萜苷提取物在制备治疗便秘药物中的应用，其特征在于:所述剂型是指口服片剂、胶囊剂、软胶囊、颗粒剂、分散片、滴丸中的任意一种。
3.如权利要求1所述的独一味总环烯醚萜苷提取物在制备治疗便秘药物中的应用，其特征在于:所述独一味总环烯醚萜苷提取物的纯度以8-乙酰氧基山桅子苷甲酯计为.20.0?100 %。
【文档编号】A61P1/10GK104127486SQ201410349693
【公开日】2014年11月5日 申请日期:2014年7月22日 优先权日:2014年7月22日
【发明者】李茂星, 贾正平, 王谨慧, 陶锐 申请人:李茂星