一种美洲大蠊脱色提取物及其制备方法和用途
【专利摘要】本发明提供了一种美洲大蠊脱色提取物，它是以美洲大蠊提取物为原料，经离子交换树脂、大孔树脂或活性炭进行脱色处理后即得。本发明研究表明，美洲大蠊提取物经脱色处理后，除去了抑制药效作用的成分，使得提取物具有更好的药效活性，为临床用药提供了新的选择。
【专利说明】一种美洲大蠊脱色提取物及其制备方法和用途
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种美洲大蠊脱色提取物及其制备方法和用途。
【背景技术】
[0002] 美洲大蠊（PeriplanetaAmericana)属昆虫纲，蜚蠊目，蜚蠊科，"蟑螂"为其俗名， 首见于《本草纲目拾遗》，也称其为石姜、滑虫，在地球上已经生存了 3. 5亿年，是世界上生 命力最强、最古老、至今繁衍最成功的昆虫类群之一。美洲大蠊药用主癥瘕、破积聚，通利血 脉，外用可敛疮、拔毒、化腐、生肌，现代研究表明其还具有良好的抗菌作用。
[0003] 康复新液主要成分为美洲大蠊干燥虫体的乙醇提取物，功能通利血脉，养阴生肌， 现代医学认为康复新液具有促进肉芽组织生长、抗炎及消除炎性水肿、提高机体免疫功能、 抑制胃酸分泌等药理作用，临床用于十二指肠溃疡，胃溃疡，烧烫伤等的治疗。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种美洲大蠊脱色提取物及其制备方法和用途。
[0005] 本发明提供了一种美洲大蠊脱色提取物，它是以美洲大蠊提取物为原料，经离子 交换树脂、大孔树脂或活性炭进行脱色处理后即得。
[0006] 本发明研究发现，将美洲大蠊提取物经过脱色处理后，在相同的生药剂量下，其对 消化性溃疡、肝损伤、创面、肿瘤等的治疗功效，得到了明显提高，这一结果表明，本发明通 过脱色处理，除去了美洲大蠊提取物中抑制药效作用的成分。
[0007] 离子交换树脂、大孔树脂和活性炭脱色方法，是目前较为常用的脱色处理方法，它 们普遍应用于药物制剂、饮料、油类等产品的脱色处理，如注射剂脱色、多糖脱色、果汁脱色 等。
[0008] 本发明中，采用活性炭进行脱色处理的操作如下：
[0009] 取液态的美洲大蠊提取物或者含有美洲大蠊提取物的液体，加入活性炭，加热，搅 拌，除去活性炭，即完成脱色处理。
[0010] 加热搅拌脱色，是活性炭脱色工艺中的常规手段，本发明基于是对含有氨基酸、多 肽或蛋白质类药物进行了加工处理，其加热温度应保证不会导致活性成分失活，例如，本发 明【具体实施方式】中使用的加热温度为50?80°C，优选为60?80°C。 toon] 更进一步地，活性炭的质量为液态的美洲大蠊提取物或者含有美洲大蠊提取物的 液体体积的〇· 1?10% g/ml。
[0012] 本发明中，采用离子交换树脂或大孔树脂进行脱色处理的操作如下：
[0013] 取美洲大蠊提取物，湿法上离子交换树脂或大孔树脂柱，收集流出液，即完成脱色 处理。上样液经过树脂柱后，其色素类强脂溶性成分即可被树脂吸附保留，而美洲大蠊提取 物中的其他极性成分则与溶媒一起流出，从而达到与色素类成分的分离。
[0014] 其中，所述大孔树脂为非极性、中极性或极性大孔树脂；
[0015] 进一步地，所述非极性大孔树脂选自H801、H806、NKA、X-5、HPD100、HP20 ;所述 中极性大孔树脂选自AB-8、DM130、D101、D201、D301、D113、DOOl ;所述极性大孔树脂选自 NKA-9、NKA-2。
[0016] 湿法上柱，与干法上柱一起，组成本发明样品上柱的常规方法。所谓湿法上柱，即 将液态的待分离样品（如样品自身即为液态或固态样品加溶剂成液态）直接从已经装有填 料的层析柱顶部倒入。干法上柱，即将待分离样品混入少量柱层析填料中，搅拌均匀，待除 去溶剂至干后，将吸附有分离样品的填料均匀平铺与已经装柱的柱层析填料顶部。
[0017] 本发明中，柱层析所用填料为大孔树脂（又称大孔吸附树脂），对于大孔树脂柱而 言，湿法上柱的待分离样品中的溶媒应为水。即，美洲大蠊提取物经湿法上柱过程中，以水 为溶媒。
[0018] 其中，所述美洲大蠊提取物满足WS3-B-3674-2000⑵中对"美洲大蠊Per ip leneta ameri Cana干燥虫体的提取物"的限定标准，按照干燥品计算，含总氨基酸不少于 7.0%，例如"康复新"。
[0019] 进一步地，所述美洲大蠊提取物是由如下方法制备得到：
[0020] 取美洲大蠊，粉碎，用30%?90% v/v乙醇提取，合并提取液，静置，滤过，滤液回 收乙醇并浓缩成稠膏，加入纯水，加热搅拌，静置，冷却，使油脂充分上浮，取下清液，过滤， 滤液浓缩成稠膏，得美洲大蠊提取物。
[0021] 进一步地，乙醇浓度进一步为70%?90% v/v乙醇，优选0-90% v/v乙醇。
[0022] 本发明还提供了上述的美洲大蠊脱色提取物在制备治疗消化性溃疡、抗肝损伤、 促进创面愈合或抗肿瘤的药物中的用途。
[0023] 进一步地，所述消化性溃疡为胃溃疡。
[0024] 进一步地，所述肝损伤为急性肝损伤。
[0025] 进一步地,所述创面为烧烫伤创面。
[0026] 进一步地，所述肿瘤为肉瘤。
[0027] 本发明还提供了一种药物组合物，它是由上述的美洲大蠊脱色提取物为活性成 分，加上药学上常用的辅料或辅助性成分制备得到的制剂。
[0028] 本发明所述药学上可接受的辅料包括但不仅限于填充剂（稀释剂）、润滑剂（助流 剂或抗粘着剂）、分散剂、湿润剂、粘合剂、调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、崩解剂 等。粘合剂包含糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶、纤维素及其衍生物（如微晶纤维素、 羧甲基纤维素钠、乙基纤维素或羟丙甲基纤维素等）、明胶浆、糖浆、淀粉浆或聚乙烯吡咯烷 酮等；填充剂包含乳糖、糖粉、糊精、淀粉及其衍生物、纤维素及其衍生物、无机钙盐（如硫 酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、沉降碳酸钙等）、山梨醇或甘氨酸等；润滑剂包含微粉硅胶、硬脂 酸镁、滑石粉、氢氧化铝、硼酸、氢化植物油、聚乙二醇等；崩解剂包含淀粉及其衍生物（如 羧甲基淀粉钠、淀粉乙醇酸钠、预胶化淀粉、改良淀粉、羟丙基淀粉、玉米淀粉等）、聚乙烯吡 略烧丽或微晶纤维素等；湿润剂包含十-烧基硫酸纳、水或醇等；抗氧剂包含亚硫酸纳、亚 硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、二丁基苯酸等；抑菌剂包含〇. 5%苯酚、0. 3%甲酚、0. 5%三氯叔丁 醇等；调节剂包含盐酸、枸橼酸、氢氧化钾（钠）、枸橼酸钠及缓冲剂（包括磷酸二氢钠和磷 酸氢二钠）等；乳化剂包含聚山梨酯-80、没酸山梨坦、普流罗尼克F-68,卵磷酯、豆磷脂等； 增溶剂包含吐温-80、胆汁、甘油等。
[0029] 所述药学上可接受的辅助性成分，它具有一定生理活性，但该成分的加入不会改 变上述食品、保健品或药物组合物在疾病治疗或对人体生理功能改善过程中的主导地位， 而仅仅发挥辅助功效，这些辅助功效仅仅是对该成分已知活性的利用，是医药领域或保健 领域惯用的辅助方式。
[0030] 进一步地，所述制剂为口服制剂。例如，片剂、散剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂或口服 液。
[0031] 本发明研究表明，美洲大蠊提取物经脱色处理后，具有更好的药效活性，为临床用 药提供了新的选择。
[0032] 显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和手段，在不脱离本发 明上述基本技术思想前提下，还可以做出其他多种形式的修改、替换或变更。
[0033] 以下通过具体实施例的形式，对本发明的上述内容再做进一步的详细说明。但不 应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现 的技术均属于本发明的范围。
【专利附图】
【附图说明】
[0034] 图IJSS组大鼠胃组织
[0035] 图2MD组大鼠胃组织
[0036] 图3MZDL组大鼠胃组织
[0037] 图4TS组大鼠胃组织
[0038] 图5烫伤A组7d大鼠背部皮肤创面
[0039] 图6烫伤B组7d大鼠背部皮肤创面
[0040] 图7烫伤C组7d大鼠背部皮肤创面
[0041] 图8烫伤A组14d大鼠背部皮肤创面
[0042] 图9烫伤B组14d大鼠背部皮肤创面
[0043] 图10烫伤C组14d大鼠背部皮肤创面
[0044] 图11各实验组小鼠肿瘤图片
【具体实施方式】
[0045] 实施例1本发明美洲大蠊脱色提取物的制备
[0046] 取美洲大蠊提取物，经离子交换树脂脱色处理后，即得美洲大蠊脱色提取物。
[0047] 本发明中使用的美洲大蠊提取物，满足WS3-B-3674-2000 (Z)中对"美洲大蠊 Perip leneta ameri Cana干燥虫体的提取物"的限定标准（即康复新），即按照干燥品计 算，含总氨基酸不得少于7.0%。
[0048] 具体脱色方法如下：
[0049] 本发明中w/v中，w单位为g，V为ml。
[0050] 大孔树脂脱样品1 :取H801大孔树脂适量，将美洲大蠊提取物湿法上柱，以3. 2BV/ h(lBV = 234ml)的流速上样，收集流出液，减压浓缩，即得；
[0051] 大孔树脂脱样品2 :取AB-8大孔树脂适量，将美洲大蠊提取物湿法上柱，以4. 6BV/ h(lBV = 202ml)的流速上样，收集流出液，减压浓缩，即得；
[0052] 大孔树脂脱样品3 :取NKA-9大孔树脂适量，将美洲大蠊提取物湿法上柱，以 5. 8BV/h(lBV = 212ml)的流速上样，收集流出液，减压浓缩，即得；
[0053] 活性炭脱色样品1 :取实施例1所制备美洲大蠊提取物适量，加入0. 1 % (W/V)活 性炭，搅拌30min，调节温度至80°C，脱色30min后过滤，收集滤液，减压浓缩，即得。活性炭 脱色样品2 :取实施例1所制备美洲大蠊提取物适量，加入1% (W/V)活性炭，搅拌45min， 调节温度至60°C，脱色45min后过滤，收集滤液，减压浓缩，即得。
[0054] 活性炭脱色样品3 :取实施例1所制备美洲大蠊提取物适量，加入3% (W/V)活性 炭，搅拌60min，调节温度至70°C，脱色60min后过滤，收集滤液，减压浓缩，即得。
[0055] 活性炭脱色样品4 :取实施例1所制备美洲大蠊提取物适量，加入5% (W/V)活性 炭，搅拌50min，调节温度至75°C，脱色90min后过滤，收集滤液，减压浓缩，即得。
[0056] 活性炭脱色样品5 :取实施例1所制备美洲大蠊提取物适量，加入10% (W/V)活性 炭，搅拌70min，调节温度至65°C，脱色120min后过滤，收集滤液，减压浓缩，即得。
[0057] 混合脱色样品1 :取NKA-9大孔树脂适量，将美洲大蠊提取物湿法上柱，以4. 8BV/ h(lBV = 212ml)的流速上样，收集流出液，减压浓缩至适量，加入3% (W/V)活性炭吸附脱 色，搅拌40min，调节温度至50°C，脱色50min，过滤，收集滤液，减压浓缩，即得。
[0058] 混合脱色样品2 :取AB-8大孔树脂适量，将美洲大蠊提取物湿法上柱，以5. OBV/ h(lBV = 203ml)的流速上样，收集流出液，减压浓缩至适量，加入5% (W/V)活性炭吸附脱 色，搅拌30min，调节温度至55°C，脱色40min，过滤，收集滤液，减压浓缩，即得。
[0059] 混合脱色样品3 :取H801大孔树脂适量，将美洲大蠊提取物湿法上柱，以4. OBV/ h(IBV= 195ml)的流速上样，收集流出液，减压浓缩至适量，加入7% (W/V)活性炭吸附脱 色，搅拌35min，调节温度至65°C，脱色45min，过滤，收集滤液，减压浓缩，即得。
[0060] 本发明使用的美洲大蠊提取物还可以通过如下方法制备得到：
[0061] 取美洲大蠊，粉碎，用80%?90%的乙醇提取，第一次加7倍量乙醇回流提取2小 时，第二次加5倍量乙醇回流提取1. 5小时，第三次加3倍量乙醇回流提取1小时，合并提 取液，静置8h以上，滤过，滤液回收乙醇并浓缩成稠膏（相对密度约1.30 (85°C ))，加入20 倍浸膏量的纯水，加热搅拌，静置，冷却，使油脂充分上浮，取下清液，过滤，滤液浓缩成稠膏 (相对密度约1. 30 (85 °C ))，得美洲大蠊提取物。
[0062] 实施例2 口服液的制备
[0063] 【处方】
[0064] 原料：大孔树脂脱色美洲大蠊提取物样品1 (以总氨基酸计）不少于0. 8g
[0065] 辅料：甘油150ml
[0066] 苯甲酸钠3.5g
[0067] 山梨酸2g
[0068] 共制成 IOOOml
[0069]【制法】取脱色美洲大蠊提取物（以总氨基酸计）不少于0· 8g，加入80%所需量的 纯水、甘油150ml、苯甲酸钠3. 5g及山梨酸2g，加热溶解，滤过，滤液加水至1000ml，搅勻，灭 菌，滤过，灌装口服液瓶，即得。
[0070] 实施例3喷雾剂的制备
[0071] 【处方】
[0072] 原料：大孔树脂脱色美洲大蠊提取物样品2 (以总氨基酸计）不少于0. Sg
[0073] 辅料：甘油150ml
[0074] 苯甲酸钠3.5g
[0075] 山梨酸2g
[0076] 共制成 IOOOml
[0077]【制法】取脱色美洲大蠊提取物（以总氨基酸计）不少于0· 8g，加入80%所需量的 纯水、甘油150ml、苯甲酸钠3. 5g及山梨酸2g，加热溶解，滤过，滤液加水至1000ml，搅勻，灭 菌，滤过，灌装喷雾剂瓶，即得。
[0078] 实施例4乳膏的制备
[0079] 【处方】
[0080] 原料：大孔树脂脱色美洲大蠊提取物样品3 (以总氨基酸计）不少于0. Sg
[0081] 辅料：硬脂酸IOOg
[0082] 碳酸钾IOg
[0083] 单硬脂酸甘油脂30g
[0084] 三乙醇胺4ml
[0085] 甘油 90g
[0086] 共制成 IOOOg
[0087] 【制法】取由硬脂酸100g、碳酸钾10g、单硬脂酸甘油脂35g、三乙醇胺4ml、甘油 90g、水750ml制成的基质，加热至70°C，加入脱色美洲大蠊提取物（以总氨基酸计）不少于 〇.8g，混匀，即得。
[0088] 实施例5片剂的制备
[0089] 【处方】
[0090] 原料：活性炭脱色美洲大蠊提取物样品1 (以总氨基酸计）不少于8g
[0091] 辅料：糊精200g
[0092] 淀粉 IOOg
[0093] 共制成 1000片
[0094] 【制法】取脱色美洲大蠊提取物（以总氨基酸计）不少于8g、糊精200g、淀粉100g， 加入适量50%稀乙醇润湿，混匀，制粒，干燥，整粒，压片，即得。
[0095] 实施例6胶囊的制备
[0096] 【处方】
[0097] 原料：活性炭脱色美洲大蠊提取物样品2 (以总氨基酸计）不少于Sg
[0098] 辅料：微晶纤维素200g
[0099] 乳糖 IOOg
[0100] 共制成 1000粒
[0101]【制法】取脱色美洲大蠊提取物（以总氨基酸计）不少于8g、微晶纤维素200g、乳 糖100g，加入适量50%稀乙醇润湿，混匀，制粒，干燥，整粒，装胶囊，即得。
[0102] 实施例7滴丸的制备
[0103] 【处方】
[0104] 原料：活性炭脱色美洲大蠊提取物样品3 (以总氨基酸计）不少于0. Sg
[0105] 辅料：PEG 4000 20g
[0106] PEG 6000 20g
[0107] 共制成 1000粒
[0108] 【制法】取脱色美洲大蠊提取物（以总氨基酸计）不少于0· 8g、PEG 400020g、PEG 6000 20g，加热至融化，混匀，制成滴丸，即得。
[0109] 实施例8软胶囊的制备
[0110] 【处方】
[0111] 原料：混合脱色美洲大蠊提取物样品3 (以总氨基酸计）不少于Sg
[0112] 辅料：大豆油300ml
[0113] PEG 400 100ml
[0114] 共制成 1000粒
[0115] 【制法】取脱色美洲大蠊提取物（以总氨基酸计）不少于8g、大豆油300ml、PEG 400 100ml，充分混匀，制成软胶囊，即得。
[0116] 以下通过试验例具体说明本发明的有益效果。
[0117] 试验例1本发明脱色提取物的考察
[0118] -、材料与仪器
[0119] ▲美洲大蠊药材（购自云南腾冲，经生药教研室卢先明教授鉴定为蜚蠊科大蠊属 昆虫美洲大爐 Periplaneta americana L );
[0120] ▲清洁级SD大鼠，108只，雄性，体重180_220g，由成都达硕生物科技有限公司提 供。动物质量合格证：SCXK (川）2008-24号；
[0121] ▲电子天平（北京赛多利斯天平有限公司，型号BS-200S-WEI);
[0122] ▲离心机（飞鸽牌，型号：LXJ- Π B);
[0123] ▲数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，型号：KQ_500DB);
[0124] ▲高精度电子计重称（福州日辰电子有限公司，型号：AWH-30KC);
[0125] ▲旋转蒸发仪、冷凝管、铁架台、圆底烧瓶（1000ml、2000ml);
[0126] ▲其他：EP管（5ml，10ml)、烧杯、量筒、锥形瓶、称量纸、手术缝合针、手术缝合线、 玻璃棒、棉签、灌胃针、注射器、恒温水浴装置、大鼠固定板、注射器、持针器、镊子数把、大小 手术剪数把、皮筋适量等；
[0127] ▲水合氯醛（成都市科龙化工试剂厂，生产批号：20100920,规格：250g);
[0128] ▲甲醛（成都市科龙化工试剂厂，生产批号：20120320,规格：500ml);
[0129] ▲无水乙醇（成都市科龙化工试剂厂，生产批号：20110820,规格：500ml);
[0130] ▲氯化钠注射液（昆明南疆制药有限公司，生产批号：D101211A2,规格：500ml : 4.5g);蒸馏水等。
[0131] 二、脱色工艺对美洲大蠊提取物影响
[0132] 1、美洲大蠊提取物的制备
[0133] 取美洲大蠊，粉碎，用80 %?90 %的乙醇提取，第一次加7倍量乙醇回流提取2小 时，第二次加5倍量乙醇回流提取1. 5小时，第三次加3倍量乙醇回流提取1小时，合并提 取液，静置8h以上，滤过，滤液回收乙醇并浓缩成稠膏（相对密度约1.30 (85°C ))，加入20 倍浸膏量的纯水，加热搅拌，静置，冷却，使油脂充分上浮，取下清液，过滤，滤液浓缩成稠膏 (相对密度约1. 30 (85 °C ))，得美洲大蠊提取物。
[0134] 2、脱色物的制备
[0135] 取上述"1、美洲大蠊提取物的制备"的提取物，采用离子交换树脂或大孔树脂或活 性炭按实施例1方法进行脱色处理，即得。
[0136] 3.药效对比
[0137] 3.1消化性胃溃疡
[0138] 方法：以大鼠胃幽门结扎法为模型，比较美洲大蠊提取物和经脱色处理后的美洲 大蠊提取物（大孔树脂脱色样品1)治疗消化性溃疡的药理作用差异。将48只SD大鼠按 体重随机平均分为4组：①假手术组（JSS组）：等体积纯净水；②模型组（MD组）：等体积 纯净水；③美洲大蠊提取物组（MZDL组）；④美洲大蠊提取物脱色组（TS组）。每组12只大 鼠，自实验当天开始，各实验组大鼠按组别、剂量灌胃给予相应药物或纯净水，连续7天。末 次给药后，除假手术组外，其余各组大鼠制作幽门结扎型胃溃疡，禁食禁水18h后，剖取胃 组织，计算溃疡抑制百分率和病理损伤指数。
[0139] 结果：
[0140] (1)胃组织一般观察比较图见1?4。
[0141] 图1显示，正常胃组织显示淡红色黏膜皱褶，胃粘膜表面上皮被覆在整个胃粘膜 表面和胃小凹的周壁；图2显示，模型组大鼠胃组织出现明显溃烂和穿孔；图3显示，MZDL 组大鼠胃组织溃疡损伤较模型组明显减轻，但仍然可见明显的溃疡病变；图4显示，TS组大 鼠胃组织溃疡病变显著减少，基本愈合，接近正常胃组织。
[0142] (2)溃疡抑制率比较结果见表1。
[0143] 表1对大鼠胃溃疡抑制率的影响（?土S, n=10)
[0144]
【权利要求】
1. 一种美洲大蠊脱色提取物，其特征在于：它是以美洲大蠊提取物为原料，经离子交 换树脂、大孔树脂或活性炭进行脱色处理后即得。
2. 根据权利要求1所述的美洲大蠊脱色提取物，其特征在于：采用活性炭进行脱色处 理的操作如下： 取液态的美洲大蠊提取物或者含有美洲大蠊提取物的液体，加入活性炭，加热，搅拌， 除去活性炭，即完成脱色处理。
3. 根据权利要求1或2所述的美洲大蠊脱色提取物，其特征在于：活性炭的质量为液 态的美洲大蠊提取物或者含有美洲大蠊提取物的液体体积的〇. 1?10% g/ml。
4. 根据权利要求1所述的美洲大蠊脱色提取物，其特征在于：采用离子交换树脂或大 孔树脂进行脱色处理的操作如下： 取美洲大蠊提取物，湿法上离子交换树脂或大孔树脂柱，收集流出液，即完成脱色处 理。
5. 根据权利要求1或4所述的美洲大蠊脱色提取物，其特征在于：所述大孔树脂为非 极性、中极性或极性大孔树脂。
6. 根据权利要求1所述的美洲大蠊脱色提取物，其特征在于：所述美洲大蠊提取物为 美洲大蠊Perip leneta ameri Cana干燥虫体的提取物，按照干燥品计算，含总氨基酸不少 于 7. 0%。
7. 美洲大蠊脱色提取物的制备方法，其特征在于：它是以美洲大蠊提取物为原料，经 离子交换树脂、大孔树脂或活性炭进行脱色处理后即得。
8. 权利要求1?6任意一项所述的美洲大蠊脱色提取物在制备治疗消化性溃疡、抗肝 损伤、促进创面愈合或抗肿瘤的药物中的用途。
9. 一种药物组合物，其特征在于：它是由权利要求1?6任意一项所述的美洲大蠊脱 色提取物为活性成分，加上药学上常用的辅料或辅助性成分制备得到的制剂。
10. 根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于：所述制剂为口服制剂。
【文档编号】A61K35/64GK104337843SQ201410379577
【公开日】2015年2月11日 申请日期:2014年8月4日 优先权日:2013年8月2日
【发明者】王达宾, 苏柘僮, 熊永爱, 邹俊波, 姜小东, 郭华 申请人:成都百草和济科技有限公司