一种药物传递载体的制作方法【专利摘要】本发明属于生物医药领域，公开了一种基于枯草菌脂肽的药物传递载体。本发明以枯草菌脂肽为药物传递载体，利用枯草菌脂肽为两性分子的性质，使其分散于水溶液中分子自排形成胶束，荷载具有治疗、诊断或预防意义的物质，从而形成枯草菌脂肽药物传递载体。进一步，通过在枯草菌脂肽药物传递载体表面修饰形成药物靶向传递系统。本发明所述药物传递载体制备容易、适用范围广、稳定性高、易于实现靶向传递。【专利说明】一种药物传递载体【
技术领域：
】[0001]本发明属于生物医药领域，具体涉及一种药物传递载体，尤其涉及一种基于枯草菌脂肽的药物传递载体。【
背景技术：
】[0002]近年来，医药学有了显著发展，使许多疾病能够得到预防和控制，显著地延长了人类平均寿命，提高了人们生活质量。然而，目前疾病仍是威胁人类健康与生存的首要因素。尽管人们已经研制出能够克服各种疾病(如感染，肿瘤，基因缺陷等)的不同药物，然而由于缺乏理想的传递方式而不能有效地应用于临床。因此，发展药物传递系统(drugdeliverysystem,DDS),实现有效的祀向药物传递，已经是药剂研究人员面临的首要任务。[0003]药物传递系统是指应用现代制剂技术(膜控释、脂质体、毫微囊与微球制备、血细胞包封、单克隆抗体等生物工程技术等)和高分子材料或聚合物，将药物分散在结构特殊、复杂而巧妙的体系中，以达到按预期方式、速率释出药物并输送至期望部位或靶位为目的，不同给药途径的药物制品。DDS(药物传递系统)基本上摆脱了原始的、无反馈作用的制剂技术体制，属于功能化体系，是在反馈生物药剂学、药物动力学、制剂理论等研究结果的基础上设计，经过筛选辅料、系统构造及外形等并予以反馈，使设计逐步合理化而研制成功的，因而能够比常规制剂更加合理的发挥药物特性、系统中特殊设置的作用，成为“高”、“精”、“尖”药物制品(高指疗效高，精指质量好，尖指对病变部位的靶向性强)。DDS能为机体提供平稳、持久的血药浓度的特点，是趋向“五最”(有效治疗药量最小、疗效最高、毒副作用最小最少、服用用最方便、价格最合理)的理想药物制品。如今，DDS已经成为制药领域研究主流，一些DDS制剂已经应用于临床，使一些活性强、难以采用传统剂型应用的药物能够发挥优良的治疗作用。这不但产生了很好的社会效益，也形成了可观的经济增长点，甚至使制药发展为许多发达国家的支柱产业。[0004]然而，目前多数DDS存在着靶向性低、稳定性差、毒副作用大等明显不足，尚需要进一步发展与完善。如DDS中，脂质体药物传递系统具有良好的生物相容性、适于载各种药物、能够提高药物稳定性、通过融合作用可将药物传入细胞等明显优势，应用较为广泛，发展较为成熟。但是脂质体本质上具有热力学不稳定(thermodynamicallyinstable)特征。首先，脂质体稳定性差，水溶液中容易凝聚、融合，对于许多药物包封率低且容易泄漏；其次，缺乏有效的制备方法，难以实现工业化生产；另外，靶向性低也是脂质体无法用于临床的重要因素之一。【
发明内容】[0005]有鉴于此，本发明的一个目的是提供枯草菌脂肽作为药物传递载体的用途。[0006]本发明的另一个目的是提供一种药物传递载体，包括枯草菌脂肽和至少一种药物。[0007]其中所述枯草菌脂肽优选以胶束形式存在。[0008]作为优选，所述胶束粒径小于200纳米。[0009]作为优选，所述胶束为枯草菌脂肽分子自排形成具有疏水核、粒径小于200纳米的胶体粒子。[0010]本发明所述药物传递载体中所述药物为具有治疗、诊断或预防意义的物质。[0011]作为优选，所述药物为治疗药物、标记物、造影剂。[0012]更优选地，所述药物为抗癌药。[0013]进一步的，本发明所述药物传递载体还至少包括一种修饰分子。[0014]作为优选，所述修饰分子为靶向分子、定位释放分子、控释分子、缓释分子。[0015]进一步的，作为优选，所述修饰分子为细胞表面载体亲和分子、聚乙二醇、叶酸、单克隆抗体。[0016]更优选地，所述靶向分子为聚乙二醇或叶酸。[0017]本发明的另一个目的是提供一种制备药物传递载体的方法，将枯草菌脂肽分散于水溶液形成胶束，胶束包载药物。[0018]其中所述胶束包括但不限于通过乳化-冻干、乳化-蒸发、薄膜分散、超声分散、乙醇注入、逆向蒸发或调节pH溶解的方法形成。[0019]所述包载包括但不限于为通过疏水作用、亲脂作用、静电作用或与枯草菌脂肽特异结合，使药物聚集于胶束疏水部位或结合于胶束表面。[0020]进一步的，所述制备药物传递载体的方法还包括在胶束表面连接修饰分子的步骤。[0021]本发明还提供了所述制备方法制备得到的药物传递载体。[0022]本发明的另一个目的是提供所述药物传递载体在制备预防、诊断、治疗药物中的应用。[0023]本发明以枯草菌脂肽为药物传递载体构建一种新型药物传递载体。利用枯草菌脂肽为两性分子的性质，使其分散于水溶液中分子自排形成胶束，荷载具有治疗、诊断或预防意义的物质，从而形成枯草菌脂肽药物传递载体。进一步，通过在枯草菌脂肽表面连接靶向分子、定位释放分子、控释分子或缓释分子等具有特定功能的修饰分子，使枯草菌脂肽药物传递载体形成具有靶向、定位释放、控释或缓释等特定的功能的药物传递载体。[0024]与传统药物传递载体相比，本发明所述药物传递载体至少具有以下一种优势:[0025]I)制备容易:枯草菌脂肽在水中分散制备胶束的工艺简单，无需特殊设备，成本较低，易于工业化生产。[0026]2)适用范围广:枯草菌脂肽形成的胶束可用于包封各种具有治疗、诊断或预防意义的物质，如化学药物、基因、肽、影像物质以及诊断试剂等，适用于各种病灶部位(组织、细胞内环境)，如肿瘤组织、感染部位等，具有广泛的适用范围。[0027]3)稳定性高:枯草菌脂肽形成的胶束本身具有良好的热力学稳定性；进一步的，枯草菌脂肽表面连接的修饰分子增加了所述药物传递载体的稳定性。[0028]4)靶向性、定位释放功能:枯草菌脂肽本身具有PH敏感性，即在不同酸性环境胶束解体或聚集，以枯草菌脂肽形成的胶束作为药物传递载体具有定位释药功能。进一步，本发明药物传递载体还可以通过枯草菌脂肽表面连接的修饰分子实现靶向性、如叶酸修饰，使得载体与肿瘤细胞表面叶酸载体结合，从而实现药物通过主动靶向传递至肿瘤细胞。【专利附图】【附图说明】[0029]为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。[0030]图1示本发明所述枯草菌脂肽的分子结构示意图；[0031]图2示本发明所述枯草菌脂肽包载药物的结构示意图；[0032]图3示实施例3扫描电子显微镜结果图。【具体实施方式】[0033]下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。[0034]胶束作为药物传递载体受到广泛重视。胶束为两亲性表面活性剂在水溶液中浓度超过临界值(CMC)后，分子间的氢键、静电相互作用和范德华力等推动下形成分子自排体系(aself-assemblysystem)。胶束核可以成为疏水性药物的结合位置，即药物在胶束中存在的微环境。胶束作为药物载体的具有显著特点。首先能够增溶疏水性药物，通过独立的聚合物单元进行分子间络合，在一定条件下可重新解离为独立的聚合物链。其次利用其具有极小的粒径能增强药物对肿瘤组织血管壁的渗透，实现对肿瘤的被动靶向性释药；对聚合物胶束的粒径和表面特征的设计可有助于避免网状内皮系统的识别，延长体循环时间；一些带有电荷的聚合物胶束可以保护基因、疫苗和蛋白质药物的活性，可作为生物大分子药物的口服给药系统；可偶联靶向配体，实现药物定位传递，可通过口服、局部或注射等途径给药；一些聚合物胶束可作为运输药物透过血脑屏障的载体，还可以用于疾病诊断(如医学造影和显影)等领域，呈现出广阔的应用前景。[0035]本申请人:经过潜心研究发现枯草菌脂肽分散于水溶液容易形成稳定的胶束，从而能够有效构建疏水性药物的胶束传递系统。因此本发明提供了枯草菌脂肽作为药物传递载体的用途。[0036]枯草菌脂肽译为Surfactin，是一种由枯草芽孢杆菌合成的环肽，多以钠盐形式应用，其分子结构如图1所示。枯草菌脂肽分散于水溶液后枯草菌脂肽分子自排形成具有胶体粒子即稳定的胶束，进而荷载药物实现药物传递。[0037]本发明所述药物传递载体，包括枯草菌脂肽和至少一种药物。[0038]其中，所述枯草菌脂肽以胶束形式存在。[0039]作为优选，所述胶束粒径小于200纳米。[0040]在一些实施方案中，所述胶束为枯草菌脂肽分子自排形成具有疏水核、粒径小于200纳米的胶体粒子。例如小于190纳米、小于180纳米、小于170纳米、小于160纳米、小于150纳米、小于140纳米、小于130纳米、小于120纳米、小于110纳米或小于100纳米。[0041]本领域的技术人员将理解本发明不限于传递治疗药物或药剂，可以按照本发明传递任何数量的天然存在或合成的物质，因此本发明所述药物包括但不限于具有治疗、诊断或预防意义的物质。例如治疗药物、标记物或造影剂。[0042]这些物质包括但不限于小分子化学药物、光/热感应物质、蛋白、肽类、基因或基因片段。[0043]在一些优选实施方案中，所述药物为抗癌药。[0044]在一些具体实施例中，所述药物为紫杉醇、青霉素V钾或醋氯酚酸。[0045]其中，所述紫杉醇与所述枯草菌脂肽的质量比优选为1:5?1:20。[0046]另外，本领域的技术人员将理解在本发明中使用的药物或物质的量将取决于需要给药的剂量和期望的治疗。本领域的技术人员将理解“治疗”指的是给药药物活性组分的任何期望目的，包括控制，治疗，保持或改善健康等。[0047]本领域的技术人员还将理解本发明不限于传递单一的药物。实际上，使用本发明药物传递载体可同时传送多种药物。例如，在一个“剂量”中，接受者可以接受两种或多种药物的组合，至少一种治疗药物和一种标记物等[0048]进一步的，在一些实施方案中，本发明所述的药物传递载体还至少包括一种修饰分子，以形成具有特定功能的药物传递载体。[0049]本领域的技术人员将理解本发明可以按照本发明所要传递的药物而在枯草菌脂肽分子表面连接任何修饰分子形成任何适合于药物可以实现的功能的药物传递载体。[0050]其中，所述修饰分子包括但不限于靶向分子、定位释放分子、控释分子或缓释分子。[0051]所述靶向分子在本文中是指叶酸，其包括但不限于叶酸。[0052]所述定位释放在本文中是指在酸性环境释放，如肿瘤组织、炎症部位，其包括但不限于此。[0053]在一些实施方案中，所述修饰分子为细胞表面载体亲和分子、聚乙二醇、叶酸、肿瘤表面抗原特异性单克隆抗体。[0054]例如，在枯草菌脂肽分子表面连接聚乙二醇分子，可以实现体内避开网状内皮系统清除的长循环作用，实现选择性进入血管通透性较高的病变部位(如肿瘤组织、感染部位等)，而不进入正常组织。进而通过包载的药物对病变部位进行诊断或治疗。[0055]再如，在枯草菌脂肽分子表面连接肿瘤细胞特异性配体，可以实现肿瘤靶向药物传递，进而通过包载的药物对肿瘤细胞进行定位诊断或治疗。[0056]在一些实施方案中，本发明所述的药物传递载体所述枯草菌脂肽分子表面荷电数可以被调节。[0057]本领域技术人员可以通过调节本发明所述的药物传递载体中枯草菌脂肽分子表面荷电数而实现对不同等电点组织的靶向传递。如利用肿瘤组织呈酸性(pH〈6.5)调节枯草菌脂肽分子表面荷电数，获得酸敏感肿瘤祀向Surfactin药物传递载体(pH_sensitivetumor-targetingSurfactinDDS,pTSurf-DDS)。[0058]本发明所述制备药物传递载体的方法为将枯草菌脂肽分散于水溶液形成胶束，胶束包载药物。[0059]本领域的技术人员可以理解本发明可以通过任何已知的方法使枯草菌脂肽分子形成胶束，所述形成胶束的方法但不限于乳化-冻干、乳化-蒸发、薄膜分散、超声分散、乙醇注入、逆向蒸发或调节pH溶解的方法形成。[0060]本领域的技术人员可以理解本发明可以通过任何已知的方法将药物包载于胶束中，以使药物聚集于胶束疏水部位或结合于胶束表面。所述包载的方法包括但不限于通过疏水作用、亲脂作用、静电作用或与枯草菌脂肽特异结合。[0061]进一步的，在一些实施方案中，本发明所述制备药物传递载体的方法还包括在胶束表面连接修饰分子。[0062]其中，所述修饰分子包括但不限于靶向分子、定位释放分子、控释分子或缓释分子。[0063]在一些实施方案中，所述修饰分子为细胞表面载体亲和分子、聚乙二醇、叶酸、单克隆抗体。[0064]例如，在枯草菌脂肽分子表面连接聚乙二醇分子，可以实现体内避开网状内皮系统清除的长循环作用，实现选择性进入血管通透性较高的病变部位(如肿瘤组织、感染部位等)，而不进入正常组织。进而通过包载的药物对病变部位进行诊断或治疗。[0065]本发明还提供了所述药物传递载体在制备预防、诊断、治疗药物中的应用。[0066]本领域的技术人员可以理解本发明将所述药物传递载体传递至动物或人的方法，其包含给药所述药物传递载体于所述动物或人。[0067]进一步的，将所述药物传递载体传递至动物或人的方法中，所述给药进一步包含通过多种途径给药所述药物传递载体，所述途径包括但不限于口服、口颊、舌下、鼻、局部、经皮、眼、阴道、直肠、膀胱内、肺、动脉内、静脉内、皮内、肌内、皮下、腹膜内、鞘内和眼内。[0068]本发明还提供了诊断、预防或治疗动物或人疾病的方法，其包含给药所述药物传递载体。其中所述药物传递载体是以生物活性剂量提供。所述给药进一步包含通过多种途径给药所述药物传递载体，所述途径包括但不限于口服、口颊、舌下、鼻、局部、经皮、眼、阴道、直肠、膀胱内、肺、动脉内、静脉内、皮内、肌内、皮下、腹膜内、鞘内和眼内。[0069]本发明所述的枯草菌脂肽可以通过商业渠道购买得到，也可以按现有技术已知的方法制备得到。如由枯草芽孢杆菌经发酵得到。[0070]在一些实施例中，所述枯草菌脂肽为保藏编号为CGMCCN0.1107的枯草芽孢杆菌菌株ES接种于发酵培养基，发酵培养，纯化得到。[0071]为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明进行详细说明。其中本发明中使用的所有原材料均可以通过商业渠道购得，所述粒径的测定采用动态光散射法(DLS)，所述包封率的测定采用高速离心法(中国医药工业杂志ChineseJournalofPharmaceuticals2010,41(6),464-467)。[0072]实施例1:乳化-冻干法制备包载紫杉醇的枯草菌脂肽胶束药物传递载体[0073]以氯仿/环己烷(1:3，v/v)为油相(0)，以蔗糖(5W/W%)水溶液为水相(W)，将枯草菌脂肽、紫杉醇按质量比为20:1的比例溶于油相，取I份油相加入3份水相，超声(40w,lmin)乳化得到油/水型乳剂，随后冻干除去溶剂，得到冻干品，加水水化形成载有紫杉醇的枯草菌脂肽胶束药物传递载体，按照DLS检测法检测包载紫杉醇的枯草菌脂肽胶束粒径为160纳米。按照高速离心法测定包封率，制得的药物传递载体的药物包封率为91%。并且得到的冻干产物可以长期储存。[0074]实施例2:药物与枯草菌脂肽的质量比对包封率的影响(以乳化-冻干法制备PAC-SurfMice):[0075]以氯仿/环己烷(1:3，v/v)为油相(O)，以蔗糖(5W/W%)水溶液为水相(W)，分别将枯草菌脂肽、紫杉醇按质量比为20:1、10:1、5:1的比例溶于油相，取I份油相加入3份水相，超声(40w，lmin)乳化得到油/水型乳剂，随后冻干除去溶剂，得到冻干品，加水水化形成载有紫杉醇的枯草菌脂肽胶束药物传递载体。按照DLS检测法检测包载紫杉醇的枯草菌脂肽胶束粒径为160纳米。按照高速离心法测定制得的药物传递载体的药物包封率，当紫杉醇/枯草菌脂肽=1:20时，包封率82%;当紫杉醇/枯草菌脂肽=1:10时，包封率36%;当紫杉醇/枯草菌脂肽=1:5时，包封率21%。[0076]实施例3:包载紫杉醇的枯草菌脂肽胶束药物传递载体的制备(单相溶液冻干法)[0077]以叔丁醇为有机相(O)、蔗糖(Jmh%)水溶液为水相(W)，将枯草菌脂肽、紫杉醇按质量比为20:1的比例溶于有机相，再将有机相与水相按2:1的体积比混合，得到澄清溶液，随后冻干除去溶剂，得到冻干品，加水水化形成载有紫杉醇的枯草菌脂肽胶束药物传递载体，按照DLS检测法检测包载紫杉醇的枯草菌脂肽胶束粒径为40纳米，按照超速离心法测定制得的药物传递载体的药物包封率为91%，并且得到的冻干产物可以长期储存。[0078]实施例4:包载青霉素V钾的枯草菌脂肽胶束药物传递载体的制备(薄膜分散法)[0079]以氯仿为油相(O),PBS(pH7.4，50mM)水溶液为水相(W)，将枯草菌脂肽溶于油相，将青霉素V钾溶于水相，其中所述青霉素V钾与枯草菌脂肽的质量比为1:20。取油相加入圆底烧瓶，旋转蒸发除去油相，枯草菌脂肽于瓶壁形成薄膜，加入水相(使所述青霉素V钾与枯草菌脂肽的质量比为1:20)，旋转形成载有青霉素V钾的枯草菌脂肽胶束药物传递载体青，按照DLS检测法检测包载青霉素V钾的枯草菌脂肽胶束粒径为160纳米，按照高速离心法测定制得的药物传递载体的药物包封率10%，并且得到的冻干产物可以长期储存。[0080]实施例5:包载醋氯酚酸的枯草菌脂肽胶束药物传递载体的制备(乳化-蒸发法)[0081]以氯仿为油相(O)，蔗糖(Jmh%)水溶液为水相(W)，将枯草菌脂肽、醋氯酚酸按质量比为1:20溶于油相，取I份油相加入3份水相，超声乳化得到油/水型乳剂，随后旋转蒸发除去油相溶剂，形成载有醋氯酚酸的枯草菌脂肽胶束药物传递载体，按照DLS检测法检测包载醋氯酚酸的枯草菌脂肽胶束粒径为110纳米，按照高速离心法测定制得的药物传递载体的药物包封率11%，并且得到的冻干产物可以长期储存。[0082]实施例6:枯草菌脂肽的PEG修饰的胶束(以乳化-冻干法制备PAC-SurfMice):[0083]以氯仿/环己烷(1:3，v/v)为油相(O)，以蔗糖(5W/W%)水溶液为水相(W)，分别将枯草菌脂肽/PEG2000-PE/紫杉醇按质量比为(20:5:1)比例溶于油相，取I份油相加入3份水相，超声乳化得到油/水型乳剂，随后冻干除去溶剂，得到冻干品，加水水化形成载有紫杉醇的枯草菌脂肽胶束药物传递载体。按照所述DLS检测法检测包载紫杉醇的枯草菌脂肽胶束粒径为180纳米。按照高速离心法测定制得的药物传递载体的药物包封率，约为85%。[0084]实施例7:叶酸修饰的枯草菌脂肽胶束(以乳化-冻干法制备PAC-SurfMice):[0085]以氯仿/环己烷(I:3,v/v)为油相(O)，以蔗糖(5W/W%)水溶液为水相(W)，分别将枯草菌脂肽/叶酸-PEG2000-PE/紫杉醇按质量比为(20:8:1)比例溶于油相，取I份油相加入3份水相，超声乳化得到油/水型乳剂，随后冻干除去溶剂，得到冻干品，加水水化形成载有紫杉醇的枯草菌脂肽胶束药物传递载体。按照所述DLS检测法检测包载紫杉醇的枯草菌脂肽胶束粒径为190纳米。按照高速离心法测定制得的药物传递载体的药物包封率，约为78%。[0086]实施例8:[0087]用扫描电子显微镜观察实施例1制备得到的枯草菌脂肽胶束药物传递载体冻干品，结果见图3。[0088]图3结果显示，实施例1制备得到的药物传递载体冻干品均为近球形，大小与用粒度仪测定的结果相吻合。[0089]用扫描电子显微镜观察实施例2-7制备得到的枯草菌脂肽胶束药物传递载体冻干品。结果显示，实施例2-7制备得到的药物传递载体冻干品均为近球形，大小与用粒度仪测定的结果相吻合。【权利要求】1.枯草菌脂肽作为药物传递载体的用途。2.—种药物传递载体,包括枯草菌脂肽和至少一种药物。3.根据权利要求2所述的药物传递载体，其中所述枯草菌脂肽以胶束形式存在，胶束粒径小于200纳米。4.根据权利要求2或3所述的药物传递载体，其中所述药物为治疗药物、标记物、造影剂。5.根据权利要求2-4任意一项所述的药物传递载体，其中所述药物为抗癌药。6.根据权利要求2-5任意一项所述的药物传递载体，其中所述药物传递载体还至少包括一种修饰分子。7.根据权利要求6所述的药物传递载体，其中所述修饰分子为聚乙二醇或叶酸。8.一种制备药物传递载体的方法，将枯草菌脂肽分散于水溶液形成胶束，胶束包载药物。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述胶束通过乳化-冻干、乳化-蒸发、薄膜分散、超声分散、乙醇注入、逆向蒸发或调节邱溶解的方法形成。10.根据权利要求8或9所述的方法，其中所述包载为通过疏水作用、亲脂作用、静电作用或与枯草菌脂肽特异结合，使药物聚集于胶束疏水部位或结合于胶束表面。11.根据权利要求8-10任意一项所述的方法，其还包括在胶束表面连接修饰分子的步骤。12.权利要求8-11任意一项所述的方法制备得到的药物传递载体。13.权利要求2-7及12任意一项所述药物传递载体在制备预防、诊断、治疗药物中的应用。【文档编号】A61K47/42GK104436207SQ201410619931【公开日】2015年3月25日申请日期:2014年11月6日优先权日:2014年11月6日【发明者】孙文,王汀,丁仕奇,王元晨,王媚,刘山山,张继曼申请人:安徽帝元生物科技有限公司