抗hpv病毒凝胶敷料及其制备方法
【专利摘要】本发明公开一种抗HPV病毒凝胶敷料及其制备方法，特别是在治疗和预防HPV病毒感染及其相关疾病中的应用。抗HPV病毒凝胶敷料主要包括抗HPV病毒冻干粉和溶解液；其中抗HPV病毒冻干粉组分包括茶酸性蛋白AP、异聚麦芽糖、冻干保护剂、杀/抑菌剂；溶解液组分包括水、磷酸盐、甘油、薄荷油。本发明制备的抗HPV病毒凝胶敷料，无油腻感，能吸收组织渗出液，不易流出，不妨碍黏膜正常功能，能有效治疗生殖器病毒感染，预防宫颈癌和阴茎癌，对由病毒感染引发的宫颈上皮细胞瘤变(CIN)、慢性宫颈炎等疾病具有显著疗效。
【专利说明】抗HPV病毒凝胶敷料及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药领域，更具体地说，涉及抗HPV病毒凝胶敷料及其制备方法，以及 在治疗和预防生殖器病毒感染，慢性宫颈炎、宫颈癌和阴茎癌等HPV相关疾病中的应用。
【背景技术】
[0002] 在我国，宫颈癌新增发病数占女性生殖系统恶性肿瘤发病率的73-93%，是发达国 家的6倍，以25岁到45岁的妇女最为常见，个别地区高于全国平均数的10倍。2008年诺 贝尔生理学和医学奖获得者哈拉尔德?楚尔?豪森博士发现（Human Papillomavirus，HPV) 是导致子宫颈癌的病因。在美国等发达国家的医疗保险中已明确规定，女性在30岁以后每 年进行一次宫颈涂片细胞学检查，如发现细胞异常，马上进行HPV病毒检测。由于引发宫颈 癌病变的高危型HPV病毒为弱病毒，如能及时发现感染，及时清除，可达到防治宫颈癌的目 的。控制宫颈癌的发生，重在预防，关键在早期筛查，而难点是，目前还没有理想的方法能有 效的将HPV病毒清除。
[0003] HPV是一种嗜上皮性病毒，在人和动物中分布广泛，有高度的特异性。病毒粒子呈 球形，20面体对称，直径45-55nm，是一类无包膜双链小分子环状DNA病毒，由蛋白衣壳和 DNA核心组成，其中蛋白衣壳由Ll和L2组成，其中Ll蛋白的C端具有一段富含正电荷氨 基酸（R和K)，这段顺序即核定位信号，可以和宿主细胞内相应的受体结合而进入核内。L2 蛋白的的N端有一段富含正电荷氨基酸区域。研宄发现（Dasgupta J, Bienkowska-Haba MjOrtega MEjPatel HDj Bodevin Sj Spillmann D，Bishop Bj Sapp Mj Chen XS. Structural basis of oligosaccharide receptor recognition by human papillomavirus. J Biol Chem.2011，28;286(4):2617-24)，带有大量负电荷的肝素（糖蛋白）可以和携带正电荷的 病毒外壳蛋白结合，从而阻止HPV病毒感染。
[0004] 目前妇科疾病的药物治疗主要通过阴道给药，目前常用阴道给药制剂的剂型主要 有栓剂、凝胶剂、泡腾片、阴道片、洗剂、胶囊剂、膜剂等，但这些剂型或多或少存在一些缺 陷，影响药物发挥作用。
[0005] 如①洗液，作用时间短，不易深入腔道深处，难以充分到达病症部位，药物不易充 分发挥作用，用于治疗宫颈糜烂的药物，不宜制成洗剂。
[0006] ②阴道片剂，普通阴道片剂分布性差，与粘膜接触面小，不宜渗入皱襞；阴道泡腾 片需要阴道黏液的配合，不适于干燥性阴道炎患者。同时泡腾片易吸潮崩解，影响储存。而 且，片剂的辅料主要为一些不溶性成分，排除困难，引起病人的不适。
[0007] ③栓剂，药物释放不好，与阴道粘膜接触面小，难以渗入粘膜皱襞。而且栓剂在温 度较高时易变形，稳定性不好。
[0008] ④胶囊剂，药物不易释放，涂布面较差，受胶囊崩解的影响。
[0009] ⑤阴道膜剂，药物与粘膜接触面小、渗透性差，不适于阴道分泌物少的妇女。有时 粘滞的高分子浆状物会使人产生不适。
[0010] ⑥阴用凝胶剂，药物涂布面及渗透性较不够，稳定性不好。
[0011] ⑦喷雾剂，不易达到腔道深处，在阴道给药中应用较少。喷雾用药难以均匀分布到 阴道壁，难以充分发挥药效。治疗宫颈糜烂时，喷雾用药也有难以达到用药部位的缺点。
[0012] ⑧泡沫气雾剂，成本较高（因需内压容器、阀门系统和特殊的生产设备），抛射剂 的致冷效应可引起创面不适与刺激。
[0013] ⑨挤捏液，站位时药物易流出。
【发明内容】
[0014] 本发明的目的是提供了一种抗HPV病毒凝胶敷料及其制备方法，以及在治疗和预 防生殖器病毒感染，慢性宫颈炎、宫颈癌和阴茎癌等HPV相关疾病中的应用。
[0015] 为了实现上述目的，本发明的技术方案为：提供抗HPV病毒凝胶敷料，包括抗HPV 病毒冻干粉和溶解液；其中所述抗HPV病毒冻干粉组分包括茶酸性蛋白AP、异聚麦芽糖、杀 /抑菌剂、冻干保护剂；所述溶解液组分包括水、磷酸盐、甘油、薄荷油。
[0016] 优选的，所述茶酸性蛋白AP是一类分子量为3-100KD的糖蛋白，等电点PI为 2. 0~5, 0〇
[0017] 优选的，所述茶酸性蛋白AP按照下述方法制备获得：
[0018] (a)取新鲜茶叶以I :3-10(w/v)料水比研磨匀衆，调PH7-9,10-40°C浸提1-5小 时，过滤离心，取上清液，调PH2-5,离心，取沉淀，冷冻干燥后得到茶酸性蛋白AP粗品；
[0019] (b)茶酸性蛋白AP粗品复溶后，过CM Sepharose Fast Flow层析柱，去除碱性蛋 白，收取含酸性蛋白的流穿液，经真空冷冻干燥制成茶酸性蛋白AP。
[0020] 优选的，所述抗HPV病毒冻干粉组分包括以下重量百分比的组分：
[0021] 茶酸性蛋白 AP :0· 01-10% ;
[0022] 异聚麦芽糖：1-25%
[0023] 冻干保护剂：20-90%
[0024] 杀 / 抑菌剂：0.01-1% ;
[0025] 其中所述茶酸性蛋白AP从茶树（Camellia sinensis)新鲜叶片中提取，优先选择 海南种植的茶树（海南五指山新鲜茶叶）；所述冻干保护剂为多糖；所述杀/抑菌剂为氯己 定。
[0026] 优选的，所述溶解液具体包括以下重量百分比的组分：
[0027] 水：60-100%
[0028] 磷酸盐：0-2%
[0029] 甘油：0-15%
[0030] 薄荷油：0-8%
[0031] 抗HPV病毒凝胶敷料的制备方法，其中，包括以下步骤：
[0032] (1)茶酸性蛋白AP提取；
[0033] (2)将步骤（1)提取的茶酸性蛋白AP在溶剂介质中溶解，加入异聚麦芽糖、冻干保 护剂和杀/抑菌剂的一种或几种，均匀搅拌后，低温真空干燥，制得抗HPV病毒冻干粉；
[0034] (3)将步骤（2)制得的抗HPV病毒冻干粉，根据等量递增原则，添加生物凝胶、增稠 剂、助流剂，混合均匀，制备成冻干粉散剂，分装后包装；
[0035] (4)将水、磷酸盐、甘油、薄荷油的一种或几种按比例配成溶解液，分装后包装；
[0036] (5)使用前将步骤（3)得到的散剂和步骤（4)制备的溶解液混合。
[0037] 本发明中，所述的抗HPV病毒冻干粉疏松多孔，可直接配合喷粉器使用，在治疗和 预防生殖器病毒感染，慢性宫颈炎、宫颈癌和阴茎癌等HPV相关疾病中的应用。
[0038] 本发明中，所述的抗HPV病毒冻干粉散剂，可直接配合喷粉器使用，在治疗和预防 生殖器病毒感染，慢性宫颈炎、宫颈癌和阴茎癌等HPV相关疾病中的应用。
[0039] 本发明中，所述的抗HPV病毒凝胶敷料在治疗和预防生殖器病毒感染，慢性宫颈 炎、宫颈癌和阴茎癌中应用。
[0040] HPV病感染毒宿主特异，双受体，不进入血液。HPV感染特异宿主宫颈鳞状上皮基 底细胞有2个必要条件：1、游离态HPV病毒粒子，2、游离态的HPV病毒粒子通过由于宫颈上 皮粘膜的微创而导致的通往宫颈上皮基底细胞层，先与基底细胞膜的第一受体结合，然后 通过病毒外壳结构的改变，才能与基底细胞吸附，进入细胞，进行病毒复制。本发明的茶酸 性蛋白AP等电点为2. 0-5.0,在抗HPV病毒凝胶敷料中带有大量的负电荷，可以和携带正电 荷的病毒外壳蛋白结合，阻断游离态HPV病毒粒子通过鳞状上皮微创而导致的间隙进入基 底细胞层，从而阻断和清除HPV病毒感染。
[0041] 本发明的抗HPV病毒凝胶敷料，具有较好的贮存稳定性，在常温下更稳定，更易于 保存。给药后，可深入腔道深处并达到宫颈等病症部位，遇水后溶解迅速并黏附在黏膜上， 与粘膜接触面大，药物作用直接，起效快。无油腻感，能吸收组织渗出液，不易流出，不妨碍 黏膜正常功能。同时，本发明的冻干粉在制造工艺过程中，不会对热敏性物质（如蛋白）、成 分造成损害，是一种疗效确切、使用方便、稳定性好的新型阴道给药制剂。该制剂能有效治 疗HPV病毒感染，预防宫颈癌和阴茎癌，对由HPV病毒感染引发的宫颈上皮细胞瘤变（CIN)、 慢性宫颈炎等疾病具有显著疗效，具有良好的临床应用前景。
【具体实施方式】
[0042] 实施例1
[0043] 1、茶酸性蛋白AP的制备
[0044] 取海南五指山新鲜茶叶以I :5(w/v)料水比研磨匀衆，调PH7_9,40°C浸提3小时， 过滤离心，取上清液，调PH2-5,离心，取沉淀，冷冻干燥后得到茶酸性蛋白AP粗品。茶酸性 蛋白AP粗品复溶后，过CM Sepharose Fast Flow层析柱，去除碱性蛋白，收取含酸性蛋白 的流穿液，经真空冷冻干燥制成茶酸性蛋白AP。
[0045] 2、抗HPV病毒冻干粉的制备：
[0046] 加入茶酸性蛋白AP 0. 01份、异聚麦芽糖10份、多糖89. 94份，氯己定0. 05份，加 水溶解后，均匀搅拌，低温真空干燥制得。
[0047] 3、溶解液的制备：
[0048] 加入甘油5份，薄荷油5份、水90份，所有原料混合均匀制成。
[0049] 4、抗HPV病毒凝胶敷料的制备方法，包括以下步骤：
[0050] (1)茶酸性蛋白AP提取；
[0051] (2)将步骤（1)提取的茶酸性蛋白AP在溶剂介质中溶解，加入异聚麦芽糖、多糖和 氯己定，均匀搅拌后，低温真空干燥，制得抗HPV病毒冻干粉；
[0052] (3)将步骤（2)制得的抗HPV病毒冻干粉，根据等量递增原则，添加生物凝胶、增稠 剂、助流剂，混合均匀，制备成冻干粉散剂，分装后包装；
[0053] (4)将水、甘油、薄荷油按比例配成溶解液，分装后包装；
[0054] (5)使用前将步骤（3)得到的散剂和步骤（4)制备的溶解液混合。
[0055] 实施例2
[0056] 1、茶酸性蛋白AP的制备
[0057] 取海南五指山新鲜茶叶以I :8 (w/v)料水比研磨匀浆，调PH7-9, 25°C浸提3小时， 过滤离心，取上清液，调PH2-5,离心，取沉淀，冷冻干燥后得到茶酸性蛋白AP粗品。茶酸性 蛋白AP粗品复溶后，过CM Sepharose Fast Flow层析柱，去除碱性蛋白，收取含酸性蛋白 的流穿液，经真空冷冻干燥制成茶酸性蛋白AP。
[0058] 2、抗HPV病毒冻干粉的制备：
[0059] 加入茶酸性蛋白AP 1份、异聚麦芽糖15份、多糖83. 99份，氯己定0. 01份，加水 溶解后，均匀搅拌，低温真空干燥制得。
[0060] 3、溶解液的制备：
[0061] 加入磷酸二氢钾0. 03份，磷酸氢二钾0. 18份，水99. 79份，所有原料混合均匀制 成。
[0062] 4、抗HPV病毒凝胶敷料的制备方法，包括以下步骤：
[0063] (1)茶酸性蛋白AP提取；
[0064] (2)将步骤⑴提取的茶酸性蛋白AP在溶剂介质中溶解，加入异聚麦芽糖、多糖和 氯己定，均匀搅拌后，低温真空干燥，制得抗HPV病毒冻干粉；
[0065] (3)将步骤⑵制得的抗HPV病毒冻干粉，根据等量递增原则，添加生物凝胶、增稠 剂、助流剂，混合均匀，制备成冻干粉散剂，分装后包装；
[0066] (4)将水、磷酸二氢钾，磷酸氢二钾按比例配成溶解液，分装后包装；
[0067] (5)使用前将步骤（3)得到的散剂和步骤（4)制备的溶解液混合。
[0068] 实施例3
[0069] 1、茶酸性蛋白AP的制备
[0070] 取海南五指山新鲜茶叶以I :10(w/v)料水比研磨匀浆，调PH7-9，10°C浸提3小 时，过滤离心，取上清液，调PH2-5,离心，取沉淀，冷冻干燥后得到茶酸性蛋白AP粗品。茶酸 性蛋白AP粗品复溶后，过CM Sepharose Fast Flow层析柱，去除碱性蛋白，收取含酸性蛋 白的流穿液，经真空冷冻干燥制成茶酸性蛋白AP。
[0071] 2、抗HPV病毒冻干粉的制备：
[0072] 加入茶酸性蛋白AP 5份、异聚麦芽糖25份、多糖69. 98份，氯己定0. 02份，加水 溶解后，均匀搅拌，低温真空干燥制得。
[0073] 3、溶解液的制备：
[0074] 加入磷酸二氢钾0. 05份，甘油3份，水96. 95份，所有原料混合均匀制成。
[0075] 4、抗HPV病毒凝胶敷料的制备方法，包括以下步骤：
[0076] (1)茶酸性蛋白AP提取；
[0077] (2)将步骤⑴提取的茶酸性蛋白AP在溶剂介质中溶解，加入异聚麦芽糖、多糖和 氯己定，均匀搅拌后，低温真空干燥，制得抗HPV病毒冻干粉；
[0078] (3)将步骤（2)制得的抗HPV病毒冻干粉，根据等量递增原则，添加生物凝胶、增稠 剂、助流剂，混合均匀，制备成冻干粉散剂，分装后包装；
[0079] (4)将水、磷酸二氢钾，甘油按比例配成溶解液，分装后包装；
[0080] (5)使用前将步骤（3)得到的散剂和步骤（4)制备的溶解液混合。
[0081 ] 上述三个实施例制备的抗HPV病毒凝胶敷料的批号为1308001、1308002、 1308003〇
[0082] 1、抗HPV病毒冻干粉稳定性考察
[0083] 采用考马斯亮蓝法检测蛋白含量。将抗HPV病毒冻干粉样品（1308001、1308002、 1308003)室温留样考察24个月，在第3、6、9、12、18、24个月检测，考察结果如下表1
[0084] 表1抗HPV病毒冻干粉样品室温留样考察结果
[0085]
【权利要求】
1. 一种抗HPV病毒凝胶敷料，其特征在于：包括抗HPV病毒冻干粉和溶解液；其中所述 抗HPV病毒冻干粉组分包括茶酸性蛋白AP、异聚麦芽糖、冻干保护剂、杀/抑菌剂；所述溶 解液组分包括水、磷酸盐、甘油、薄荷油。
2. 如权利要求1所述的抗HPV病毒凝胶敷料，其特征在于：所述茶酸性蛋白AP是一类 分子量为3-100KD的糖蛋白，等电点PI为2. 0-5. 0。
3. 如权利要求2所述的抗HPV病毒凝胶敷料，其特征在于：所述茶酸性蛋白AP的制备 方法包括以下步骤： (a) 取新鲜茶叶以1 :3-10w/v料水比研磨匀浆，调PH7-9,10-40°C浸提1-5小时，过滤 离心；取上清液，调PH2-5,离心，取沉淀；冷冻干燥后得到茶酸性蛋白AP粗品； (b) 茶酸性蛋白AP粗品复溶后，过CM Sepharose Fast Flow层析柱，去除碱性蛋白，收 取含酸性蛋白的流穿液，经真空冷冻干燥制成茶酸性蛋白AP。
4. 如权利要求1所述的抗HPV病毒凝胶敷料，其特征在于：所述抗HPV病毒冻干粉组 分具体包括： 茶酸性蛋白AP :0.01-10% 异聚麦芽糖1-25% 冻干保护剂20-90% 杀/抑菌剂0.01-1 % ; 其中所述茶酸性蛋白AP从茶树（Camellia sinensis)新鲜叶片中提取，优先选择海南 种植的茶树；所述冻干保护剂为多糖；所述杀/抑菌剂为氯己定。
5. 如权利要求1所述的抗HPV病毒凝胶敷料，其特征在于：所述溶解液组分具体包括： 水：60-100% 磷酸盐：0-2% 甘油：0-15% 薄荷油：〇-8%。
6. 如权利要求1所述的抗HPV病毒凝胶敷料的制备方法，其特征在于，具体包括以下步 骤： (1) 茶酸性蛋白AP提取； (2) 将步骤（1)提取的茶酸性蛋白AP在溶剂介质中溶解，加入异聚麦芽糖、冻干保护剂 和杀/抑菌剂的一种或几种，均匀搅拌后，低温真空干燥，制得抗HPV病毒冻干粉； (3) 将步骤（2)制得的抗HPV病毒冻干粉，根据等量递增原则，添加生物凝胶、增稠剂、 助流剂，混合均匀，制备成冻干粉散剂，分装后包装； ⑷将水、磷酸盐、甘油、薄荷油的一种或几种按比例配成溶解液，分装后包装； (5)使用前将步骤（3)得到的冻干粉散剂和步骤（4)制备的溶解液混合。
7. 如权利要求1所述的抗HPV病毒凝胶敷料，其特征在于：所述的抗HPV病毒冻干粉 疏松多孔，可直接配合喷粉器使用，在治疗和预防生殖器病毒感染，慢性宫颈炎、宫颈癌和 阴茎癌HPV疾病中的应用。
8. 如权利要求6所述的抗HPV病毒凝胶敷料，其特征在于：所述冻干粉散剂，可直接配 合喷粉器使用，在治疗和预防生殖器病毒感染，慢性宫颈炎、宫颈癌和阴茎癌HPV疾病中的 应用。
9. 一种如权利要求6所述制备的抗HPV病毒凝胶敷料在治疗和预防生殖器病毒感染， 慢性宫颈炎、宫颈癌和阴茎癌HPV疾病中的应用。
【文档编号】A61P31/20GK104491838SQ201410798607
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月19日 优先权日:2014年12月19日
【发明者】张春发, 邓柳红, 高海波, 唐权, 黄超, 陈一萍, 王胜, 王桂玉 申请人:海南森瑞谱生命科学药业股份有限公司