本发明涉及一种生物发酵领域，特别涉及一种用益生菌固态发酵玉屏风散的制备方法和应用。
背景技术：
随着当前养殖业的集约化程度越来越高，畜禽疾病也越来越复杂，加之抗生素类药物的滥用、食品安全保障以及养殖环境污染等问题出现，已成为影响养殖业发展的重大挑战。
我国中药资源丰富，历史悠久，有许多经典方剂在提高畜禽的免疫力和抗病力中起作很重要的作用。玉屏风散是一剂中药名方，有典籍可考。中医名著《世医得效方》、朱丹溪《丹溪心法》、《医方考》、《古今名医方论》、《古方选注》、《成方便读》等均有记载。方中重用黄芪以益气固表，为主药；白术健脾益气，助黄芪益气固表止汗，为辅药；二药合用使气旺表实，汗不外泄，邪不内浸。防风走表而散风祛寒，为佐使药。黄芪得防风，固表而不致留邪；防风得黄芪，祛邪而不伤正，有补中寓疏，散中寓补之意。三药合用，使邪去则无外所扰而汗止，卫和则腠理固密而邪不复浸，脾健则正气复而内有所据，达到益气固表，扶正祛邪之功。玉屏风散主要应用在具有益气固表止汗的功效，主要用于治表虚自汗以及体虚患畜易感风邪；现代药理学研究证明，玉屏风散具有提高免疫功能、抗菌和抗病毒的作用。当前使用玉屏风散存在利用率低、活性成分含量低的问题，主要通过提取的方式解决；然而提取工艺复杂、提取率低、成本高；限制了玉屏风散的应用和推广。
技术实现要素：
针对现有技术存在的缺陷，本发明提出一种用益生菌固态发酵玉屏风散的制备方法和应用，能够提高中兽药的利用率，又能提高中兽药的生物利用度、有效作用；制备方法简单易行，无污染，无残留，容易实现大规模生产。
为实现上述目的，本发明提出一种用益生菌固态发酵玉屏风散的制备方法，按重量百分比计，包含下列组分 ：玉屏风散40-70%，益生菌液5-10%，蛋白质10-30%，有机酸1-5%，寡糖10-30%；该制备方法包括以下几个步骤 ：
1）将益生菌放在培养基中进行培养，然后纯化培养，得到相应的益生菌菌液；
2）使所述玉屏风散粉碎、过筛，然后放入固态发酵罐内，再按比例添加蛋白质、有机酸和寡糖，并混合均匀；
3）调节含水量及pH，再灭菌、加入益生菌菌液发酵、烘干即成。
优选的，所述玉屏风散包括黄芪、白术和防风，重量比为3：2：1；把所述黄芪、白术和防风分别进行挑拣、清洗后，晾干，并将所述发酵罐的清洗、消毒和干燥。
优选的，所述益生菌液选自乳酸菌、酵母菌、凝结芽孢杆菌中的至少一种。
优选的，所述乳酸菌菌液的制备：将活化的乳酸菌接种到乳酸菌种子液培养基中，37℃条件下培养24小时，即的乳酸菌菌液。
优选的，所述乳酸菌菌液制备中，乳酸菌种子液培养基的制备方法为 ：将酵母膏、牛肉膏、胰蛋白胨、葡萄糖、麦芽糖、乙酸钠和番茄汁加入蒸馏水中，混合并溶解均匀，调节 pH 值至 6.5，在 121℃下蒸汽灭菌 15 分钟。
优选的，所述蛋白质选自豆粕、酿酒蛋白、血清蛋白中的至少一种；所述有机酸选自甲酸、乙酸、丁酸中的至少一种；所述寡糖选自果寡糖、低聚糖、壳聚糖中的至少一种。
优选的，所述第2）步中玉屏风散粉碎，过40目筛。
优选的，所述第3）步中调节含水量为40%，pH为7.0，灭菌温度为105℃，处理时间为2小时。
优选的，所述第3）步中采用厌氧发酵模式，发酵时间为36-72小时，当pH值达到4.0时，即为发酵终点。
所述的固态发酵玉屏风散在提高疫苗免疫效果中的应用。
有益效果：
本发明用益生菌固态发酵玉屏风散能提高中兽药的利用率，又能提高中兽药的生物利用度、有效作用；制备方法简单易行，无污染，无残留，容易实现大规模生产；本发明的发酵玉屏风散的稳定性好，提高有效活性成分含量，有特殊的香味，适口性较好；本发明的发酵玉屏风散主要应用在提高疫苗的免疫效果方面。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
酵母菌菌液的制备：将活化的酵母菌接种到酵母菌种子液培养基中，37℃条件下培养24小时，即的酵母菌菌液。酵母菌种子液培养基的制备方法为：将马铃薯汁、蔗糖加入蒸馏水中，混合并溶解均匀，调节PH 值至6.0，在 121℃下蒸汽灭菌 15 分钟，即得酵母菌液。
凝结芽孢杆菌菌液的制备：将活化的凝结芽孢杆菌接种到凝结芽孢杆菌种子液培养基中，37℃条件下培养24小时，即的凝结芽孢杆菌菌液。凝结芽孢杆菌种子液培养基的制备方法为 ：将蛋白胨、酵母浸膏粉、无水葡萄糖和麸皮水，混合并溶解均匀，调节 PH 值至 7.0，在121℃下蒸汽灭菌 15 分钟，即得凝结芽孢杆菌液。
实施例1
将玉屏风散中的黄芪、白术、防风挑拣清洗后，晾干。
将发酵罐清洗干净后，进行消毒、干燥。
将活化的乳酸菌菌种接种到乳酸菌种子液培养基中，在 37℃条件下放置于回旋摇床上进行振荡培养 2 天，得到乳酸菌菌液，待用。
按重量百分比计，包含下列组分：玉屏风散50%，乳酸菌菌液6%，豆粕15%，甲酸4%，果寡糖25%。
所述玉屏风散粉碎、过40目筛，然后放入固态发酵罐内，再与豆粕、甲酸、果寡糖混合均匀，再灭菌105oC处理2小时、加乳酸菌菌液密闭厌氧发酵，控制含水量为40%，pH为7.0，连续发酵36小时，当pH为4.0时，为发酵终点。
乳酸菌种子液培养基的制备方法为 ：将酵母膏20g、牛肉膏20g、蛋白胨20g、葡萄糖20g、麦芽糖20g、乙酸钠5g和番茄汁200mL加入蒸馏水中，混合并溶解均匀，调节 pH 值至 6.5，在 121℃下蒸汽灭菌 15 分钟。
实施例2
将玉屏风散中的黄芪、白术、防风挑拣清洗后，晾干。
将发酵罐清洗干净后，进行消毒、干燥。
将活化的酵母菌菌种接种到酵母菌种子液培养基中，在 37℃条件下放置于回旋摇床上进行振荡培养 2 天，得到酵母菌菌液，待用。
按重量百分比计，包含下列组分：玉屏风散60%，酵母菌菌液8%，酵母蛋白10%，乙酸2%，低聚糖20%。
所述玉屏风散粉碎、过40目筛，然后放入固态发酵罐内，再与酵母蛋白、乙酸、低聚糖混合均匀，再灭菌105oC处理2小时、加酵母菌菌液密闭厌氧发酵，控制含水量为40%，pH为7.0，连续发酵48小时，当pH为4.0时，为发酵终点。
酵母菌种子液培养基的制备方法为：将马铃薯汁20g、葡萄糖2g加入蒸馏水中，混合并溶解均匀，调节PH 值至6.0，在 121℃下蒸汽灭菌 15 分钟。
实施例3
将玉屏风散中的黄芪、白术、防风挑拣清洗后，晾干。
将发酵罐清洗干净后，进行消毒、干燥。
将活化的凝结芽孢杆菌菌种接种到凝结芽孢杆菌种子液培养基中，在 37℃条件下放置于回旋摇床上进行振荡培养 2 天，得到凝结芽孢杆菌菌液，待用。
按重量百分比计，包含下列组分：玉屏风散55%，凝结芽孢杆菌菌液9%，血清蛋白10%，丁酸2%，壳聚糖24%。
所述玉屏风散粉碎、过40目筛，然后放入固态发酵罐内，再与血清蛋白、丁酸、壳聚糖混合均匀，再灭菌105oC处理2小时、加凝结芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵，控制含水量为40%，pH为7.0，连续发酵72小时，当pH为4.0时，为发酵终点。
凝结芽孢杆菌种子液培养基的制备方法为 ：将蛋白胨10g、酵母浸膏粉3g、氯化钠10g和麸皮水100mL，混合并溶解均匀，调节 PH 值至 7.0，在121℃下蒸汽灭菌 15 分钟。
固态发酵玉屏风散对鸡传染性喉气管炎疫苗免疫效果的影响
选2,000只一日龄健康雏鸡，正常饲养至45日龄，随机分成8组,Ⅰ~Ⅲ组在传染性喉气管炎(ILT)冻干苗免疫前一天分别按高(1.0kg/吨料)、中(0.5kg/吨料)、低(0.25kg/吨料) 3个浓度的发酵玉屏风散连续使用3d。Ⅳ~VI组分别在免疫后第3天按高、中、低3个浓度的发酵玉屏风散连续使用3d。Ⅶ为免疫对照组、Ⅷ组不免疫对照组。于52、59、73、87日龄时,每组随机取8只鸡，心脏采血测定ILT抗体水平、IFN-γ、IL-4；翅下静脉采血测定CD4、CD8T淋巴细胞含量及CD4/CD8比值；随后剖杀取胸腺、脾脏、法氏囊、气管和肠管;计算胸腺、脾脏、法氏囊的器官指数，并将气管、肠管置于Bouin液中固定48小时制作石蜡切片，测定IgA分泌细胞的阳性表达率。试验结果表明，免疫前一天和免疫第三天的高、中剂量发酵玉屏风散全程能显著提高血液中ILT抗体效价(P0.01)、IFN-γ含量、免疫器官指数(P0.05)、雏鸡气管小肠中IgA分泌细胞的阳性表达率和外周血巨噬细胞的吞噬活性并降低IL-4含量。低剂量的发酵玉屏风散前期对IFN-γ、抗体、免疫器官指数均、气管小肠中IgA分泌细胞的阳性表达率和外周血巨噬细胞的吞噬活性均有不同程度的增强作用并降低IL-4含量，后期与对照组呈显著性差异；结果表明，发酵玉屏风散能有效提高雏鸡的免疫功能。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过参照本发明的某些优选实施例已经对本发明进行了描述，但本领域的普通技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离所附权利要求书所限定的本发明的精神和范围。