本发明涉及一种贻贝蛋白复合医用敷料的制备方法，，属于医用敷料制备领域。
背景技术：
医用敷料主要功能是覆盖、保护破损皮肤，同时提供有助于伤口愈合的环境，传统主要使用脱脂棉纱布、纱布条、棉球和棉膜等天然纤维性材料类敷料，可使伤口干燥，具备物理隔离功能；但存在与渗出物结痂，造成伤口粘连，换药时引发疼痛及新的创伤，以及细菌滋生、保湿及止血性能不佳等问题。为此，学者们研究出了生物敷料，其能与伤口紧密贴合，保持伤口润湿避免其干燥，可辅助局部使用的药物及机体内源性分子促进伤口愈合。生物敷料通常应具备以下要求：（1）保湿、吸湿性良好，能有效保留伤口渗液同时不形成积液；（2）伤口组织处粘连程度轻，不易与伤口渗液粘连成痂，减轻换药时的疼痛及造成新生组织损伤；（3）抗菌、抑菌性较好，预防伤口感染；（4）生物相容性优良，对人体无刺激，不会引起中毒、病变等。
目前的生物敷料根据用途以及材质，可将其分为天然材料类、人工合成材料类和载药类敷料。天然材料类包括海藻酸盐敷料、壳聚糖敷料、动物类敷料等，海藻酸盐敷料具有吸湿性强、揭除容易、有助于血液凝固及伤口愈合等优点，但是海藻酸盐敷料需要一定的湿度才能发挥作用，所以它们不能用于干燥的伤口和被坚硬的坏死组织所覆盖的伤口，这是海藻酸盐敷料的主要缺点。壳聚糖敷料具有良好的生物相容性和生物可降解性，还具有抗菌、消毒、无毒、止血、减少创面渗出和促进创伤组织再生等优点，其缺点是力学性能较差，抗水性能差等。动物类敷料在结构、黏附性及胶原含量上与人体皮肤组织比较接近，但是它的力学性能较差，容易分层，会影响自体皮肤移植，且病原微生物容易污染，不易储存。合成材料类包括薄膜型敷料、水胶体类敷料、泡沫类敷料，薄膜型敷料透气性、阻菌性及贴附性好，但是吸收性较差，水胶体类敷料胶体层吸收大量渗出物后会造成创面伤口的二次污染，泡沫类敷料由于其具有多孔结构，伤口组织易长入孔隙，造成脱膜困难，并常有泡沫碎屑遗留于伤口导致痂痕增多。载药类敷料的缺点为不具备粘连性，需要增加辅料加以固定，并且使用后会有着色现象，也有可能会产生耐药性，对其在临床上的应用也产生了一定的抑制作用。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题：针对目前壳聚糖敷料存在力学性能差、脆性大和抗水性差的问题，提供了一种用贻贝粘蛋白增强抗水性、细菌纤维素复合壳聚糖制备医用敷料的方法，本发明首先从贻贝中提取粘性蛋白，再将壳聚糖与细菌纤维素混合溶胀后，与硫酸软骨素混合即可得到医用敷料，利用贻贝粘蛋白在水中可以粘附在任何基底上，足见贻贝粘蛋白抗水性之强，再用细菌纤维素增强壳聚糖敷料的强度和力学性能，本发明制备的医用敷料能够透过坚硬的坏死组织进入伤口内部，使伤口快速愈合，作用于软骨组织时，还能使促进软骨组织生长，具有保湿、透气、吸收伤口渗出液等功效。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：
（1）称取200～300g贻贝肉，并用去离子水洗涤3～5遍后，置于烧杯中，再加入400～500mLpH为6.3～6.5的磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲溶液，搅拌3～5min后，转移至组织粉碎机中粉碎20～30min，得到匀浆液，并对其进行加热至50～60℃，搅拌提取4～5h，停止加热，并置于离心机，在4000～5000r/min下离心20～30min，收集上清液；
（2）将上述上清液加入到烧杯中，并置于冰水浴中，控制温度在3～5℃，再加入20～30g氯化铵，搅拌10～20min，待氯化铵全部溶解后，静置2～3h，再置于离心机中，在1000～1200r/min下离心20～30min，收集沉淀，得到贻贝蛋白，备用；
（3）称取10～20g壳聚糖加入到三口烧瓶中，并将烧瓶置于水浴锅中，升温至70～80℃，再加入100～200mL质量分数为36%醋酸溶液，搅拌10～20min，待壳聚糖全部溶解后，再加入8～12g细菌纤维素，搅拌溶胀1～2h后，得到混合液；
（4）按重量份数计，称取30～40份步骤（2）备用的贻贝蛋白、40～50份上述混合液、2～3份硫酸软骨素和3～5份羧甲基纤维素，加入到烧杯中，搅拌混合5～10min后，倒入模具中，在-45～-35℃下冷冻干燥24～26h，即可得到贻贝蛋白复合医用敷料。
本发明的应用方法：本发明制备的医用敷料可用于治愈烧伤、烫伤、手术切口等多种皮肤类创伤，使用前先用医用酒精将创伤周围皮肤擦干，再选用比创面大5～8cm的本发明的医用敷料覆盖伤口，之后再用无菌纱布包扎，更换时间根据创面渗出液而定，渗出液多，敷料吸收饱和应及时更换，渗出液少，可隔1～2天更换即可。
本发明与其他方法相比，有益技术效果是：
（1）本发明制备的医用敷料能够透过坚硬的坏死组织进入伤口内部，使伤口快速愈合，作用于软骨组织时，还能使促进软骨组织生长，具有保湿、透气、吸收伤口渗出液等功效；
（2）本发明操作简单，原料价廉易得。
具体实施方式
首先称取200～300g贻贝肉，并用去离子水洗涤3～5遍后，置于烧杯中，再加入400～500mLpH为6.3～6.5的磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲溶液，搅拌3～5min后，转移至组织粉碎机中粉碎20～30min，得到匀浆液，并对其进行加热至50～60℃，搅拌提取4～5h，停止加热，并置于离心机，在4000～5000r/min下离心20～30min，收集上清液；将上述上清液加入到烧杯中，并置于冰水浴中，控制温度在3～5℃，再加入20～30g氯化铵，搅拌10～20min，待氯化铵全部溶解后，静置2～3h，再置于离心机中，在1000～1200r/min下离心20～30min，收集沉淀，得到贻贝蛋白，备用；称取10～20g壳聚糖加入到三口烧瓶中，并将烧瓶置于水浴锅中，升温至70～80℃，再加入100～200mL质量分数为36%醋酸溶液，搅拌10～20min，待壳聚糖全部溶解后，再加入8～12g细菌纤维素，搅拌溶胀1～2h后，得到混合液；按重量份数计，称取30～40份备用的贻贝蛋白、40～50份上述混合液、2～3份硫酸软骨素和3～5份羧甲基纤维素，加入到烧杯中，搅拌混合5～10min后，倒入模具中，在-45～-35℃下冷冻干燥24～26h，即可得到贻贝蛋白复合医用敷料。
实例1
首先称取200g贻贝肉，并用去离子水洗涤3遍后，置于烧杯中，再加入400mLpH为6.3的磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲溶液，搅拌3min后，转移至组织粉碎机中粉碎20min，得到匀浆液，并对其进行加热至50℃，搅拌提取4h，停止加热，并置于离心机，在4000r/min下离心20min，收集上清液；将上述上清液加入到烧杯中，并置于冰水浴中，控制温度在3℃，再加入20g氯化铵，搅拌10min，待氯化铵全部溶解后，静置2h，再置于离心机中，在1000r/min下离心20min，收集沉淀，得到贻贝蛋白，备用；称取10g壳聚糖加入到三口烧瓶中，并将烧瓶置于水浴锅中，升温至70℃，再加入100mL质量分数为36%醋酸溶液，搅拌10min，待壳聚糖全部溶解后，再加入8g细菌纤维素，搅拌溶胀1h后，得到混合液；按重量份数计，称取30份备用的贻贝蛋白、40份上述混合液、2份硫酸软骨素和3份羧甲基纤维素，加入到烧杯中，搅拌混合5min后，倒入模具中，在-45℃下冷冻干燥24h，即可得到贻贝蛋白复合医用敷料。
本发明的应用方法：将待改良的土地表面的杂草去除后，将土壤改良剂与水按质量比为1：400进行稀释，然后均匀喷洒在土地表面，控制土壤改良剂用量为40kg/亩，待2天后进行翻锄，再隔7天后再次喷洒质量比为1：400加水稀释后的土壤改良剂溶液，土壤改良剂用量不变，喷洒完毕后再次翻锄一次即可。经本发明土壤改良剂改良后的土壤容重降低了15%，总孔隙度提高了18%，N、P、K元素含量均增加了10%，土壤的保水保肥能力显著提高。
实例2
首先称取250g贻贝肉，并用去离子水洗涤4遍后，置于烧杯中，再加入450mLpH为6.4的磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲溶液，搅拌4min后，转移至组织粉碎机中粉碎25min，得到匀浆液，并对其进行加热至55℃，搅拌提取4h，停止加热，并置于离心机，在4500r/min下离心25min，收集上清液；将上述上清液加入到烧杯中，并置于冰水浴中，控制温度在4℃，再加入25g氯化铵，搅拌15min，待氯化铵全部溶解后，静置2h，再置于离心机中，在1100r/min下离心25min，收集沉淀，得到贻贝蛋白，备用；称取15g壳聚糖加入到三口烧瓶中，并将烧瓶置于水浴锅中，升温至75℃，再加入150mL质量分数为36%醋酸溶液，搅拌15min，待壳聚糖全部溶解后，再加入10g细菌纤维素，搅拌溶胀2h后，得到混合液；按重量份数计，称取35份备用的贻贝蛋白、45份上述混合液、2份硫酸软骨素和4份羧甲基纤维素，加入到烧杯中，搅拌混合8min后，倒入模具中，在-40℃下冷冻干燥25h，即可得到贻贝蛋白复合医用敷料。
本发明的应用方法：将待改良的土地表面的杂草去除后，将土壤改良剂与水按质量比为1：450进行稀释，然后均匀喷洒在土地表面，控制土壤改良剂用量为45kg/亩，待2.5天后进行翻锄，再隔7.5天后再次喷洒质量比为1：450加水稀释后的土壤改良剂溶液，土壤改良剂用量不变，喷洒完毕后再次翻锄一次即可。经本发明土壤改良剂改良后的土壤容重降低了16%，总孔隙度提高了19%，N、P、K元素含量均增加了18%，土壤的保水保肥能力显著提高。
实例3
首先称取300g贻贝肉，并用去离子水洗涤5遍后，置于烧杯中，再加入500mLpH为6.5的磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲溶液，搅拌5min后，转移至组织粉碎机中粉碎30min，得到匀浆液，并对其进行加热至60℃，搅拌提取5h，停止加热，并置于离心机，在5000r/min下离心30min，收集上清液；将上述上清液加入到烧杯中，并置于冰水浴中，控制温度在5℃，再加入30g氯化铵，搅拌20min，待氯化铵全部溶解后，静置3h，再置于离心机中，在1200r/min下离心30min，收集沉淀，得到贻贝蛋白，备用；称取20g壳聚糖加入到三口烧瓶中，并将烧瓶置于水浴锅中，升温至80℃，再加入200mL质量分数为36%醋酸溶液，搅拌20min，待壳聚糖全部溶解后，再加入12g细菌纤维素，搅拌溶胀2h后，得到混合液；按重量份数计，称取40份备用的贻贝蛋白、50份上述混合液、3份硫酸软骨素和5份羧甲基纤维素，加入到烧杯中，搅拌混合10min后，倒入模具中，在-35℃下冷冻干燥26h，即可得到贻贝蛋白复合医用敷料。
本发明的应用方法：将待改良的土地表面的杂草去除后，将土壤改良剂与水按质量比为1：500进行稀释，然后均匀喷洒在土地表面，控制土壤改良剂用量为50kg/亩，待3天后进行翻锄，再隔8天后再次喷洒质量比为1：500加水稀释后的土壤改良剂溶液，土壤改良剂用量不变，喷洒完毕后再次翻锄一次即可。经本发明土壤改良剂改良后的土壤容重降低了18%，总孔隙度提高了20%，N、P、K元素含量均增加了15%，土壤的保水保肥能力显著提高。