一种温敏水凝胶及其制备方法与流程

文档序号:12092117阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种温敏水凝胶,其特征在于,所述温敏水凝胶的原料包含细胞因子活性稳定剂、表皮干细胞条件培养基和胶原蛋白交联液。

2.根据权利要求1所述的温敏水凝胶,其特征在于,所述细胞因子活性稳定剂、表皮干细胞条件培养基和胶原蛋白交联液的体积比为:1:2:1。

3.如权利要求1所述的温敏水凝胶,其特征在于,所述细胞因子活性稳定剂由组分A和组分B组成,所述组分A包含壳聚糖、甘露醇、聚乙二醇、透明质酸和海藻酸钠,所述组分B包含β-甘油磷酸钠和人白蛋白。

4.如权利要求3所述的温敏水凝胶,其特征在于,所述组分A中,壳聚糖的浓度为1.5~2.5%(W/V),甘露醇的浓度为0.1~0.5%(W/V)、聚乙二醇的浓度为0.5~1%(W/V),透明质酸的浓度为0.5~1%(W/V),海藻酸钠的浓度为3~5%(W/V);和/或

所述组分B中,所述人白蛋白的浓度为0.5~1%(W/V),所述β-甘油磷酸钠的浓度为40~60%(W/V)。

5.如权利要求4所述的温敏水凝胶,其特征在于,所述细胞因子活性稳定剂通过在冰浴条件下将所述组分A与组分B按体积比4~7:1的比例充分混合制得。

6.如权利要求4所述的温敏水凝胶,其特征在于,所述组分A的制备方法为:(1)向0.1mol/L的盐酸溶液中加入壳聚糖粉末,得到壳聚糖溶液,其中所述壳聚糖的浓度为1.5~2.5%(W/V);(2)向步骤(1)所得的壳聚糖溶液中加入甘露醇、聚乙二醇、透明质酸和海藻酸钠,其中所述甘露醇的终浓度为0.1~0.5%(W/V)、聚乙二醇的终浓度为0.5~1%(W/V)、透明质酸的终浓度为0.5~1%(W/V)、海藻酸钠的终浓度为3~5%(W/V);(3)使用1M的NaOH水溶液调整pH值为6~6.5,高压蒸汽灭菌,即为所述组分A;和/或

所述组分B的制备方法为:将β-甘油磷酸钠粉末溶于三蒸水中,其中所述β-甘油磷酸钠的终浓度为40~60%(W/V),然后加入人白蛋白,所述人白蛋白的终浓度为0.5~1%(W/V),最后经0.22μm滤网过滤除菌,即为所述组分B。

7.如权利要求1所述的温敏水凝胶,其特征在于,所述表皮干细胞条件培养基的制备方法为:首先分离皮肤样本表皮部分,利用0.25%胰蛋白酶溶液消化表皮,然后加入表皮干细胞培养基培养,则第3~5代的表皮干细胞培养基即为表皮干细胞条件培养基。

8.如权利要求7所述的温敏水凝胶,其特征在于,所述表皮干细胞培养基为:采用K-SFM培养基作为基础培养基,其中加入人表皮生长因子,使其终浓度为5-20ng/ml;加入成纤维细胞生长因子和类胰岛素生长因子-1,使其终浓度均为1.5-5ng/ml;加入牛垂体提取物,使其终浓度为20-40μg/ml;加入CaCl2,使其终浓度为0.01~0.1mM;加入氢化可的松,使其终浓度为0.2~1μg/mL;加入青霉素和链霉素,使其终浓度均为50~150U/ml。

9.如权利要求1所述的温敏水凝胶,其特征在于,所述胶原蛋白交联液包含胶原蛋白和水,其中胶原蛋白的浓度为0.5~2mg/mL。

10.如权利要求1~9中任一项所述的温敏水凝胶的制备方法,其特征在于:所述方法包括以下步骤:将所述细胞因子活性稳定剂、表皮干细胞条件培养基和胶原蛋白交联液在冰浴搅拌条件下混合,即得所述温敏水凝胶。

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