本发明属于中兽药制药领域，尤其涉及一种猪用抗病毒中药组合物。
背景技术：
猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸综合征（俗称蓝耳病）病毒引起的一种急性高致死性疫病，曾称为“神秘猪病”、“新猪病”、“猪流行性流产和呼吸综合症”、“猪繁殖与呼吸综合症”、“蓝耳病”、“猪瘟疫”等，我国将其列为二类传染病。猪蓝耳病接触传染性很高，它有地方流行性特性。猪蓝耳病毒只会感染猪，其它动物不会感染，各种日龄、品种的猪都可以感染此病毒，其中日龄在1月以内的仔猪和妊娠母猪是最易感猪群，严重危害了养猪业的发展。
而猪蓝耳病发生后，抗生素是无治疗作用的，能够防治猪蓝耳病的中兽药也较少，即使有个别品种能够防治猪蓝耳病，但却存在着容易复发和不能根治的弊病，存在严重不足。
技术实现要素：
为解决以上问题，本发明提供一种防治猪蓝耳病的中药组合物，其包括下列各组分：癞蛤蟆草12～36份，土大黄7～21份，野坝子9～27份，苎麻根5～15份。
较佳的，癞蛤蟆草12～18份，土大黄7～10份，野坝子9～12份，苎麻根5～8份。
较佳的，所述中药组合物的剂型为口服液。
这种防治猪蓝耳病的中药组合物制备方法包括如下步骤：
a.称取对应份量的野坝子加蒸馏水浸泡，待浸泡结束后进行蒸馏，并收集蒸馏液，备用。
b.向步骤a中蒸馏后的残渣、残液中加入对应份量的癞蛤蟆草、土大黄、苎麻根三味药材，并加入蒸馏水浸泡，待浸泡结束后煎煮2～3次。随后合并煎液并进行一次浓缩至稠状得到浓缩液i，在浓缩液i中加入乙醇调至醇浓度60%～70%。对浓缩液ⅰ沉淀、过滤后，对滤液进行二次浓缩得到浓缩液ⅱ，在浓缩液ⅱ中加乙醇调至醇浓度75%～80%。对浓缩液ⅱ沉淀、过滤后，对滤液进行三次浓缩得到浓缩液ⅲ，在浓缩液ⅲ中加蒸馏水冷藏沉淀，过滤，对滤液进行四次浓缩得到浓缩液ⅳ。
c.将步骤a中的野坝子蒸馏液与步骤b中得到的浓缩液ⅳ合并，制剂。
较佳的，步骤a中，加入的蒸馏水为野坝子药材总重的3～5倍，且浸泡时间为24～36小时。
较佳的，步骤a中先对浸泡结束的野坝子进行一次蒸馏，收集蒸馏液。随后再将蒸馏液重蒸馏，收集重蒸液，直至重蒸液的重量为野坝子药材总重的1/2，将重蒸液收集备用于步骤c中。
较佳的，步骤b中所使用的乙醇浓度为95%。
较佳的，步骤b中每次加入的蒸馏水重量为癞蛤蟆草、土大黄、苎麻根、野坝子四味药材总重量的4～5倍，且浸泡时间为24～36小时。
较佳的，步骤c为：将步骤a中的野坝子蒸馏液与步骤b中得到的浓缩液ⅳ合并，得浓度为每ml含1～2g生药量的药液，调ph7.0，制成口服液。
本发明提供的这种防治猪蓝耳病的中药组合物极其制备方法，其有益效果如下：
（1）本发明使用四味中药，其中癞蛤蟆草具有清热、解毒、凉血、利尿的功效，可用于咽喉肿痛、支气管炎、肾炎水肿、痈肿，外治乳腺炎、痔疮肿痛、出血等。土大黄具有清热解毒、止血、祛瘀、通便、杀虫功效。野坝子具有清热解毒、消食化积、止血止痛功效，用于伤风感冒，消化不良，腹痛腹胀，糖尿病，高血压，痢疾，鼻衄，咳血，风湿关节痛，外伤出血，烂疮，蛇咬伤等。苎麻根为荨麻科植物苎麻的根，具有清热、止血、解毒、散瘀，对丹毒，痈肿，跌打损伤，蛇虫咬伤等功效。将四味药物配伍，通过多次实验研究出最适搭配份量，及最适制备方法，达到标本兼治的目的，其效果好，副作用小，使用安全方便。
（2）制备剂型为口服液，弥补散剂的不足。中药的剂型中多为散剂，而猪发病后食欲逐渐废绝，散剂无法使用。饮欲可以延续很长时间，口服液可以口服或饮水治疗。而且，可依据所需在口服液中加入矫味剂、抑菌剂等附加剂，具有服用剂量小、味道好、吸收快、奏效迅速、质量稳定、便于携带、易于保存等优点。
（3）癞蛤蟆草、土大黄、野坝子、苎麻根，四味药材都是常见的中草药，其采购价格低廉，且其制备工艺步骤简单，无需要使用高精度的制备仪器，确保其制备成本低廉，可实现批量化生产价格低廉的治疗猪蓝耳病的口服剂。
具体实施方式
实施例一
组方：癞蛤蟆草18g，土大黄10g，野坝子12g，苎麻根8g。
具体制备过程如下：
a、称取对应份量的野坝子，加入野坝子药材总重量3倍的蒸馏水浸泡24小时，使药材充分膨胀后蒸馏，收集蒸馏液，直至得到药材总重2倍的蒸馏液，再将蒸馏液重蒸馏1次，直至收集得到野坝子药材总重1/2重蒸液，将重蒸液装瓶灭菌备用。
b、向步骤a中蒸馏后的残渣、残液加入对应份量的癞蛤蟆草、土大黄、苎麻根三味中药，并添加野坝子、癞蛤蟆草、土大黄、苎麻根四味药材总重量4倍的蒸馏水，浸泡24小时后进行第一煎煮得到煎液i；随后再次加入野坝子、癞蛤蟆草、土大黄、苎麻根四味药材总重量4倍的蒸馏水进行二次煎煮得到煎液ⅱ，其中二次煎煮前无需浸泡，且每次煎煮时需在煮沸后维持0.5小时以上。随后合并煎液i、煎液ⅱ并进行一次加热浓缩至稠状，得到浓缩液i，在浓缩液i中加重量百分比浓度为95%的乙醇调至醇浓度到60%，充分搅拌混匀，沉淀48小时以上，再进行过滤，对滤液进行二次加热浓缩挥发乙醇至无醇味，并得到浓缩液ⅱ，在浓缩液ⅱ中加95%乙醇调至醇浓度75%，搅匀沉淀48小时，过滤，滤液进行三次加热浓缩挥发乙醇至无醇味，得到浓缩液ⅲ，在浓缩液ⅲ中加4倍量蒸馏水冷藏沉淀48小时，过滤，对滤液进行四次浓缩得到浓缩液ⅳ；
c、将步骤a中野坝子蒸馏液与步骤b得到的浓缩液ⅳ合并，得浓度为每ml含生药1.5g的药液，调ph7.0，制成口服液，分装，灭菌即得。
实施例二
组方：癞蛤蟆草12g，土大黄7g，野坝子9g，苎麻根5g。
具体制备过程如下：
a、称取对应份量的野坝子，加入野坝子药材加总重量3倍的蒸馏水浸泡24小时，使药材充分膨胀后蒸馏，收集蒸馏液，直至得到药材总重2倍的蒸馏液，再将蒸馏液重蒸馏1次，直至收集得到此种药材总重1/2重蒸液，将重蒸液装瓶灭菌备用；
b、向步骤a中蒸馏后的残渣、残液加癞蛤蟆草、土大黄、苎麻根三味中药，并添加野坝子、癞蛤蟆草、土大黄、苎麻根四味药材总重量4倍的蒸馏水，浸泡24小时后进行第一煎煮得到煎液i；随后再次加入野坝子、癞蛤蟆草、土大黄、苎麻根四味药材总重量4倍的蒸馏水进行二次煎煮得到煎液ⅱ，其中二次煎煮前无需浸泡，且每次煎煮时需在煮沸后维持0.5小时以上。随后合并煎液i、煎液ⅱ并进行一次加热浓缩至稠状，得到浓缩液i，在浓缩液i中加重量百分比浓度为95%的乙醇调至醇浓度到60%，充分搅拌混匀，沉淀48小时以上，再进行过滤，对滤液进行二次加热浓缩挥发乙醇至无醇味，并得到浓缩液ⅱ，在浓缩液ⅱ中加95%乙醇调至醇浓度75%，搅匀沉淀48小时，过滤，对滤液进行三次加热浓缩挥发乙醇至无醇味，得到浓缩液ⅲ，在浓缩液ⅲ中加4倍量蒸馏水冷藏沉淀48小时，过滤，对滤液进行四次浓缩得到浓缩液ⅳ。
c、将步骤a中野坝子蒸馏液与步骤b得到的浓缩液ⅳ合并，得浓度为每ml含生药1g的药液，调ph7.0，制成口服液，分装，灭菌即得。
实施例三
组方：癞蛤蟆草24g，土大黄14g，野坝子18g，苎麻根10g
具体制备过程如下：
a、称取对应份量的野坝子，加入野坝子药材加总重量4倍的蒸馏水浸泡36小时，使药材充分膨胀后蒸馏，收集蒸馏液，直至得到药材总重2倍的蒸馏液，再将蒸馏液重蒸馏1次，直至收集得到此种药材总重1/2重蒸液，将重蒸液装瓶灭菌备用。
b、向步骤a中蒸馏后的残渣、残液加癞蛤蟆草、土大黄、苎麻根三味中药，并添加野坝子、癞蛤蟆草、土大黄、苎麻根四味药材总重量5倍的蒸馏水，浸泡24小时后进行第一煎煮得到煎液i；随后再次加入野坝子、癞蛤蟆草、土大黄、苎麻根四味药材总重量5倍的蒸馏水进行二次煎煮得到煎液ⅱ，其中二次煎煮前无需浸泡，且每次煎煮时需在煮沸后维持0.5小时以上。随后合并煎液i、煎液ⅱ并进行一次加热浓缩至稠状，得到浓缩液i，在浓缩液i中加重量百分比浓度为95%的乙醇调至醇浓度到65%，充分搅拌混匀，沉淀48小时，再进行过滤，对滤液进行二次加热浓缩，挥发乙醇至无醇味，并得到浓缩液ⅱ，在浓缩液ⅱ中加95%乙醇调至醇浓度80%，搅匀沉淀48小时，过滤，再对滤液进行三次加热浓缩，挥发乙醇至无醇味，得到浓缩液ⅲ，在浓缩液ⅲ中加2倍量蒸馏水冷藏沉淀24小时，过滤，对滤液进行四次浓缩得到浓缩液ⅳ。
c、将步骤a中野坝子蒸馏液与步骤b得到的浓缩液ⅳ合并，得浓度为每ml含生药2g的药液，调ph7.0，制成口服液，分装，灭菌即得。
实施例四
组方：癞蛤蟆草36g，土大黄21g，野坝子27g，苎麻根15g。
具体制备过程如下：
a、称取对应份量的野坝子，加入野坝子药材加总重量3倍的蒸馏水浸泡36小时，使药材充分膨胀后蒸馏，收集蒸馏液，直至得到药材总重2倍的蒸馏液，再将蒸馏液重蒸馏1次，直至收集得到此种药材总重1/2重蒸液，将重蒸液装瓶灭菌备用。
b、向步骤a中蒸馏后的残渣、残液加癞蛤蟆草、土大黄、苎麻根三味中药，并添加野坝子、癞蛤蟆草、土大黄、苎麻根四味药材总重量5倍的蒸馏水，浸泡24小时后进行第一煎煮得到煎液i；随后再次加入野坝子、癞蛤蟆草、土大黄、苎麻根四味药材总重量5倍的蒸馏水进行二次煎煮得到煎液ⅱ，其中二次煎煮前无需浸泡，且每次煎煮时需在煮沸后维持1小时。随后合并煎液i、煎液ⅱ并进行一次加热浓缩至稠状，得到浓缩液i，在浓缩液i中加重量百分比浓度为95%的乙醇调至醇浓度到70%，充分搅拌混匀，沉淀48小时，再进行过滤，对滤液进行二次加热浓缩，挥发乙醇至无醇味，并得到浓缩液ⅱ，在浓缩液ⅱ中加95%乙醇调至醇浓度80%，搅匀沉淀48小时，过滤，对滤液进行三次加热浓缩，挥发乙醇至无醇味，得到浓缩液ⅲ，在浓缩液ⅲ中加3倍量蒸馏水冷藏沉淀24小时，过滤，对滤液进行四次浓缩得到浓缩液ⅳ.
c、将步骤a中野坝子蒸馏液与步骤b得到的浓缩液ⅳ合并，得浓度为每ml含生药1.5g的药液，调ph7.0，制成口服液，分装，灭菌即得。
下面就本发明的效果进一步说明本发明的疗效。
一、本发明体外抗蓝耳病病毒试验研究
1、药品
（1）本发明样品1按照实施例1方法制备得到，用生理盐水分别配制成1.5g/ml，1g/ml，0.5g/ml的浓度。
（2）本发明样品2按照实施例3方法制备得到，用生理盐水分别配制成2g/ml，1.5g/ml，1g/ml的浓度。
（3）西药对照药品利巴韦林，用生理盐水配成2g/ml的浓度。
2、猪蓝耳病毒株由江苏农牧科技职业学院预防兽医教研室提供，按reed-muench法测得病毒半数组织感染量（tcid50）为10-7.5，按终质量浓度100×tcid50用量使用。
3、marc-145细胞由江苏农牧科技职业学院预防兽医教研室提供，常规传代培养。
（1）含药血清制备
将sd大鼠按体重随机分为正常对照组、发明样品1和2的高剂量组（8g/ml）、中剂量组（4g/ml）、低剂量组（2g/ml）、利巴韦林对照组（2g/ml），每组6只，雌雄分笼喂养。取发明样品1和2的三种剂量组、利巴韦林对照组的药品，分别灌胃给药，对照组以生理盐水灌胃，每天2次，每次1ml连续给药共3天，末次给药后1h腹主动脉无菌采血，血样置温于无菌离心管中，静置2h以上，待血块收缩良好后，2500r/min10min无菌分离血清，经56℃、30min灭活处理，-20℃冰箱冻存备用。
（2）正常对照组血清毒性实验
取已长满单层marc-145细胞的96孔培养板，弃生长液，用pbs洗板2次，将正常对照组血清以不含胎牛血清的dmem细胞维持液做1﹕1—1﹕8倍比稀释，分别加至96孔细胞板上，每孔100ul，每个稀释度做4个重复，同时设细胞对照孔（不加血清，仅加细胞维持液），置37℃、5%co2恒温培养箱中培养，每日观察细胞生长情况，联系观察72h，用mtt法测吸光度值（od值），与细胞对照孔对比，以胞不出现肿胀、变形、脱落，mtt法试验细胞存活95%以上
的最小稀释度为血清应用的无毒浓度，本实验血清应用的无毒浓度为1﹕4。
（3）含药血清抗蓝耳病病毒作用观察
分三种加药方式观察含药血清抗蓝耳病病毒作用：
第一种方式，先加入蓝耳病病毒，后加含药血清，目的是观察含药血清对蓝耳病病毒的抑制作用。取已长满单层marc-145细胞的96孔培养板，每孔接种100×tcid50蓝耳病病毒液100ul，置37℃、5%co2恒温培养箱中培养2h吸附感染细胞，然后加入已制备好的终浓度为1﹕4的正常对照组、高、中、低剂量组发明样品1、发明样品2和利巴韦林对照组含药血清，每孔100ul，每份血清平行测定孔4孔，同时设正常细胞和病毒对照孔，继续培养，每日观察细胞病变效应（pce）进展情况，当病毒对照孔出现+++以上病变时，弃培养液上清,每孔加入mtt（终浓度0.5mg/ml）50ul,继续培养2h，弃mtt上清,每孔加入dmso100ul，震荡作用10min，酶标仪492nm测吸光度值，计算病毒抑制率。病毒抑制率%=（各实验组平均od值一病毒对照孔平均od值）/(正常细胞对照孔平均od值一病毒对照孔平均od值)×100%。
第二种方式，先加入含药血清，后加入蓝耳病病毒，目的是观察含药血清对蓝耳病病毒吸附细胞的影响。取已制备好的终浓度为1﹕4的正常对照组、高、中、低剂量组发明样品1、发明样品2和利巴韦林对照组含药血清，加入已长满单层marc-145细胞的96孔培养板中，每孔加入100ul，每份血清平行测定孔4孔，同时设正常细胞和病毒对照孔，继续培养2h，然后每孔接种100×tcid50蓝耳病病毒液100ul，同第一种方式培养、检查及数据分析。
第三种方式，含药血清与蓝耳病病毒混合后加入细胞培养板，目的是观察含药血清对蓝耳病病毒的直接杀灭作用。将已制备好的终浓度为1﹕4的正常对照组、高、中、低剂量组发明样品1、发明样品2和利巴韦林对照组含药血清，分别与蓝耳病病毒等量混合，恒温培养箱中作用2h，将混合液加入已长满单层marc-145细胞的96孔培养板中，同时设正常细胞和病毒对照孔，同第一种方式培养、检查及数据分析。
5、试验方法数据处理，数据以x±ｓ表示（均值±标准差），检测结果采用spss统计软件进行组间单因素方差分析。x±ｓ
6、试验结果
发明样品1含药血清在不同方式对蓝耳病病毒作用的影响，结果见表1-3。
表1发明样品1含药血清对蓝耳病病毒增殖的抑制作用
注：与正常细胞对照孔相比，*p<0.05；与病毒对照孔阳性对照组相比，△p<0.05，与正常对照血清相比，＃p<0.05，同列数据无相同字母者，表示差异显著p<0.05，下表
表2发明样品1含药血清对蓝耳病病毒吸附细胞影响
表3发明样品1含药血清对蓝耳病病毒的之间杀灭作用
从表1-3中可以看出，发明样品1含药血清与病毒同时作用（第3种给药方式）及预防给药方式（第2种给药方式）时病毒抑制率明显高于治疗给药方式（第1中给药方式），而以同时作用的抑制率最高，各含药血清组抑制作用高于正常血清组，高剂量组抑制作用强于低、中剂量组及利巴韦林对照组，结果表明，发明样品1具有显著的体外抗蓝耳病病毒作用。
发明样品2含药血清在不同方式对蓝耳病病毒作用的影响，结果见表4-6。
表4发明样品2含药血清对蓝耳病病毒增殖的抑制作用
表5发明样品2含药血清对蓝耳病病毒吸附细胞影响
表6发明样品2含药血清对蓝耳病病毒的之间杀灭作用
从表4-6中可以看出，发明样品2与发明样品1一样，其含药血清与病毒同时作用（第3种给药方式）及预防给药方式（第2种给药方式）时病毒抑制率明显高于治疗给药方式（第1中给药方式），而以同时作用的抑制率最高，各含药血清组抑制作用高于正常血清组，高剂量组抑制作用强于低、中剂量组及利巴韦林对照组，结果表明，发明样品2具有显著的体外抗蓝耳病病毒作用，其抗蓝耳病病毒作用要优于发明样品1。
二、本发明对实验性猪蓝耳病的治疗试验
1、试验动物及分组本试验用35日断奶仔猪24头，随机分为8组，每组3头，即本发明样品1(按实施例2制备，每毫升含1g生药浓度)预防组与治疗组，本发明样品2(按实施例4制备，每毫升含1.5g生药浓度)预防组与治疗组，利巴韦林预防组与治疗组，感染对照组，空白对照组。
2、猪蓝耳病毒株由江苏农牧科技职业学院预防兽医教研室提供，按reed-muench法计算为ld50为10-5.75，在做攻毒试验前用生理盐水配制成1000ld50/0.2ml，作为攻毒剂量。
3、试验方法
（1）操作空白对照组的猪不用药，不接种蓝耳病病毒液，只接种生理盐水0.2ml，其余7组的猪在同一时间里每头猪鼻腔接种蓝耳病病毒液0.2ml。
（2）用药方法与疗效本发明样品1预防组在接种蓝耳病病毒液的同时，开始用本发明样品1口服，每只猪每次5ml，每天用药2次，连用4d。本发明样品1治疗组在接种蓝耳病病毒液4d后（出现病状）用药，每头猪每次5ml，每天用药2次，连用4d。本发明样品2预防组在接种蓝耳病病毒液的同时，用本发明样品2口服，每只鸡每次5ml，每天用药2次，连用4d；本发明样品2治疗组在接种蓝耳病病毒液4d后（出现病状）用药，每头猪每次5ml，每天用药2次，连用4d。利巴韦林预防组在接种蓝耳病病毒液的同时，用2g/ml的利巴韦林肌注，每头猪2ml，每日2次，连用4d。利巴韦林预治疗组在接种蓝耳病病毒液4d后（出现症状），用2g/ml的利巴韦林药物治疗，每头猪每头2ml肌注，每天2次，连用4d。感染对照组的猪只接种蓝耳病病毒液，不用任何药物，结果见表7。
表7猪蓝耳病预防与治疗结果
三、本发明对猪蓝耳病治疗的临床观察
猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸综合征（俗称蓝耳病）病毒引起的一种急性高致死性疫病，母猪感染后主要表现为流产、死胎等繁殖障碍症状，仔猪与育肥猪主要表现为呼吸困难，致死率较高，可造成很大经济损失，严重危害了养猪业的发展。用本发明样品1（按实施例2制备，每毫升含1g生药浓度）和本发明样品2（按实施例4制备，每毫升含1.5g生药浓度），每头猪每次口服5ml，每天用药2次，连用4d。在我国某省a市、b市、c市、d市对发病猪进行药物治疗试验，结果见表8、表9。
表8本发明样品1对猪蓝耳病临床疗效结果
表9本发明样品2对猪蓝耳病临床疗效结果
由表8和表9可见，本发明所制作的药物治疗猪蓝耳病1000余例，均取得较好疗效，一般治疗2d后停止死亡，4～5d后可治愈，治愈后一般不复发，表明本发明治疗猪蓝耳病具有较高的疗效。
以上仅为本发明较佳的实施例，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明说明书内容所作的等效变化与装饰，皆应属于本发明覆盖的范围内。