一种药食同源的组合物在制备改善睡眠障碍或改善记忆功能减退药物或保健食品中的应用的制作方法

文档序号:13911509阅读:340来源:国知局

本发明涉及一种药食同源的组合物在制备改善睡眠障碍或改善记忆功能减退或治疗老年痴呆药物或保健食品中的应用,属于中医药制备技术领域。



背景技术:

代代花又名酸橙花、回青橙花、玳玳花、枳壳花、橙花,其来源主要为芸香科柑橘属citrusaurantiuml.及其变种植物的新鲜花或芸香科柑橘属所有植物的新鲜花,更具体为新鲜代代花的花蕾的阴干、晒干、机器烘干的干燥花蕾药材,更具体优选是新鲜代代花的花蕾的冷冻干燥花蕾药材。代代花性平、味辛甘、微苦,入脾、肝经,可药食两用。代代花含多糖、氨基酸、微量元素、果胶、腺苷、黄酮类、单萜类(环烯醚萜类)、二倍半萜类和三萜类等成分类型,特别是微量元素、辛弗林、腺苷、水苏碱、缬氨酸、酪氨酸、异亮氨酸、n一甲基酪胺、绿原酸、法筚枝苷、析圣草枸橼苷、柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷、桔皮素、蜜桔黄素、柠檬苦素等为其花的营养价值成分或活性成分类型。代代花具有疏肝和胃,理气解郁功效。主治胸中痞闷、脘腹胀痛、呕吐少食。清血,促进血液循环,舒肝、和胃、理气,适合脾胃失调而肥胖的女性。有破气行痰,散积消痞之功,治咳嗽气逆胃腕作痛等功效。代代花是一种美容茶。代代花略微有点苦,但香气浓郁,闻之令人忘倦。可镇定心情,解除紧张不安,此外,也有助于缓解压力所导致的腹泻,能清血、促进循环,还有减脂瘦身的效果。现代药理研究具有镇定心情、解除紧张不安功能。本发明前期证实代代花原料组分或新鲜代代花冷冻干燥花蕾的粉末具有改善记忆功能减退的功能疗效或改善睡眠障碍的功能疗效或治疗老年痴呆的功能疗效。特别是新鲜代代花冷冻干燥花蕾保留了所有的营养价值成分或活性成分类型,具有较大的市场前景与应用价值。

综上所述,为了发挥代代花的最佳疗效,本发明制备了包含药食同源的代代花、酸枣仁、益智仁和栀子的中药组合物,上述药食同源的组合物发挥复方中药的整体调节优势,代代花具有疏肝和胃,理气解郁为君药。益智仁能温脾止泻摄涎,暖肾缩尿固精,助代代花和胃止呕,以吐虚烦,故以为臣药。酸枣仁能宁心安神、养肝、敛汗,助代代花舒肝理气,解郁宁心安神,故以为佐药。如有患者为余热郁于胸膈,身热懊憹,虚烦不得眠,胸脘痞闷,上述药食同源的组合物应加栀子果实,栀子果实泄热除烦,色赤入心,配合酸枣仁和益智仁使心肾相交而达水火相济,而除烦宁心安神,故以为使药。如果有患者为外感热病,邪郁上焦,心胸烦闷不眠而形成热扰心神者,上述药食同源的组合物应加栀子花,栀子花泻火除烦,配合酸枣仁和益智仁使心肾相交而达水火相济,而除烦宁心安神,故以为使药。上述药食同源的组合物在制备改善睡眠障碍或改善记忆功能减退或治疗老年痴呆药物或保健食品中的应用,上述药食同源的组合物主要具有疏肝和胃、理气解郁、暖肾缩尿固精、宁心除烦安神等传统的功能疗效,上述药食同源的组合物还具有辅助改善记忆功能减退、改善睡眠功能、缓解疲劳功能、助消化功能、增强免疫力功能的现代药理疗效。



技术实现要素:

本发明目的是提供了一种药食同源的组合物在制备改善睡眠障碍或改善记忆功能减退或治疗老年痴呆药物或保健食品中的应用。

本发明公开了一种药食同源的组合物在制备改善睡眠障碍或改善记忆功能减退或治疗老年痴呆药物或保健食品中的应用。本发明所制备的组合物主要包含药食同源的代代花、酸枣仁、益智仁、栀子的中药组成,上述药食同源的组合物发挥复方中药的整体调节优势,代代花具有疏肝和胃,理气解郁为君药。益智仁能温脾止泻摄涎,暖肾缩尿固精,助代代花和胃止呕,以吐虚烦,故以为臣药。酸枣仁能宁心安神、养肝、敛汗,助代代花舒肝理气,解郁宁心安神,故以为佐药。如有患者为余热郁于胸膈,身热懊憹,虚烦不得眠,胸脘痞闷,上述药食同源的组合物应加栀子果实,栀子果实泄热除烦,色赤入心,配合酸枣仁和益智仁使心肾相交而达水火相济,而除烦宁心安神,故以为使药。如果有患者为外感热病,邪郁上焦,心胸烦闷不眠而形成热扰心神者,上述药食同源的组合物应加栀子花,栀子花泻心火除烦,配合酸枣仁和益智仁使心肾相交而达水火相济,而除烦宁心安神,故以为使药。上述药食同源的组合物在制备改善睡眠障碍或改善记忆功能减退或治疗老年痴呆药物或保健食品中的应用,上述药食同源的组合物主要具有疏肝和胃、理气解郁、暖肾缩尿固精、宁心除烦安神等传统的功能疗效,上述药食同源的组合物还具有辅助改善记忆功能减退、改善睡眠功能、缓解疲劳功能、助消化功能、增强免疫力功能的现代药理疗效。

本发明采用了下述技术方案。

一种药食同源的组合物在制备改善睡眠障碍或改善记忆功能减退或治疗老年痴呆药物或保健食品中的应用,其特征在于药食同源的组合物由下列质量百分比的原料制成:代代花20-45、酸枣仁25-40、益智仁30-40,并加入适量药用填充辅料。

一种药食同源的组合物在制备改善睡眠障碍或改善记忆功能减退或治疗老年痴呆药物或保健食品中的应用,其特征在于药食同源的组合物由下列质量百分比的原料制成:代代花20-25、酸枣仁25-30、益智仁25-30、栀子(栀子果实或栀子花)20-25,并加入适量药用填充辅料。

上述药食同源的组合物主要具有疏肝和胃、理气解郁、暖肾缩尿固精、宁心除烦安神的传统功能疗效,上述药食同源的组合物还具有辅助改善记忆功能减退、改善睡眠功能、缓解疲劳功能、助消化功能、增强免疫力功能的现代药理疗效。

上述药食同源的组合物中代代花,代代花又名酸橙花、回青橙花、玳玳花、枳壳花、橙花,其来源主要为芸香科柑橘属citrusaurantiuml.及其变种植物的新鲜花或芸香科柑橘属所有植物的新鲜花,具体为新鲜代代花的花蕾的阴干、晒干、机器烘干的干燥花蕾药材,更具体的优选是新鲜代代花的花蕾的冷冻干燥花蕾药材。

上述药食同源的组合物中栀子,其特征在于栀子来源主要为茜草科栀子属植物栀子gardeniajasminoidesellis.的果实或花,也可用茜草科栀子属所有已知植物的花,更具体的为栀子花的花蕾或花盛期的花的的阴干、晒干、机器烘干的干燥花蕾或花药材,更具体的优选是新鲜栀子花的花蕾的冷冻干燥花蕾药材。

上述一种药食同源的组合物在制备改善睡眠障碍或改善记忆功能减退或治疗老年痴呆药物或保健食品中的应用,其特征在于所述药食同源的组合物的药物或保健食品的制剂剂型为口服液、颗粒剂、胶囊剂、片剂、泡腾片、糖浆剂、丸剂、膏滋剂、软胶囊、软膏剂、乳剂、散剂、缓释剂、控释剂、靶向制剂、粉针剂、水针剂、注射剂、雾化剂、微乳剂、凝胶剂、纳米制剂。

上述药食同源的组合物的药物或保健食品的胶囊剂为硬胶囊、软胶囊、明胶胶囊、植物胶囊、超安宝胶囊、充液胶囊、天然胶囊、控释胶囊、缓释胶囊、肠溶胶囊的胶囊制剂。

上述药食同源的组合物的药物或保健食品的片剂为普通压制片、包衣片、糖衣片、薄膜衣片、肠溶衣片、泡腾片、咀嚼片、多层片、分散片、舌下片、口含片、植入片、溶液片、长效片、微囊片、速释片、缓释片和控释片的片剂制剂。

代代花的花蕾的冷冻干燥花蕾药材的制备方法如下:采用冷冻干燥工艺将采摘的新鲜代代花的花蕾置于冰柜温度于零下5℃~零下40℃硬化结冰后,置于冷冻真空干燥机内温度于零下5℃~零下50℃,真空度为1~999pa的条件下,冷冻真空干燥6~48小时,其水分含量小于5%,得新鲜代代花的花蕾的冷冻干燥的花蕾药材。

栀子花的花蕾的冷冻干燥花蕾药材的制备方法如下:采用冷冻干燥工艺将采摘的新鲜栀子花的花蕾置于冰柜温度于零下5℃~零下40℃硬化结冰后,置于冷冻真空干燥机内温度于零下5℃~零下50℃,真空度为1~999pa的条件下,冷冻真空干燥6~48小时,其水分含量小于5%,得新鲜栀子花的花蕾的冷冻干燥的花蕾药材。

本发明的优点是:提供了一种药食同源组合物的药物或保健食品的制备方法,所制备的药食同源的组合物主要具有疏肝和胃、理气解郁、暖肾缩尿固精、宁心除烦安神的传统功能疗效,所制备的药食同源的组合物还具有辅助改善记忆功能减退、改善睡眠功能、缓解疲劳功能、助消化功能、增强免疫力功能的现代药理疗效。

提供了代代花和栀子花的新的制备工艺及其具体新用途和新功效,特别是代代花的冷冻干燥花蕾药材和栀子花的冷冻干燥花蕾药材,其含有未受外界其他因素影响的花蜜,其还保留了其花所有的营养价值成分或活性成分类型。

发现了栀子花的新的药用部位,栀子花的花蕾。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步描述:

实施例1

新鲜代代花的冷冻干燥花蕾的制备方法如下:采用冷冻干燥工艺将采摘清洗后的新鲜代代花的花蕾2000克置于冰柜温度于零下30℃硬化结冰后,置于冷冻真空干燥机内温度于零下45℃,真空度为8pa的条件下,冷冻真空干燥12小时,其水分含量小于5%,得新鲜代代花冷冻干燥的花蕾。

实施例2

将实例1中得到的新鲜代代花冷冻干燥的花蕾应用粉碎机打粉,过药典的6号筛,得100目新鲜代代花冷冻干燥花蕾的粉末。

实施例3

新鲜栀子花的冷冻干燥花蕾的制备方法如下:采用冷冻干燥工艺将采摘清洗后的新鲜栀子花的花蕾2000克置于冰柜温度于零下35℃硬化结冰后,置于冷冻真空干燥机内温度于零下45℃,真空度为6pa的条件下,冷冻真空干燥18小时,其水分含量小于5%,得新鲜栀子花冷冻干燥的花蕾。

实施例4

将实例3中得到的新鲜栀子花冷冻干燥的花蕾应用粉碎机打粉,过药典的6号筛,得100目新鲜栀子花冷冻干燥花蕾的粉末。

实施例5

将药店购买的药食同源的益智仁应用粉碎机打粉,过药典的6号筛,得100目益智仁的粉末。

实施例6

将药店购买的药食同源的酸枣仁应用粉碎机打粉,过药典的6号筛,得100目酸枣仁的粉末。

实施例7

将药店购买的药食同源的栀子果实应用粉碎机打粉,过药典的6号筛,得100目栀子果实的粉末。

实施例8

本发明从动物因素诱发性与生理性脑衰老的记忆功能减退出发,将睡眠障碍(sleepdisorder,sd,其使脑部气络异常或紊乱内生毒邪至“毒损脑络”)和aβ蛋白等多因素引起的生理性脑衰老的记忆功能减退相结合,利用睡眠剥夺致睡眠障碍及鼠脑室一次性注射aβ淀粉样蛋白制作睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sleepdisorder-factors'physiologicalbrainagingmemorysubside,sdpbams,)模型,简称sdad模型。应用睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sdad)模型大鼠对代代花制备的原料组分为新鲜代代花冷冻干燥花蕾的粉末及其30%乙醇水洗脱部位、70%乙醇水洗脱部位和95%乙醇水总提取物进行药理活性筛选,通过行为学(morris水迷宫)测定和生理生化相应指标的测定与检测,实验证实新鲜代代花冷冻干燥花蕾的粉末及其30%乙醇水洗脱部位、70%乙醇水洗脱部位和95%乙醇水总提取物均能使睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sdad)模型大鼠缩短潜伏期、增加过台次数,延长在第四象限逗留时间。同时,新鲜代代花冷冻干燥花蕾的粉末及其30%乙醇水洗脱部位能使睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sdad)模型大鼠自主活动增加,从而起到清心除烦,延缓脑衰老,改善睡眠,抗抑郁等多种功能。其对由睡眠障碍和aβ纤丝形成聚集等多因素引起的睡眠障碍生理性脑衰老的记忆功能减退(sdad)具有辅助改善记忆功能,进一步证实代代花制备的原料组分具有改善记忆功能减退的功能疗效或改善睡眠障碍的功能疗效或治疗阿尔茨海默病的功能疗效或治疗老年痴呆的功能疗效。特别是新鲜代代花冷冻干燥花蕾保留了所有的营养价值成分或活性成分类型,药理疗效十分显著,具有较大的市场前景与应用价值。

1材料

1.1动物spf级健康sd雄性大鼠,体质量300-350g,由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供,许可证号:scxk(湘)2009-0004。饲养条件:温度20-22℃,喂以大鼠标准饲料,自由饮水。

1.2代代花的原料组分与试剂由实例1和实例2得到的代代花原料组分为100目新鲜代代花冷冻干燥花蕾的粉末及其95%乙醇水总提取物和95%乙醇水总体物上大孔吸附树脂的30%乙醇水洗脱部位以及70%乙醇水洗脱部位。aβ25-35(sigma公司,批号095m4775v)。

1.3仪器zs-b型脑立体定位仪、morris水迷宫视频分析系统(北京众实迪创科技发展有限责任公司),forma-86cult超低温冰箱(美国赛默飞),allegra64r高速冷冻离心机(美国贝克曼库尔特),uv-1800型紫外-可见分光光度计(日本岛津公司)。

2方法

2.1动物分组和动物模型的建立将110只健康sd雄性大鼠随机分为空白组、睡眠障碍生理性脑衰老记忆力减退(sleepdisorder-factors'physiologicalbrainagingmemorysubside,sdad)模型组、盐酸多奈哌齐组、代代花95%乙醇水总提取物中剂量组、代代花95%乙醇水总提取物高剂量组、代代花30%乙醇水洗脱部位中剂量组、代代花30%乙醇水洗脱部位高剂量组、代代花70%乙醇水洗脱部位中剂量组、代代花70%乙醇水洗脱部位高剂量组、新鲜代代花冷冻干燥花蕾的粉末中剂量组、新鲜代代花冷冻干燥花蕾的粉末高剂量组,共11组,每组10只大鼠。

睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sdad)模型的建立:各实验组先利用改良多平台水环境法进行睡眠剥夺3周得睡眠障碍易发生理性脑衰老记忆功能减退大鼠。之后,取未死亡状态良好的睡眠障碍易发生理性脑衰老记忆功能减退病变大鼠再脑内注射凝聚态aβ25-35得睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sdad)整体动物模型。

空白组不予处理;模型组与各给药组分别按上述造模方法予以处理。模型组于脑内注射手术前14天开始灌胃2%吐温-80水溶液至手术后7天截止给药,共21天,每天1次。各给药组于睡眠剥夺第2周开始即手术前14天开始连续灌胃给药至手术后7天截止给药,共给药21天,每天1次。

2.2morris水迷宫实验预先在水池里注入清水使水面高出平台1-2cm,水温控制在24士2℃左右。水池内壁涂有黑漆,每次测试前须向水池内加入适量黑色墨水,水池共分为4个象限。将平台放在第四象限中间,在其他三个象限任选一点面向水池池壁将大鼠放入水中,试验历时5天,每天上午每个象限各测试一次,每次测试1min。若大鼠在1min之内尚未找到平台,则将大鼠拿到平台上并使它在上面站15s,若大鼠在lmin之内找到平台,也让其在平台上站15s,方结束一次训练,如此训练4天。在第5天,将平台移走,每只大鼠游lmin,记录每只大鼠第一次经过原平台的时间(潜伏期),每只大鼠在lmin内经过平台的次数、游过的总距离以及在原平台所在象限及其它三个象限内逗留的时间,计算出在第四象限游泳的时间(t4)占整个游泳时间(t总)的百分比。

2.3自主活动测试:将小动物自主活动检测装置与mp-100生理实验信号采集分析系统相连,随机在每个装置内放1只大鼠,每次检测前让动物在装置内适应5min,检测室内保持安静,防止对大鼠的活动产生影响。记录各组大鼠20min内的自主活动次数和自主活动时间,并称量大鼠的体重变化。

2.4统计方法采用sas软件分析,实验数据用±s表示,单因素方差分析实验的数据。p<0.05为有统计学意义。

3结果

3.1代代花原料组分对睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sdad)模型大鼠morris水迷宫实验的影响

与空白组比较,模型组大鼠潜伏期延长、过台次数减少,在第四象限逗留时间短,差异显著(p<0.01),模型组大鼠出现空间探索能力障碍、记忆功能减退、活动减少等痴呆症状;与模型组比较,给药盐酸多奈哌齐组、代代花原料组分各组能缩短潜伏期、增加过台次数,在第四象限逗留时间和距离延长(p<0.05或p<0.01),说明各给药组治疗有效,提示代代花原料组分(尤其是新鲜代代花冷冻干燥花蕾的粉末组、代代花30%乙醇水洗脱部位组、代代花70%乙醇水洗脱部位组)效果明显,上述各给药组具有改善模型大鼠空间探索能力,上述各给药组具有改善模型大鼠的痴呆症状表现,上述各给药组具有改善模型大鼠的记忆功能减退的功能疗效。结果见表1。

表1代代花各部位对sdad模型大鼠空间探索试验结果(±sn=8)

与空白组比较:﹟﹟p<0.01;与sdad模型组比较:*p<0.05,**p<0.01。

3.2代代花原料组分对睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sdad)模型大鼠自主活动行为学试验结果

与空白组比较,模型组大鼠自主活动次数减少,体重增加缓慢,差异显著(p<0.01),模型组大鼠出现睡眠障碍、心神不宁、过度嗜睡等痴呆症状表现,模型组大鼠毛色凌乱、行为焦躁并有一定攻击性等出现抑郁症状表现;与模型组比较,代代花原料组分各部位能使模型动物的活动次数增加(代代花具有疏肝和胃、理气解郁、改善睡眠功能、缓解疲劳功能等传统功能疗效),给药后的模型大鼠毛色光滑平整、性情温和、抑郁症状表现消失,体重增加显著(p<0.05或p<0.01),说明代代花原料组各部位对sdad模型大鼠效果明显,尤其是新鲜代代花冷冻干燥花蕾的粉末和代代花30%乙醇水洗脱部位组效果最优。特别是新鲜代代花冷冻干燥花蕾保留了所用的营养价值成分或活性成分类型,药理疗效十分显著。上述研究也证实了代代花具有疏肝和胃,理气解郁的传统功效。同时,代代花还具有镇定心情、解除紧张不安的现代药理疗效。见结果见表2和表3。

表2代代花原料组分各部位对sdad模型大鼠自主活动行为学试验结果(±sn=8)

与空白组比较:﹟﹟p<0.01;与sdad模型组比较:*p<0.05,**p<0.01。

表3代代花原料组分各部位对sdad模型大鼠体重变化分析结果(±sn=8)

与空白组比较:﹟﹟p<0.01;与sdad模型组比较:*p<0.05,**p<0.01。

实施例9

本发明从动物因素诱发性与生理性脑衰老的记忆功能减退出发,将睡眠障碍(sleepdisorder,sd,其使脑部气络异常或紊乱内生毒邪至“毒损脑络”)和aβ蛋白等多因素引起的生理性脑衰老的记忆功能减退相结合,利用睡眠剥夺致睡眠障碍及鼠脑室一次性注射aβ淀粉样蛋白制作睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sleepdisorder-factors'physiologicalbrainagingmemorysubside,sdpbams,)模型,简称sdad模型。应用睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sdad)模型大鼠对栀子花制备的原料组分为新鲜栀子花冷冻干燥花蕾的粉末及其30%乙醇水洗脱部位、70%乙醇水洗脱部位和95%乙醇水总提取物进行药理活性筛选,通过行为学(morris水迷宫)测定和生理生化相应指标的测定与检测,实验证实新鲜栀子花冷冻干燥花蕾的粉末及其30%乙醇水洗脱部位、70%乙醇水洗脱部位和95%乙醇水总提取物能使睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sdad)模型大鼠缩短潜伏期、增加过台次数,延长在第四象限逗留时间。同时,新鲜栀子花冷冻干燥花蕾的粉末及其95%乙醇水总提取物能使睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sdad)模型大鼠自主活动增加,从而起到清心除烦,延缓脑衰老,改善睡眠,抗抑郁等多种功能。其对由睡眠障碍和aβ纤丝形成聚集等多因素引起的睡眠障碍生理性脑衰老的记忆功能减退(sdad)具有辅助改善记忆功能减退的功能疗效,进一步证实栀子花制备的原料组分具有改善睡眠障碍或改善记忆功能减退功能疗效。

1材料

1.1动物spf级健康sd雄性大鼠,体质量300-350g,由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供,许可证号:scxk(湘)2009-0004。饲养条件:温度20-22℃,喂以大鼠标准饲料,自由饮水。

1.2栀子花的原料组分与试剂由实例3和实例4得到的栀子花原料组分为100目新鲜栀子花冷冻干燥花蕾的粉末及其95%乙醇水总提取物和95%乙醇水总体物上大孔吸附树脂的30%乙醇水洗脱部位以及70%乙醇水洗脱部位。aβ1-40(sigma公司,批号052m4801v)。

1.3仪器zs-b型脑立体定位仪、morris水迷宫视频分析系统(北京众实迪创科技发展有限责任公司),forma-86cult超低温冰箱(美国赛默飞),allegra64r高速冷冻离心机(美国贝克曼库尔特),uv-1800型紫外-可见分光光度计(日本岛津公司)。

2方法

2.1动物分组和动物模型的建立将110只健康sd雄性大鼠随机分为空白组、睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sleepdisorder-factors'physiologicalbrainagingmemorysubside,sdad)模型组、盐酸多奈哌齐组、栀子花95%乙醇水总提取物中剂量组、栀子花95%乙醇水总提取物高剂量组、栀子花30%乙醇水洗脱部位中剂量组、栀子花30%乙醇水洗脱部位高剂量组、栀子花70%乙醇水洗脱部位中剂量组、栀子花70%乙醇水洗脱部位高剂量组、新鲜栀子花冷冻干燥花蕾的粉末中剂量组、新鲜栀子花冷冻干燥花蕾的粉末高剂量组,共11组,每组10只大鼠。

睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sdad)模型的建立:各实验组先利用改良多平台水环境法进行睡眠剥夺3周得睡眠障碍易发生理性脑衰老记忆功能减退大鼠。之后,取未死亡状态良好的睡眠障碍易发生理性脑衰老记忆功能减退病变大鼠再脑内注射凝聚态aβ25-35得睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sdad)整体动物模型。

空白组不予处理;模型组与各给药组分别按上述造模方法予以处理。模型组于脑内注射手术前14天开始灌胃2%吐温-80水溶液至手术后7天截止给药,共21天,每天1次。各给药组于睡眠剥夺第2周开始即手术前14天开始连续灌胃给药至手术后7天截止给药,共给药21天,每天1次。

2.2morris水迷宫实验预先在水池里注入清水使水面高出平台1-2cm,水温控制在24士2℃左右。水池内壁涂有黑漆,每次测试前须向水池内加入适量黑色墨水,水池共分为4个象限。将平台放在第四象限中间,在其他三个象限任选一点面向水池池壁将大鼠放入水中,试验历时5天,每天上午每个象限各测试一次,每次测试1min。若大鼠在1min之内尚未找到平台,则将大鼠拿到平台上并使它在上面站15s,若大鼠在lmin之内找到平台,也让其在平台上站15s,方结束一次训练,如此训练4天。在第5天,将平台移走,每只大鼠游lmin,记录每只大鼠第一次经过原平台的时间(潜伏期),每只大鼠在lmin内经过平台的次数、游过的总距离以及在原平台所在象限及其它三个象限内逗留的时间,计算出在第四象限游泳的时间(t4)占整个游泳时间(t总)的百分比。

2.3自主活动测试:将小动物自主活动检测装置与mp-100生理实验信号采集分析系统相连,随机在每个装置内放1只大鼠,每次检测前让动物在装置内适应5min,检测室内保持安静,防止对大鼠的活动产生影响。记录各组大鼠20min内的自主活动次数和自主活动时间,并称量大鼠的体重变化。

2.4统计方法采用sas软件分析,实验数据用±s表示,单因素方差分析实验的数据。p<0.05为有统计学意义。

3结果

3.1栀子花原料组分对睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sdad)模型大鼠morris水迷宫实验的影响

与空白组比较,模型组大鼠潜伏期延长、过台次数减少,在第四象限逗留时间短,差异显著(p<0.01),模型组大鼠出现空间探索能力障碍、记忆功能减退、活动减少等痴呆症状;与模型组比较,给药盐酸多奈哌齐组、栀子花原料组分各组能缩短潜伏期、增加过台次数,在第四象限逗留时间和距离延长(p<0.05或p<0.01),说明各给药组治疗有效,提示栀子花原料组分(尤其是栀子花30%乙醇水洗脱部位组、新鲜栀子花冷冻干燥花蕾的粉末组、新鲜栀子花冷冻干燥花蕾粉末的95%乙醇水总提取物组)效果明显,上述各给药组具有改善模型大鼠空间探索能力,上述各给药组具有改善模型大鼠的痴呆症状表现,上述各给药组具有改善模型大鼠的记忆功能减退的功能疗效。结果见表4。

表4栀子花原料组分各部位对sdad模型大鼠空间探索试验结果(±sn=8)

与模型组比较:*p<0.05,**p<0.01。

3.2栀子花原料组分对睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sdad)模型大鼠自主活动行为学试验结果

与空白组比较,模型组大鼠自主活动次数减少,体重增加缓慢,差异显著(p<0.01),模型组大鼠出现睡眠障碍、心神不宁、过度嗜睡等痴呆症状表现,模型组大鼠毛色凌乱、行为焦躁并有一定攻击性等出现抑郁症状表现;与模型组比较,栀子花原料组分各部位能使模型动物的活动次数增加(栀子花具有泻火除烦、舒肝解郁等传统疗效。),各给药组模型大鼠毛色光滑平整、性情温和、抑郁症状表现消失;各给药组模型大鼠体重增加明显(p<0.05或p<0.01),特别是新鲜栀子花冷冻干燥花蕾的粉末组体重增加十分显著,新鲜栀子花冷冻干燥花蕾的粉末因其含有花粉具有改善胃肠道功能(通便),特别适用青少年改善胃肠道功能(厌食症)并增加体重;说明栀子花原料组各部位对sdad模型大鼠效果明显,尤其是新鲜栀子花冷冻干燥花蕾的粉末和栀子花95%乙醇总提取物效果最优。上述研究也证实了栀子花有泻火除烦,舒肝解郁等传统疗效。同时,栀子花还具有镇静安神、缓解疲劳的现代药理疗效。见结果见表5和表6。

表5栀子花原料组分各部位对sdad模型大鼠自主活动行为学试验结果(±sn=8)

与模型组比较:*p<0.05,**p<0.01。

表6栀子花原料组分各部位对sdad模型大鼠体重变化分析结果(±sn=8)

实施例10本发明从动物因素诱发性与生理性脑衰老的记忆功能减退出发,将睡眠障碍(sleepdisorder,sd,其使脑部气络异常或紊乱内生毒邪至“毒损脑络”)和aβ蛋白等多因素引起的生理性脑衰老的记忆功能减退相结合,利用睡眠剥夺致睡眠障碍及鼠脑室一次性注射aβ淀粉样蛋白制作睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sleepdisorder-factors'physiologicalbrainagingmemorysubside,sdpbams,)模型,简称sdad模型。应用睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sdad)模型大鼠对药食同源为代代花(新鲜代代花的花蕾的冷冻干燥花蕾药材)粉末3克、酸枣仁粉末4克、益智仁粉末4克的组合物共11克粉末(简称复方代代花-1号方),药食同源为代代花(新鲜代代花的花蕾的冷冻干燥花蕾药材)粉末3克、酸枣仁粉末4克、益智仁粉末4克、栀子果实4克的组合物共15克粉末(简称复方代代花-2号方),药食同源为代代花(新鲜代代花的花蕾的冷冻干燥花蕾药材)粉末3克、酸枣仁粉末4克、益智仁粉末4克、栀子花((新鲜栀子花的花蕾的冷冻干燥花蕾药材))粉末4克的组合物共15克粉末(简称复方代代花-3号方)进行药理活性筛选,通过行为学(morris水迷宫)测定和生理生化相应指标的测定与检测,实验证实复方代代花-1号方、复方代代花-2号方和复方代代花-3号方均能使睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sdad)模型大鼠缩短潜伏期、增加过台次数,延长在第四象限逗留时间。同时,复方代代花-1号方、复方代代花-2号方和复方代代花-3号方均能使睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sdad)模型大鼠自主活动增加,从而起到清心除烦,延缓脑衰老,改善睡眠,抗抑郁等多种功能。其对由睡眠障碍和aβ纤丝形成聚集等多因素引起的睡眠障碍生理性脑衰老的记忆功能减退(sdad)具有辅助改善记忆功能减退的功能疗效,进一步证实上述药食同源的组合物制备的复方代代花-1、2、3号方具有改善睡眠障碍或改善记忆功能减退的功能疗效。

1材料

1.1动物spf级健康sd雄性大鼠,体质量300-350g,由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供,许可证号:scxk(湘)2009-0004。饲养条件:温度20-22℃,喂以大鼠标准饲料,自由饮水。

1.2药食同源的组合物制备的复方代代花-1、2、3号方与试剂由实例2得100目新鲜代代花冷冻干燥花蕾的粉末、实例4得100目新鲜栀子花冷冻干燥花蕾的粉末、实例5得100目益智仁的粉末、实例6得100目酸枣仁的粉末和实例7得100目栀子果实的粉末,将上述药食同源的粉末进行组合制备药食同源的组合物,复方代代花-1号方:药食同源的代代花(新鲜代代花的花蕾的冷冻干燥花蕾药材)粉末3克、酸枣仁粉末4克、益智仁粉末4克的组合物共11克粉末;复方代代花-2号方:药食同源的代代花(新鲜代代花的花蕾的冷冻干燥花蕾药材)粉末3克、酸枣仁粉末4克、益智仁粉末4克、栀子果实粉末4克的组合物共15克粉末;复方代代花-3号方:药食同源的代代花(新鲜代代花的花蕾的冷冻干燥花蕾药材)粉末3克、酸枣仁粉末4克、益智仁粉末4克、栀子花((新鲜栀子花的花蕾的冷冻干燥花蕾药材))粉末4克的组合物共15克粉末。aβ25-35(sigma公司,批号095m4775v)。

1.3仪器zs-b型脑立体定位仪、morris水迷宫视频分析系统(北京众实迪创科技发展有限责任公司),forma-86cult超低温冰箱(美国赛默飞),allegra64r高速冷冻离心机(美国贝克曼库尔特),uv-1800型紫外-可见分光光度计(日本岛津公司)。

2方法

2.1动物分组和动物模型的建立将90只健康sd雄性大鼠随机分为空白组、睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sleepdisorder-factors'physiologicalbrainagingmemorysubside,sdad)模型组、盐酸多奈哌齐组、复方代代花-1号方中剂量组、复方代代花-1号方高剂量组、复方代代花-2号方中剂量组、复方代代花-2号方高剂量组、复方代代花-3号方中剂量组、复方代代花-3号方高剂量组,共9组,每组10只大鼠。

睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sdad)模型的建立:各实验组先利用改良多平台水环境法进行睡眠剥夺3周得睡眠障碍易发生理性脑衰老记忆功能减退大鼠。之后,取未死亡状态良好的睡眠障碍易发生理性脑衰老记忆功能减退病变大鼠再脑内注射凝聚态aβ25-35得睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sdad)整体动物模型。

空白组不予处理;模型组与各给药组分别按上述造模方法予以处理。模型组于脑内注射手术前14天开始灌胃2%吐温-80水溶液至手术后7天截止给药,共21天,每天1次。各给药组于睡眠剥夺第2周开始即手术前14天开始连续灌胃给药至手术后7天截止给药,共给药21天,每天1次。

2.2morris水迷宫实验预先在水池里注入清水使水面高出平台1-2cm,水温控制在24士2℃左右。水池内壁涂有黑漆,每次测试前须向水池内加入适量黑色墨水,水池共分为4个象限。将平台放在第四象限中间,在其他三个象限任选一点面向水池池壁将大鼠放入水中,试验历时5天,每天上午每个象限各测试一次,每次测试1min。若大鼠在1min之内尚未找到平台,则将大鼠拿到平台上并使它在上面站15s,若大鼠在lmin之内找到平台,也让其在平台上站15s,方结束一次训练,如此训练4天。在第5天,将平台移走,每只大鼠游lmin,记录每只大鼠第一次经过原平台的时间(潜伏期),每只大鼠在lmin内经过平台的次数、游过的总距离以及在原平台所在象限及其它三个象限内逗留的时间,计算出在第四象限游泳的时间(t4)占整个游泳时间(t总)的百分比。

2.3自主活动测试:将小动物自主活动检测装置与mp-100生理实验信号采集分析系统相连,随机在每个装置内放1只大鼠,每次检测前让动物在装置内适应5min,检测室内保持安静,防止对大鼠的活动产生影响。记录各组大鼠20min内的自主活动次数和自主活动时间,并称量大鼠的体重变化。

2.4统计方法采用sas软件分析,实验数据用±s表示,单因素方差分析实验的数据。p<0.05为有统计学意义。

3结果

3.1药食同源的组合物制备的复方代代花-1、2、3号方对睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sdad)模型大鼠morris水迷宫实验的影响

与空白组比较,模型组大鼠潜伏期延长、过台次数减少,在第四象限逗留时间短,差异显著(p<0.01),模型组大鼠出现空间探索能力障碍、记忆功能减退、活动减少等痴呆症状;与模型组比较,给药盐酸多奈哌齐组、药食同源的组合物制备的复方代代花-1、2、3号方各给药组能缩短潜伏期、增加过台次数,在第四象限逗留时间和距离延长(p<0.05或p<0.01),说明药食同源的组合物制备的复方代代花-1、2、3号方各给药组治疗有效,其药食同源的组合物制备的复方代代花-1、2、3号方效果十分显著,上述药食同源的组合物制备的复方代代花-1、2、3号方各给药组具有改善模型大鼠空间探索能力,上述药食同源的组合物制备的复方代代花-1、2、3号方各给药组具有改善模型大鼠的痴呆症状表现,上述药食同源的组合物制备的复方代代花-1、2、3号方各给药组具有改善模型大鼠的记忆功能减退的功能疗效。结果见表7。

表7复方代代花-1、2、3号方对sdad模型大鼠空间探索试验结果(±s,n=8)

注:与模型组比较,*p﹤0.05,**p﹤0.01。

3.2药食同源的组合物制备的复方代代花-1、2、3号方对睡眠障碍生理性脑衰老记忆功能减退(sdad)模型大鼠自主活动行为学试验和体重的影响

与空白组比较,模型组大鼠自主活动次数减少,体重增加缓慢,差异显著(p<0.01),模型组大鼠出现睡眠障碍、心神不宁、过度嗜睡等痴呆症状表现,模型组大鼠毛色凌乱、行为焦躁并有一定攻击性等出现抑郁症状表现;与模型组比较,药食同源的组合物制备的复方代代花-1、2、3号方各给药组能使模型动物的活动次数增加,药食同源的组合物制备的复方代代花-1、2、3号方各给药组的模型大鼠毛色光滑平整、性情温和、抑郁症状表现消失;药食同源的组合物制备的复方代代花-1、2、3号方各给药组的模型大鼠体重增加明显(p<0.05或p<0.01)。见结果见表8。

表8复方代代花-1、2、3号方对sdad模型大鼠自主活动及体重变化的影响(±s,n=8)

注:与模型组比较,*p﹤0.05,**p﹤0.01。

综上所述,上述药食同源的组合物制备的复方代代花-1、2、3号方均具有疏肝和胃、理气解郁、暖肾缩尿固精、宁心除烦安神的传统功能疗效,上述药食同源的组合物制备的复方代代花-1、2、3号方还均具有辅助改善记忆功能减退、改善睡眠功能、缓解疲劳功能、助消化功能、增强免疫力功能的现代药理疗效。

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