本申请涉及生物提取的技术领域，特别涉及一种朝鲜蓟提取物的制备工艺及其检测方法。
背景技术：
朝鲜蓟，又名洋蓟、食托菜蓟、菜蓟、法国洋蓟、球洋蓟，是一种在地中海沿岸生长的菊科菜蓟属植物，香港一般按其意大利语音译作雅枝竹或亚枝竹。它的花蕾可以用来煮菜，最初经由意大利料理而传入华人社会。现在在中国大陆的上海、浙江、湖南、北京、云南、陕西省、山东省等地均有分布。朝鲜蓟在食用时口感介于鲜笋和蘑菇之间，有消渴解酒的功效，营养丰富，健身养颜，食用价值极高，有“蔬菜之皇”的美誉。
朝鲜蓟能够：提高肝脏的活力促进排除肝脏中的毒素(如消化蛋白质所产生的氨)促进肝脏细胞的再生增进胆汁的分泌和脂肪的消化(调节体内的胆固醇)朝鲜蓟所含有的其他疗效成份有：类黄酮、苦味素这些疗效物质都有辅助朝鲜蓟保护肝脏和促进肝脏排毒的功能。而黄酮类化合物具有有益的生理效应。对恶性细胞有相当功效。对血管紫癜有缓解作用。常食朝鲜蓟有治疗慢性肝炎、降低胆醇以及治疗消化不良，改善胃肠功能、增加胆汁分泌和缓解便秘、腹泻、恶心、呕吐等的功效，刺激胆汁的分泌，有防止动脉硬化、保护心血的功能。
现有技术中，朝鲜蓟内的有效成分提取率低，制备工艺复杂，成本高。
技术实现要素：
本申请的目的在于提供一种朝鲜蓟提取物的制备工艺及其检测方法，解决了现有技术中朝鲜蓟提取物的提取工艺复杂，提取率低的问题。
第一方面，本发明的实施例提供了一种朝鲜蓟提取物的制备工艺，包括以下步骤：
步骤一：向反应釜中加入朝鲜蓟，再加入水；
步骤二：加热至所述反应釜内温度为60℃后开启冷凝器，使冷凝水循环，当所述温度升温至90-95℃开启热回流；
步骤三：重复两次所述步骤二；
步骤四：通过第一滤膜过滤所述步骤三中得到的物质，得到提取液；
步骤五：浓缩所述提取液的浓度至1:1-1:2ml/g或相对密度至1.08-1.15，分别配置浓度为50％、60％、70％、80％的乙醇溶液，冷却时间对应浓度依次为12h、24h、36h、48h，冷却后醇沉，得到上清液，将所述上清液通过第二滤膜过滤，得到滤液；
步骤六：将所述滤液通过树脂柱吸附；
步骤七：将残留在所述树脂柱中的母液用水清洗，得到水洗液，将所述水洗液回收浓缩后保存；
步骤八：使用乙醇水溶液通过所述树脂柱，得到醇洗液，将所述醇洗液经过微孔过滤器滤除杂质后，通过真空浓缩，回收乙醇，得到浓浆后喷雾干燥，过筛，得到朝鲜蓟提取物。
进一步地，所述步骤一中的朝鲜蓟的质量为400kg，水体积为1500l。
进一步地，所述第一滤膜和所述第二滤膜的孔径均分别为0.45μm。
进一步地，所述步骤六中，所述树脂柱的体积为400l，所述树脂柱的数量为5根，所述滤液在所述树脂柱中的流速为75-200l/h。
进一步地，所述步骤七中，所述水的使用量为200l，水的流速为50-150l/h。
进一步地，所述步骤八中的微孔过滤器的孔径为0.22μm。
第二方面，本发明的实施例提供了一种朝鲜蓟提取物的检测方法，所述的朝鲜蓟提取物为权利要求1-6任一项所述的制备工艺制备的朝鲜蓟提取物，所述检测方法包括如下步骤：
步骤一：采用高效液相色谱仪测定洋蓟素、绿原酸，包括如下步骤：
称取50mg朝鲜蓟提取物，加入甲醇50ml，使用超声溶解后过滤，得到朝鲜蓟提取物溶液；
制备0.1mg/ml绿原酸甲醇溶液和0.1mg/ml洋蓟素甲醇溶液；
色谱条件：
色谱柱：symmetry4.6x250mmc185μm；柱温：30℃；流速：1ml/min；波长：330nm；进样量：10μl；
流动相：a相：100％乙腈溶液，b相：质量分数0.2％磷酸溶液，采用梯度洗脱30min，乙腈与磷酸溶液体积比从5:95到50:50；
步骤二：采用紫外分光光度计测定多酚，包括如下步骤：
对照品溶液制备：0.1mg/ml标准溶液，分别取0.2、0.4、0.6、0.8ml加水补足1ml于10ml容量瓶中，加入5ml的10％福林酚试剂摇匀，反应5min，加入4ml的7.5％碳酸钠溶液，后加水定容摇匀，温室下放置1h，在765nm测定吸光度；
样品溶液制备：称取20mg朝鲜蓟提取物加50ml的75％甲醇，超声溶解后过滤后得到样品溶液，取1ml样品溶液于10ml容量瓶中，加入5ml的10％福林酚试剂摇匀，反应5min，加入4ml的7.5％碳酸钠溶液，加水定容摇匀，温室下放置1h，在765nm测定吸光度；
步骤三：朝鲜蓟提取物的水分测定，包括如下步骤：
称取一定量的朝鲜蓟提取物，用烘箱在120℃下烘干1h，再次称重；
计算水分含量，使用如下公式：水分含量/％＝(m-m0)/m×100％
式中：m为烘干前朝鲜蓟提取物质量/g；m0为烘干后朝鲜蓟提取物质量/g。
由以上技术方案可知，本申请实施例示出一种朝鲜蓟提取物的制备工艺及其检测方法，所述制备工艺包括如下步骤：步骤一：向反应釜中加入朝鲜蓟，再加入水；步骤二：加热至所述反应釜内温度为60℃后开启冷凝器，使冷凝水循环，当所述温度升温至90-95℃开启热回流；步骤三：重复两次所述步骤二；步骤四：通过第一滤膜过滤所述步骤三中得到的物质，得到提取液；步骤五：浓缩所述提取液的浓度至1:1-1:2ml/g或相对密度至1.08-1.15，分别配置浓度为50％、60％、70％、80％的乙醇溶液，冷却时间对应浓度依次为12h、24h、36h、48h，冷却后醇沉，得到上清液，将所述上清液通过第二滤膜过滤，得到滤液；步骤六：将所述滤液通过树脂柱吸附；步骤七：将残留在所述树脂柱中的母液用水清洗，得到水洗液，将所述水洗液回收浓缩后保存；步骤八：使用乙醇水溶液通过所述树脂柱，得到醇洗液，将所述醇洗液经过微孔过滤器滤除杂质后，通过真空浓缩，回收乙醇，得到浓浆后喷雾干燥，过筛，得到朝鲜蓟提取物。本申请实施例通过提取、醇沉、过滤、干燥等简单工艺步骤有效提高了朝鲜蓟提取物的提取效率。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为根据本申请实施例示出的一种朝鲜蓟提取物的制备工艺的流程图。
具体实施方式
本申请实施例示出一种朝鲜蓟提取物的制备工艺，如图1所示，包括如下步骤：
步骤s01：向反应釜中加入朝鲜蓟，再加入水；
步骤s02：加热至所述反应釜内温度为60℃后开启冷凝器，使冷凝水循环，当所述温度升温至90-95℃开启热回流；
步骤s03：重复两次所述步骤s02，从步骤s02到步骤s03，重复冷凝水循环和热回流的步骤共三次，总用时300min。
步骤s04：通过第一滤膜过滤所述步骤s03中得到的物质，得到提取液；
步骤s05：浓缩所述提取液的浓度至1:1-1:2ml/g或相对密度至1.08-1.15，分别配置浓度为50％、60％、70％、80％的乙醇溶液，冷却时间对应浓度依次为12h、24h、36h、48h，冷却后醇沉，得到上清液，将所述上清液通过第二滤膜过滤，得到滤液；
需要说明的是醇沉的全称为乙醇沉淀法，常用于提取液的纯化精制，利用有效成分能溶于乙醇而杂质不溶于乙醇的特性，加入乙醇后，有效成分转溶到乙醇中而杂质则被沉淀出来，为了保证醇沉时尽量除去杂质，同时减少有效成分损失和乙醇消耗量，所以选择将所述提取液浓缩后进行醇沉处理，选择浓缩所述提取液的浓度为1.1-1.2ml/g的原因为如果浓度过高，粘稠度较大，乙醇和浓缩后的提取液接触面积较小，如果浓度过小，浓缩后的提取液的数量比较大，需要消耗大量乙醇。当通过浓度为50％、60％、70％、80％的乙醇溶液醇沉后，几乎可除去全部淀粉、多糖、蛋白质、无机盐类杂质。
步骤s06：将所述滤液通过树脂柱吸附；
所述树脂柱可选取的型号为d101型、ab-8型、聚酰氨和21型。
步骤s07：将残留在所述树脂柱中的母液用水清洗，得到水洗液，将所述水洗液回收浓缩后保存；所述水洗液回收浓缩保存后可以用在下次使用树脂柱吸附时使用，因为所述水洗液中可能存有朝鲜蓟的有效成分，重复吸附可以避免有效成分浪费。
步骤s08：使用乙醇水溶液通过所述树脂柱，得到醇洗液，将所述醇洗液经过微孔过滤器滤除杂质后，通过真空浓缩，回收乙醇，得到浓浆后喷雾干燥，过筛，得到朝鲜蓟提取物。
具体的，所述步骤s08中使用乙醇水溶液的浓度为15％，以流速50-150l/h的速度通过吸附柱，洗脱液体积为300l，将醇洗液经过0.22μm微孔过滤器滤除杂质后，通过45-65℃真空浓缩，回收乙醇，得到浓浆后喷雾干燥，过筛，可得到5-8％纯度洋蓟提取物。
所述步骤s08中使用乙醇水溶液的浓度为45％，以流速50-150l/h的速度通过吸附柱，洗脱液体积为500l，将醇洗液经过0.22μm微孔过滤器滤除杂质后，通过40-55℃真空浓缩，回收乙醇，得到浓浆真空干燥，过筛，可得到10-25％纯度洋蓟提取物。
所述步骤s08中使用乙醇水溶液的浓度为95％，以流速50-150l/h的速度通过吸附柱，洗脱液体积为500l，将醇洗液经过0.22μm微孔过滤器滤除杂质后，通过35-50℃真空浓缩，回收乙醇，得到浓浆真空干燥，过筛，可得到8-12％纯度洋蓟提取物。
进一步地，所述步骤s01中的朝鲜蓟的质量为400kg，水体积为1500l。
进一步地，所述第一滤膜和所述第二滤膜的孔径均分别为0.45μm。
进一步地，所述步骤s06中，所述树脂柱的体积为400l，所述树脂柱的数量为5根，所述滤液在所述树脂柱中的流速为75-200l/h。
进一步地，所述步骤s07中，所述水的使用量为200l，水的流速为50-150l/h。
进一步地，所述步骤s08中的微孔过滤器的孔径为0.22μm。
本申请实施例还示出一种朝鲜蓟提取物的检测方法，所述的朝鲜蓟提取物为上述制备工艺制备的朝鲜蓟提取物，所述检测方法包括如下步骤：
步骤一：采用高效液相色谱仪测定洋蓟素、绿原酸，包括如下步骤：
称取50mg朝鲜蓟提取物，加入甲醇50ml，使用超声溶解后过滤，得到朝鲜蓟提取物溶液；
制备0.1mg/ml绿原酸甲醇溶液和0.1mg/ml洋蓟素甲醇溶液；
色谱条件：
色谱柱：symmetry4.6x250mmc185μm；柱温：30℃；流速：1ml/min；波长：330nm；进样量：10μl；
流动相：a相：100％乙腈溶液，b相：质量分数0.2％磷酸溶液，采用梯度洗脱30min，乙腈与磷酸溶液体积比从5:95到50:50；a泵或a相：0-5min5％线性升至20％，5-20min20％线性升30％，20-23min30％线性升至50％，b泵或b相相对应0-5min95％线性降至80％，5-20min80％线性降至70％，20-23min70％线性降至50％，双相都在50％后，保持5min后，在两分钟之内，恢复到初始相比例，a相5％，b相95％。现有技术中常采用醋酸等溶液当过流动相，但是通过大量实验发现，其液相色谱出的色谱峰都没有乙腈和磷酸溶液的好，所以选取100％乙腈溶液和质量分数0.2％磷酸溶液作为流动相。梯度洗脱可以连续的改变流动相比例的组成，可改善复杂试样的分离度，缩短分析时间，改善峰形和提高检测灵敏度，从而更好的让洋蓟素的峰形更好，利于检测。
步骤二：采用紫外分光光度计测定多酚，包括如下步骤：
10％福林酚试剂的制备：20ml福林酚试剂用水稀释至200ml；
7.5％碳酸钠溶液的制备：37.5g碳酸钠用水溶解并定容至500ml；
对照品溶液制备：0.1mg/ml标准溶液，分别取0.2,0.4,0.6,0.8ml加水补足1ml于10ml容量瓶中，加入5ml的10％福林酚试剂摇匀，反应5min，加入4ml的7.5％碳酸钠溶液，后加水定容摇匀，温室下放置1h，在765nm测定吸光度；
样品溶液制备：称取20mg朝鲜蓟提取物加50ml的75％甲醇，超声溶解后过滤后得到样品溶液，取1ml样品溶液于10ml容量瓶中，加入5ml的10％福林酚试剂摇匀，反应5min，加入4ml的7.5％碳酸钠溶液，加水定容摇匀，温室下放置1h，在765nm测定吸光度；
步骤三：朝鲜蓟提取物的水分测定，包括如下步骤：
称取一定量的朝鲜蓟提取物，用烘箱在120℃下烘干1h，再次称重；
计算水分含量，使用如下公式：水分含量/％＝(m-m0)/m×100％
式中：m为烘干前朝鲜蓟提取物质量/g；m0为烘干后朝鲜蓟提取物质量/g。
由以上技术方案可知，本申请实施例示出一种朝鲜蓟提取物的制备工艺及其检测方法，所述制备工艺包括如下步骤：步骤一：向反应釜中加入朝鲜蓟，再加入水；步骤二：加热至所述反应釜内温度为60℃后开启冷凝器，使冷凝水循环，当所述温度升温至90-95℃开启热回流；步骤三：重复两次所述步骤二；步骤四：通过第一滤膜过滤所述步骤三中得到的物质，得到提取液；步骤五：浓缩所述提取液的浓度至1:1-1:2ml/g或相对密度至1.08-1.15，分别配置浓度为50％、60％、70％、80％的乙醇溶液，冷却时间对应浓度依次为12h、24h、36h、48h，冷却后醇沉，得到上清液，将所述上清液通过第二滤膜过滤，得到滤液；步骤六：将所述滤液通过树脂柱吸附；步骤七：将残留在所述树脂柱中的母液用水清洗，得到水洗液，将所述水洗液回收浓缩后保存；步骤八：使用乙醇水溶液通过所述树脂柱，得到醇洗液，将所述醇洗液经过微孔过滤器滤除杂质后，通过真空浓缩，回收乙醇，得到浓浆后喷雾干燥，过筛，得到朝鲜蓟提取物。本申请实施例通过提取、醇沉、过滤、干燥等简单工艺步骤有效提高了朝鲜蓟提取物的提取效率。
本领域技术人员在考虑说明书及实践这里公开的申请后，将容易想到本申请的其它实施方案。本申请旨在涵盖本申请的任何变型、用途或者适应性变化，这些变型、用途或者适应性变化遵循本申请的一般性原理并包括本申请未公开的本技术领域中的公知常识或惯用技术手段。说明书和实施例仅被视为示例性的，本申请的真正范围和精神由下面的权利要求指出。
应当理解的是，本申请并不局限于上面已经描述并在附图中示出的精确结构，并且可以在不脱离其范围进行各种修改和改变。本申请的范围仅由所附的权利要求来限制。