本发明属于化妆品领域，具体的涉及一种微生物发酵复方组合物及其在制备美白保湿护肤品中的应用。
背景技术：
：三七又名田七，是双子叶植物纲伞形目五加科人参属的多年生草本植物，是我国传统名贵中药材。三七性温，味甘且微苦，根、根状茎为重要的中药材，同棵植物的花叶也能入药，当茶饮。早在400多年以前，我国就已经开始栽培种植三七，其活血化瘀、止痛疗效非常显著，用于治疗出血，刺痛及肿痛等疾病也已有悠久的历史，是云南白药主要成分。其主要药理活性成分为皂苷，同时含有丰富的三七素、糖类、氨基酸等成分。主要产有我国云南、四川、广西等地。我国拥有丰富的药用植物和真菌资源，目前已知的中药材近万种，药用真菌近50种，通过对国家食品药品监督管理总局颁布的《已使用化妆品原料名称目录》(2015年版)中的原料进行筛查发现，化妆品中已使用的真菌的种类有30多种。目录中菌类原料多达133种，大体可分为3类:菌类提取物、菌中的营养成分或内容物以及菌类的发酵产物。其中菌类提取物包含菌核粉和菌丝粉在内，共有46种；而菌中的营养成分或内容物则包括多糖类、氨基酸类、肽类以及一些酶，共计14种；从目录中也可以发现，目前化妆品中应用的菌类原料大多数还是以发酵产物为主，共计73种。不同的真菌与中药之间交叉可形成大量的发酵组合，并有可能产生一些的新的活性物质，从而丰富了化妆品的原料选择（左锦辉，薛燕，杜一杰，李丽，董银卯。中药双向发酵技术在化妆品中的应用，日用化学工业，2017，47（10）：583-597）。目前市场上利用发酵技术生产的化妆品有很多，其中比较有代表性的品牌有雅诗兰黛小棕瓶、sk-ⅱ神仙水、海蓝之谜等，因具有一些独特的优势，这类发酵化妆品已经成为继天然植物提取化妆品后的又一大市场发展的新方向。当前对三七茎叶的研究多集中于新资源食品等领域，还不能起到充分利用三七茎叶资源的目的，此外，当前化妆品研发也倾向于使用从天然动植物中获得的成分，以替代化学合成的香精香料等物质。此外，一些可用于化妆品中的真菌类成分在发酵后会产生不良气味，如何选择加入合适的产品对气味进行调整也是本发明拟解决的问题。技术实现要素：本发明一个目的在于提供一种微生物发酵复方组合物及其在制备美白保湿护肤品中的应用。本发明的目的通过下述技术方案实现：一种微生物发酵复方组合物，其特征在于，活性组分为三七茎叶、玫瑰花、玉兰花、桃花、木槿花，微生物选自酿酒酵母、灵芝菌、蛹虫草、红曲霉、茯苓或黑曲霉。所述微生物发酵复方组合物，其特征在于，各活性组分重量份为三七茎叶50-100份、玫瑰花50-80份、玉兰花50-80份、桃花50-80份、木槿花50-80份。所述微生物发酵复方组合物的制备方法，其特征在于，制备方法包括如下步骤：（1）称取重量份三七茎叶，粉碎成粗粉，与辅料麸皮按一定比例混匀灭菌，加入3%-5%微生物45-48℃发酵3-5天，50%-70%乙醇70-90℃提取1-3次，每次1-2h，过滤取上清液，将所得上清液在115-120℃下，高压灭菌5-20min使菌失活，将灭菌后的发酵液在12000-15000r/min下离心20-30min，收集上清液，减压浓缩，得三七茎叶发酵液；（2）将玫瑰花、玉兰花、桃花、木槿花按重量份称取，粉碎成粗粉，混匀，加入5-10倍去离子水，加热至50-70℃浸润20-30min，100-200w超声提取30-60min，过滤，回收滤液，得玫瑰花、玉兰花、桃花、木槿花混合提取液。所述的微生物发酵复方组合物的制备方法，其特征在于，所述微生物选自酿酒酵母。所述的微生物发酵复方组合物的制备方法，其特征在于，所述各步骤中，工艺参数为：（1）称取重量份三七茎叶，粉碎成粗粉，与辅料麸皮按一定比例混匀灭菌，加入5%微生物46℃发酵4天，65%乙醇70℃提取2次，每次1h，过滤取上清液，将所得上清液在115℃下，高压灭菌15min使菌失活，将灭菌后的发酵液在12000r/min下离心20min，收集上清液，减压浓缩，得三七茎叶发酵液；（2）将玫瑰花、玉兰花、桃花、木槿花按重量份称取，粉碎成粗粉，混匀，加入6-8倍去离子水，加热至55℃浸润30min，160w超声提取60min，过滤，回收滤液，得玫瑰花、玉兰花、桃花、木槿花混合提取液。一种微生物发酵复方组合物，其特征在于，所述有效成分包括上述步骤中所得三七茎叶发酵液与玫瑰花、玉兰花、桃花、木槿花混合提取液。一种所述微生物发酵复方组合物在制备美白保湿护肤品中的应用。所述微生物发酵复方组合物在制备美白保湿护肤品中的应用，其特征在于，三七茎叶发酵液与玫瑰花、玉兰花、桃花、木槿花混合提取液在使用时配比为1:10-10:1。所述微生物发酵复方组合物在制备美白保湿护肤品中的应用，其特征在于，三七茎叶发酵液与玫瑰花、玉兰花、桃花、木槿花混合提取液二者配比使用占所述护肤品重量百分比为2-25%。一种美白保湿护肤品，其特征在于，含有上述微生物发酵复方组合物，或上述制备方法制得的微生物发酵复方组合物。按上述方法得到的微生物发酵复方组合物可以作为添加成分，应用于护肤品。所述护肤品可以是如乳、膏、霜、水、凝胶类、粉、喷剂、面膜、皂等剂型。所述的美白保湿护肤品还可以含有美白剂、保湿剂、抗氧化剂、表面活性剂、醇类化合物的至少一种。对于产品中各原料组分：《生草药性备要》称三七茎叶味辛，治折伤跌扑出血，敷么即止，青肿经夜即散，余功同根；三七花甘、凉、清热、平肝、降压，常用于治疗高血压、头昏、目眩、耳鸣、急性咽喉炎等。自古来，云南当地的壮族、苗族民间有用三七茎叶、花制作菜肴及将其泡茶饮用的习惯。三七茎叶与花中的皂苷类成分也为其指标性化学成分，目前已有研究对皂苷类的毒理性进行了研究。在三七叶总皂苷的毒性研究中，通过急性毒性试验，刺激性试验，对家兔犬的血压呼吸心率心电图的影响的试验，对小肠的作用的试验以及亚急性毒性试验，结果发现三七叶总皂苷毒性极低及安全范围较大且能提供临床长期用药（高明菊，赵爱，朱琳，崔秀明。三七茎叶新资源食品的研究开发[j]。现代中药研究与实践，2012，26（3）：34-35）。玫瑰花为常用中药，性温，味甘，微苦。用玫瑰花提炼的精油不仅用于蜜饯、糕点的制作，并在化妆品生产中作为化妆品香精使用，目前在烟草加香中亦得到应用。目前已发现的化学成分中有芳樟醇、乙醇苯乙酷、丁香酚、香叶醇等。菇烯类化合物和醇类化合物约占精油总量的50%，根据分析测定，在成熟的玫瑰中，含有大量的维生素a、b和c，还有十多种氨基酸、可溶性糖、生物碱，其中vc含量最丰富，此外还含有蛋白质、脂肪、碳水化合物、钙、磷、钾、铁和镁等。玉兰花为木兰科落叶乔木玉兰的花，性味辛、温，具有祛风散寒通窍、宣肺通鼻的功效。可用于头痛、血瘀型痛经、鼻塞、急慢性鼻窦炎、过敏性鼻炎等症。现代药理学研究表明，玉兰花对常见皮肤真菌有抑制作用。在早春三月开放，鲜用或晒干用。玉兰花是名贵的观赏植物，其花朵大，花形俏丽，开放时溢发幽香。其花瓣可供食用，肉质较厚，具特有清香，清代《花镜》谓：“其（花）瓣择洗清洁，拖面麻油煎食极佳，或蜜浸亦可。”玉兰花含有挥发油，其中主要为柠檬醛、丁香油酸等，还含有木兰花碱、生物碱、望春花素、癸酸、芦丁、油酸、维生素a等成分，具有一定的药用价值。桃花是我国传统的美容养颜佳品，其美白功效在我国很早就得到了广泛的认可。在现存最早的中药学著作《神农本草经》中称其具有“令人好颜色”之功效；宋代官修方书《太平圣惠方》记载：“取桃花阴干研末加冬瓜子研末等份调蜜敷面可治雀斑、黑斑、黑痣”；葛洪《肘后备急方》也有“桃花令人面白，细腰身”等记载；民间更有“桃花增白方”、“桃花美颜粥”等验方用于神色黯黑或面部有黑斑、妊娠色素斑、老年斑者，有润泽皮肤、白净脸皮之作用。木槿花，为锦葵科木槿属落叶灌木或小乔木，其花、果、根、叶和皮均可入药。木槿花不仅具有观赏价值，而且还具有食用和药用价值。木槿花含有蛋白质、纤维素、胡萝卜素、多种维生素等大量人体所需营养成分和钙、镁、锌、铜、磷、钾、硒、铬等微量元素，并含有肥皂草苷、异牡荆素、皂苷、黄酮类化合物等，具有抗炎、降血脂、抑菌等作用。此外，木槿花中还含有植物多酚类成分，具有相当的抗氧化活性。本发明所达到的有益效果：（1）本发明不同组别产品均表现出一定的吸湿性，并且二者配比使用后，效果较单独使用好，并且在部分配比条件下，吸湿效果由于芦荟粉，证实本发明不同配比产品具有较好的保湿效果。对于保湿性效果而言，本发明不同组别产品均表现出一定的保湿效果，并且二者配比使用后，效果较单独使用好，而且在部分配比条件下，保湿效果与芦荟粉相当，证实本发明不同配比产品具有较好的保湿效果.（2）本发明在未添加其他成分的前提下，表现出良好的美白与保湿效果，为天然动植物研发化妆品又提供了一种途径与思路。（3）在本发明实现所述效果的基础上，本发明也为三七茎叶的综合开发利用提供一种借鉴。具体实施方式具体实施例种涉及的实验旨在结合实际对本发明进行说明。1、三七茎叶发酵液制备实施例1称取重量份三七茎叶50g，粉碎成粗粉，与辅料麸皮按8:3比例混匀灭菌，加入3%啤酒酵母45℃发酵3天，50%乙醇70℃提取1次，每次1h，过滤取上清液，将所得上清液在115℃下，高压灭菌20min使菌失活，将灭菌后的发酵液在12000r/min下离心30min，收集上清液，减压浓缩，得三七茎叶发酵液。具体的啤酒酵母菌液培养等步骤按照本领域常规方法进行。对所得三七茎叶发酵液采用分光光度法测定，三七茎叶总黄酮含量为2.04%，总皂苷类含量为5.32%。实施例2称取重量份三七茎叶50g，粉碎成粗粉，与辅料麸皮按7:3比例混匀灭菌，加入5%啤酒酵母45℃发酵5天，70%乙醇70℃提取1次，每次1h，过滤取上清液，将所得上清液在115℃下，高压灭菌20min使菌失活，将灭菌后的发酵液在12000r/min下离心30min，收集上清液，减压浓缩，得三七茎叶发酵液。具体的啤酒酵母菌液培养等步骤按照本领域常规方法进行。对所得三七茎叶发酵液采用分光光度法测定，三七茎叶总黄酮含量为2.50%，总皂苷类含量为6.21%。实施例3称取重量份三七茎叶100g，粉碎成粗粉，与辅料麸皮按7:3比例混匀灭菌，加入5%啤酒酵母45℃发酵5天，60%乙醇70℃提取1次，每次1h，过滤取上清液，将所得上清液在115℃下，高压灭菌20min使菌失活，将灭菌后的发酵液在12000r/min下离心30min，收集上清液，减压浓缩，得三七茎叶发酵液。具体的啤酒酵母菌液培养等步骤按照本领域常规方法进行。对所得三七茎叶发酵液采用分光光度法测定，三七茎叶总黄酮含量为2.45%，总皂苷类含量为6.68%。实施例4称取重量份三七茎叶100g，粉碎成粗粉，与辅料麸皮按8:3比例混匀灭菌，加入5%啤酒酵母48℃发酵5天，70%乙醇70℃提取2次，每次1h，过滤取上清液，将所得上清液在120℃下，高压灭菌5min使菌失活，将灭菌后的发酵液在15000r/min下离心20min，收集上清液，减压浓缩，得三七茎叶发酵液。具体的啤酒酵母菌液培养等步骤按照本领域常规方法进行。对所得三七茎叶发酵液采用分光光度法测定，三七茎叶总黄酮含量为2.70%，总皂苷类含量为7.02%。实施例5称取重量份三七茎叶100g，粉碎成粗粉，与辅料麸皮按8:3比例混匀灭菌，加入3%啤酒酵母48℃发酵3天，70%乙醇70℃提取2次，每次1h，过滤取上清液，将所得上清液在120℃下，高压灭菌5min使菌失活，将灭菌后的发酵液在15000r/min下离心20min，收集上清液，减压浓缩，得三七茎叶发酵液。具体的啤酒酵母菌液培养等步骤按照本领域常规方法进行。对所得三七茎叶发酵液采用分光光度法测定，三七茎叶总黄酮含量为2.30%，总皂苷类含量为5.94%。实施例6称取重量份三七茎叶100g，粉碎成粗粉，与辅料麸皮按7:3比例混匀灭菌，加入5%啤酒酵母47℃发酵3天，70%乙醇70℃提取2次，每次1h，过滤取上清液，将所得上清液在120℃下，高压灭菌5min使菌失活，将灭菌后的发酵液在15000r/min下离心20min，收集上清液，减压浓缩，得三七茎叶发酵液。具体的啤酒酵母菌液培养等步骤按照本领域常规方法进行。对所得三七茎叶发酵液采用分光光度法测定，三七茎叶总黄酮含量为2.25%，总皂苷类含量为5.87%。实施例7称取重量份三七茎叶100g，粉碎成粗粉，与辅料麸皮按一定比例混匀灭菌，加入5%微生物46℃发酵4天，65%乙醇70℃提取2次，每次1h，过滤取上清液，将所得上清液在115℃下，高压灭菌15min使菌失活，将灭菌后的发酵液在12000r/min下离心20min，收集上清液，减压浓缩，得三七茎叶发酵液。具体的啤酒酵母菌液培养等步骤按照本领域常规方法进行。对所得三七茎叶发酵液采用分光光度法测定，三七茎叶总黄酮含量为2.69%，总皂苷类含量为7.12%。2、玫瑰花、玉兰花、桃花、木槿花混合提取液制备实施例8将玫瑰花、玉兰花、桃花、木槿花各50g，粉碎成粗粉，混匀，加入5倍去离子水，加热至70℃浸润20min，200w超声提取30min，过滤，回收滤液，得玫瑰花、玉兰花、桃花、木槿花混合提取液。采用分光光度法测定，花中总多酚含量为3.41%。实施例9将玫瑰花、玉兰花、桃花、木槿花各100g，粉碎成粗粉，混匀，加入5倍去离子水，加热至70℃浸润30min，200w超声提取30min，过滤，回收滤液，得玫瑰花、玉兰花、桃花、木槿花混合提取液。采用分光光度法测定，花中总多酚含量为3.86%。实施例10将玫瑰花、玉兰花、桃花、木槿花各100g，粉碎成粗粉，混匀，加入10倍去离子水，加热至60℃浸润30min，100w超声提取20min，过滤，回收滤液，得玫瑰花、玉兰花、桃花、木槿花混合提取液。采用分光光度法测定，花中总多酚含量为3.18%。实施例11将玫瑰花、玉兰花、桃花、木槿花各100g，粉碎成粗粉，混匀，加入10倍去离子水，加热至70℃浸润30min，200w超声提取30min，过滤，回收滤液，得玫瑰花、玉兰花、桃花、木槿花混合提取液。采用分光光度法测定，花中总多酚含量为3.95%。实施例12将玫瑰花、玉兰花、桃花、木槿花各100g，粉碎成粗粉，混匀，加入8倍去离子水，加热至55℃浸润30min，160w超声提取60min，过滤，回收滤液，得玫瑰花、玉兰花、桃花、木槿花混合提取液。采用分光光度法测定，花中总多酚含量为4.06%。3、活性测试实施例133.1刺激性实验根据gb7919～87《化妆品安全性评价程序和方法》中相关标准，本发明经动物皮外实验验证，对皮肤无刺激性，无损伤。实验样品分别选自实施例7与实施例12所得。3.2不同配比三七茎叶发酵液与玫瑰花、玉兰花、桃花、木槿花混合提取液体外酪氨酸酶活性抑制实验。实验样品分别选自实施例7与实施例12所得。（抑制酪氨酸酶活性测试，实验方法参见cn201610382618第72-87段，与本课题组在先申请文件中涉及评价方法一致）表1三七茎叶发酵液与玫瑰花、玉兰花、桃花、木槿花混合提取液配比关系组别三七茎叶发酵液玫瑰花、玉兰花、桃花、木槿花混合提取液101021003734375113.2.1溶液配制（1）pbs溶液（ph＝6.8，0.1mol/l）)：17.91g十二水磷酸氢二钠溶于去离子水中，用去离子水定容至500ml；7.8g二水磷酸二氢钠溶于去离子水中，用去离子水定容至500ml。分别取92.6ml十二水磷酸氢二钠和107.4ml二水磷酸二氢钠配制成200mlph＝6.8的磷酸缓冲溶液。（2）l-酪氨酸溶液：0.05gl-酪氨酸溶于35ml0.1mol/l的hcl中，用ph6.8的pbs（0.1mol/l）缓冲液定容至100ml。（3）酪氨酸酶：酶活为100u/ml。3.2.2试样配制将组别1-5配比所得产品干燥至恒重后，用去离子水稀释，配成浓度为0.05%、0.1%、0.2%、0.4%、0.8%的样品溶液，进行如下试验。3.2.3试验方法按照表1加样，不加酪氨酸酶。表1酪氨酸酶活性抑制实验配制表空白对照空白样品对照样品pbs溶液2.52.01.51.0l-酪氨酸1.01.01.01.0酪氨酸酶--0.5--0.5样品----1.01.0合计3.53.53.53.5将溶液置于37℃水浴中恒温10min。加入酪氨酸酶，将溶液置于37℃水浴中恒温10min后，于475nm下测量其吸光度值，并与熊果苷进行比较。酪氨酸酶活性抑制率=（空白吸光度值-样品吸光度值）/空白吸光度值×100抑制率实验结果如下：组别0.05%0.1%0.2%0.4%0.8%1506490929125872949596372909296954688996949256590949395结果显示组别1-5配比原料均有一定的酪氨酸酶活性抑制率。单独使用三七茎叶发酵液或玫瑰花、玉兰花、桃花、木槿花混合提取液时，低浓度的上述成分所表现出的酪氨酸酶活性抑制能力较低；但将其按一定配比混合后，低浓度即可起到较好的酪氨酸酶活性抑制作用，显示二者配比使用时可能存在协同效果。3.3保湿效果评价采用体外称重法，以玻璃板和医用透气胶带为仿角质层、表皮等生物材料，在上面直接均匀涂布约干燥至恒重的1g本发明组别1-5中的产品，芦荟粉作为阳性对照，每份样品分别放置10份测定平均值。将上述样品置于干燥器中，相对湿度为81%（k2co3饱和液）和43%（kcl饱和液）的干燥器内，室温条件下放置各样品放置4、8、12、24、36h后称量后精确称取各样品质量，根据放置后样品的质量差，吸湿率（%）=100（wn-w0）/w0，式中w0为样品放置前的质量，wn为放置一定时间后的质量。在室温下，精密称取干燥至恒重的本发明组别1-5中的产品各1g，芦荟粉作为阳性对照，分别置于培养皿中，加入质量分数为10%的水，缓慢晃动，使样品能充分吸收水分，置于装有干硅胶的干燥器内，各样品放置4、8、12、24、36h后称量，按下式计算吸湿率：吸湿率（%）=100（hn-h0）/h0，式中h0为样品放置前的质量，hn为放置一定时间后的质量。（杨征，陈雅，伊柔美白霜的保湿性能评价，中国药业，2007年第16卷第3期，第7页）表1本发明产品吸湿性测定（%，相对湿度为43%）48122436组别17.44±1.9516.33±1.6730.33±1.7840.12±1.9548.97±1.99组别28.35±1.8417.89±1.8632.21±2.3134.35±2.3450.01±2.25组别314.63±2.0323.36±2.3138.44±1.9354.22±2.2362.31±2.34组别412.20±2.0420.01±2.0334.31±2.1147.83±2.1455.43±2.22组别513.11±1.9821.89±1.8936.73±2.0448.34±2.0357.74±1.97芦荟粉15.42±2.1424.33±2.3239.95±1.9854.26±2.6560.87±2.44表2本发明产品吸湿性测定（%，相对湿度为81%）48122436组别113.89±1.6620.96±1.7539.16±1.7155.33±1.9164.43±2.01组别215.66±1.8522.53±1.9640.02±1.8757.61±1.9966.02±2.10组别321.33±2.0130.88±2.1648.13±2.3468.39±2.1685.25±2.35组别418.12±1.9827.45±2.0143.33±2.1261.32±2.2378.91±2.16组别520.23±1.8829.6±1.9847.02±2.0463.58±2.1279.32±2.03芦荟粉20.03±2.0328.12±2.0445.33±1.9865.75±2.0880.61±2.11表3本发明产品保湿性测定（%）48122436组别190.02±1.7880.14±1.8771.23±1.6562.45±1.3555.36±20.6组别291.23±1.7481.87±1.9573.76±1.9764.17±1.6657.63±1.94组别394.62±1.6383.98±1.7979.46±1.6470.54±1.9461.37±2.11组别492.07±1.8881.63±1.8675.85±1.5968.61±2.0159.45±2.99组别593.35±1.7983.45±1.9577.12±1.7969.21±1.8860.12±2.31芦荟粉95.51±1.9784.12±1.9180.56±1.8770.87±1.9660.35±2.21从上述实验结果可看出，相较于芦荟粉，本发明不同组别产品均表现出一定的吸湿性，并且二者配比使用后，效果较单独使用好，并且在部分配比条件下，吸湿效果由于芦荟粉，证实本发明不同配比产品具有较好的保湿效果。对于保湿性效果而言，本发明不同组别产品均表现出一定的保湿效果，并且二者配比使用后，效果较单独使用好，而且在部分配比条件下，保湿效果与芦荟粉相当，证实本发明不同配比产品具有较好的保湿效果。3.4不同配比条件下所得产品感官评价对不同配比下所得产品感官进行评价，实验结果证实，在三七茎叶发酵液与玫瑰花、玉兰花、桃花、木槿花混合提取液配比在8:2-4:6之间具有清香气味，无刺激性气味产生，证实玫瑰花、玉兰花、桃花、木槿花混合提取液还可用作化妆品气味调节剂。当前第1页12