用于拟肽大环化合物的伴随诊断工具的制作方法

本申请要求2016年3月21日提交的第62/311,071号美国临时申请的权益，该美国临时申请通过引用整体并入本文。
背景技术：
：肿瘤抑制物p53响应于dna损伤和细胞应激而介导细胞周期停滞、衰老和凋亡，以阻止癌症的发展。e3泛素连接酶mdm2(hdm2)经由泛素化-蛋白酶体途径负调节p53功能。由缺失、突变或mdm2过表达引起的p53活性丧失是人类癌症中最常见的缺陷。技术实现要素：在一些实施方案中，本发明提供了一种治疗有需要的受试者的病况的方法，该方法包括：a)进行测定以确定该受试者中调节p53途径的基因的突变状态，以及b)向该受试者施用治疗有效量的拟肽大环化合物或其药学上可接受的盐。援引并入本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，如同明确地和分别地指出各个单独的出版物、专利或专利申请通过引用并入本文。附图说明在所附的权利要求书中详细地阐述了本发明的新特征。通过参考以下对利用本发明原理的说明性实施方案加以阐述的详细说明和附图，将会获得对本发明的特征和优点的更好的理解，在这些附图中：图1描述了fmoc-me-6-氯-色氨酸和fmoc-6-氯-色氨酸的合成。图2示出了人野生型p53编码序列和蛋白质序列。图3示出了与mdmx(primaryswissprot数据库登录号q7zuw7，条目mdm4_danre)复合的拟肽大环化合物46(表14)(一种p53拟肽大环化合物)的结构。图4示出了与mdmx(primaryswissprot数据库登录号q7zuw7，条目mdm4_danre)结合的p53拟肽大环化合物142(表14)和sp43的叠加结构。图5a-f描述了针对示例性本发明拟肽大环化合物的细胞活力分析、竞争性elisa测定、grip测定、kd数据、p21活化试验、荧光偏振竞争性结合和圆螺旋度数据的结果。图6a-d提供了来自多种拟肽大环化合物的数据。图7a-b提供了来自多种拟肽大环化合物的数据。图8示出了拟肽大环化合物sp154对小鼠mcf-7异种移植模型中肿瘤生长的影响。图9示出了拟肽大环化合物sp249对小鼠mcf-7异种移植模型中肿瘤生长的影响。图10示出了拟肽大环化合物sp315对小鼠mcf-7异种移植模型中肿瘤生长的影响。图11示出了sp154的点突变sp252对小鼠mcf-7异种移植模型中肿瘤生长的影响。图12示出了化合物1对人突变型和野生型p53的半数最大有效浓度(ec50)。具体实施方式人转录因子蛋白质p53响应于dna损伤和细胞应激而诱导细胞周期停滞和凋亡，从而在保护细胞免于恶性转化方面发挥关键作用。e3遍在蛋白连接酶mdm2(也称为hdm2)通过中和p53反式激活活性的直接结合相互作用而负调节p53的功能，导致p53蛋白质从核输出，并经由遍在蛋白化-蛋白酶体途径使p53降解。由缺失、突变或mdm2过表达而引起的p53活性丧失是人类癌症的最常见缺陷。表达野生型p53的肿瘤易受到稳定或提高活性p53浓度的药剂的攻击。在此背景下，对mdm2活性的抑制可在体外和体内恢复p53活性并使癌细胞再次对凋亡敏感。mdmx(mdm4)最近已被鉴定为p53的相似的负调节剂，并且研究显示在mdm2和mdmx的p53结合界面之间具有显著的结构同源性。p53-mdm2和p53-mdmx的蛋白质-蛋白质相互作用由p53的同一个15个残基的α螺旋反式激活域介导，所述α螺旋反式激活域插入mdm2和mdmx的表面上的疏水性裂隙内。p53的这个域内的三个残基(f19、w23和l26)对与mdm2和mdmx的结合至关重要。本文提供了能调节p53活性的基于p53的化合物。本文还提供了能抑制p53、mdm2和/或mdmx蛋白之间相互作用的基于p53的拟肽大环化合物。此外，本文提供了能够用于治疗包括但不限于癌症和其他高增生性疾病的疾病的基于p53的拟肽大环化合物。如本文所用的，术语“大环化合物”是指这样的分子：其具有包括由至少9个共价键合的原子形成的环或环形的化学结构。如本文所用的，术语“拟肽大环化合物”或“交联的多肽”是指包含通过多个肽键连接的多个氨基酸残基和至少一个大环形成连接体的化合物，所述大环形成连接体在第一天然存在的或非天然存在的氨基酸残基(或类似物)与同一分子内的第二天然存在的或非天然存在的氨基酸残基(或类似物)之间形成大环。拟肽大环化合物包括其中大环形成连接体将第一氨基酸残基(或类似物)的α碳连接至第二氨基酸残基(或类似物)的α碳的实施方案。拟肽大环化合物任选地包含处于一个或多个氨基酸残基和/或氨基酸类似物残基之间的一个或多个非肽键，且除了形成大环化合物的任意残基外，任选地还包含一个或多个非天然存在的氨基酸残基或氨基酸类似物残基。当在拟肽大环化合物的背景下提及时，“相应的非交联多肽”被理解为涉及与该大环化合物长度相同并且包含对应于该大环化合物的野生型序列的等同天然氨基酸的多肽。如本文所用的，术语“稳定性”是指如通过圆二色性、nmr或另一种生物物理测量法测量的，本发明拟肽大环化合物在溶液中维持确定的二级结构，或在体外或体内对蛋白水解降解作用的抗性。本发明预期的二级结构的非限制性例子是α-螺旋、β-转角和β-折叠。如本文所用的，术语“螺旋稳定性”是指如通过圆二色性或nmr测量的，本发明拟肽大环化合物维持α-螺旋结构。例如，在一些实施方案中，与相应的非交联的大环化合物相比，如通过圆二色性确定的，本发明拟肽大环化合物在α-螺旋度上表现出至少1.25、1.5、1.75或2倍的增加。术语“α-氨基酸”或简称“氨基酸”是指同时含有与被称为α-碳的碳结合的氨基和羧基的分子。合适的氨基酸包括但不限于天然存在的氨基酸的d-和l-异构体，以及通过有机合成或其他代谢途径制备的非天然存在的氨基酸。除非上下文明确说明不是这样，否则本文所用的术语氨基酸旨在包括氨基酸类似物。术语“天然存在的氨基酸”是指在自然界合成的肽中通常发现的20种氨基酸中的任一种，已知其单字母缩写为a、r、n、c、d、q、e、g、h、i、l、k、m、f、p、s、t、w、y和v。下表示出了天然氨基酸的性质一览：“疏水性氨基酸”包括但不限于小疏水性氨基酸和大疏水性氨基酸。“小疏水性氨基酸”为甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸及其类似物。“大疏水性氨基酸”为缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸及其类似物。“极性氨基酸”为丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、酪氨酸及其类似物。“带电荷氨基酸”为赖氨酸、精氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸及其类似物。术语“氨基酸类似物”是指在结构上类似于氨基酸并且在拟肽大环化合物的形成中可代替氨基酸的分子。氨基酸类似物包括但不限于β-氨基酸和其中氨基或羧基被相似反应性基团取代(例如，用仲胺或叔胺取代伯胺，或用酯取代羧基)的氨基酸。术语“氨基酸类似物”或“非天然氨基酸”是指在结构上与氨基酸类似并且在拟肽大环化合物的形成中能够置换氨基酸的分子。氨基酸类似物包括但不限于除了在氨基与羧基之间包含一个或多个额外的亚甲基(例如，α-氨基β-羧酸)或者氨基或羧基被类似反应性基团置换(例如，伯胺被仲胺或叔胺置换，或者羧基被酯置换)以外，在结构上与本文所定义的氨基酸相同的化合物。非天然氨基酸包括以下结构：“非必需”氨基酸残基是相对于多肽的野生型序列可能发生改变而不消除或基本不改变其基本生物学或生物化学活性(例如，受体结合或激活)的残基。“必需”氨基酸残基是当相对于多肽的野生型序列发生改变时导致多肽的基本生物学或生物化学活性消除或基本消除的残基。“保守氨基酸置换”是其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基所替代的氨基酸置换。本领域中已定义了具有相似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如，k、r、h)、具有酸性侧链的氨基酸(例如，d、e)、具有不带电荷的极性侧链的氨基酸(例如，g、n、q、s、t、y、c)、具有非极性侧链的氨基酸(例如，a、v、l、i、p、f、m、w)、具有β分支的侧链的氨基酸(例如，t、v、i)和具有芳香族侧链的氨基酸(例如，y、f、w、h)。因此，多肽中预测的非必需氨基酸残基例如优选被来自同一侧链家族的另一种氨基酸残基所替代。可接受的置换的其他例子是基于电子等排考虑(例如，正亮氨酸取代甲硫氨酸)或其他性质(例如2-噻吩丙氨酸取代苯丙氨酸)的置换。氨基酸类似物包括β-氨基酸类似物。β-氨基酸类似物的实例包括但不限以下：环状β-氨基酸类似物；β-丙氨酸；(r)-β-苯丙氨酸；(r)-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-乙酸；(r)-3-氨基-4-(1-萘基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-(2,4-二氯苯基)丁酸；(r)-3-氨基-4-(2-氯苯基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-(2-氰基苯基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-(2-氟苯基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-(2-呋喃基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-(2-甲苯基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-(2-萘基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-(2-噻吩基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-(2-三氟甲苯基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-(3,4-二氯苯基)丁酸；(r)-3-氨基-4-(3,4-二氟苯基)丁酸；(r)-3-氨基-4-(3-苯并噻吩基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-(3-氯苯基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-(3-氰基苯基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-(3-氟苯基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-(3-甲苯基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-(3-吡啶基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-(3-噻吩基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-(3-三氟甲苯基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-(4-溴苯基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-(4-氯苯基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-(4-氰基苯基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-(4-氟苯基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-(4-碘苯基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-(4-甲苯基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-(4-硝基苯基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-(4-吡啶基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-(4-三氟甲苯基)-丁酸；(r)-3-氨基-4-五氟-苯基丁酸；(r)-3-氨基-5-己烯酸；(r)-3-氨基-5-己炔酸；(r)-3-氨基-5-苯基戊酸；(r)-3-氨基-6-苯基-5-己烯酸；(s)-1,2,3,4-四氢-异喹啉-3-乙酸；(s)-3-氨基-4-(1-萘基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-(2,4-二氯苯基)丁酸；(s)-3-氨基-4-(2-氯苯基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-(2-氰基苯基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-(2-氟苯基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-(2-呋喃基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-(2-甲苯基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-(2-萘基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-(2-噻吩基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-(2-三氟甲苯基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-(3,4-二氯苯基)丁酸；(s)-3-氨基-4-(3,4-二氟苯基)丁酸；(s)-3-氨基-4-(3-苯并噻吩基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-(3-氯苯基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-(3-氰基苯基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-(3-氟苯基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-(3-甲苯基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-(3-吡啶基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-(3-噻吩基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-(3-三氟甲苯基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-(4-溴苯基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-(4-氯苯基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-(4-氰基苯基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-(4-氟苯基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-(4-碘苯基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-(4-甲苯基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-(4-硝基苯基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-(4-吡啶基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-(4-三氟甲苯基)-丁酸；(s)-3-氨基-4-五氟-苯基丁酸；(s)-3-氨基-5-己烯酸；(s)-3-氨基-5-己炔酸；(s)-3-氨基-5-苯基戊酸；(s)-3-氨基-6-苯基-5-己烯酸；1,2,5,6-四氢吡啶-3-甲酸；1,2,5,6-四氢吡啶-4-甲酸；3-氨基-3-(2-氯苯基)-丙酸；3-氨基-3-(2-噻吩基)-丙酸；3-氨基-3-(3-溴苯基)-丙酸；3-氨基-3-(4-氯苯基)-丙酸；3-氨基-3-(4-甲氧苯基)-丙酸；3-氨基-4,4,4-三氟-丁酸；3-氨基己二酸；d-β-苯丙氨酸；β-亮氨酸；l-β-高丙氨酸；l-β-高天冬氨酸γ-苄酯；l-β-高谷氨酸δ-苄酯；l-β-高异亮氨酸；l-β-高亮氨酸；l-β-高甲硫氨酸；l-β-高苯丙氨酸；l-β-高脯氨酸；l-β-高色氨酸；l-β-高缬氨酸；l-nω-苄氧羰基-β-高赖氨酸；nω-l-β-高精氨酸；o-苄基-l-β-高羟脯氨酸；o-苄基-l-β-高丝氨酸；o-苄基-l-β-高苏氨酸；o-苄基-l-β-高酪氨酸；γ-三苯甲基-l-β-高天冬酰胺；(r)-β-苯丙氨酸；l-β-高天冬氨酸γ-叔丁酯；l-β-高谷氨酸δ-叔丁酯；l-nω-β-高赖氨酸；nδ-三苯甲基-l-β-高谷氨酰胺；nω-2,2,4,6,7-五甲基-二氢苯并呋喃-5-磺酰基-l-β-高精氨酸；o-叔丁基-l-β-高羟基-脯氨酸；o-叔丁基-l-β-高丝氨酸；o-叔丁基-l-β-高苏氨酸；o-叔丁基-l-β-高酪氨酸；2-氨基环戊烷羧酸；和2-氨基环己烷羧酸。氨基酸类似物包括丙氨酸、缬氨酸、甘氨酸或亮氨酸的类似物。丙氨酸、缬氨酸、甘氨酸或亮氨酸的氨基酸类似物的实例包括但不限于以下：α-甲氧基甘氨酸；α-烯丙基-l-丙氨酸；α-氨基异丁酸；α-甲基-亮氨酸；β-(1-萘基)-d-丙氨酸；β-(1-萘基)-l-丙氨酸；β-(2-萘基)-d-丙氨酸；β-(2-萘基)-l-丙氨酸；β-(2-吡啶基)-d-丙氨酸；β-(2-吡啶基)-l-丙氨酸；β-(2-噻吩基)-d-丙氨酸；β-(2-噻吩基)-l-丙氨酸；β-(3-苯并噻吩基)-d-丙氨酸；β-(3-苯并噻吩基)-l-丙氨酸；β-(3-吡啶基)-d-丙氨酸；β-(3-吡啶基)-l-丙氨酸；β-(4-吡啶基)-d-丙氨酸；β-(4-吡啶基)-l-丙氨酸；β-氯-l-丙氨酸；β-氰基-l-丙氨酸；β-环己基-d-丙氨酸；β-环己基-l-丙氨酸；β-环戊烯-1-基-丙氨酸；β-环戊基-丙氨酸；β-环丙基-l-ala-oh·二环己基铵盐；β-叔丁基-d-丙氨酸；β-叔丁基-l-丙氨酸；γ-氨基丁酸；l-α,β-二氨基丙酸；2,4-二硝基-苯基甘氨酸；2,5-二氢-d-苯基甘氨酸；2-氨基-4,4,4-三氟丁酸；2-氟-苯基甘氨酸；3-氨基-4,4,4-三氟-丁酸；3-氟-缬氨酸；4,4,4-三氟-缬氨酸；4,5-脱氢-l-leu-oh·二环己基铵盐；4-氟-d-苯基甘氨酸；4-氟-l-苯基甘氨酸；4-羟基-d-苯基甘氨酸；5,5,5-三氟-亮氨酸；6-氨基己酸；环戊基-d-gly-oh·二环己基铵盐；环戊基-gly-oh·二环己基铵盐；d-α,β-二氨基丙酸；d-α-氨基丁酸；d-α-叔丁基甘氨酸；d-(2-噻吩基)甘氨酸；d-(3-噻吩基)甘氨酸；d-2-氨基己酸；d-2-茚满基甘氨酸；d-烯丙基甘氨酸·二环己基铵盐；d-环己基甘氨酸；d-正缬氨酸；d-苯基甘氨酸；β-氨基丁酸；β-氨基异丁酸；(2-溴苯基)甘氨酸；(2-甲氧基苯基)甘氨酸；(2-甲苯基)甘氨酸；(2-噻唑基)甘氨酸；(2-噻吩基)甘氨酸；2-氨基-3-(二甲氨基)-丙酸；l-α,β-二氨基丙酸；l-α-氨基丁酸；l-α-叔丁基甘氨酸；l-(3-噻吩基)甘氨酸；l-2-氨基-3-(二甲氨基)-丙酸；l-2-氨基己酸二环己基-铵盐；l-2-茚满基甘氨酸；l-烯丙基甘氨酸·二环己基铵盐；l-环己基甘氨酸；l-苯基甘氨酸；l-炔丙基甘氨酸；l-正缬氨酸；n-α-氨基甲基-l-丙氨酸；d-α,γ-二氨基丁酸；l-α,γ-二氨基丁酸；β-环丙基-l-丙氨酸；(n-β-(2,4-二硝基苯基))-l-α,β-二氨基丙酸；(n-β-1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代亚环己-1-基)乙基)-d-α,β-二氨基丙酸；(n-β-1-(4,4-二甲基-2,6-二氧环己-1-亚基)乙基)-l-α,β-二氨基丙酸；(n-β-4-甲基三苯甲基)-l-α,β-二氨基丙酸；(n-β-烯丙氧羰基)-l-α,β-二氨基丙酸；(n-γ-1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代环己-1-亚基)乙基)-d-α,γ-二氨基丁酸；(n-γ-1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代环己-1-亚基)乙基)-l-α,γ-二氨基丁酸；(n-γ-4-甲基三苯甲基)-d-α,γ-二氨基丁酸；(n-γ-4-甲基三苯甲基)-l-α,γ-二氨基丁酸；(n-γ-烯丙氧羰基)-l-α,γ-二氨基丁酸；d-α,γ-二氨基丁酸；4,5-脱氢-l-亮氨酸；环戊基-d-gly-oh；环戊基-gly-oh；d-烯丙基甘氨酸；d-环己基高丙氨酸；l-1-芘基丙氨酸；l-2-氨基己酸；l-烯丙基甘氨酸；l-环己基高丙氨酸；和n-(2-羟基-4-甲氧基-bzl)-gly-oh。氨基酸类似物还包括精氨酸或赖氨酸的类似物。精氨酸和赖氨酸的氨基酸类似物的实例包括但不限于以下：瓜氨酸；l-2-氨基-3-胍基丙酸；l-2-氨基-3-脲基丙酸；l-瓜氨酸；lys(me)2-oh；lys(n3)-oh；nδ-苄氧羰基-l-鸟氨酸；nω-硝基-d-精氨酸；nω-硝基-l-精氨酸；α-甲基-鸟氨酸；2,6-二氨基庚二酸；l-鸟氨酸；(nδ-1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代-环己-1-亚基)乙基)-d-鸟氨酸；(nδ-1-(4,4-二甲基-2,6-二氧-环己-1-亚基)乙基)-l-鸟氨酸；(nδ-4-甲基三苯甲基)-d-鸟氨酸；(nδ-4-甲基三苯甲基)-l-鸟氨酸；d-鸟氨酸；l-鸟氨酸；arg(me)(pbf)-oh；arg(me)2-oh(不对称的)；arg(me)2-oh(对称的)；lys(ivdde)-oh；lys(me)2-oh·hcl；lys(me)3-oh氯化物；nω-硝基-d-精氨酸；和nω-硝基-l-精氨酸。氨基酸类似物包括天冬氨酸或谷氨酸的类似物。天冬氨酸和谷氨酸的氨基酸类似物的实例包括但不限于以下：α-甲基-d-天冬氨酸；α-甲基-谷氨酸；α-甲基-l-天冬氨酸；γ-亚甲基-谷氨酸；(n-γ-乙基)-l-谷氨酰胺；[n-α-(4-氨基苯甲酰基)]-l-谷氨酸；2,6-二氨基庚二酸；l-α-氨基辛二酸；d-2-氨基己二酸；d-α-氨基辛二酸；α-氨基庚二酸；亚氨基二乙酸；l-2-氨基己二酸；苏-β-甲基-天冬氨酸；γ-羧基-d-谷氨酸γ,γ-二-叔丁酯；γ-羧基-l-谷氨酸γ,γ-二-叔丁酯；glu(oall)-oh；l-asu(otbu)-oh；和焦谷氨酸。氨基酸类似物包括半胱氨酸和甲硫氨酸的类似物。半胱氨酸和甲硫氨酸的氨基酸类似物的实例包括但不限于cys(法呢基)-oh、cys(法呢基)-ome、α-甲基-甲硫氨酸、cys(2-羟乙基)-oh、cys(3-氨丙基)-oh、2-氨基-4-(乙硫基)丁酸、丁硫氨酸、丁硫氨酸亚砜胺、乙硫氨酸、甲硫氨酸甲基锍氯化物、硒代甲硫氨酸、磺丙氨酸、[2-(4-吡啶基)乙基]-dl-青霉胺、[2-(4-吡啶基)乙基]-l-半胱氨酸、4-甲氧苄基-d-青霉胺、4-甲氧苄基-l-青霉胺、4-甲基苄基-d-青霉胺、4-甲基苄基-l-青霉胺、苄基-d-半胱氨酸、苄基-l-半胱氨酸、苄基-dl-高半胱氨酸、氨甲酰基-l-半胱氨酸、羧乙基-l-半胱氨酸、羧甲基-l-半胱氨酸、二苯基甲基-l-半胱氨酸、乙基-l-半胱氨酸、甲基-l-半胱氨酸、叔丁基-d-半胱氨酸、三苯甲基-l-高半胱氨酸、三苯甲基-d-青霉胺、胱硫醚、高胱氨酸、l-高胱氨酸、(2-氨基乙基)-l-半胱氨酸、硒代-l-胱氨酸、胱硫醚、cys(stbu)-oh和乙酰氨甲基-d-青霉胺。氨基酸类似物包括苯丙氨酸和酪氨酸的类似物。苯丙氨酸和酪氨酸的氨基酸类似物的实例包括β-甲基-苯丙氨酸、β-羟基苯丙氨酸、α-甲基-3-甲氧基-dl-苯丙氨酸、α-甲基-d-苯丙氨酸、α-甲基-l-苯丙氨酸、1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酸、2,4-二氯-苯丙氨酸、2-(三氟甲基)-d-苯丙氨酸、2-(三氟甲基)-l-苯丙氨酸、2-溴-d-苯丙氨酸、2-溴-l-苯丙氨酸、2-氯-d-苯丙氨酸、2-氯-l-苯丙氨酸、2-氰基-d-苯丙氨酸、2-氰基-l-苯丙氨酸、2-氟-d-苯丙氨酸、2-氟-l-苯丙氨酸、2-甲基-d-苯丙氨酸、2-甲基-l-苯丙氨酸、2-硝基-d-苯丙氨酸、2-硝基-l-苯丙氨酸、2,4,5-三羟基-苯丙氨酸、3,4,5-三氟-d-苯丙氨酸、3,4,5-三氟-l-苯丙氨酸、3,4-二氯-d-苯丙氨酸、3,4-二氯-l-苯丙氨酸、3,4-二氟-d-苯丙氨酸、3,4-二氟-l-苯丙氨酸、3,4-二羟基-l-苯丙氨酸、3,4-二甲氧基-l-苯丙氨酸、3,5,3’-三碘-l-甲状腺原氨酸、3,5-二碘-d-酪氨酸、3,5-二碘-l-酪氨酸、3,5-二碘-l-甲状腺原氨酸、3-(三氟甲基)-d-苯丙氨酸、3-(三氟甲基)-l-苯丙氨酸、3-氨基-l-酪氨酸、3-溴-d-苯丙氨酸、3-溴-l-苯丙氨酸、3-氯-d-苯丙氨酸、3-氯-l-苯丙氨酸、3-氯-l-酪氨酸、3-氰基-d-苯丙氨酸、3-氰基-l-苯丙氨酸、3-氟-d-苯丙氨酸、3-氟-l-苯丙氨酸、3-氟-酪氨酸、3-碘-d-苯丙氨酸、3-碘-l-苯丙氨酸、3-碘-l-酪氨酸、3-甲氧基-l-酪氨酸、3-甲基-d-苯丙氨酸、3-甲基-l-苯丙氨酸、3-硝基-d-苯丙氨酸、3-硝基-l-苯丙氨酸、3-硝基-l-酪氨酸、4-(三氟甲基)-d-苯丙氨酸、4-(三氟甲基)-l-苯丙氨酸、4-氨基-d-苯丙氨酸、4-氨基-l-苯丙氨酸、4-苯甲酰基-d-苯丙氨酸、4-苯甲酰基-l-苯丙氨酸、4-双(2-氯乙基)氨基-l-苯丙氨酸、4-溴-d-苯丙氨酸、4-溴-l-苯丙氨酸、4-氯-d-苯丙氨酸、4-氯-l-苯丙氨酸、4-氰基-d-苯丙氨酸、4-氰基-l-苯丙氨酸、4-氟-d-苯丙氨酸、4-氟-l-苯丙氨酸、4-碘-d-苯丙氨酸、4-碘-l-苯丙氨酸、高苯丙氨酸、甲状腺氨酸、3,3-二苯丙氨酸、甲状腺原氨酸、乙基-酪氨酸和甲基-酪氨酸。氨基酸类似物包括脯氨酸的类似物。脯氨酸的氨基酸类似物的实例包括但不限于3,4-脱氢-脯氨酸、4-氟-脯氨酸、顺-4-羟基-脯氨酸、噻唑烷-2-甲酸和反-4-氟-脯氨酸。氨基酸类似物包括丝氨酸和苏氨酸的类似物。丝氨酸和苏氨酸的氨基酸类似物的实例包括但不限于3-氨基-2-羟基-5-甲基己酸、2-氨基-3-羟基-4-甲基戊酸、2-氨基-3-乙氧丁酸、2-氨基-3-甲氧丁酸、4-氨基-3-羟基-6-甲基庚酸、2-氨基-3-苄氧丙酸、2-氨基-3-苄氧丙酸、2-氨基-3-乙氧丙酸、4-氨基-3-羟基丁酸和α-甲基丝氨酸。氨基酸类似物包括色氨酸的类似物。色氨酸的氨基酸类似物的实例包括但不限于以下：α-甲基-色氨酸；β-(3-苯并噻吩基)-d-丙氨酸；β-(3-苯并噻吩基)-l-丙氨酸；1-甲基-色氨酸；4-甲基-色氨酸；5-苄氧基-色氨酸；5-溴-色氨酸；5-氯-色氨酸；5-氟-色氨酸；5-羟基-色氨酸；5-羟基-l-色氨酸；5-甲氧基-色氨酸；5-甲氧基-l-色氨酸；5-甲基-色氨酸；6-溴-色氨酸；6-氯-d-色氨酸；6-氯-色氨酸；6-氟-色氨酸；6-甲基-色氨酸；7-苄氧基-色氨酸；7-溴-色氨酸；7-甲基-色氨酸；d-1,2,3,4-四氢-去甲哈尔满-3-甲酸；6-甲氧基-1,2,3,4-四氢去甲哈尔满-1-甲酸；7-氮杂色氨酸；l-1,2,3,4-四氢-去甲哈尔满-3-甲酸；5-甲氧基-2-甲基-色氨酸；和6-氯-l-色氨酸。在一些实施方案中，氨基酸类似物是外消旋的。在一些实施方案中，使用氨基酸类似物的d型异构体。在一些实施方案中，使用氨基酸类似物的l型异构体。在其他实施方案中，氨基酸类似物包含为r或s构型的手性中心。在又一些其他实施方案中，β-氨基酸类似物的氨基基团被诸如叔丁氧羰基(boc基团)、9-芴甲氧羰基(fmoc)、甲苯磺酰基等保护基团取代。在一些其他实施方案中，β-氨基酸类似物的羧酸官能团例如作为其酯衍生物被保护。在一些实施方案中，使用氨基酸类似物的盐。术语“封端基团”是指出现在本发明拟肽大环化合物的多肽链的羧基末端或氨基末端的化学部分。羧基末端的封端基团包括未修饰的羧酸(即-cooh)或具有取代基的羧酸。例如，羧基末端可被氨基取代，从而在c末端产生羧酰胺。各种取代基包括但不限于伯胺和仲胺，仲胺包括聚乙二醇化的仲胺。用于c末端的代表性的仲胺封端基团包括：氨基末端的封端基团包括未修饰的胺(即-nh2)或具有取代基的胺。例如，氨基末端可被酰基取代，从而在n-末端生成羧酰胺。各种取代基包括但不限于取代的酰基，包括c1-c6羰基、c7-c30羰基和聚乙二醇化的氨基甲酸酯。用于n-末端的代表性封端基团包括：在本文中与大环化合物或大环形成连接体一起使用的术语“元”是指形成或可以形成大环的原子，并且不包括取代基或侧链原子。以此类推，环癸烷、1,2-二氟-癸烷和1,3-二甲基环癸烷都被认为是十元大环化合物，因为氢或氟取代基或甲基侧链都没有参与形成大环。当用作分子结构的一部分时，符号是指单键或者反式或顺式双键。术语“氨基酸侧链”是指连接到氨基酸中的α-碳上的部分。例如，丙氨酸的氨基酸侧链是甲基，苯丙氨酸的氨基酸侧链是苯甲基，半胱氨酸的氨基酸侧链是硫甲基，天冬氨酸的氨基酸侧链是羧甲基，酪氨酸的氨基酸侧链是4-羟基苯甲基，等等。也包括其他非天然存在的氨基酸侧链，例如，自然产生的氨基酸侧链(例如，氨基酸代谢物)或合成制备的氨基酸侧链(例如，α,α-二取代的氨基酸)。术语“α,α-二取代的氨基酸”是指包含的氨基和羧基都结合到碳(α-碳)上而该碳(α-碳)连接到两个天然或非天然氨基酸侧链上的分子或部分。术语“多肽”包括通过共价键(例如，酰胺键)连接的两个或更多个天然或非天然存在的氨基酸。本文所述的多肽包括全长蛋白质(例如，完全加工的蛋白质)以及较短的氨基酸序列(例如，天然存在的蛋白质的片段或合成的多肽片段)。术语“第一c-末端氨基酸”是指最靠近c-末端的氨基酸。术语“第二c-末端氨基酸”是指连接在第一c-末端氨基酸的n末端处的氨基酸。本文所用的术语“大环化试剂”或“大环形成试剂”是指任何可以用来通过介导两个反应性基团之间的反应而制备本发明拟肽大环化合物的试剂。该反应性基团可以是，例如，叠氮和炔，在这种情况下，大环化试剂包括但不限于cu试剂，如提供反应性cu(i)物质的试剂，如cubr、cui或cuotf，以及通过加入诸如抗坏血酸或抗坏血酸钠的还原剂可以原位转化为活性cu(i)试剂的cu(ii)盐，如cu(co2ch3)2、cuso4和cucl2。大环化试剂另外还可以包括，例如，本领域已知的ru试剂，如cp*rucl(pph3)2、[cp*rucl]4，或其他可以提供反应性ru(ii)物质的ru试剂。在其他情况下，反应性基团为末端烯烃。在这样的实施方案中，大环化试剂或大环形成试剂为复分解催化剂，包括但不限于稳定的后过渡金属卡宾络合物催化剂，如viii族过渡金属卡宾催化剂。例如，这样的催化剂为具有+2氧化态、电子计数为16且五配位的ru和os金属中心。其他催化剂在grubbs等人,"ringclosingmetathesisandrelatedprocessesinorganicsynthesis"acc.chem.res.1995,28,446-452和美国专利号5,811,515中公开。在另外其他的情况下，反应性基团为巯基。在这样的实施方案中，大环化试剂为，例如，用两个巯基反应性基团如卤素基团官能化的连接体。术语“卤代”或“卤素”是指氟、氯、溴或碘或其基团。术语“烷基”是指含有指定数目的碳原子的直链或支链烃链。例如，c1-c10表示该基团中具有1-10(含端值)个碳原子。在没有指定任何数值时，“烷基”是其中具有1-20(含端值)个碳原子的链(直链或支链)。术语“亚烷基”是指二价烷基(即，-r-)。术语“烯基”是指具有一个或多个碳-碳双键的直链或支链烃链。烯基部分含有指定数目的碳原子。例如，c2-c10表示该基团中具有2-10(含端值)个碳原子。术语“低级烯基”是指c2-c6烯基链。在没有指定任何数值时，“烯基”是其中具有2-20(含端值)个碳原子的链(直链或支链)。术语“炔基”是指具有一个或多个碳-碳叁键的直链或支链烃链。炔基部分含有指定数目的碳原子。例如，c2-c10表示该基团中具有2-10(含端值)个碳原子。术语“低级炔基”是指c2-c6炔基链。在没有指定任何数值时，“炔基”是其中具有2-20(含端值)个碳原子的链(直链或支链)。术语“芳基”是指6碳单环或10碳双环的芳香环系，其中各环的0、1、2、3或4个原子被取代基取代。芳基的例子包括苯基、萘基等。术语“芳基烷基”或术语“芳烷基”是指是指被芳基取代的烷基。术语“芳基烷氧基”是指被芳基取代的烷氧基。“烷基芳基(arylalkyl)”是指其中芳基的氢原子中的一个被如上定义的c1-c5烷基取代的如上定义的芳基。烷基芳基的代表性例子包括但不限于：2-甲基苯基、3-甲基苯基、4-甲基苯基、2-乙基苯基、3-乙基苯基、4-乙基苯基、2-丙基苯基、3-丙基苯基、4-丙基苯基、2-丁基苯基、3-丁基苯基、4-丁基苯基、2-戊基苯基、3-戊基苯基、4-戊基苯基、2-异丙基苯基、3-异丙基苯基、4-异丙基苯基、2-异丁基苯基、3-异丁基苯基、4-异丁基苯基、2-仲丁基苯基、3-仲丁基苯基、4-仲丁基苯基、2-叔丁基苯基、3-叔丁基苯基和4-叔丁基苯基。“酰胺基芳基(arylamido)”是指其中芳基的氢原子中的一个被一个或多个-c(o)nh2基团取代的如上定义的芳基。酰胺基芳基的代表性例子包括：2-c(o)nh2-苯基、3-c(o)nh2-苯基、4-c(o)nh2-苯基、2-c(o)nh2-吡啶基、3-c(o)nh2-吡啶基和4-c(o)nh2-吡啶基。“杂环基烷基(alkylheterocycle)”是指其中c1-c5烷基的氢原子中的一个被杂环取代的如上定义的c1-c5烷基。杂环基烷基的代表性例子包括但不限于：-ch2ch2-吗啉、-ch2ch2-哌啶、-ch2ch2ch2-吗啉和-ch2ch2ch2-咪唑。“酰胺基烷基(alkylamido)”是指其中c1-c5烷基的氢原子中的一个被-c(o)nh2基团取代的如上定义的c1-c5烷基。酰胺基烷基的代表性例子包括但不限于：-ch2-c(o)nh2、-ch2ch2-c(o)nh2、-ch2ch2ch2c(o)nh2、-ch2ch2ch2ch2c(o)nh2、-ch2ch2ch2ch2ch2c(o)nh2、-ch2ch(c(o)nh2)ch3、-ch2ch(c(o)nh2)ch2ch3、-ch(c(o)nh2)ch2ch3、-c(ch3)2ch2c(o)nh2、-ch2-ch2-nh-c(o)-ch3、-ch2-ch2-nh-c(o)-ch3-ch3和-ch2-ch2–nh-c(o)-ch＝ch2。“羟烷基(alkanol)”是指其中c1-c5烷基的氢原子中的一个被羟基取代的如上定义的c1-c5烷基。羟烷基的代表性例子包括但不限于：-ch2oh、-ch2ch2oh、-ch2ch2ch2oh、-ch2ch2ch2ch2oh、-ch2ch2ch2ch2ch2oh、-ch2ch(oh)ch3、-ch2ch(oh)ch2ch3、-ch(oh)ch3和-c(ch3)2ch2oh。“羧基烷基(alkylcarboxy)”是指其中c1-c5烷基的氢原子中的一个被-cooh基团取代的如上定义的c1-c5烷基。羧基烷基的代表性例子包括但不限于：-ch2cooh、-ch2ch2cooh、-ch2ch2ch2cooh、-ch2ch2ch2ch2cooh、-ch2ch(cooh)ch3、-ch2ch2ch2ch2ch2cooh、-ch2ch(cooh)ch2ch3、-ch(cooh)ch2ch3和-c(ch3)2ch2cooh。本文使用的术语“环烷基”包括具有3-12个碳、优选3-8个碳、更优选3-6个碳的饱和的和部分不饱和的环烃基团，其中环烷基另外任选地被取代。一些环烷基包括但不限于：环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环庚基和环辛基。术语“杂芳基”是指芳香族的5-8元单环、8-12元双环或11-14元三环的环系，其如果是单环则具有1-3个杂原子，如果是双环则具有1-6个杂原子，或者如果是三环则具有1-9个杂原子，所述杂原子选自o、n或s(例如，如果是单环、双环或三环，分别为碳原子和1-3、1-6或1-9个o、n或s杂原子)，其中每个环的0、1、2、3或4个原子被取代基取代。杂芳基的例子包括吡啶基、呋喃基(furyl或furanyl)、咪唑基、苯并咪唑基、嘧啶基、噻吩基(thiophenyl或thienyl)、喹啉基(quinolinyl)、吲哚基、噻唑基等。术语“杂芳基烷基”或术语“杂芳烷基”是指被杂芳基取代的烷基。术语“杂芳基烷氧基”是指被杂芳基取代的烷氧基。术语“杂芳基烷基”或术语“杂芳烷基”是指被杂芳基取代的烷基。术语“杂芳基烷氧基”是指被杂芳基取代的烷氧基。术语“杂环基”是指非芳香族的5-8元单环、8-12元双环或11-14元三环的环系，其如果是单环则具有1-3个杂原子，如果是双环则具有1-6个杂原子，或者如果是三环则具有1-9个杂原子，所述杂原子选自o、n或s(例如，如果是单环、双环或三环，分别为碳原子和1-3、1-6或1-9个o、n或s杂原子)，其中每个环的0、1、2或3个原子被取代基取代。杂环基的例子包括哌嗪基、吡咯烷基、二氧杂环己基、吗啉基、四氢呋喃基等。术语“取代基”是指取代任何分子、化合物或部分上的第二原子或基团如氢原子的基团。合适的取代基包括但不限于卤素、羟基、巯基、氧代、硝基、卤代烷基、烷基、烷芳基、芳基、芳烷基、烷氧基、硫代烷氧基、芳氧基、氨基、烷氧羰基、酰胺基、羧基、链烷磺酰基、烷基羰基和氰基。在一些实施方案中，一种或多种本发明化合物包含一个或多个不对称中心，因而作为外消旋体或外消旋混合物、单一对映异构体、单独的非对映异构体和非对映体混合物存在。在一个实施方案中，除非另外明确地指出，否则本发明包括这些化合物的异构体形式。在一些实施方案中，一种或多种本发明化合物也呈现为多种互变异构形式，在这些情况下，一种或多种本发明化合物包括本文所述化合物的所有互变异构形式(例如，如果环系的烷基化作用导致在多个位置发生烷基化，那么一种或多种本发明化合物包括所有这样的反应产物)。除非另外明确地指出，否则本发明包括这类化合物的所有这些异构体形式。除非另外明确地指出，否则本发明包括本文所述化合物的所有晶形。如本文所用的，术语“增加”和“减少”分别意味着导致至少5％的统计学显著的(即，p<0.1)增加或减少。如本文所用的，提及变量的数值范围旨在表示本发明可以用等于该范围内的任意值的变量来实施。因此，对于本身不连续的变量，该变量等于该数值范围内的任意整数值，包括该范围的端点。类似地，对于本身连续的变量，该变量等于该数值范围内的任意实值，包括该范围的端点。作为例子，而不是限制，如果变量本身是不连续的，描述为具有0-2之间的值的变量取0、1或2的值；而如果变量本身是连续的，则取0.0、0.1、0.01、0.001的值或≥0且≤2的其他任何实值。如本文所用的，除非另外特别指出，单词“或”以“和/或”的包含性含义使用，而非“任一/或”的排它性的含义。术语“平均”表示对于每个数据点通过进行至少3次独立的重复而获得的平均值。术语“生物活性”包括本发明大环化合物的结构和功能性质。生物活性是，例如，结构稳定性、α-螺旋性、对靶标的亲和性、对蛋白水解降解的抗性、细胞透性、细胞内稳定性、体内稳定性或其任意组合。术语“结合亲和力”是指结合相互作用的强度，例如拟肽大环化合物与靶标之间的结合相互作用的强度。结合亲和力可以表示为，例如，平衡解离常数(“kd”)，其表示单位为浓度的量度(例如m、mm、μm、nm等)。在数字上，结合亲和力和kd值相反地变化，从而使得较低的结合亲和力对应于较高的kd值，而较高的结合亲和力对应于较低的kd值。在需要高结合亲和力的情况下，“改善的”结合亲和力是指较高的结合亲和力，因此指较低的kd值。术语“结合亲和力之比”是指第一结合相互作用(分子)与第二结合相互作用(分母)的解离常数(kd值)之比。因此，针对靶标1相比于靶标2的“降低的结合亲和力之比”是指较低的表示为kd(靶标1)/kd(靶标2)的比值。此概念也可表征为对靶标1相比于靶标2的“改善的选择性”，这可能是由于针对靶标1的kd值的降低，也可能是由于针对靶标2的kd值的升高。术语“体外效力”是指测试化合物如拟肽大环化合物在体外测试系统或试验中产生有益结果的程度。例如，体外效力可以测量为“ic50”或“ec50”值，其表示测试化合物在测试系统中产生50％的最大效应的浓度。术语“体外效力之比”或“体外效力比”是指来自第一试验(分子)与来自第二试验(分母)的ic50或ec50值的比值。因此，针对试验1相比于试验2的改善的体外效力比是指较低的表示为ic50(试验1)/ic50(试验2)或ec50(试验1)/ec50(试验2)的比值。此概念也可表征为在试验1中相比于在试验2中的“改善的选择性”，这可能是由于针对靶标1的ic50或ec50值的降低，也可能是由于针对靶标2的ic50或ec50值的升高。在下面的附图和描述中阐述了本发明的一个或多个具体实施方案的细节。从说明书、附图和权利要求书可以明显看出本发明的其他特征、目的和优势。在一些实施方案中，所述肽序列衍生自p53蛋白。用于本发明的合适p53肽的非限制性示例性列表在下面给出。表1表2表3在表3中及其他地方，“aib”代表2-氨基异丁酸残基，而“ac3c”代表氨基环丙烷羧酸残基。拟肽大环化合物在一些实施方案中，本发明的拟肽大环化合物具有下式：其中：每个a、c、d和e独立地为天然或非天然氨基酸；b为天然或非天然氨基酸、氨基酸类似物、[-nh-l3-co-]、[-nh-l3-so2-]或[-nh-l3-]；末端d和e独立任选地包括封端基团；r1和r2独立地为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂烷基或杂环烷基，其未被取代或被卤素-取代；l为式–l1–l2–的大环形成连接体；每个l和l’独立地为下式的大环形成连接体l1、l2和l3独立地为亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚杂烷基、亚环烷基、亚杂环烷基、亚环芳基、亚杂环芳基或[-r4-k-r4-]n，各自任选地被r5取代；r3为氢、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、环芳基或杂环芳基，其任选地被r5取代；每个r4为亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚杂烷基、亚环烷基、亚杂环烷基、亚芳基或亚杂芳基；每个k为o、s、so、so2、co、co2或conr3；每个r5独立地为卤素、烷基、-or6、-n(r6)2、-sr6、-sor6、-so2r6、-co2r6、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；每个r6独立地为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基烷基、杂环烷基、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；r7为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，其任选地被r5取代，或是与d残基形成的环状结构的一部分；r8为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，其任选地被r5取代，或是与e残基形成的环状结构的一部分；v和w独立地为1-1000的整数，例如1-500、1-200、1-100、1-50、1-30、1-20或1-10；u为1-10的整数，例如1-5、1-3或1-2；x、y和z独立地为0-10的整数；例如x+y+z之和为2、3或6；且n为1-5的整数。在一些实施方案中，拟肽大环化合物具有下式：其中：每个a、c、d和e独立地为氨基酸；b为氨基酸、[-nh-l4-co-]、[-nh-l4-so2-]或[-nh-l4-]；r1和r2独立地为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂烷基或杂环烷基，其未被取代或被卤素-取代；或者r1和r2中的至少一个形成连接至所述d或e氨基酸之一的α位的大环形成连接体l’；r3为氢、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、环芳基或杂环芳基，其任选地被r5取代；l1、l2、l3和l4独立地为亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚杂烷基、亚环烷基、亚杂环烷基、亚环芳基、亚杂环芳基或[-r4-k-r4-]n，其各自未被取代或被r5取代；每个k为o、s、so、so2、co、co2或conr3；每个r4为亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚杂烷基、亚环烷基、亚杂环烷基、亚芳基或亚杂芳基；每个r5独立地为卤素、烷基、-or6、-n(r6)2、-sr6、-sor6、-so2r6、-co2r6、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；每个r6独立地为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基烷基、杂环烷基、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；r7为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，其任选地被r5取代，或是与d残基形成的环状结构的一部分；r8为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，其任选地被r5取代，或是与e残基形成的环状结构的一部分；v和w独立地为1-1000的整数，例如1-500、1-200、1-100、1-50、1-30、1-20或1-10；u为1-10的整数，例如1-5、1-3或1-2；x、y和z独立地为0-10的整数，例如x+y+z之和为2、3或6；且n为1-5的整数。在一些实施方案中，v和w为1-30的整数。在一些实施方案中，w为3-1000，例如3-500、3-200、3-100、3-50、3-30、3-20或3-10的整数。在一些实施方案中，x+y+z之和为3或6。在一些实施方案中，x+y+z之和为3。在其他实施方案中，x+y+z之和为6。在一些实施方案中，请求保护拟肽大环化合物，条件是当u＝1且w＝2时，由e代表的第一c-末端氨基酸不是精氨酸(r)和/或由e代表的第二c-末端氨基酸不是苏氨酸(t)。例如，当u＝1且w＝2时，由e代表的第一c-末端氨基酸和/或第二c-末端氨基酸不包含带正电荷的侧链或不带正电荷的极性侧链。在一些实施方案中，当u＝1且w＝2时，由e代表的第一c-末端氨基酸和/或第二c-末端氨基酸包含疏水性侧链。例如，当w＝2时，由e代表的第一c-末端氨基酸和/或第二n-末端氨基酸包含疏水性侧链，例如大疏水性侧链。在一些实施方案中，w为3至1000。例如，由e代表的第三氨基酸包含大疏水性侧链。在公开的任何拟肽大环化合物的一些实施方案中，l1和l2单独地或组合地不形成全烃链或硫醚。在公开的任何拟肽大环化合物的其他实施方案中，l1和l2单独地或组合地不形成全烃链或三唑。在一个实例中，r1和r2中的至少一个为未取代或被卤素-取代的烷基。在另一个实例中，r1和r2均独立地为未取代或被卤素-取代的烷基。在一些实施方案中，r1和r2中的至少一个为甲基。在其他实施方案中，r1和r2为甲基。在一些实施方案中，x+y+z至少为3。在其他实施方案中，x+y+z为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些实施方案中，x+y+z之和为3或6。在一些实施方案中，x+y+z之和为3。在其他实施方案中，x+y+z之和为6。大环化合物或大环化合物前体中每次出现的a、b、c、d或e独立地选择。例如，由式[a]x表示的序列，当x为3时，包括其中氨基酸不相同的实施方案，例如gln–asp–ala，以及其中氨基酸相同的实施方案，例如gln–gln–gln。这适用于x、y或z在指定范围内的任意值。类似地，当u大于1时，每种化合物可包括相同或不同的拟肽大环化合物。例如，化合物可包括含有不同连接体长度或化学组成的拟肽大环化合物。在一些实施方案中，所述拟肽大环化合物包含为α-螺旋的二级结构且r8为–h，从而允许螺旋内氢键键合。在一些实施方案中，a、b、c、d或e中的至少一个为α,α-二取代的氨基酸。在一个实例中，b为α,α-二取代的氨基酸。例如，a、b、c、d或e中的至少一个为2-氨基异丁酸。在其他实施方案中，a、b、c、d或e中的至少一个为在其他实施方案中，选择从第一cα到第二cα测量的大环形成连接体l的长度，以稳定希望的二级肽结构，例如由拟肽大环化合物的残基(包括但不是必须限于第一cα到第二cα之间的残基)形成的α-螺旋。还提供了下式的拟肽大环化合物：其中：xaa3、xaa5、xaa6、xaa7、xaa8、xaa9和xaa10中的每一个单独地为氨基酸，其中xaa3、xaa5、xaa6、xaa7、xaa8、xaa9和xaa10中的至少三个是与序列phe3-x4-his5-tyr6-trp7-ala8-gln9-leu10-x11-ser12相应位置处的氨基酸相同的氨基酸，其中每个x为氨基酸；每个d和e独立地为氨基酸；r1和r2独立地为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂烷基或杂环烷基，其未被取代或被卤素-取代；或者r1和r2中的至少一个形成连接至所述d或e氨基酸之一的α位的大环形成连接体l’；每个l或l’独立地为式–l1–l2–的大环形成连接体；l1和l2独立地为亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚杂烷基、亚环烷基、亚杂环烷基、亚环芳基、亚杂环芳基或[-r4-k-r4-]n，其各自任选地被r5取代；r3为氢、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、环芳基或杂环芳基，其任选地被r5取代；每个r4为亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚杂烷基、亚环烷基、亚杂环烷基、亚芳基或亚杂芳基；每个k为o、s、so、so2、co、co2或conr3；每个r5独立地为卤素、烷基、-or6、-n(r6)2、-sr6、-sor6、-so2r6、-co2r6、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；每个r6独立地为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基烷基、杂环烷基、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；r7为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，其任选地被r5取代，或是与d残基形成的环状结构的一部分；r8为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，其任选地被r5取代，或是与e残基形成的环状结构的一部分；v为1-1000的整数，例如1-500、1-200、1-100、1-50、1-30、1-20或1-10；w为3-1000的整数，例如3-500、3-200、3-100、3-50、3-30、3-20或3-10；且n为1-5的整数。在一些实施方案中，v和w为1-30的整数。在一些实施方案中，w或v为3-1000，例如3-500、3-200、3-100、3-50、3-30、3-20或3-10的整数。在一些实施方案中，x+y+z之和为3或6。在一些实施方案中，x+y+z之和为3。在其他实施方案中，x+y+z之和为6。在本文所述任何通式的一些实施方案中，xaa3、xaa5、xaa6、xaa7、xaa8、xaa9和xaa10中的至少三个是与序列phe3-x4-his5-tyr6-trp7-ala8-gln9-leu10-x11-ser12相应位置处的氨基酸相同的氨基酸。在其他实施方案中，xaa3、xaa5、xaa6、xaa7、xaa8、xaa9和xaa10中的至少四个是与序列phe3-x4-his5-tyr6-trp7-ala8-gln9-leu10-x11-ser12相应位置处的氨基酸相同的氨基酸。在其他实施方案中，xaa3、xaa5、xaa6、xaa7、xaa8、xaa9和xaa10中的至少五个是与序列phe3-x4-his5-tyr6-trp7-ala8-gln9-leu10-x11-ser12相应位置处的氨基酸相同的氨基酸。在其他实施方案中，xaa3、xaa5、xaa6、xaa7、xaa8、xaa9和xaa10中的至少六个是与序列phe3-x4-his5-tyr6-trp7-ala8-gln9-leu10-x11-ser12相应位置处的氨基酸相同的氨基酸。在其他实施方案中，xaa3、xaa5、xaa6、xaa7、xaa8、xaa9和xaa10中的至少七个是与序列phe3-x4-his5-tyr6-trp7-ala8-gln9-leu10-x11-ser12相应位置处的氨基酸相同的氨基酸。在一些实施方案中，拟肽大环化合物具有下式：其中：xaa3、xaa5、xaa6、xaa7、xaa8、xaa9和xaa10中的每一个单独地为氨基酸，其中xaa3、xaa5、xaa6、xaa7、xaa8、xaa9和xaa10中的至少三个是与序列phe3-x4-glu5-tyr6-trp7-ala8-gln9-leu10/cba10-x11-ala12相应位置处的氨基酸相同的氨基酸，其中每个x为氨基酸；每个d独立地为氨基酸；每个e独立地为氨基酸，例如选自ala(丙氨酸)、d-ala(d-丙氨酸)、aib(α-氨基异丁酸)、sar(n-甲基甘氨酸)和ser(丝氨酸)的氨基酸；r1和r2独立地为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂烷基或杂环烷基，其未被取代或被卤素-取代；或者r1和r2中的至少一个形成连接至所述d或e氨基酸之一的α位的大环形成连接体l’；每个l或l’独立地为式–l1–l2–的大环形成连接体；每个l和l’独立地为下式的大环形成连接体l1和l2独立地为亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚杂烷基、亚环烷基、亚杂环烷基、亚环芳基、亚杂环芳基或[-r4-k-r4-]n，其各自任选地被r5取代；r3为氢、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、环芳基或杂环芳基，其任选地被r5取代；每个r4为亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚杂烷基、亚环烷基、亚杂环烷基、亚芳基或亚杂芳基；每个k为o、s、so、so2、co、co2或conr3；每个r5独立地为卤素、烷基、-or6、-n(r6)2、-sr6、-sor6、-so2r6、-co2r6、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；每个r6独立地为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基烷基、杂环烷基、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；r7为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，其任选地被r5取代，或是与d残基形成的环状结构的一部分；r8为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，其任选地被r5取代，或是与e残基形成的环状结构的一部分；v为1-1000的整数，例如1-500、1-200、1-100、1-50、1-30、1-20或1-10；w为3-1000的整数，例如3-500、3-200、3-100、3-50、3-30、3-20或3-10；且n为1-5的整数。在上述通式的一些实施方案中，xaa3、xaa5、xaa6、xaa7、xaa8、xaa9和xaa10中的至少三个是与序列phe3-x4-glu5-tyr6-trp7-ala8-gln9-leu10/cba10-x11-ala12的相应位置处的氨基酸相同的氨基酸。在上述通式的其他实施方案中，xaa3、xaa5、xaa6、xaa7、xaa8、xaa9和xaa10中的至少四个是与序列phe3-x4-glu5-tyr6-trp7-ala8-gln9-leu10/cba10-x11-ala12的相应位置处的氨基酸相同的氨基酸。在上述通式的其他实施方案中，xaa3、xaa5、xaa6、xaa7、xaa8、xaa9和xaa10中的至少五个是与序列phe3-x4-glu5-tyr6-trp7-ala8-gln9-leu10/cba10-x11-ala12的相应位置处的氨基酸相同的氨基酸。在上述通式的其他实施方案中，xaa3、xaa5、xaa6、xaa7、xaa8、xaa9和xaa10中的至少六个是与序列phe3-x4-glu5-tyr6-trp7-ala8-gln9-leu10/cba10-x11-ala12的相应位置处的氨基酸相同的氨基酸。在上述通式的其他实施方案中，xaa3、xaa5、xaa6、xaa7、xaa8、xaa9和xaa10中的至少七个是与序列phe3-x4-glu5-tyr6-trp7-ala8-gln9-leu10/cba10-x11-ala12的相应位置处的氨基酸相同的氨基酸。在一些实施方案中，w为3-10的整数，例如3-6、3-8、6-8或6-10。在一些实施方案中，w为3。在其他实施方案中，w为6。在一些实施方案中，v为1-10的整数，例如2-5。在一些实施方案中，v为2。在本文所述的任何通式的一个实施方案中，l1和l2单独地或组合地不形成三唑或硫醚。在一个实例中，r1和r2中的至少一个是未取代的或被卤素–取代的烷基。在另一个实例中，r1和r2均独立地为未取代的或被卤素–取代的烷基。在一些实施方案中，r1和r2中的至少一个为甲基。在其他实施方案中，r1和r2为甲基。在本发明的一些实施方案中，x+y+z至少为3。在本发明的其他实施方案中，x+y+z为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。本发明的大环化合物或大环化合物前体中每次出现的a、b、c、d或e独立地选择。例如，由式[a]x表示的序列，当x为3时，包括其中氨基酸不相同的实施方案，例如gln–asp–ala，以及其中氨基酸相同的实施方案，例如gln–gln–gln。这适用于x、y或z在指定范围内的任意值。类似地，当u大于1时，每种本发明化合物可包括相同或不同的拟肽大环化合物。例如，本发明化合物可包括含有不同连接体长度或化学组成的拟肽大环化合物。在一些实施方案中，本发明的拟肽大环化合物包含为α-螺旋的二级结构且r8为–h，从而允许螺旋内氢键键合。在一些实施方案中，a、b、c、d或e中的至少一个是α,α-二取代的氨基酸。在一个实例中，b为α,α-二取代的氨基酸。例如，a、b、c、d或e中的至少一个是2-氨基异丁酸。在其他实施方案中，a、b、c、d或e中的至少一个是在其他实施方案中，选择从第一cα到第二cα测量的大环形成连接体l的长度，以稳定希望的二级肽结构，例如由拟肽大环化合物的残基(包括但不是必须限于第一cα到第二cα之间的残基)形成的α-螺旋。在一个实施方案中，所述拟肽大环化合物是：其中每个r1和r2独立地为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂烷基或杂环烷基，其为未取代的或被卤素–取代的。在相关实施方案中，所述拟肽大环化合物是：还提供了下式的拟肽大环化合物：其中：xaa3、xaa5、xaa6、xaa7、xaa8、xaa9和xaa10中的每一个单独地为氨基酸，其中xaa3、xaa5、xaa6、xaa7、xaa8、xaa9和xaa10中的至少三个是与序列phe3-x4-his5-tyr6-trp7-ala8-gln9-leu10-x11-ser12相应位置处的氨基酸相同的氨基酸，其中每个x为氨基酸；每个d和e独立地为氨基酸；r1和r2独立地为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂烷基或杂环烷基，其未被取代或被卤素-取代；或者r1和r2中的至少一个形成连接至所述d或e氨基酸之一的α位的大环形成连接体l’；l1、l2、l3和l4独立地为亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚杂烷基、亚环烷基、亚杂环烷基、亚环芳基、亚杂环芳基或[-r4-k-r4-]n，其各自未被取代或被r5取代；每个k为o、s、so、so2、co、co2或conr3；r3为氢、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、环芳基或杂环芳基，其任选地被r5取代；每个r4为亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚杂烷基、亚环烷基、亚杂环烷基、亚芳基或亚杂芳基；每个r5独立地为卤素、烷基、-or6、-n(r6)2、-sr6、-sor6、-so2r6、-co2r6、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；每个r6独立地为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基烷基、杂环烷基、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；r7为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，其任选地被r5取代，或是与d残基形成的环状结构的一部分；r8为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，其任选地被r5取代，或是与e残基形成的环状结构的一部分；v为1-1000的整数，例如1-500、1-200、1-100、1-50、1-30、1-20或1-10；w为3-1000，例如3-500、3-200、3-100、3-50、3-30、3-20或3-10；且n为1-5的整数。还提供了下式的拟肽大环化合物：其中：xaa3、xaa5、xaa6、xaa7、xaa8、xaa9和xaa10中的每一个单独地为氨基酸，其中xaa3、xaa5、xaa6、xaa7、xaa8、xaa9和xaa10中的至少三个是与序列phe3-x4-glu5-tyr6-trp7-ala8-gln9-leu10/cba10-x11-ala12相应位置处的氨基酸相同的氨基酸，其中每个x为氨基酸；每个d和e独立地为氨基酸；r1和r2独立地为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂烷基或杂环烷基，其未被取代或被卤素-取代；或者r1和r2中的至少一个形成连接至所述d或e氨基酸之一的α位的大环形成连接体l’；l1、l2、l3和l4独立地为亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚杂烷基、亚环烷基、亚杂环烷基、亚环芳基、亚杂环芳基或[-r4-k-r4-]n，其各自未被取代或被r5取代；每个k为o、s、so、so2、co、co2或conr3；r3为氢、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、环芳基或杂环芳基，其任选地被r5取代；每个r4为亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚杂烷基、亚环烷基、亚杂环烷基、亚芳基或亚杂芳基；每个r5独立地为卤素、烷基、-or6、-n(r6)2、-sr6、-sor6、-so2r6、-co2r6、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；每个r6独立地为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基烷基、杂环烷基、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；r7为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，其任选地被r5取代，或是与d残基形成的环状结构的一部分；r8为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，其任选地被r5取代，或是与e残基形成的环状结构的一部分；v为1-1000的整数，例如1-500、1-200、1-100、1-50、1-30、1-20或1-10；w为3-1000的整数，例如3-500、3-200、3-100、3-50、3-30、3-20或3-10；且n为1-5的整数。在一个实施方案中，所述拟肽大环化合物是：其中每个r1和r2独立地为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂烷基或杂环烷基，其未被取代或被卤素–取代。在相关实施方案中，所述拟肽大环化合物是：其中每个r1’和r2’独立地为氨基酸。在其他实施方案中，所述拟肽大环化合物是以下所示通式的任何化合物：其中“aa”表示任何天然或非天然氨基酸侧链，且为如上定义的[d]v、[e]w，且n为0至20、50、100、200、300、400或500的整数。在一些实施方案中，n为0。在其他实施方案中，n小于50。大环形成连接体l的示例性实施方案如下所示。在其他实施方案中，为了促进细胞摄取，进一步修饰所述化合物中的d和/或e。在一些实施方案中，将拟肽大环化合物脂质化(lipidating)或peg化有利于细胞摄取、提高生物利用度、增强血液循环、改变药代动力学、降低免疫原性和/或降低所需的给药频率。在其他实施方案中，所公开的通式化合物中的[d]和[e]中的至少一个代表包含另外的大环形成连接体的部分，使得该拟肽大环化合物包含至少两个大环形成连接体。在特定实施方案中，拟肽大环化合物包含两个大环形成连接体。在实施方案中，u为2。在本发明的拟肽大环化合物中，本文所述的任何大环形成连接体可以与表1-3、9-13、23-25、27-28中所示的任何序列任意组合使用，也可以与本文所述的任何r–取代基任意组合使用。在一些实施方案中，拟肽大环化合物包含至少一个α-螺旋基序。例如，所公开的化合物中的a、b和/或c包含一个或多个α-螺旋。一般来说，α-螺旋每圈包含3至4个氨基酸残基。在一些实施方案中，拟肽大环化合物的α-螺旋包括1至5圈，因此包含3至20个氨基酸残基。在特定实施方案中，α-螺旋包括1圈、2圈、3圈、4圈或5圈。在一些实施方案中，大环形成连接体稳定化在拟肽大环化合物内包含的α-螺旋基序。因此，在一些实施方案中，选择大环形成连接体l从第一cα到第二cα的长度，以提高α-螺旋的稳定性。在一些实施方案中，大环形成连接体跨越α-螺旋的1圈至5圈。在一些实施方案中，大环形成连接体跨越α-螺旋的大约1圈、2圈、3圈、4圈或5圈。在一些实施方案中，大环形成连接体的长度为每圈α-螺旋大约至或每圈α-螺旋大约至当大环形成连接体跨越大约1圈α-螺旋时，长度等于大约5个碳-碳键至13个碳-碳键，大约7个碳-碳键至11个碳-碳键，或大约9个碳-碳键。当大环形成连接体跨越大约2圈α-螺旋时，长度等于大约8个碳-碳键至16个碳-碳键，大约10个碳-碳键至14个碳-碳键，或大约12个碳-碳键。当大环形成连接体跨越大约3圈α-螺旋时，长度等于大约14个碳-碳键至22个碳-碳键，大约16个碳-碳键至20个碳-碳键，或大约18个碳-碳键。当大环形成连接体跨越大约4圈α-螺旋时，长度等于大约20个碳-碳键至28个碳-碳键，大约22个碳-碳键至26个碳-碳键，或大约24个碳-碳键。当大环形成连接体跨越大约5圈α-螺旋时，长度等于大约26个碳-碳键至34个碳-碳键，大约28个碳-碳键至32个碳-碳键，或大约30个碳-碳键。当大环形成连接体跨越大约1圈α-螺旋时，连接含有大约4个原子至12个原子，大约6个原子至10个原子，或大约8个原子。当大环形成连接体跨越大约2圈α-螺旋时，连接含有大约7个原子至15个原子，大约9个原子至13个原子，或大约11个原子。当大环形成连接体跨越大约3圈α-螺旋时，连接含有大约13个原子至21个原子，大约15个原子至19个原子，或大约17个原子。当大环形成连接体跨越大约4圈α-螺旋时，连接含有大约19个原子至27个原子，大约21个原子至25个原子，或大约23个原子。当大环形成连接体跨越大约5圈α-螺旋时，连接含有大约25个原子至33个原子，大约27个原子至31个原子，或大约29个原子。当大环形成连接体跨越大约1圈α-螺旋时，得到的大环形成含有大约17元至25元、大约19元至23元或大约21元的环。当大环形成连接体跨越大约2圈α-螺旋时，得到的大环形成含有大约29元至37元、大约31元至35元或大约33元的环。当大环形成连接体跨越大约3圈α-螺旋时，得到的大环形成含有大约44元至52元、大约46元至50元或大约48元的环。当大环形成连接体跨越大约4圈α-螺旋时，得到的大环形成含有大约59元至67元、大约61元至65元或大约63元的环。当大环形成连接体跨越大约5圈α-螺旋时，得到的大环形成含有大约74元至82元、大约76元至80元或大约78元的环。在其他实施方案中，本发明提供了拟肽大环化合物：其中：每个a、c、d和e独立地为天然或非天然氨基酸，并且末端d和e独立地任选地包括封端基团；b为天然或非天然氨基酸、氨基酸类似物、[-nh-l3-co-]、[-nh-l3-so2-]或[-nh-l3-]；r1和r2独立地为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂烷基或杂环烷基，其为未取代的或被卤素–取代的，或是与e残基形成的环状结构的一部分；r3为氢、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、环烷基烷基、环芳基或杂环芳基，其任选地被r5取代；l为式–l1–l2–的大环形成连接体；l1和l2独立地为亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚杂烷基、亚环烷基、亚杂环烷基、亚环芳基、亚杂环芳基或[-r4-k-r4-]n，其各自任选地被r5取代；每个r4为亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚杂烷基、亚环烷基、亚杂环烷基、亚芳基或亚杂芳基；每个k为o、s、so、so2、co、co2或conr3；每个r5独立地为卤素、烷基、-or6、-n(r6)2、-sr6、-sor6、-so2r6、-co2r6、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；每个r6独立地为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基烷基、杂环烷基、荧光部分、放射性同位素或治疗剂；r7为–h、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、杂烷基、环烷基烷基、杂环烷基、环芳基或杂环芳基，其任选地被r5取代；v和w独立地为1-1000的整数；u为1-10的整数；x、y和z独立地为0-10的整数；且n为1-5的整数。在一个实例中，l1和l2单独地或组合地不形成三唑或硫醚。在一个实例中，r1和r2中的至少一个是未取代的或被卤素–取代的烷基。在另一个实例中，r1和r2均独立地为未取代的或被卤素–取代的烷基。在一些实施方案中，r1和r2中的至少一个为甲基。在其他实施方案中，r1和r2为甲基。在本发明的一些实施方案中，x+y+z之和至少为1。在本发明的其他实施方案中，x+y+z之和至少为2。在本发明的其他实施方案中，x+y+z之和为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。本发明的大环化合物或大环化合物前体中每次出现的a、b、c、d或e独立地选择。例如，由式[a]x表示的序列，当x为3时，包括其中氨基酸不相同的实施方案，例如gln–asp–ala，以及其中氨基酸相同的实施方案，例如gln–gln–gln。这适用于x、y或z在指定范围内的任意值。在一些实施方案中，本发明的拟肽大环化合物包含为α-螺旋的二级结构且r8为–h，从而允许螺旋内氢键键合。在一些实施方案中，a、b、c、d或e中的至少一个为α,α-二取代的氨基酸。在一个实例中，b为α,α-二取代的氨基酸。例如，a、b、c、d或e中的至少一个为2-氨基异丁酸。在其他实施方案中，a、b、c、d或e中的至少一个为在其他实施方案中，选择从第一cα到第二cα测量的大环形成连接体l的长度，以稳定希望的二级肽结构，例如由拟肽大环化合物的残基(包括但不是必须限于第一cα到第二cα之间的残基)形成的α-螺旋。在一些实施方案中，相对于其中w为0、1或2的相应拟肽大环化合物，所述拟肽大环化合物具有改善的对mdm2或mdmx的结合亲和力。在其他情况下，相对于其中w为0、1或2的相应拟肽大环化合物，所述拟肽大环化合物具有降低的对mdmx与mdm2的结合亲和力之比。在另外其他的情况下，相对于其中w为0、1或2的相应拟肽大环化合物，所述拟肽大环化合物具有改善的针对p53阳性肿瘤细胞系的体外抗肿瘤效力。在一些实施方案中，相对于其中w为0、1或2的相应拟肽大环化合物，所述拟肽大环化合物在p53阳性肿瘤细胞系中显示改善的体外凋亡诱导。在其他情况下，权利要求1的拟肽大环化合物，其中相对于其中w为0、1或2的相应拟肽大环化合物，所述拟肽大环化合物具有改善的对p53阳性与对p53阴性或突变肿瘤细胞系的抗肿瘤效力比。在另外其他情况下，相对于其中w为0、1或2的相应拟肽大环化合物，所述拟肽大环化合物具有改善的对p53阳性肿瘤的体内抗肿瘤效力。在另外的情况下，相对于其中w为0、1或2的相应拟肽大环化合物，所述拟肽大环化合物在p53阳性肿瘤中具有改善的体内凋亡诱导。在一些实施方案中，相对于其中w为0、1或2的相应拟肽大环化合物，所述拟肽大环化合物具有改善的细胞透性。在其他情况下，相对于其中w为0、1或2的相应拟肽大环化合物，所述拟肽大环化合物具有改善的溶解度。在一些实施方案中，xaa5为glu或其氨基酸类似物。在一些实施方案中，xaa5为glu或其基酸类似物，并且其中相对于xaa5为ala的相应拟肽大环化合物，所述拟肽大环化合物具有改善的性质，如改善的结合亲和力、改善的溶解度、改善的细胞效力、改善的细胞透性、改善的体内或体外抗肿瘤效力或改善的凋亡诱导。在一些实施方案中，相对于其中xaa5为ala的相应拟肽大环化合物，所述拟肽大环化合物具有改善的对mdm2或mdmx的结合亲和力。在其他实施方案中，相对于其中xaa5为ala的相应拟肽大环化合物，所述拟肽大环化合物具有降低的对mdmx与对mdm2的结合亲和力之比。在一些实施方案中，相对于其中xaa5为ala的相应拟肽大环化合物，所述拟肽大环化合物具有改善的溶解度，或者相对于其中xaa5为ala的相应拟肽大环化合物，所述拟肽大环化合物具有改善的细胞效力。在一些实施方案中，xaa5为glu或其氨基酸类似物，并且相对于其中xaa5为ala的相应拟肽大环化合物，其中所述拟肽大环化合物具有改善的生物活性，如改善的结合亲和力、改善的溶解度、改善的细胞效力、改善的螺旋度、改善的细胞透性、改善的体内或体外抗肿瘤效力或改善的凋亡诱导。在一个实施方案中，本文公开的化合物在构成这类化合物的一个或多个原子处可含有非天然比例的原子同位素。例如，所述化合物可以用放射性同位素如氚(3h)、碘-125(125i)或在-14(14c)放射性标记。在另一个实施方案中，本文公开的化合物的一个或多个碳原子可被硅原子代替。本文涉及本文公开的化合物的所有同位素变化，无论是否是放射性的。如本文所用的术语“液体癌”是指存在于体液如血液、淋巴和骨髓中的癌细胞。液体癌包括白血病、骨髓瘤和液体淋巴瘤。液体淋巴瘤包括含有囊肿或液体区域的淋巴瘤。如本文所用的液体癌不包括实体瘤，例如不含有囊肿或液体区域的肉瘤和癌或实体淋巴瘤。如本文所用的术语“不良事件”(ae)包括由临床研究的任何阶段发生的身体体征、症状和/或实验室变化所指示的，任何有害的、病理的或非有意的解剖学、生理学或代谢功能的变化，不论其是否与研究药物的施用在时间上相关，并且不论其是否被认为与研究药物有关。该定义包括先前存在的医学状况或事件的加重、并发疾病、超敏反应、药物相互作用或临床上有意义的实验室检查结果。ae不包括以下各项：(i)医学或手术程序，例如，拔牙、输血、手术(导致该程序的医学状况将被记录为ae)；(ii)在研究开始时存在或检测到且没有恶化的先前存在的状况或程序；(iii)因选择性手术或其中未发生不利医学事件的其他情况而住院；(iv)异常的实验室值，除非研究人员认为它在临床上有意义，需要干预，或导致研究药物的延迟、中止或剂量变化；(v)未伴有体征/症状的研究药物或伴随用药的给药过量；如果出现体征/症状，则最终诊断应被记录为ae；(vi)妊娠，除非妊娠期间发生导致住院的并发症；在这种情况下，导致住院的医学状况将被记录为ae；以及(vii)作为此研究中的效力参数而收集、因此不记录为ae的所研究的疾病的显著恶化。如本文所用的术语严重不良事件(sae)是指导致以下任一种结果的不良事件：(i)死亡；(ii)危及生命的不良体验(即，事件发生时存在因其而死亡的直接风险；这不包括在以更严重的形式发生时可能导致死亡的不良事件)；(iii)持续或重大的残疾/失能；(iv)住院或现有住院延长；以及(v)先天性异常/出生缺陷。在根据医学判断可能危及患者或可能需要医疗或外科手术来防止该定义中所列出的一种结果时，可能不会导致死亡、危及生命或需要住院的重要医疗事件可被视为严重的。因潜在疾病而住院将不会被报告为sae，除非有理由怀疑与研究药物有因果关系。如果ae或疑似不良反应没有在拟肽大环化合物研究者手册中列出或没有以已观察到的特异性或严重性列出；或者与方案或其他地方描述的风险信息不一致，则其被视为“非预期的”(被称为非预期的不良事件(uae))。例如，在该定义下，如果研究者手册仅提到肝酶升高或肝炎，则肝坏死将是非预期的(由于严重性更高)。类似地，如果研究者的手册仅列出脑血管意外，则脑血栓栓塞和脑血管炎将是非预期的(由于特异性更高)。该定义中使用的“非预期的”还指在研究者手册中提到伴随一类药物发生，或从拟肽大环化合物的药理学性质可以预期，但没有具体提及伴随该拟肽大环化合物发生的ae或疑似不良反应。如本文所用的“剂量限制毒性”(dlt)被定义为据认为可能、或许或必定与研究药物有关的任何等级≥3的ae，以下情况除外：(1)对于恶心、呕吐、腹泻、皮疹或粘膜炎，只有在48小时内不对标准支持性/药物治疗发生响应的≥3级的ae才被视为dlt；(2)对于电解质失衡，只有在24小时内不对纠正发生响应的≥3级的ae才被视为dlt；(3)对于输液反应，只有导致住院治疗的3级反应或4级反应才被视为dlt。此外，具体的血液学dlt被定义为：血小板减少—任意持续时间的4级，3级持续≥7天，或伴有临床上有意义的出血的3级；中性粒细胞减少—4级持续≥3天，或任何≥3级的发热性中性粒细胞减少。上述标准可用于在整个试验过程中对剂量减少、中断或中止进行单独的患者评定，但在第1周期发生的dlt将用于告知剂量递增决定的安全性和耐受性评价。dlt可评估的群体包括第一阶段剂量递增中在第一治疗周期期间经历dlt的所有患者。如本文所用的“最大耐受剂量”(mtd)被定义为6名患者中≤1名患者经历符合dlt的治疗相关毒性并且下一更高剂量使至多6名患者中≥2名患者经历dlt的剂量。在加入队列中的所有患者完成第1周期、中止治疗或减少剂量之前不能建立mtd。如果在之后的周期中观察到dlt，则将重新评价之前建立的剂量水平的耐受性。如本文所用的“最佳生物学剂量”(obd)被定义为对于每个治疗组，安全性审查委员会在达到mtd之前确定的剂量。这样的obd将来源于对来自该研究剂量递增部分的可获得的安全性、pk、pd和/或初步效力信息的评价。如本文所用的“可测量的疾病”(md)通过存在至少一种可测量的ctc或mnbc来定义。可测量的ctc和mnbc被定义为来自可精确计数的生物样品的ctc和mnbc。如本文所用的“不可测量的疾病”包括所有其他病变。如本文所用的“完全响应”(cr)被定义为所有目标ctc和/或mnbc消失。如本文所用的“部分响应(pr)”被定义为ctc和/或mnbc数降低至少30％。如本文所用的“病情进展(pd)”被定义为ctc和/或mnbc数增加至少20％。如本文所用的“病情稳定”(sd)被定义为以研究时的最小直径总和作为参考，既没有充分缩小到符合pr的量，也没有充分增加到符合pd的量。术语“受试者”或“患者”包括哺乳动物和非哺乳动物。哺乳动物的实例包括但不限于人；非人类灵长类动物，如黑猩猩，及其他猿类和猴物种；农场动物，如牛、马、绵羊、山羊、猪；家养动物，如兔子、狗和猫；实验动物，包括啮齿动物，如大鼠、小鼠和豚鼠，等等。非哺乳动物的实例包括但不限于鸟、鱼等。在本文提供的方法和组合物的一个实施方案中，所述哺乳动物为人。除非另有说明，否则任何化合物(包括拟肽大环化合物、大环化合物前体和其他组合物)也意在包括仅在是否存在一个或多个同位素富集的原子方面不同的化合物。例如，除了用氘或氚替代氢或者用13c-或14c-富集的碳替代碳以外具有所述结构的化合物在本公开内容的范围内。在一些实施方案中，本文公开的化合物可以在构成此类化合物的一个或多个原子处含有非自然比例的原子同位素。例如，该化合物可以用诸如例如氚(3h)、碘-125(125i)或碳-14(14c)的放射性同位素进行放射性标记。在其他实施方案中，一个或多个碳原子被硅原子替代。本文涉及本文公开的化合物的所有同位素变化，无论是放射性的还是非放射性的。所述拟肽大环化合物在人血液中的循环半衰期可为约1-24h。例如，该拟肽大环化合物在人血液中的循环半衰期可为约2-24h、4-24h、6-24h、8-24h、10-24h、12-24h、14-24h、16-24h、18-24h、20-24h、22-24h、1-20h、4-20h、6-20h、8-20h、10-20h、12-20h、14-20h、16-20h、18-20h、1-16h、4-16h、6-16h、8-16h、10-16h、12-16h、14-16h、1-12h、4-12h、6-12h、8-12h、10-12h、1-8h、4-8h、6-8h或1-4h。在一些实例中，该拟肽大环化合物在人血液中的循环半衰期可为约1-12h，例如约1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h、11h或12h。在一些实例中，该拟肽大环化合物在人血液中的循环半衰期为约2h。在一些实例中，该拟肽大环化合物在人血液中的循环半衰期为约4h。在一些实例中，该拟肽大环化合物在人血液中的循环半衰期为约6h。在一些实例中，该拟肽大环化合物在人血液中的循环半衰期为约8h。在一些实例中，该拟肽大环化合物在人血液中的循环半衰期为约10h。所述拟肽大环化合物在生物组织中的半衰期可为约1-24h。例如，该拟肽大环化合物在人血液中的循环半衰期可为约1-24h、5-24h、10-24h、15-24h、20-24h、1-22h、5-22h、10-22h、15-22h、20-22h、1-20h、5-20h、15-20h、1-18h、5-18h、10-18h、15-18h、1-16h、5-16h、10-16h、15-16h、1-14h、5-14h、10-14h、1-12h、5-12h、10-12h、1-10h、5-10h、1-8h、5-8h、1-6h、5-6h或1-4h。在一些实例中，该拟肽大环化合物在人血液中的循环半衰期可为约5-20h，例如约5h、6h、7h、8h、9h、10h、11h、12h、13h、14h、15h、16h、17h、18h、19h或20h。在一些实例中，该拟肽大环化合物在人血液中的循环半衰期为约2h。在一些实例中，该拟肽大环化合物在人血液中的循环半衰期为约4h。在一些实例中，该拟肽大环化合物在人血液中的循环半衰期为约6h。在一些实例中，该拟肽大环化合物在人血液中的循环半衰期为约8h。在一些实例中，该拟肽大环化合物在人血液中的循环半衰期为约10h。所述拟肽大环化合物在人血液中的循环半衰期可大于、等于或小于该拟肽大环化合物在生物组织中的半衰期。在一些实例中，该拟肽大环化合物在人血液中的循环半衰期可大于该拟肽大环化合物在生物组织中的半衰期。在一些实例中，该拟肽大环化合物在人血液中的循环半衰期可等于该拟肽大环化合物在生物组织中的半衰期。在一些实例中，该拟肽大环化合物在生物组织中的半衰期大于该拟肽大环化合物在人血液中的循环半衰期。这可以促进该拟肽大环化合物以较低的剂量和/或较低的频率给药。在一些实施方案中，该拟肽大环化合物在生物组织中的半衰期比该拟肽大环化合物在人血液中的循环半衰期长至少1h、至少2h、至少3h、至少4h、至少5h、至少6h、至少7h、至少8h、至少9h、至少10h、至少11h或至少12h。在一些实例中，该拟肽大环化合物在人血液中的循环半衰期为约4h，且在生物组织中的半衰期为约10h。在一些实例中，该拟肽大环化合物在人血液中的循环半衰期为约6h，且在生物组织中的半衰期为约10h。本发明的一个或多个特定实施方案的细节在附图和以下描述中阐述。通过说明书和附图以及权利要求书，本发明的其他特征、目的和优点将是明显的。拟肽大环化合物的制备本发明的拟肽大环化合物可以通过本领域已知的众多方法中的任意方法来制备。例如，表1-3和9中由“x”表示的任何残基可以被置换为能够与相同分子中的第二残基或这类残基的前体形成交联体的残基。拟肽大环化合物可以通过本领域已知的众多方法中的任意方法来制备。例如，在表10-13中由“$”或“$r8”表示的任何残基可以被替换为能够与同一分子中的第二残基形成交联体的残基或这样的残基的前体。各种实现拟肽大环化合物的形成的方法是本领域已知的。例如，schafmeister等人,j.am.chem.soc.122:5891-5892(2000)；schafmeister和verdine,j.am.chem.soc.122:5891(2005)；walensky等人,science305:1466-1470(2004)；美国专利号7,192,713和pct申请wo2008/121767中描述了所公开的拟肽大环化合物的制备。在所引用的参考文献中公开的α,α-二取代的氨基酸和氨基酸前体可以用于拟肽大环化合物前体多肽的合成。例如，“s5-烯烃氨基酸”是(s)-α-(2’-戊烯基)丙氨酸，且“r8-烯烃氨基酸”是(r)-α-(2’-辛烯基)丙氨酸。在将这样的氨基酸掺入前体多肽中之后，末端烯烃与复分解反应催化剂反应，从而导致拟肽大环化合物的形成。在多个实施方案中，下列氨基酸可用于合成拟肽大环化合物。制备所公开的大环化合物的方法例如在美国专利号7,202,332中描述。设想为适于实施本发明的形成拟肽大环化合物的其他方法包括以下文献中公开的方法：mustapa,m.firouzmohd等人,j.org.chem(2003),68,第8193-8198页；yang,bin等人bioorgmed.chem.lett.(2004),14,第1403-1406页；美国专利5,364,851；美国专利5,446,128；美国专利5,824,483；美国专利6,713,280和美国专利7,202,332。在这样的实施方案中，使用在α-位含有另外的取代基r-的氨基酸前体。这样的氨基酸在希望的位置并入大环化合物前体中，其可以处于交联体被取代的位置，或者，备选地，在大环化合物前体序列中的其他位置。然后根据指定的方法实现前体的环化。所公开的拟肽大环化合物可以通过本领域已知的众多方法中的任意方法来制备。例如，具有表23-25中由“$4rn6”或“$4a5”表示的残基的大环化合物可以被置换为能够与相同分子中的第二残基或这类残基的前体形成交联体的残基。在一些实施方案中，这些拟肽大环化合物的合成涉及多步骤过程，该过程的特征在于合成含有叠氮部分和炔烃部分的拟肽前体；随后使该拟肽前体与大环化试剂接触，以产生三唑连接的拟肽大环化合物。例如，在2008年2月25日提交的美国申请12/037,041中描述了这样的方法。大环化合物或大环化合物前体例如通过溶液相或固相方法来合成，并且可以包含天然存在的和非天然存在的氨基酸。参见，例如，hunt,“thenon-proteinaminoacids”，于chemistryandbiochemistryoftheaminoacids,g.c.barrett,chapman和hall编著,1985。在所公开的大环化合物的一些实施方案中，叠氮部分与残基的α-碳连接，并且炔烃与另一残基的α-碳附接。在一些实施方案中，叠氮部分是氨基酸l-赖氨酸、d-赖氨酸、α-甲基-l-赖氨酸、α-甲基-d-赖氨酸、l-鸟氨酸、d-鸟氨酸、α-甲基-l-鸟氨酸或α-甲基基-d-鸟氨酸的叠氮基-类似物。在另一个实施方案中，炔烃部分是l-炔丙基甘氨酸。在其他实施方案中，炔烃部分是选自l-炔丙基甘氨酸、d-炔丙基甘氨酸、(s)-2-氨基-2-甲基-4-戊炔酸、(r)-2-氨基-2-甲基-4-戊炔酸、(s)-2-氨基-2-甲基-5-己炔酸、(r)-2-氨基-2-甲基-5-己炔酸、(s)-2-氨基-2-甲基-6-庚炔酸、(r)-2-氨基-2-甲基-6-庚炔酸、(s)-2-氨基-2-甲基-7-辛炔酸、(r)-2-氨基-2-甲基-7-辛炔酸、(s)-2-氨基-2-甲基-8-壬炔酸和(r)-2-氨基-2-甲基-8-壬炔酸的氨基酸。在一些实施方案中，本文提供了一种合成所公开的拟肽大环化合物的方法，该方法包括使下式拟肽前体与大环化试剂接触的步骤：其中v、w、x、y、z、a、b、c、d、e、r1、r2、r7、r8、l1和l2如以上所定义；当大环化试剂是cu试剂时，r12为-h，而当大环化试剂是ru试剂时，r12为-h或烷基；并且其中所述接触步骤导致在前体中的炔烃和叠氮部分之间形成共价键。例如，当大环化试剂是ru试剂时，r12可以是甲基。在一些实施方案中，本文提供了一种合成所公开的拟肽大环化合物的方法，该方法包括使下式拟肽前体与式x-l2-y化合物接触的步骤：其中v、w、x、y、z、a、b、c、d、e、r1、r2、r7、r8、l1和l2如前面公开的化合物所定义；并且x和y各自独立地为能够与巯基反应的反应性基团；并且其中所述接触步骤导致在两个巯基之间形成共价键。在本文公开的拟肽大环化合物中，r1和r2的至少一个为烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂烷基或杂环烷基，其未被取代或被卤素-取代。在一些实施方案中，r1和r2均独立地为烷基、烯基、炔基、芳基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂烷基或杂环烷基，其未被取代或被卤素-取代。在一些实施方案中，a、b、c、d或e中的至少一个为α,α-二取代的氨基酸。在一个实例中，b为α,α-二取代的氨基酸。例如，a、b、c、d或e中的至少一个为2-氨基异丁酸。例如，r1和r2的至少一个为未被取代或被卤素-取代的烷基。在另一个实例中，r1和r2均独立地为未被取代或被卤素-取代的烷基。在一些实施方案中，r1和r2的至少一个为甲基。在其他实施方案中，r1和r2为甲基。所述大环化试剂可以是cu试剂或ru试剂。在一些实施方案中，在接触步骤之前纯化拟肽前体。在其他实施方案中，在接触步骤之后纯化拟肽大环化合物。在其他实施方案中，拟肽大环化合物在接触步骤之后重折叠。该方法可以在溶液中进行，或者，该方法可以在固体支持体上进行。本文还设想在目标大分子的存在下进行本文公开的方法，该目标大分子在有利于所述结合的条件下与拟肽前体或拟肽大环化合物结合。在一些实施方案中，该方法在目标大分子的存在下进行，该目标大分子在有利于所述结合的条件下，优先与拟肽前体或拟肽大环化合物结合。该方法还可以应用于合成拟肽大环化合物文库。在一些实施方案中，用于制备所公开的化合物的拟肽前体的炔烃部分是选自l-炔丙基甘氨酸、d-炔丙基甘氨酸、(s)-2-氨基-2-甲基-4-戊炔酸、(r)-2-氨基-2-甲基-4-戊炔酸、(s)-2-氨基-2-甲基-5-己炔酸、(r)-2-氨基-2-甲基-5-己炔酸、(s)-2-氨基-2-甲基-6-庚炔酸、(r)-2-氨基-2-甲基-6-庚炔酸、(s)-2-氨基-2-甲基-7-辛炔酸、(r)-2-氨基-2-甲基-7-辛炔酸、(s)-2-氨基-2-甲基-8-壬炔酸和(r)-2-氨基-2-甲基-8-壬炔酸的氨基酸的侧链。在其他实施方案中，用于制备所公开的化合物的拟肽前体的叠氮部分是选自ε-叠氮基-l-赖氨酸、ε-叠氮基-d-赖氨酸、ε-叠氮基-α-甲基-l-赖氨酸、ε-叠氮基-α-甲基-d-赖氨酸、δ-叠氮基-α-甲基-l-鸟氨酸和δ-叠氮基-α-甲基-d-鸟氨酸的氨基酸的侧链。在一些实施方案中，用于制备所公开的化合物的拟肽前体的巯基是选自下组的氨基酸的侧链：l-半胱氨酸、d-半胱氨酸、l-n-甲基半胱氨酸、d-n-甲基半胱氨酸、l-高半胱氨酸、d-高半胱氨酸、l-n-甲基高半胱氨酸、d-n-甲基高半胱氨酸、α-甲基-l-半胱氨酸、α-甲基-d-半胱氨酸、α-甲基-l-高半胱氨酸、α-甲基-d-高半胱氨酸、l-青霉胺、d-青霉胺、l-n-甲基青霉胺、d-n-甲基青霉胺和为了液相或固相肽合成而适当保护的所有形式。在一些实施方案中，x+y+z为3，并且a、b和c独立地是天然或非天然氨基酸。在其他实施方案中，x+y+z为6，且a、b和c独立地是天然或非天然氨基酸。在一些实施方案中，接触步骤在选自质子溶剂、水性溶剂、有机溶剂及其混合物的溶剂中进行。例如，溶剂可以选自h2o、thf、thf/h2o、tbuoh/h2o、dmf、dipea、ch3cn或ch2cl2、clch2ch2cl或其混合物。溶剂可以是有利于螺旋形成的溶剂。将备选的但等效的保护基团、离去基团或试剂替换，并按照替代的序列或顺序进行特定的合成步骤，以产生希望的化合物。用于合成本文所述的化合物的合成化学转化和保护基团方法(保护和脱保护)包括，例如，如以下文献中所述的方法：larock,comprehensiveorganictransformations,vchpublishers(1989)；greene和wuts,protectivegroupsinorganicsynthesis,第2版,johnwileyandsons(1991)；fieser和fieser,fieserandfieser'sreagentsfororganicsynthesis,johnwileyandsons(1994)；和paquette编著，encyclopediaofreagentsfororganicsynthesis,johnwileyandsons(1995)及其后续版本。本文公开的拟肽大环化合物例如通过化学合成方法制备，如fields等人,syntheticpeptides:auser'sguide中的第3章，grant,w.h.编著，freeman&co.,newyork,n.y.,1992,第77页中所述的方法。因此，例如，采用具有被tboc或fmoc化学部分保护的胺的自动化merrifield固相合成技术，在例如自动化肽合成仪(例如，appliedbiosystems(fostercity,ca),430a、431或433型)上使用侧链保护的氨基酸合成肽。一种产生本文所述的拟肽前体和拟肽大环化合物的方式使用固相肽合成法(spps)。将c-末端氨基酸经由与连接体分子的酸不稳定的键连接到交联的聚苯乙烯树脂上。这种树脂不溶于用于合成的溶剂，从而使得洗去过量的试剂和副产物相对简单和快速。n-末端用在酸中稳定、但可用碱去除的fmoc基团保护。必要时，用碱稳定的、酸不稳定的基团保护侧链官能团。例如，通过使用天然的化学连接结合单个的合成肽来产生较长的拟肽前体。或者，通过公知的重组dna和蛋白质表达技术生物合成较长的合成肽。这些技术在公知的标准手册中提供了详细方案。为了构建编码本文公开的拟肽前体的基因，逆向翻译氨基酸序列以获得编码该氨基酸序列的核酸序列，优选地使用对于将表达该基因的生物体为最佳的密码子。然后，通常通过合成编码该肽的寡核苷酸和在必要时合成任何调节元件来制备合成的基因。将合成的基因插入合适的克隆载体中，并转染到宿主细胞内。然后在适合选择的表达系统和宿主的合适条件下表达该肽。通过标准方法纯化并表征该肽。例如，使用例如高通量多通道组合合成仪(例如，来自creosalus,louisville,ky的thuramedtetras多通道肽合成仪或来自aapptec,inc.,louisville,ky的apex396型多通道肽合成仪)以高通量的组合方式制备拟肽前体。提供以下合成方案只是为了说明本发明，而并非意在限制如本文所述的本发明的范围。合成方案1-5描述了所公开的拟肽大环化合物的制备。为了简化图片，说明性的方案显示了叠氮基氨基酸类似物ε-叠氮基-α-甲基-l-赖氨酸和ε-叠氮基-α-甲基-d-赖氨酸，以及炔氨基酸类似物l-炔丙基甘氨酸、(s)-2-氨基-2-甲基-4-戊炔酸和(s)-2-氨基-2-甲基-6-庚炔酸。因此，在下面的合成方案中，r1、r2、r7和r8各自为-h；每个l1为-(ch2)4-；且每个l2为-(ch2)-。但是，如以上整个发明详述部分所指出的，可以采用许多其他的氨基酸类似物，其中r1、r2、r7、r8、l1和l2可以独立地选自本文公开的各种结构。合成方案1：合成方案1描述了可用于制备本文公开的化合物的几种化合物的制备。如belokon等人(1998),tetrahedronasymm.9:4249-4252所述制备由手性辅剂(s)-2-[n-(n’-苄基脯氨酰)氨基]苯甲酮(bpb)衍生的席夫碱和诸如甘氨酸或丙氨酸的氨基酸的ni(ii)络合物。产生的络合物随后与包含叠氮部分或炔部分的烷基化试剂反应，以产生对映体富集的本文公开的化合物。如需要，可以对产生的化合物进行保护以用于肽合成。合成方案2：在如合成方案2所示的用于合成所公开的拟肽大环化合物的一般方法中，拟肽前体包含叠氮部分和炔部分，并且通过溶液相或固相肽合成法(spps)，使用可商购的氨基酸n-α-fmoc-l-炔丙基甘氨酸以及氨基酸(s)-2-氨基-2-甲基-4-戊炔酸、(s)-2-氨基-6-庚炔酸、(s)-2-氨基-2-甲基-6-庚炔酸、n-甲基-ε-叠氮基-l-赖氨酸和n-甲基-ε-叠氮基-d-赖氨酸的n-α-fmoc保护的形式合成。然后通过标准条件(例如，强酸如95％tfa)将拟肽前体脱保护并从固相树脂上切下。拟肽前体作为粗制混合物进行反应，或者在与大环化试剂如cu(i)在有机溶液或水性溶液中反应之前进行纯化(rostovtsev等人(2002),angew.chem.int.ed.41:2596-2599；tornoe等人(2002),j.org.chem.67:3057-3064；deiters等人(2003),j.am.chem.soc.125:11782-11783；punna等人(2005),angew.chem.int.ed.44:2215-2220)。在一个实施方案中，在有利于α-螺旋形成的条件下进行三唑形成反应。在一个实施方案中，在选自h2o、thf、ch3cn、dmf、dipea、tbuoh或其混合物的溶剂中进行大环化步骤。在另一个实施方案中，在dmf中进行大环化步骤。在一些实施方案中，在经缓冲的水性溶剂或部分水性溶剂中进行大环化步骤。合成方案3：在如合成方案3所示的用于合成所公开的拟肽大环化合物的一般方法中，拟肽前体包含叠氮部分和炔部分，并且通过固相肽合成法(spps)，使用可商购的氨基酸n-α-fmoc-l-炔丙基甘氨酸以及氨基酸(s)-2-氨基-2-甲基-4-戊炔酸、(s)-2-氨基-6-庚炔酸、(s)-2-氨基-2-甲基-6-庚炔酸、n-甲基-ε-叠氮基-l-赖氨酸和n-甲基-ε-叠氮基-d-赖氨酸的n-α-fmoc保护的形式合成。拟肽前体作为粗制混合物与大环化试剂如cu(i)试剂在树脂上反应(rostovtsev等人(2002),angew.chem.int.ed.41:2596-2599；tornoe等人(2002),j.org.chem.67:3057-3064；deiters等人(2003),j.am.chem.soc.125:11782-11783；punna等人(2005),angew.chem.int.ed.44:2215-2220)。然后通过标准条件(例如，强酸如95％tfa)将得到的含三唑的拟肽大环化合物脱保护并从固相树脂上切下。在某些实施方案中，在选自ch2cl2、clch2ch2cl、dmf、thf、nmp、dipea、2,6-二甲基吡啶、吡啶、dmso、h2o或其混合物的溶剂中进行大环化步骤。在一些实施方案中，在经缓冲的水性溶剂或部分水性溶剂中进行大环化步骤。合成方案4：在如合成方案4所示的用于合成所公开的拟肽大环化合物的一般方法中，拟肽前体包含叠氮部分和炔部分，并且通过溶液相或固相肽合成法(spps)，使用可商购的氨基酸n-α-fmoc-l-炔丙基甘氨酸以及氨基酸(s)-2-氨基-2-甲基-4-戊炔酸、(s)-2-氨基-6-庚炔酸、(s)-2-氨基-2-甲基-6-庚炔酸、n-甲基-ε-叠氮基-l-赖氨酸和n-甲基-ε-叠氮基-d-赖氨酸的n-α-fmoc保护的形式合成。然后通过标准条件(例如，强酸如95％tfa)将拟肽前体脱保护并从固相树脂上切下。拟肽前体作为粗制混合物进行反应，或者在与大环化试剂如cu(ii)试剂例如cp*rucl(pph3)2或[cp*rucl]4反应之前进行纯化(rasmussen等人(2007),org.lett.9:5337-5339；zhang等人(2005),j.am.chem.soc.127:15998-15999)。在一些实施方案中，在选自dmf、ch3cn和thf的溶剂中进行大环化步骤。合成方案5：在如合成方案5所示的用于合成所公开的拟肽大环化合物的一般方法中，拟肽前体包含叠氮部分和炔部分，并且通过固相肽合成法(spps)，使用可商购的氨基酸n-α-fmoc-l-炔丙基甘氨酸以及氨基酸(s)-2-氨基-2-甲基-4-戊炔酸、(s)-2-氨基-6-庚炔酸、(s)-2-氨基-2-甲基-6-庚炔酸、n-甲基-ε-叠氮基-l-赖氨酸和n-甲基-ε-叠氮基-d-赖氨酸的n-α-fmoc保护的形式合成。拟肽前体作为粗制混合物与大环化试剂如ru(ii)试剂在树脂上反应。例如，该试剂可以是cp*rucl(pph3)2或[cp*rucl]4(rasmussen等人(2007),org.lett.9:5337-5339；zhang等人(2005),j.am.chem.soc.127:15998-15999)。在一些实施方案中，在选自ch2cl2、clch2ch2cl、ch3cn、dmf和thf的溶剂中进行大环化步骤。在一些实施方案中，所公开的拟肽大环化合物在三唑部分上包含卤素基团取代，例如碘取代。此类拟肽大环化合物可由具有部分结构的前体并使用本文所教导的交联方法来制备。如本文所述的任何长度的交联剂可制备为包含此类取代。在一个实施方案中，拟肽大环化合物根据如下所示的方案制备。例如，在cui和胺配体如tea或ttta的存在下进行反应。参见，例如，hein等人.angew.chem.,int.ed.2009,48,8018-8021。在其他实施方案中，根据以下所示的方案产生碘取代的三唑。例如，以下反应方案中的第二步骤例如使用cui和n-溴代琥珀酰亚胺(nbs)在thf的存在下进行(参见，例如，zhang等人,j.org.chem.2008,73,3630-3633)。在其他实施方案中，以下所示的反应方案中的第二步骤例如使用cui和碘化剂如icl进行(参见，例如，wu等人,synthesis2005,1314-1318)。在一些实施方案中，在交叉偶联反应，例如suzuki或sonogashira偶联中使用碘取代的三唑部分，以得到包含经取代的交联体的拟肽大环化合物。如下所示使用炔烃的sonogashira偶联可例如在诸如pd(pph3)2cl2的钯催化剂、cui的存在下以及诸如三乙胺的碱的存在下进行。如下所示使用芳基硼酸或经取代的烯基硼酸的suzuki偶联可例如在诸如pd(pph3)4的催化剂的存在下和诸如k2co3的碱的存在下进行。与碘取代的三唑反应的任何合适的三唑取代基均可在本文所述的suzuki偶联中使用。用于suzuki偶联的示例性的三唑取代基如下所示：其中“cyc”为合适的芳基、环烷基、环烯基、杂芳基或杂环基，它们是未取代的或任选地被如下所述的ra或rb基团取代。在一些实施方案中，所述取代基是：与碘取代的三唑反应的任何合适的取代基均可在本文所述的sonogashira偶联中使用。用于sonogashira偶联的示例性的三唑取代基如下所示：其中“cyc”为合适的芳基、环烷基、环烯基、杂芳基或杂环基，它们是未取代的或任选地被如下所述的ra或rb基团取代。在一些实施方案中，所述三唑取代基为：在一些实施方案中，以上所示的cyc基团进一步被至少一个ra或rb取代基所取代。在一些实施方案中，ra和rb中的至少一个独立地为：ra或rb＝h,och3,cf3,nh2,ch2nh2,f,br,i在其他实施方案中，所述三唑取代基为且ra和rb中的至少一个为烷基(包括氢、甲基或乙基)，或：本发明涉及在本文所述的公开拟肽大环化合物的合成中使用非天然存在的氨基酸和氨基酸类似物。任何适合于用来合成稳定的含三唑拟肽大环化合物的合成方法的氨基酸或氨基酸类似物都可以用于本发明。例如，预计l-炔丙基甘氨酸是本发明中有用的氨基酸。但是，含有不同氨基酸侧链的其他含炔的氨基酸也可用于本发明。例如，l-炔丙基甘氨酸在氨基酸的α-碳和氨基酸侧链的炔之间含有一个亚甲基单元。本发明也涉及使用在α-碳和炔之间具有多个亚甲基单元的氨基酸。另外，也预计氨基酸l-赖氨酸、d-赖氨酸、α-甲基-l-赖氨酸和α-甲基-d-赖氨酸的叠氮类似物是本发明的有用的氨基酸。但是，含有不同的氨基酸侧链的其他末端叠氮氨基酸也可以用于本发明。例如，l-赖氨酸的叠氮类似物在氨基酸的α-碳和氨基酸侧链的末端叠氮基之间含有4个亚甲基单元。本发明也涉及使用在α-碳和末端叠氮基之间具有少于或多于4个亚甲基单元的氨基酸。以下表4显示了一些可用于制备本文公开的拟肽大环化合物的氨基酸。表4在一些实施方案中，氨基酸和氨基酸类似物是d-构型。在其他实施方案中，它们是l-构型。在某些实施方案中，拟肽中包含的某些氨基酸和氨基酸类似物是d-构型，而某些氨基酸和氨基酸类似物是l-构型。在一些实施方案中，氨基酸类似物是α,α-二取代的，如α-甲基-l-炔丙基甘氨酸、α-甲基-d-炔丙基甘氨酸、ε-叠氮基-α-甲基-l-赖氨酸和ε-叠氮基-α-甲基-d-赖氨酸。在一些实施方案中，氨基酸类似物是n-烷基化的，例如，n-甲基-l-炔丙基甘氨酸、n-甲基-d-炔丙基甘氨酸、n-甲基-ε-叠氮基-l-赖氨酸和n-甲基-ε-叠氮基-d-赖氨酸。所公开的大环化合物的制备例如在2007年12月17日提交的美国申请11/957,325中有描述，该申请通过引用并入本文。合成方案6-9描述了所公开的这类化合物的制备。为了简化图片，该说明性的方案显示了由l-或d-半胱氨酸衍生的氨基酸类似物，其中l1和l3都是-(ch2)-。但是，如以上整个发明详述部分所指出的，可以采用许多其他的氨基酸类似物，其中l1和l3可以独立地选自本文公开的各种结构。符号“[aa]m”、“[aa]n”、“[aa]o”表示酰胺键连接的部分如天然或非天然氨基酸的序列。如前面所述，每个出现的“aa”与任何其他出现的“aa”无关，而且诸如“[aa]m”的通式包括，例如，不相同氨基酸的序列以及相同氨基酸的序列。合成方案6：在方案6中，拟肽前体含有2个-sh部分，而且使用可商购的n-α-fmoc氨基酸如n-α-fmoc-s-三苯甲基-l-半胱氨酸或n-α-fmoc-s-三苯甲基-d-半胱氨酸通过固相肽合成法(spps)来合成。通过已知方法(seebach等人(1996),angew.chem.int.ed.engl.35:2708-2748以及其中的参考文献)产生d-半胱氨酸或l-半胱氨酸的α-甲基化形式，然后通过已知方法("bioorganicchemistry:peptidesandproteins",oxforduniversitypress,newyork:1998,本文通过引用引入其完整内容)将其转化为适当保护的n-α-fmoc-s-三苯甲基单体。接着通过标准条件(例如，强酸如95％tfa)对前体拟肽脱保护并从固相树脂上切下。前体拟肽作为粗制混合物进行反应，或者在有机溶液或水性溶液中在与x-l2-y反应前进行纯化。在某些实施方案中，在稀释条件(即，0.15mmol/l)下进行烷基化反应，以有利于大环化并避免聚合。在某些实施方案中，在有机溶液如液nh3中(mosberg等人(1985),j.am.chem.soc.107:2986-2987；szewczuk等人(1992),int.j.peptideproteinres.40:233-242)、nh3/meoh中或nh3/dmf中(or等人(1991),j.org.chem.56:3146-3149)进行烷基化反应。在其他实施方案中，在水性溶液如ph8的6m盐酸胍中进行烷基化反应(brunel等人(2005),chem.commun.(20):2552-2554)。在其他实施方案中，用于烷基化反应的溶剂是dmf或二氯乙烷。合成方案7：在方案7中，前体拟肽含有2个或更多个-sh部分，其中的2个特别地进行保护以允许其选择性地脱保护及随后烷基化以形成大环。通过固相肽合成法(spps)，使用可商购的n-α-fmoc氨基酸如n-α-fmoc-s-对甲氧基三苯甲基-l-半胱氨酸或n-α-fmoc-s-对甲氧基三苯甲基-d-半胱氨酸合成前体拟肽。通过已知方法(seebach等人(1996),angew.chem.int.ed.engl.35:2708-2748以及其中的参考文献)产生d-半胱氨酸或l-半胱氨酸的α-甲基化形式，然后通过已知方法(bioorganicchemistry:peptidesandproteins,oxforduniversitypress,newyork:1998，其完整内容通过引用并入本文)将其转化为适当保护的n-α-fmoc-s-对甲氧基三苯甲基单体。然后通过标准条件(例如，弱酸，如dcm中的1％tfa)选择性地切下拟肽前体的mmt保护基团。然后前体拟肽在树脂上与有机溶液中的x-l2-y反应。例如，该反应在受阻碱如二异丙基乙胺的存在下发生。在某些实施方案中，烷基化反应在有机溶液如液nh3中(mosberg等人(1985),j.am.chem.soc.107:2986-2987；szewczuk等人(1992),int.j.peptideproteinres.40:233-242)、nh3/meoh中或nh3/dmf(or等人(1991),j.org.chem.56:3146-3149)中进行。在其他实施方案中，烷基化反应在dmf或二氯乙烷中进行。然后通过标准条件(例如，强酸，如95％tfa)将拟肽大环化合物脱保护并从固相树脂上切下。合成方案8：在方案8中，拟肽前体含有2个或更多个-sh部分，其中的2个进行特别保护以允许其选择性地脱保护和随后烷基化以形成大环。通过固相肽合成法(spps)，使用可商购的n-α-fmoc氨基酸如n-α-fmoc-s-对甲氧基三苯甲基-l-半胱氨酸、n-α-fmoc-s-对甲氧基三苯甲基-d-半胱氨酸、n-α-fmoc-s-s-叔丁基-l-半胱氨酸和n-α-fmoc-s-s-叔丁基-d-半胱氨酸合成拟肽前体。通过已知方法(seebach等人(1996),angew.chem.int.ed.engl.35:2708-2748以及其中的参考文献)产生d-半胱氨酸或l-半胱氨酸的α-甲基化形式，然后通过已知方法(bioorganicchemistry:peptidesandproteins,oxforduniversitypress,newyork:1998,其完整内容通过引用并入本文)将其转化为适当保护的n-α-fmoc-s-对甲氧基三苯甲基或n-α-fmoc-s-s-叔丁基单体。然后通过已知条件(例如，dmf中的20％的2-巯基乙醇，参考文献：galande等人(2005),j.comb.chem.7:174-177)选择性地切下拟肽前体的s-s-叔丁基保护基团。然后前体拟肽在树脂上与有机溶液中的摩尔过量的x-l2-y反应。例如，反应在受阻碱如二异丙基乙胺的存在下发生。然后通过标准条件(例如，弱酸，如dcm中的1％tfa)选择性地切下拟肽前体的mmt保护基团。拟肽前体然后通过用有机溶液中的受阻碱处理而在树脂上环化。在某些实施方案中，在诸如nh3/meoh或nh3/dmf(or等人(1991),j.org.chem.56:3146-3149)的有机溶液中进行烷基化反应。然后通过标准条件(例如，强酸，如95％tfa)将拟肽大环化合物脱保护并从固相树脂上切下。合成方案9：在方案9中，拟肽前体含有2个l-半胱氨酸部分。通过已知的活细胞中的生物表达系统或通过已知的体外无细胞表达方法合成拟肽前体。前体拟肽作为粗制混合物进行反应，或者在与x-l2-y在有机溶液或水性溶液中反应之前进行纯化。在某些实施方案中，在稀释条件(即，0.15mmol/l)下进行烷基化反应，以利于大环化并避免聚合。在某些实施方案中，在有机溶液如液nh3中(mosberg等人(1985),j.am.chem.soc.107:2986-2987；szewczuk等人(1992),int.j.peptideproteinres.40:233-242)、nh3/meoh中或nh3/dmf中(or等人(1991),j.org.chem.56:3146-3149)进行烷基化反应。在其他实施方案中，在水溶液如ph8的6m盐酸胍中进行烷基化反应(brunel等人(2005),chem.commun.(20):2552-2554)。在其他实施方案中，在dmf或二氯乙烷中进行烷基化反应。在另一实施方案中，在非变性水溶液中进行烷基化，在再另一个实施方案中，在有利于α-螺旋结构形成的条件下进行烷基化。在再另一个实施方案中，在有利于前体拟肽与另一种蛋白质结合的条件下进行烷基化，从而在烷基化过程中诱导结合的α-螺旋构象的形成。本发明设想了适合与巯基反应的x和y的各种实施方案。通常，x或y各自独立地选自表5所示的总类。例如，x和y是诸如-cl、-br或-i的卤素。本文所述的任何大环形成连接体可以与所示的任何序列任意组合使用，也可以与本文表明的任何r-取代基任意组合使用。表5能够与巯基反应的反应性基团和产生的连接的实例x或y产生的共价连接丙烯酰胺硫醚卤化物(例如，烷基或芳基卤化物)硫醚磺酸酯(sulfonate)硫醚氮丙啶硫醚环氧化物硫醚卤代乙酰胺硫醚马来酰亚胺硫醚磺酸酯硫醚本发明涉及在所公开的拟肽大环化合物的合成中使用天然存在的和非天然存在的氨基酸和氨基酸类似物两者。任何适合用来合成稳定的含双巯基的拟肽大环化合物的合成方法的氨基酸或氨基酸类似物都可以用于本发明。例如，预计半胱氨酸是本发明中有用的氨基酸。但是，除半胱氨酸之外的含有不同氨基酸侧链的含硫氨基酸也是有用的。例如，半胱氨酸在氨基酸的α-碳和氨基酸侧链的末端-sh之间含有一个亚甲基单元。本发明也涉及使用在α-碳和末端-sh之间具有多个亚甲基单元的氨基酸。非限制的例子包括α-甲基-l-高半胱氨酸和α-甲基-d-高半胱氨酸。在某些实施方案中，氨基酸和氨基酸类似物是d-构型。在其他实施方案中，它们是l-构型。在某些实施方案中，拟肽中包含的某些氨基酸和氨基酸类似物是d-构型，而某些氨基酸和氨基酸类似物是l-构型。在某些实施方案中，氨基酸类似物是α,α-二取代的，如α-甲基-l-半胱氨酸和α-甲基-d-半胱氨酸。本发明包括其中大环形成连接体用来连接拟肽前体中的两个或多个-sh部分以形成本文公开的拟肽大环化合物的大环化合物。如上所述，大环形成连接体赋予构象刚性、提高代谢稳定性和/或提高细胞透性。另外，在某些实施方案中，形成大环的连接稳定拟肽大环化合物的α-螺旋二级结构。大环形成连接体具有式x-l2-y，其中x和y都是如上定义的相同或不同的部分。x和y二者都具有允许一个大环形成连接体-l2-使含有双巯基的拟肽前体双烷基化的化学特性。如上定义，连接体-l2-包括亚烷基、亚烯基、亚炔基、亚杂烷基、亚环烷基、亚杂环烷基、亚环芳基或亚杂环芳基或-r4-k-r4-，它们都可以任选地被如上定义的r5基团取代。另外，除了连接含巯基氨基酸的-sh的碳之外，大环形成连接体-l2-中的1-3个碳原子任选地被杂原子如n、s或o替代。大环形成连接体x-l2-y的l2部分尤其根据用来形成拟肽大环化合物的两个氨基酸类似物的位置之间的距离而在长度上可以变化。另外，随着大环形成连接体的l1和/或l3部分的长度发生变化，l2的长度也可以变化，以产生具有合适的总长度的连接体以形成稳定的拟肽大环化合物。例如，如果通过向每个l1和l3添加另外的亚甲基单元来改变所使用的氨基酸类似物，那么l2在长度上减少等同于大约两个亚甲基单元的长度，以抵消l1和l3的长度增加。在一些实施方案中，l2是式-(ch2)n-的亚烷基基团，其中，n为大约1至大约15之间的整数。例如，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在其他实施方案中，l2为亚烯基。在另外其他的实施方案中，l2为芳基。表6显示x-l2-y基团的另外的实施方案。例如，该表中的每个x和y独立地为cl–、br–或i–。表6设想为合适的形成拟肽大环化合物的其他方法包括以下文献中公开的方法：mustapa,m.firouzmohd等人,j.org.chem(2003),68,第8193-8198页；yang,bin等人bioorgmed.chem.lett.(2004),14,第1403-1406页；美国专利5,364,851；美国专利5,446,128；美国专利5,824,483；美国专利6,713,280和美国专利7,202,332。在这样的实施方案中，使用在α-位含有另外的取代基r-的氨基酸前体。这样的氨基酸在希望的位置并入大环化合物前体中，其可以处于交联体被取代的位置，或者，备选地，在大环化合物前体序列中的其他位置。然后根据指定的方法实现前体的环化。在一些实施方案中，使用包括但不限于-fmoc和-boc的保护基团保护氨基酸的-nh部分。在其他实施方案中，在合成拟肽大环化合物之前不保护氨基酸。试验例如，本发明拟肽大环化合物的性质通过使用下面所述的方法进行分析。在一些实施方案中，本发明拟肽大环化合相对于缺乏本文所述的取代基的相应多肽具有改善的生物学性质。用于测定α-螺旋度的试验在溶液中，具有α-螺旋结构域的多肽的二级结构在随机卷曲结构和α-螺旋结构之间达到动态平衡，这通常被称为“百分螺旋度”。因此，例如，α-螺旋结构域在溶液中主要是随机卷曲，α-螺旋含量通常低于25％。另一方面，具有优化的连接体的拟肽大环化合物具有例如至少为相应的非交联多肽的2倍的α-螺旋度。在一些实施方案中，大环化合物具有高于50％的α-螺旋度。为了测定拟肽大环化合物的螺旋度，将化合物溶解于水溶液(例如，ph7的50mm磷酸钾溶液或蒸馏水，达到25-50μm的浓度)。使用标准测量参数(例如，温度，20℃；波长，190-260nm；步分辨率(stepresolution)，0.5nm；速度，20nm/sec；累积，10；响应，1秒；带宽，1nm；路径长度，0.1cm)在分光偏振计(例如，jascoj-710)上获得圆二色性(cd)谱。通过将平均残基椭圆度(例如，[φ]222obs)除以模型螺旋十肽的报道值(yang等人(1986),methodsenzymol.130:208)来计算各个肽的α-螺旋含量。用于测量解链温度(tm)的试验含有二级结构如α-螺旋的本发明拟肽大环化合物显示出例如比相应的非交联多肽更高的解链温度。通常，本发明拟肽大环化合物显示出>60℃的tm，表明在水溶液中高度稳定的结构。为了分析大环形成对解链温度的影响，将拟肽大环化合物或未修饰的肽溶于蒸馏水中(例如，以50μm的终浓度)，并且通过使用标准参数(例如，波长，222nm；步分辨率，0.5nm；速度，20nm/sec；累积，10；响应，1秒；带宽，1nm；温度上升速度，1℃/分钟；路径长度，0.1cm)在分光偏振计(例如，jascoj-710)上测量椭圆度在一定温度范围(例如，4-95℃)内的变化来确定tm。蛋白酶抗性试验肽骨架的酰胺键易受到蛋白酶的水解，从而致使肽化合物在体内易于快速降解。但是，肽螺旋的形成通常包埋酰胺骨架，因此可以保护其免于蛋白水解裂解。本发明拟肽大环化合物可以经历体外胰蛋白酶的蛋白水解，以评价与相应的非交联多肽相比其降解速率的任何变化。例如，拟肽大环化合物和相应的非交联多肽与胰蛋白酶琼脂糖一起孵育，并在各个时间点通过离心猝灭反应，随后进行hplc注入以根据280nm处的紫外吸收对残留的底物进行定量。简单来说，拟肽大环化合物和拟肽前体(5mcg)与胰蛋白酶琼脂糖(pierce)(s/e～125)孵育0、10、20、90和180分钟。通过台式离心机高速离心猝灭反应；通过基于hplc的在280nm处的峰检测对分离的上清液中残余的底物进行定量。蛋白水解反应显示出一级动力学，且速率常数k由ln[s]相对于时间的曲线确定(k＝-1x斜率)。离体稳定性试验具有优化的连接体的拟肽大环化合物具有例如至少为相应的非交联多肽的2倍的离体半衰期，且具有12小时或更长的离体半衰期。对于离体血清稳定性研究，可以使用多种试验。例如，将拟肽大环化合物和相应的非交联多肽(2mcg)与新鲜的小鼠、大鼠和/或人血清(2ml)一起在37℃下孵育0、1、2、4、8和24小时。为了测定完整化合物的水平，可以使用下面的程序：通过将100μl的血清转移到2ml离心管中，接着加入10μl的50％甲酸和500μl乙腈并在4±2℃下以14,000rpm离心10分钟来提取样品。然后将上清液转移到新的2ml管中，并在n2<10psi、37℃下在turbovap上蒸发。样品在100μl的50:50乙腈:水中重建，并进行lc-ms/ms分析。体外结合试验为了评估拟肽大环化合物和拟肽前体与受体蛋白质的结合和亲和力，例如使用荧光偏振试验(fpa)。fpa技术使用偏振光和荧光示踪剂测量分子取向和分子迁移率。当用偏振光激发时，由于附接在具有高表观分子量的分子(例如，与大蛋白质结合的fitc标记的肽)上的荧光示踪剂(例如，fitc)与附接在较小分子(例如，在溶液中游离的fitc标记的肽)上的荧光示踪剂相比具有较慢的旋转速度，附接在具有高表观分子量的分子上的荧光示踪剂发射较高水平的偏振荧光。例如，荧光标记的(fluoresceinated)拟肽大环化合物(25nm)与接受体蛋白质(25-1000nm)在结合缓冲液(140mmnacl、50mmtris-hcl，ph7.4)中在室温下孵育30分钟。例如，用发光分光光度计(例如，perkin-elmerls50b)通过荧光偏振测定结合活性。可以使用例如graphpadprism软件(graphpadsoftware,inc.,sandiego,ca)通过非线性回归分析来确定kd值。在一些情况下，本发明拟肽大环化合物显示出与相应的非交联多肽类似的或更低的kd。用于表征肽-蛋白质相互作用的拮抗剂的体外置换试验为了评估拮抗肽与接受体蛋白质之间相互作用的化合物的结合和亲和力，例如，使用利用来源于拟肽前体序列的荧光标记的拟肽大环化合物的荧光偏振试验(fpa)。fpa技术使用偏振光和荧光示踪剂测量分子取向和分子迁移率。当用偏振光激发时，由于附接在具有高表观分子量的分子(例如，与大蛋白质结合的fitc标记的肽)上的荧光示踪剂(例如，fitc)与附接在较小分子(例如，在溶液中游离的fitc标记的肽)上的荧光示踪剂相比具有较低的旋转速度，附接在具有高表观分子量的分子上的荧光示踪剂发射较高水平的偏振荧光。拮抗荧光标记的拟肽大环化合物与接受体蛋白质之间相互作用的化合物将在竞争性结合fpa实验中进行检测。例如，推定的拮抗剂化合物(1nm至1mm)和荧光标记的拟肽大环化合物(25nm)与接受体蛋白质(50nm)一起在结合缓冲液(140mmnacl、50mmtris-hcl，ph7.4)中在室温下孵育30分钟。例如，用发光分光光度计(例如，perkin-elmerls50b)通过荧光偏振测定拮抗剂结合活性。可以使用例如graphpadprism软件(graphpadsoftware,inc.,sandiego,ca)通过非线性回归分析来确定kd值。任一类分子，如有机小分子、肽、寡核苷酸或蛋白质，可以在该试验中作为推定的拮抗剂进行检测。通过亲和选择-质谱法对蛋白质-配体结合的分析为了评估测试化合物对蛋白质的结合和亲和力，例如采用亲和选择-质谱分析试验。按照以下对全系统对照实验概述的代表性程序，使用1μm拟肽大环化合物加5μmhmdm2进行蛋白质-配体结合实验。将40μm拟肽大环化合物储备溶液的1μldmso等份溶解在19μlpbs(磷酸盐缓冲盐水：含有150mmnacl的50mm,ph7.5磷酸盐缓冲液)中。得到的溶液通过反复吸液进行混合并通过在10000g下离心10分钟进行澄清。向4μl等份得到的上清液中加入4μl10μmhmdm2的pbs溶液。每个8.0μl实验样品因此含有在pbs中的浓度为5.0μm的40pmol(1.5μg)蛋白质，加1μm拟肽大环化合物和2.5％dmso。针对每个浓度点如此制备的双份样品在室温下孵育60分钟，然后冷却至4℃，之后进行5.0μl注入液的大小排阻层析-lc-ms分析。将含有靶蛋白、蛋白质-配体复合体和未结合的化合物的样品注入到sec柱上，通过快速sec步骤将复合体与未结合的成分在该柱上分离。采用uv检测器监测sec柱洗脱液，以证实在sec柱的外水体积中洗脱的早期洗脱的蛋白质级分从保留在柱上的未结合的成分中良好地分离出来。在含有蛋白质和蛋白质-配体复合体的峰从主uv检测器洗脱后，它进入样品环路，在其中从sec阶段的流上截下，并通过阀门机构直接转移到lc-ms。通过esi-ms以预期的m/z观察拟肽大环化合物的(m+3h)3+离子，证实检测到蛋白质-配体复合体。用于蛋白质-配体kd滴定实验的分析为了评估测试化合物对蛋白质的结合和亲和力，例如，进行蛋白质-配体kd滴定实验。蛋白质-配体kd滴定实验如下进行：制备连续稀释的滴定剂拟肽大环化合物储备溶液(5,2.5,...,0.098mm)的2μldmso等份，然后溶解在38μlpbs中。得到的溶液通过反复吸液进行混合并通过在10000g下离心10分钟进行澄清。向4.0μl等份得到的上清液中加入4.0μl10μmhmdm2的pbs溶液。每个8.0μl实验样品因此含有在pbs中的浓度为5.0μm的40pmol(1.5μg)蛋白质，不同浓度(125,62.5,...,0.24μm)的滴定肽和2.5％dmso。针对每个浓度点如此制备的双份样品在室温下孵育30分钟，然后冷却至4℃，之后进行2.0μl注入液的sec-lc-ms分析。通过esi-ms观察(m+h)1+、(m+2h)2+、(m+3h)3+和/或(m+na)1+离子；对提取的离子色谱图进行定量，然后与方程拟合，以推导出结合亲和力kd，如以下文献所述：“ageneraltechniquetorankprotein-ligandbindingaffinitiesanddetermineallostericvs.directbindingsitecompetitionincompoundmixtures.”annis,d.a.；nazef,n.；chuang,c.c.；scott,m.p.；nash,h.m.j.am.chem.soc.2004,126,15495-15503，以及“alis:anaffinityselection-massspectrometrysystemforthediscoveryandcharacterizationofprotein-ligandinteractions”d.a.annis,c.-c.chuang,andn.nazef.inmassspectrometryinmedicinalchemistry.wannerk,g:wiley-vch编著；2007:121-184.mannholdr,kubinyih,folkersg(系列编者):methodsandprinciplesinmedicinalchemistry。通过亲和选择-质谱法进行竞争性结合实验的分析为了确定测试化合物竞争性结合蛋白质的能力，例如，进行亲和选择-质谱分析试验。通过将三种化合物中每一种的2μl等份400μm储备液与14μldmso混合制备每种成分40μm的配体混合物。然后，将1μl等份的该每种成分40μm的混合物与滴定剂拟肽大环化合物连续稀释储备溶液(10,5,2.5,...,0.078mm)的1μldmso等份混合。将这些2μl样品溶解在38μlpbs中。得到的溶液通过反复吸液进行混合并通过在10000g下离心10分钟进行澄清。向4.0μl等份得到的上清液中加入4.0μl10μmhmdm2的pbs溶液。每个8.0μl实验样品因此含有在pbs中的浓度为5.0μm的40pmol(1.5μg)蛋白质，加0.5μm配体、2.5％dmso和不同浓度(125,62.5,...,0.98μm)的滴定剂拟肽大环化合物。针对每个浓度点如此制备的双份样品在室温下孵育60分钟，然后冷却至4℃，之后进行2.0μl注入液的sec-lc-ms分析。这些和其他方法的另外的细节在以下文献中提供：“ageneraltechniquetorankprotein-ligandbindingaffinitiesanddetermineallostericvs.directbindingsitecompetitionincompoundmixtures.”annis,d.a.；nazef,n.；chuang,c.c.；scott,m.p.；nash,h.m.j.am.chem.soc.2004,126,15495-15503；以及“alis:anaffinityselection-massspectrometrysystemforthediscoveryandcharacterizationofprotein-ligandinteractions”d.a.annis,c.-c.chuang,andn.nazef.inmassspectrometryinmedicinalchemistry.wannerk,g:wiley-vch编著；2007:121-184.mannholdr,kubinyih,folkersg(系列编者):methodsandprinciplesinmedicinalchemistry。在完整细胞中的结合分析有可能通过免疫沉淀实验测定肽或拟肽大环化合物与其天然受体在完整细胞中的结合。例如，完整的细胞与荧光标记的(fitc-标记的)化合物在无血清的情况下孵育4小时，接着进行血清置换并进一步孵育4-18小时。然后使细胞沉淀，并在4℃下在裂解缓冲液(50mmtris[ph7.6]、150mmnacl、1％的chaps和蛋白酶抑制剂混合物)中孵育10分钟。以14,000rpm离心提取物15分钟，收集上清液，并与10μl山羊抗-fitc抗体一起孵育2小时，在4℃下旋转，接着进一步在4℃下与蛋白a/gsepharose(50μl的50％微珠浆)孵育2小时。快速离心之后，将沉淀物在含有渐增的盐浓度(例如，150、300、500mm)的裂解缓冲液中洗涤。随后以150mmnacl再平衡微珠，之后加入含有sds的样品缓冲液并煮沸。离心之后，任选地使用4％-12％梯度的bis-tris凝胶对上清液进行电泳，接着转移到immobilon-p膜上。封闭后，任选地将印迹与检测fitc的抗体一起孵育，也与一种或多种检测与拟肽大环化合物结合的蛋白质的抗体一起孵育。细胞透性分析与相应的非交联大环化合物相比，拟肽大环化合物例如具有更高的细胞透性。具有优化的连接体的拟肽大环化合物具有例如是相应的非交联大环化合物的至少2倍的细胞透性，并且常常观察到20％或更多的应用的拟肽大环化合物在4小时后已渗透入细胞。为了测量拟肽大环化合物和相应的非交联大环化合物的细胞透性，将完整的细胞与荧光化的(fluoresceinated)拟肽大环化合物或相应的非交联大环化合物(10μm)一起在不含血清的培养基中37℃孵育4小时，用培养基洗涤2次，并与胰蛋白酶(0.25％)在37℃下孵育10分钟。再次洗涤细胞并将其重悬浮于pbs中。例如，通过使用facscalibur流式细胞仪或cellomics’hcs读数仪分析细胞荧光。细胞效力分析例如，在基于细胞的杀伤试验中，使用多种致瘤和非致瘤的细胞系及源自人类或小鼠细胞群体的原代细胞测定某些拟肽大环化合物的效力。例如，在与拟肽大环化合物(0.5-50μm)一起孵育的24-96小时期间监测细胞的活力，以鉴定那些以ec50<10μm杀死细胞的化合物。检测细胞活力的几种标准分析是可以通过商业途径得到的，并且任选地用来评价拟肽大环化合物的效力。另外，测定膜联蛋白v和胱天蛋白酶激活的分析任选地用来评价拟肽大环化合物是否通过激活凋亡机制杀死细胞。例如，采用celltiter-glo试验，该试验确定随细胞内atp浓度变化的细胞活力。体内稳定性分析为了研究拟肽大环化合物的体内稳定性，例如，向小鼠和/或大鼠通过静脉内、腹膜内、口服或吸入途径以0.1-50mg/kg的浓度施用化合物，并在注射后0'、5'、15'、30'、1小时、4小时、8小时和24小时抽取血样。然后如上所述通过lc-ms/ms测定25μl新鲜血清中的完整化合物的水平。在动物模型中的体内效力为了确定本发明拟肽大环化合物在体内的抗致癌活性，例如，化合物单独给予(静脉内、腹膜内、口服、通过吸入或鼻途径)或与亚最佳剂量的相关化疗剂(例如，环磷酰胺、阿霉素、依托泊苷)联合给予。在一个实例中，在nod-scid小鼠遭受全身辐射3小时后，通过尾静脉注射稳定表达萤光素酶的5x106rs4；11细胞(从急性淋巴细胞白血病患者的骨髓建立)。如果不予处理，在该模型中这种形式的白血病在3周内是致命的。例如，通过对小鼠注射d-萤光素(60mg/kg)并对麻醉的动物进行成像(例如，xenogeninvivoimagingsystem,caliperlifesciences,hopkinton,ma)可容易地监测该白血病。通过livingimagesoftware(caliperlifesciences,hopkinton,ma)进行光子通量(photonicflux)(光子/秒)的积分(integration)来对全身生物发光进行定量。例如，拟肽大环化合物单独地或与亚最佳剂量的相关化学治疗剂联合地通过尾静脉或静脉内途径以0.1mg/kg-50mg/kg的剂量向白血病小鼠施用(注射后10天/实验第1天，生物发光范围为14-16)7-21天。任选地，在整个实验过程中每隔一天对小鼠成像，并在实验期间每天监测其存活。在实验结束时任选地对死亡的小鼠进行尸体检查。另一种动物模型是将稳定表达萤光素酶的dohh2(源自人类滤泡性淋巴瘤的细胞系)植入到nod-scid小鼠中。这些体内试验任选地产生初步的药代动力学、药效学和毒理学数据。临床试验为了确定本发明拟肽大环化合物对于人类治疗的适用性，进行了临床试验。例如，选择出被诊断为患有癌症并且需要治疗的患者并将他们分成治疗组和一个或多个对照组，其中，对治疗组施用本发明拟肽大环化合物，而对照组接受安慰剂或已知的抗癌药物。这样，可以通过对患者组就诸如生存率和生活质量的因素进行比较来评价本发明拟肽大环化合物的治疗安全性和有效性。在本实例中，相比于用安慰剂治疗的患者对照组，用拟肽大环化合物治疗的患者组显示出提高的长期生存率。药物组合物和给药途径本发明拟肽大环化合物还包括其药学上可接受的衍生物或前药。“药学上可接受的衍生物”意指本发明化合物的任何药学上可接受的盐、酯、酯的盐、前药或其他衍生物，其在向接受者施用后能够(直接或间接地)提供本发明化合物。尤其有利的药学上可接受的衍生物是当向哺乳动物施用时可以提高本发明化合物的生物利用度(例如，通过提高口服施用的化合物进入血液的吸收)，或相对于母体物质增加活性化合物向生物区室(例如，脑或淋巴系统)的递送的那些衍生物。一些药学上可接受的衍生物包含提高水溶性或跨过胃肠粘膜的主动转运的化学基团。在一些实施方案中，本发明拟肽大环化合物通过共价或非共价地连接的合适的官能团进行修饰，以提高选择性的生物学性质。这样的修饰包括那些提高进入给定生物区室(例如，血液、淋巴系统、中枢神经系统)的生物学渗透性、提高口服利用度、增加溶解度以允许注射施用、改变代谢以及改变排泄率的修饰。本发明化合物的药学上可接受的盐包括那些由药学上可接受的无机和有机的酸和碱衍生的盐。合适的酸式盐的例子包括乙酸盐、己二酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、甲酸盐、延胡索酸盐、乙醇酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、乳酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、棕榈酸盐(palmoate)、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和十一酸盐(undecanoate)。由合适的碱衍生的盐包括碱金属盐(例如，钠盐)、碱土金属盐(例如，镁盐)、铵盐和n-(烷基)4+盐。为了由本发明化合物制备药物组合物，药学上可接受的载体包括固体或液体载体。固体形式的制剂包括粉剂、片剂、丸剂、胶囊剂、扁囊剂、栓剂和分散颗粒剂。固体载体可以是一种或多种物质，其也可以作为稀释剂、调味剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包封材料发挥作用。在科学文献和专利文献中详细描述了配制和给药技术的细节，参见，例如，最新版本的remington'spharmaceuticalsciences,maackpublishingco,eastonpa。在粉剂中，载体是细碎的固体，其与细碎的活性成分混合。在片剂中，活性成分与具有必要粘合性质的载体按照适当的比例混合，并压制成需要的形状和大小。合适的固体赋形剂是碳水化合物或蛋白质填料，包括但不限于：糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；来自玉米、小麦、水稻、马铃薯或其他植物的淀粉；纤维素，如甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素或羧甲基纤维素钠；和树胶，包括阿拉伯树胶和黄蓍胶；以及蛋白质，如明胶和胶原蛋白。如果需要的话，加入崩解剂或增溶剂，如交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、海藻酸或其盐如海藻酸钠。液体形式的制剂包括溶液、悬浮液和乳液，例如，水或水/丙二醇溶液。对于肠胃外注射，液体制剂可以在聚乙二醇水溶液中配制成溶液。药物制剂优选为单位剂型。在这样的形式中，制剂细分为含有适量活性成分的单位剂量。单位剂型可以是包装制剂，该包装包含不连续量的制剂，如包装的片剂、胶囊和小瓶或安瓿中的粉末。另外，单位剂型也可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂本身，或者可以是包装形式的适当数目的这些剂型中的任一种。当本发明组合物包含拟肽大环化合物和一种或多种另外的治疗剂或预防剂的组合时，该化合物和另外的药剂都应该以通常在单一治疗方案中施用的剂量的大约1-100％的剂量水平，更优选大约5-95％的剂量水平存在。在一些实施方案中，另外的药剂作为多剂量方案的一部分与本发明化合物分开施用。或者，这些药剂是单一剂型的一部分，在单一组合物中与本发明化合物混合在一起。使用方法在一个方面，本发明提供了新型拟肽大环化合物，其可在竞争性结合试验中用于鉴别可与拟肽大环化合物所模拟的蛋白质或肽的天然配体相结合的物质。例如，在p53/hdmx系统中，基于p53的标记的拟肽大环化合物可以与竞争性结合hdmx的小分子一起在hdmx结合试验中使用。竞争结合研究允许在体外快速评价及确定对于p53/hdmx系统具有特异性的候选药物。可以使用本文公开的任何拟肽大环化合物及其结合配偶体进行这类结合研究。进一步提供了生成抗拟肽大环化合物的抗体的方法。在一些实施方案中，这些抗体特异性地结合拟肽大环化合物和拟肽大环化合物相关的前体肽，如p53。例如，这样的抗体破坏天然的蛋白质-蛋白质相互作用，例如p53与hdmx之间的结合。在其他方面，本发明提供了处理处于患与分子(包括p53、hdm2或hdmx)的异常(例如，不足或过量)表达或活性有关的疾病的危险中(或易患所述疾病)或患有所述疾病的受试者的预防方法和治疗方法。在另一实施方案中，疾病至少部分地是由p53或hdm2或hdmx的异常水平(例如，过度表达或不足表达)引起的，或由显示异常活性的p53或hdm2或hdmx的存在引起的。这样，由源自p53的拟肽大环化合物导致的p53或hdm2或hdmx水平和/或活性的降低或者p53或hdm2或hdmx水平和/或活性的提高用来例如缓解或减轻疾病的负面症状。另一方面，本发明提供了通过干扰结合配偶体之间(例如，p53与hdm2或p53与hdmx之间)的相互作用或结合来治疗或预防疾病(包括过度增殖性疾病和炎性病症)的方法。这些方法包括向包括人类的温血动物施用有效量的本发明化合物。在一些实施方案中，本发明化合物的施用诱导细胞生长停滞或凋亡。如本文所用的，术语“治疗”被定义为向患者应用或施用治疗剂，或者向从患者分离的组织或细胞系应用或施用治疗剂，所述患者患有疾病、疾病症状或具有患病倾向，其目的是治愈、恢复、减轻、解除、改变、矫正、缓解、改善或影响疾病、疾病症状或患病倾向。在一些实施方案中，本发明拟肽大环化合物用来治疗、预防和/或诊断癌症和肿瘤性病状。如本文所用的，术语“癌症”、“过度增殖的”和“肿瘤性的”指具有自主生长能力的细胞，即，以快速增殖的细胞生长为特征的异常状态或病状。过度增殖性的和肿瘤性的疾病状态可以分类为病理性的，即，表现或构成疾病状态；或者可以分类为非病理性的，即，偏离正常但与疾病状态无关。该术语意味着包括所有类型的癌性生长或致癌过程、转移性的组织或恶性转化的细胞、组织或器官，而与组织病理类型或侵入阶段无关。转移性肿瘤可以由许多原发性肿瘤类型产生，包括但不限于：乳腺、肺、肝、结肠和卵巢源的肿瘤类型。“病理性过度增殖”细胞出现于以恶性肿瘤生长为特征的疾病状态中。非病理性过度增殖细胞的例子包括与创伤修复有关的细胞增殖。细胞增殖和/或分化疾病的例子包括癌症，例如，癌瘤、肉瘤或转移性疾病。在一些实施方案中，拟肽大环化合物是用于控制乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、肺癌、这些癌症的转移等的新的治疗剂。癌症或肿瘤性疾病的例子包括但不限于：纤维肉瘤、肌肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、胃癌、食道癌、直肠癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、子宫癌、头颈癌、肺癌、乳腺癌、皮肤癌、黑素瘤、脑癌、鳞状细胞癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管原癌、肾细胞癌、肝细胞瘤、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、维尔姆斯肿瘤、子宫颈癌、睾丸癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑脊膜瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、白血病、淋巴瘤或卡波西肉瘤。增殖性疾病的例子包括造血系统肿瘤性疾病。如本文所用，术语“造血系统肿瘤性疾病”包括涉及造血系统起源的(例如，源自骨髓、淋巴或红细胞谱系的)增生性/肿瘤性细胞或其前体细胞的疾病。优选地，该疾病起因于分化不良的急性白血病，例如，成红细胞白血病和急性巨核母细胞性白血病。另外的示例性的骨髓疾病包括但不限于：急性早幼粒细胞白血病(apml)、急性髓性白血病(aml)和慢性髓性白血病(cml)(综述见vaickus(1991),critrev.oncol./hemotol.11:267-97)；淋巴样恶性肿瘤包括但不限于急性淋巴母细胞性白血病(all)，包括b-谱系all和t-谱系all、慢性淋巴细胞性白血病(cll)、幼淋巴细胞性白血病(pll)、多毛细胞白血病(hll)和瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(wm)。其他形式的恶性淋巴瘤包括但不限于：非何杰金淋巴瘤及其变化形式、外周t细胞淋巴瘤、成人t细胞白血病/淋巴瘤(atl)、皮肤t细胞淋巴瘤(ctcl)、巨粒淋巴细胞白血病(lgf)、何杰金病和里德-斯特恩伯格病。乳腺的细胞增殖和/或分化疾病的例子包括但不限于：增生性乳腺疾病，包括，例如，上皮细胞增生、硬化性腺病和小导管乳头状瘤；肿瘤，例如，诸如纤维腺瘤、叶状瘤和肉瘤的间质肿瘤，和诸如大导管乳头状瘤的上皮肿瘤；乳腺癌，包括原位(非侵袭性)癌(包括原位导管癌(包括佩吉特病)和原位小叶癌)和侵袭性(浸润性)癌(包括但不限于，浸润性导管癌、浸润性小叶癌、髓样癌、胶体(粘液)癌、小管癌和侵袭性乳头状癌)；和混杂性的恶性肿瘤。男性乳房疾病包括但不限于男性乳腺发育症和癌。皮肤的细胞增殖性和/或分化性病症的实例包括但不限于增殖性皮肤病，如黑素瘤，包括粘膜黑素瘤、浅表扩散性黑素瘤、结节性黑素瘤、雀斑(例如，恶性雀斑样痣、恶性雀斑样黑素瘤或肢端着色斑性黑素瘤)、无黑色素黑色素瘤、结缔组织增生性黑素瘤、具有斯皮茨痣特征的黑素瘤、具有小痣样细胞的黑素瘤、息肉状黑素瘤和软组织黑素瘤；基底细胞癌，包括小结基底细胞癌、表面基底细胞癌、结节性基底细胞癌(侵蚀性溃疡)、囊性基底细胞癌、疤痕性基底细胞癌、色素性基底细胞癌、异位基底细胞癌、浸润性基底细胞癌、痣样基底细胞癌综合征、息肉状基底细胞癌、孔样基底细胞癌和平库斯纤维上皮瘤；鳞状细胞癌，包括棘皮瘤(巨细胞棘皮瘤)、腺样鳞状细胞癌、基底细胞样鳞状细胞癌、透明细胞鳞状细胞癌、印戒细胞鳞状细胞癌、梭形细胞鳞状细胞癌、马乔林溃疡、凯拉增生性红斑和bowen病；或其他皮肤或皮下肿瘤。肺的细胞增殖和/或分化疾病的例子包括但不限于：支气管原癌，包括类肿瘤综合征、细支气管肺泡癌、神经内分泌肿瘤，例如，支气管类癌瘤、混杂性肿瘤和转移性肿瘤；胸膜的病状，包括炎性胸腔积液、非炎性胸腔积液、气胸和胸膜肿瘤，包括孤立性纤维瘤(胸膜纤维瘤)和恶性间皮瘤。结肠的细胞增殖和/或分化疾病的例子包括但不限于：非肿瘤性息肉、腺瘤、家族性综合征、结直肠癌形成、结直肠癌和类癌瘤。肝的细胞增殖和/或分化疾病的例子包括但不限于：结节性增生、腺瘤和恶性肿瘤，包括原发肝癌和转移性肿瘤。卵巢的细胞增殖和/或分化疾病的例子包括但不限于：卵巢肿瘤，例如，体腔上皮肿瘤、浆液性肿瘤、粘液瘤、子宫内膜样瘤、透明细胞腺癌、囊腺纤维瘤、布伦纳瘤、表面上皮肿瘤；生殖细胞瘤，例如，成熟(良性)畸胎瘤、单胚层畸胎瘤、不成熟的恶性畸胎瘤、无性细胞瘤、内胚层窦瘤、绒毛膜癌；性索-间质肿瘤(sexcord-stomaltumors)，例如，粒层-卵泡膜细胞瘤、泡膜细胞瘤纤维瘤(thecomafibromas)、男性母细胞瘤、希尔细胞瘤(hillcelltumors)和性腺母细胞瘤；和诸如克鲁肯贝格瘤的转移性肿瘤。在其他或进一步的实施方案中，本文所述的拟肽大环化合物用于治疗、预防或诊断以过度活跃的细胞死亡或由于生理损伤等引起的细胞死亡为特征的病况。以过早或不希望的细胞死亡为特征的病况的一些实例是，或者，不希望的或过度的细胞增殖包括但不限于，细胞减少/发育不良、无细胞/再生障碍或细胞过多/增生性病况。一些实例包括血液系统病症，包括但不限于范可尼贫血、再生障碍性贫血、地中海贫血、先天性嗜中性粒细胞减少症和骨髓发育不良。在其他或进一步的实施方案中，用于减少凋亡的本发明拟肽大环化合物用于治疗与不希望的细胞死亡水平相关的病症。因此，在一些实施方案中，本发明的抗凋亡拟肽大环化合物用于治疗如下病症，如导致与病毒感染相关的细胞死亡的病症，例如与人免疫缺陷病毒(hiv)感染相关的感染。多种神经系统疾病的特征在于特定神经元组的逐渐损失。一个例子是阿尔茨海默病(ad)。阿尔茨海默病的特征在于大脑皮层和某些皮层下区域的神经元和突触的损失。这种损失导致受影响区域的严重萎缩。淀粉样蛋白斑和神经原纤维缠结均可见于ad患者的大脑中。由于大脑中异常折叠的a-β和tau蛋白的积累，阿尔茨海默病已被确定为蛋白质错误折叠疾病。斑块由β-淀粉样蛋白组成。β-淀粉样蛋白是来自被称为淀粉样蛋白前体蛋白(app)的较大蛋白质的片段。app对神经元生长、存活和损伤后修复至关重要。在ad中，未知过程导致app通过蛋白水解被酶切割成较小的片段。这些片段中的一个是β-淀粉样蛋白的原纤维，其形成团块，这些团块沉积在被称为老年斑的致密形成物中的神经元外部。斑块继续在神经细胞内生长成不溶性扭曲纤维，通常被称为缠结。因此，β-淀粉样蛋白与其天然受体之间的相互作用的破坏在ad的治疗中是重要的。在一些实施方案中，本发明的抗凋亡拟肽大环化合物用于治疗ad和与细胞凋亡相关的其他神经障碍。这类神经障碍包括阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化(als)色素性视网膜炎、脊髓性肌萎缩和各种形式的小脑变性。这些疾病中的细胞损失不会诱导炎症应答，凋亡似乎是细胞死亡的机制。另外，许多血液疾病与血细胞产生减少有关。这些病症包括与慢性疾病相关的贫血、再生障碍性贫血、慢性嗜中性粒细胞减少和骨髓增生异常综合征。血细胞生成障碍，如骨髓增生异常综合征和某些形式的再生障碍性贫血，与骨髓内的凋亡细胞死亡增加有关。这些病症可由促进凋亡的基因的活化、基质细胞或造血存活的获得性缺陷因子或毒素和免疫应答介质的直接作用引起。与细胞死亡相关的两种常见病症是心肌梗死和中风。在这两种病症中，在血流急性损失的情况下产生的缺血中央区域内的细胞似乎由于坏死而迅速死亡。然而，在中央缺血区外，细胞在更长时间内死亡，并且在形态学上似乎死于凋亡。在其他或进一步的实施方案中，本发明的抗凋亡拟肽大环化合物用于治疗与不希望的细胞死亡相关的所有此类病症。用本文所述的拟肽大环化合物治疗的神经系统病症的一些实例包括但不限于阿尔茨海默病、唐氏综合征、荷兰型遗传性脑出血淀粉样变性、反应性淀粉样变性、家族性淀粉样肾病伴荨麻疹和耳聋、muckle-wells综合征、特发性骨髓瘤、巨球蛋白血症相关性骨髓瘤、家族性淀粉样多发性神经病、家族性淀粉样神经病、孤立性心脏淀粉样蛋白、全身性老年性淀粉样变性、成年发作型糖尿病、胰岛素瘤、孤立性心房淀粉样蛋白、甲状腺髓样癌、家族性淀粉样变性、遗传性脑出血伴淀粉样变性、家族性淀粉样多神经病、瘙痒症、克-雅氏病、gerstmannstraussler-scheinker综合征、牛海绵状脑炎、朊病毒介导的疾病和亨廷顿病。在另一个实施方案中，本文所述的肽模拟大环化合物用于治疗、预防或诊断炎性病症。存在许多类型的炎性病症。某些炎性疾病与免疫系统有关，例如自身免疫病。自身免疫病起因于身体对通常存在于体内的物质和组织(即自身抗原)的过度活跃的免疫应答。换句话说，免疫系统攻击自身的细胞。自身免疫病是免疫介导的疾病的主要原因。类风湿性关节炎是自身免疫疾病的一个例子，其中免疫系统攻击关节，在关节处引起炎症(即关节炎)和破坏。它还会损伤一些器官，如肺和皮肤。类风湿性关节炎可导致功能和活动性的显著丧失。类风湿性关节炎通过血液检验，尤其是类风湿因子检查来诊断。用本文所述的拟肽大环化合物治疗的自身免疫病的一些实例包括但不限于急性播散性脑脊髓炎(adem)、艾迪生病、强直性脊柱炎、抗磷脂抗体综合征(aps)、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳病、bechet病、大疱性类天疱疮、乳糜泻、查加斯病、churg-strauss综合征、慢性阻塞性肺病(copd)、克罗恩病、皮肌炎、1型糖尿病、子宫内膜异位症、goodpasture综合征、格雷夫斯病、格林-巴利综合征(gbs)、hashimoto病、化脓性汗腺炎、特发性血小板减少性紫癜、炎性肠病(ibd)、间质性膀胱炎、红斑狼疮、硬斑症、多发性硬化、重症肌无力、发作性睡病、神经性肌强直、寻常型天疱疮、恶性贫血、多肌炎、多肌性多肌痛、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、类风湿性关节炎、精神分裂症、硬皮病、舍格伦综合征、颞动脉炎(也称为“巨细胞动脉炎”)、高安动脉炎、血管炎、白癜风和韦格纳肉芽肿。用本文所述的拟肽大环化合物治疗的其他类型的炎性病症的一些实例包括但不限于变态反应，包括变应性鼻炎/鼻窦炎、皮肤变态反应(荨麻疹/麻疹、血管性水肿、特应性皮炎)、食物变态反应、药物变态反应、昆虫变态反应和罕见的变应性病症，如肥大细胞增多症、哮喘、关节炎(包括骨关节炎、类风湿性关节炎和脊柱关节病)、中枢神经系统的原发性脉管炎、结节病、器官移植排斥、纤维肌痛、纤维化、胰腺炎和盆腔炎性疾病。用本发明拟肽大环化合物治疗或预防的心血管病症(例如、炎性病症)的实例包括但不限于主动脉瓣狭窄、动脉粥样硬化、心肌梗死、中风、血栓形成、动脉瘤、心力衰竭、缺血性心脏病、心绞痛、心源性猝死、高血压心脏病、非冠状血管疾病，如小动脉硬化、小血管疾病、肾病、高甘油三酯血症、高胆固醇血症、高脂血症、黄瘤病、哮喘、高血压、肺气肿和慢性肺病；或与介入手术相关的心血管病况(“手术血管创伤”)，如血管成形术后再狭窄，放置分流器、支架、合成或天然切除移植物，留置导管、瓣膜或其他可植入装置。优选的心血管病症包括动脉粥样硬化、心肌梗死、动脉瘤和中风。虽然本文已显示和描述了本发明的优选实施方案，但是对于本领域的技术人员显而易见的是，这些实施方案只是以举例的方式提供的。在不背离本发明的情况下，本领域技术人员将会想到许多变化、改变和替换。应当理解，在实施本发明时，可以采用本文所述的本发明实施方案的各种替代方案。旨在用下列权利要求限定本发明的范围，并且这些权利要求范围内的方法和结构及其等效物也涵盖在本发明内。制剂和给药给药模式有效量的本发明的拟肽大环化合物可以作为单剂量或多剂量通过任何接受的给药模式施用。在一些实施方案中，肠胃外施用本发明的拟肽大环化合物，例如通过皮下、肌肉内、鞘内、静脉内或硬膜外注射。例如，静脉内、动脉内、皮下或通过输注施用所述拟肽大环化合物。在一些实例中，静脉内施用所述拟肽大环化合物。在一些实例中，动脉内施用所述拟肽大环化合物。无论所选择的给药途径如何，本发明的拟肽大环化合物和/或本发明的药物组合物均配制成药学上可接受的剂型。通过与其他药物类似的方法，可将根据本发明的拟肽大环化合物配制用于以任何方便的方式施用用于人类或兽医学中。在一个方面，本发明提供了包含与一种或多种药学上可接受的载体(添加剂)和/或稀释剂一起配制的、治疗有效量的一种或多种上述拟肽大环化合物的药物制剂。在一个实施方案中，一种或多种本文所述的拟肽大环化合物被配制用于肠胃外给药，本文公开的一种或多种拟肽大环化合物可被配制为水性或非水性溶液、分散液、悬浮液或乳液，或可在临使用前重建成无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。这样的制剂可包含糖、醇、抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂、使该制剂与意向接受者的血液等张的溶质，或悬浮剂或增稠剂。这些组合物还可含有辅剂，如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。可通过包含各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如，对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等，确保防止微生物作用于主题化合物。还可期望组合物中包含等张剂，如糖、氯化钠等。此外，可通过包含延缓吸收的药剂如单硬脂酸铝和明胶，导致可注射药物形式的延长吸收。若需要，可在使用前，用例如等张盐水溶液或右旋糖溶液稀释该制剂。在一些实例中，所述拟肽大环化合物被配置为水溶液并静脉内施用。给药量和频率可采用各种技术确定剂量。所选择的剂量水平可取决于多种因素，包括所采用的特定拟肽大环化合物的活性，给药途径，给药时间，所采用的特定拟肽大环化合物的排出或代谢速率，治疗的持续时间，与所采用的特定拟肽大环化合物联合使用的其他药物、化合物和/或物质，所治疗的患者的年龄、性别、体重、状况、总体健康和既往医疗史，以及医学领域公知的其他因素。剂量值还可随待缓解的状况的严重程度而变化。对于任何特定的受试者，可根据个体需要以及施用该组合物或监督该组合物的施用的人的专业判断而随时间调整具体剂量方案。医师或兽医可开具所需的药物组合物的有效量。例如，该医师或兽医可以以低于所需水平的水平开始在所述药物组合物中采用的本发明化合物的给药，以便实现所需的治疗效果并逐渐增加剂量直到实现所需的效果。在一些实施方案中，本发明的拟肽大环化合物的合适的每日剂量可以是为有效产生治疗效果的最低剂量的拟肽大环化合物的量。这样的有效剂量通常将取决于上述因素。将在给定患者中产生最有效治疗的任何特定拟肽大环化合物的准确给药时间和量将取决于特定拟肽大环化合物的活性、药代动力学和生物利用度，患者的生理学状况(包括年龄、性别、疾病类型和阶段、总体身体状况、对给定剂量的响应性和药物类型)、给药途径，等等。剂量可基于每kg患者体重的拟肽大环化合物的量。或者，可通过参考拟肽大环化合物的血浆浓度来确定本发明的剂量。例如，可以使用最大血浆浓度(cmax)和从时间0至无穷的血浆浓度-时间曲线下面积(auc)。在一些实施方案中，所述受试者为人类受试者，并且所施用的药物组合物拟肽大环化合物的量为每千克人类受试者体重0.01-100mg。例如，在多个实例中，所施用的拟肽大环化合物的量为约0.01-50mg/kg、约0.01-20mg/kg、约0.01-10mg/kg、约0.1-100mg/kg、约0.1-50mg/kg、约0.1-20mg/kg、约0.1-10mg/kg、约0.5-100mg/kg、约0.5-50mg/kg、约0.5-20mg/kg、约0.5-10mg/kg、约1-100mg/kg、约1-50mg/kg、约1-20mg/kg、约1-10mg/kg人类受试者体重。在一个实施方案中，施用每千克人类受试者体重约0.5mg-10mg拟肽大环化合物。在一些实例中，所施用的拟肽大环化合物的量为每千克人类受试者体重约0.16mg、约0.32mg、约0.64mg、约1.28mg、约3.56mg、约7.12mg、约约14.24mg或约20mg。在一些实例中，所施用的拟肽大环化合物的量为每千克人类受试者体重约0.16mg、约0.32mg、约0.64mg、约1.28mg、约3.56mg、约7.12mg或约14.24mg。在一些实例中，所施用的拟肽大环化合物的量为每千克人类受试者体重约0.16mg。在一些实例中，所施用的拟肽大环化合物的量为每千克人类受试者体重约0.32mg。在一些实例中，所施用的拟肽大环化合物的量为每千克人类受试者体重约0.64mg。在一些实例中，所施用的拟肽大环化合物的量为每千克人类受试者体重约1.28mg。在一些实例中，所施用的拟肽大环化合物的量为每千克人类受试者体重约3.56mg。在一些实例中，所施用的拟肽大环化合物的量为每千克人类受试者体重约7.12mg。在一些实例中，所施用的拟肽大环化合物的量为每千克人类受试者体重约14.24mg。在一些实施方案中，每周施用两次每千克人类受试者体重约0.5-约20mg或约0.5-约10mg的拟肽大环化合物。例如，每周施用两次每千克人类受试者体重约0.5-约1mg、约0.5-约5mg、约0.5-约10mg、约0.5-约15mg、约1-约5mg、约1-约10mg、约1-约15mg、约1-约20mg、约5-约10mg、约1-约15mg、约5-约20mg、约10-约15mg、约10-约20mg或约15-约20mg的拟肽大环化合物。在一些实例中，每周施用两次每千克人类受试者体重约1mg、约1.25mg、约1.5mg、约1.75mg、约2mg、约2.25mg、约2.5mg、约2.75mg、约3mg、约3.25mg、约3.5mg、约3.75mg、约4mg、约4.25mg、约4.5mg、约4.75mg、约5mg、约5.25mg、约5.5mg、约5.75mg、约6mg、约6.25mg、约6.5mg、约6.75mg、约7mg、约7.25mg、约7.5mg、约7.75mg、约8mg、约8.25mg、约8.5mg、约8.75mg、约9mg、约9.25mg、约9.5mg、约9.75mg、约10mg、约10.25mg、约10.5mg、约10.75mg、约11mg、约11.25mg、约11.5mg、约11.75mg、约12mg、约12.25mg、约12.5mg、约12.75mg、约13mg、约13.25mg、约13.5mg、约13.75mg、约14mg、约14.25mg、约14.5mg、约14.75mg、约15mg、约15.25mg、约15.5mg、约15.75mg、约16mg、约16.5mg、约17mg、约17.5mg、约18mg、约18.5mg、约19mg、约19.5mg或约20mg的拟肽大环化合物。在一些实例中，所施用的拟肽大环化合物的量为每千克人类受试者体重约1.25mg、约2.5mg、约5mg、约10mg或约20mg，并且所述拟肽大环化合物每周施用两次。在一些实例中，所施用的拟肽大环化合物的量为每千克人类受试者体重约1.25mg、约2.5mg、约5mg或约10mg，并且所述拟拟肽大环化合物每周施用两次。在一些实施方案中，每周施用一次每千克人类受试者体重约0.5-约20mg或约0.5-约10mg的拟肽大环化合物。例如，每周施用一次每千克人类受试者体重约0.5-约1mg、约0.5-约5mg、约0.5-约10mg、约0.5-约15mg、约1-约5mg、约1-约10mg、约1-约15mg、约1-约20mg、约5-约10mg、约1-约15mg、约5-约20mg、约10-约15mg、约10-约20mg或约15-约20mg的拟肽大环化合物。在一些实例中，每周施用一次每千克人类受试者体重约1mg、约1.25mg、约1.5mg、约1.75mg、约2mg、约2.25mg、约2.5mg、约2.75mg、约3mg、约3.25mg、约3.5mg、约3.75mg、约4mg、约4.25mg、约4.5mg、约4.75mg、约5mg、约5.25mg、约5.5mg、约5.75mg、约6mg、约6.25mg、约6.5mg、约6.75mg、约7mg、约7.25mg、约7.5mg、约7.75mg、约8mg、约8.25mg、约8.5mg、约8.75mg、约9mg、约9.25mg、约9.5mg、约9.75mg、约10mg、约10.25mg、约10.5mg、约10.75mg、约11mg、约11.25mg、约11.5mg、约11.75mg、约12mg、约12.25mg、约12.5mg、约12.75mg、约13mg、约13.25mg、约13.5mg、约13.75mg、约14mg、约14.25mg、约14.5mg、约14.75mg、约15mg、约15.25mg、约15.5mg、约15.75mg、约16mg、约16.5mg、约17mg、约17.5mg、约18mg、约18.5mg、约19mg、约19.5mg或约20mg的拟肽大环化合物。在一些实例中，所施用的拟肽大环化合物的量为每千克人类受试者体重约1.25mg、约2.5mg、约5mg、约10mg或约20mg，并且所述拟肽大环化合物每周施用一次。在一些实例中，所施用的拟肽大环化合物的量为每千克人类受试者体重约1.25mg、约2.5mg、约5mg或约10mg，并且所述拟肽大环化合物每周施用一次。在一些实施方案中，每周施用3次、4次、5次、6次或7次每千克人类受试者体重约0.5-约20mg或0.5-约10mg的拟肽大环化合物。例如，每周施用3次、4次、5次、6次或7次每千克人类受试者体重约约0.5-约1mg、约0.5-约5mg、约0.5-约10mg、约0.5-约15mg、约1-约5mg、约1-约10mg、约1-约15mg、约1-约20mg、约5-约10mg、约1-约15mg、约5-约20mg、约10-约15mg、约10-约20mg或约15-约20mg的拟肽大环化合物。在一些实例中，每周施用3次、4次、5次、6次或7次每千克人类受试者体重约1mg、约1.25mg、约1.5mg、约1.75mg、约2mg、约2.25mg、约2.5mg、约2.75mg、约3mg、约3.25mg、约3.5mg、约3.75mg、约4mg、约4.25mg、约4.5mg、约4.75mg、约5mg、约5.25mg、约5.5mg、约5.75mg、约6mg、约6.25mg、约6.5mg、约6.75mg、约7mg、约7.25mg、约7.5mg、约7.75mg、约8mg、约8.25mg、约8.5mg、约8.75mg、约9mg、约9.25mg、约9.5mg、约9.75mg、约10mg、约10.25mg、约10.5mg、约10.75mg、约11mg、约11.25mg、约11.5mg、约11.75mg、约12mg、约12.25mg、约12.5mg、约12.75mg、约13mg、约13.25mg、约13.5mg、约13.75mg、约14mg、约14.25mg、约14.5mg、约14.75mg、约15mg、约15.25mg、约15.5mg、约15.75mg、约16mg、约16.5mg、约17mg、约17.5mg、约18mg、约18.5mg、约19mg、约19.5mg或约20mg的拟肽大环化合物。在一些实例中，所施用的拟肽大环化合物的量为每千克人类受试者体重约1.25mg、约2.5mg、约5mg、约10mg或约20mg，并且所述拟肽大环化合物每周施用3次、4次、5次、6次或7次。在一些实例中，所施用的拟肽大环化合物的量为每千克人类受试者体重约1.25mg、约2.5mg、约5mg或约10mg，并且所述拟肽大环化合物每周施用3次、4次、5次、6次或7次。在一些实施方案中，每2周、3周或4周施用一次每千克人类受试者体重约0.5-约20mg或0.5-约10mg的拟肽大环化合物。例如，每2周或3周施用3次、4次、5次、6次或7次每千克人类受试者体重约0.5-约1mg、约0.5-约5mg、约0.5-约10mg、约0.5-约15mg、约1-约5mg、约1-约10mg、约1-约15mg、约1-约20mg、约5-约10mg、约1-约15mg、约5-约20mg、约10-约15mg、约10-约20mg或约15-约20mg的拟肽大环化合物。在一些实例中，每2周或3周施用一次每千克人类受试者体重约1mg、约1.25mg、约1.5mg、约1.75mg、约2mg、约2.25mg、约2.5mg、约2.75mg、约3mg、约3.25mg、约3.5mg、约3.75mg、约4mg、约4.25mg、约4.5mg、约4.75mg、约5mg、约5.25mg、约5.5mg、约5.75mg、约6mg、约6.25mg、约6.5mg、约6.75mg、约7mg、约7.25mg、约7.5mg、约7.75mg、约8mg、约8.25mg、约8.5mg、约8.75mg、约9mg、约9.25mg、约9.5mg、约9.75mg、约10mg、约10.25mg、约10.5mg、约10.75mg、约11mg、约11.25mg、约11.5mg、约11.75mg、约12mg、约12.25mg、约12.5mg、约12.75mg、约13mg、约13.25mg、约13.5mg、约13.75mg、约14mg、约14.25mg、约14.5mg、约14.75mg、约15mg、约15.25mg、约15.5mg、约15.75mg、约16mg、约16.5mg、约17mg、约17.5mg、约18mg、约18.5mg、约19mg、约19.5mg或约20mg的拟肽大环化合物。在一些实例中，所施用的拟肽大环化合物的量为每千克人类受试者体重约1.25mg、约2.5mg、约5mg、约10mg或约20mg，并且所述拟肽大环化合物每2周施用一次。在一些实例中，所施用的拟肽大环化合物的量为每千克人类受试者体重约1.25mg、约2.5mg、约5mg或约10mg，并且所述拟肽大环化合物每2周施用一次。在一些实例中，所施用的拟肽大环化合物的量为每千克人类受试者体重约1.25mg、约2.5mg、约5mg、约10mg或约20mg，并且所述拟肽大环化合物每3周施用一次。在一些实例中，所施用的拟肽大环化合物的量为每千克人类受试者体重约1.25mg、约2.5mg、约5mg或约10mg，并且所述拟肽大环化合物每3周施用一次。在一些实施方案中，所述拟肽大环化合物在一个时期内逐渐施用。可在,例如约0.1h-24h的时期内逐渐施用所需量的拟肽大环化合物。在一些情况下，在0.1h、0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、3.5h、4h、4.5h、5h、6h、7h、8h、9h、10h、11h、12h、13h、14h、15h、16h、17h、18h、19h、20h、21h、22h、23h或24h的时期内逐渐施用所需量的拟肽大环化合物。在一些实例中，在0.25-12h的时期内，例如在0.25-1h、0.25-2h、0.25-3h、0.25-4h、0.25-6h、0.25-8h、0.25-10h的时期内逐渐施用所需量的拟肽大环化合物。在一些实例中，在0.25-2h的时期内逐渐施用所需量的拟肽大环化合物。在一些实例中，在0.25-1h的时期内逐渐施用所需量的拟肽大环化合物。在一些实例中，在0.25h、0.3h、0.4h、0.5h、0.6h、0.7h、0.8h、0.9h、1.0h、1.1h、1.2h、1.3h、1.4h、1.5h、1.6h、1.7h、1.8h、1.9h或2.0h的时期内逐渐施用所需量的拟肽大环化合物。在一些实例中，在1h的时期内逐渐施用所需量的拟肽大环化合物。在一些实例中，在2h的时期内逐渐施用所需量的拟肽大环化合物。只要需要可以继续施用所述拟肽大环化合物。在一些实施方案中，一种或多种本发明的拟肽大环化合物施用持续超过1天、超过1周、超过1个月、超过2个月、超过3个月、超过4个月、超过5个月、超过6个月、超过7个月、超过8个月、超过9个月、超过10个月、超过11个月、超过12个月、超过13个月、超过14个月、超过15个月、超过16个月、超过17个月、超过18个月、超过19个月、超过20个月、超过21个月、超过22个月、超过23个月或超过24个月。在一些实施方案中，一种或多种本发明的拟肽大环化合物施用持续少于1周、少于1个月、少于2个月、少于3个月、少于4个月、少于5个月、少于6个月、少于7个月、少于8个月、少于9个月、少于10个月、少于11个月、少于12个月、少于13个月、少于14个月、少于15个月、少于16个月、少于17个月、少于18个月、少于19个月、少于20个月、少于21个月、少于22个月、少于23个月或少于24个月。在一些实施方案中，所述拟肽大环化合物在28天周期的第1天、第8天、第15天和第28天施用。在一些实施方案中，所述拟肽大环化合物在28天周期的第1天、第8天、第15天和第28天施用，并且施用持续两个周期。在一些实施方案中，所述拟肽大环化合物在28天周期的第1天、第8天、第15天和第28天施用，并且施用持续三个周期。在一些实施方案中，所述拟肽大环化合物在28天周期的第1天、第8天、第15天和第28天施用，并且施用持续4、5、6、7、8、9、10个或更多个周期。在一些实施方案中，所述拟肽大环化合物在21天周期的第1天、第8天、第11天和第21天施用。在一些实施方案中，所述拟肽大环化合物在21天周期的第1天、第8天、第11天和第21天施用，并且施用持续两个周期。在一些实施方案中，所述拟肽大环化合物在21天周期的第1天、第8天、第11天和第21天施用，并且施用持续三个周期。在一些实施方案中，所述拟肽大环化合物在21天周期的第1天、第8天、第11天和第21天施用，并且施用持续4、5、6、7、8、9、10个或更多个周期。在一些实施方案中，一种或多种本发明拟肽大环化合物持续地长期施用。在一些实施方案中，一种或多种本发明拟肽大环化合物的施用持续直到记录到疾病进展、不可接受的毒性，或者患者或医师决定中止施用。方法及用途在一个方面，本发明提供了治疗受试者的癌症的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的拟肽大环化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，其中该拟肽大环化合物与mdm2和/或mdmx蛋白结合。在一些实施方案中，该拟肽大环化合物可破坏p53与mdm2和mdmx之间的相互作用。在一些实施方案中，根据本文公开的方法的治疗可导致人类受试者中p53途径的重新激活、癌细胞增殖减少、p53蛋白增加、p21增加和/或凋亡增加。在一个方面，本发明提供了治疗受试者中被确定为缺乏p53灭活突变的癌症的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的拟肽大环化合物或其药学上可接受的盐，其中该拟肽大环化合物与mdm2和/或mdmx蛋白结合。在一些实施方案中，该拟肽大环化合物可破坏p53与mdm2和mdmx之间的相互作用。所述方法可进一步包括在施用所述拟肽大环化合物之前确认所述受试者中缺乏p53灭活突变。在一些实施方案中，根据本文公开的方法的治疗可导致人类受试者中p53途径的重新激活、癌细胞增殖减少、p53蛋白增加、p21增加和/或凋亡增加。在一个方面，本发明提供了治疗表达野生型p53的受试者的癌症的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的拟肽大环化合物或其药学上可接受的盐，其中该拟肽大环化合物与mdm2和/或mdmx蛋白结合。在一些实施方案中，该拟肽大环化合物可破坏p53与mdm2和mdmx之间的相互作用。所述方法可进一步包括在施用所述拟肽大环化合物之前确认所述受试者的野生型p53状态。在一些实施方案中，根据本文公开的方法的治疗可导致人类受试者中p53途径的重新激活、癌细胞增殖减少、p53蛋白增加、p21增加和/或凋亡增加。在一些实施方案中，本文提供的用于治疗癌症的方法抑制、减小、缩小、阻止或稳定与该癌症相关的癌细胞。在其他实施方案中，本文提供的用于治疗癌症的方法抑制、减小、缩小、阻止或稳定与该癌症或其两种或多种症状相关的病状。在一些实例中，本文提供的用于治疗癌症的方法导致癌细胞数目的减少和/或与该癌症相关的一种或多种症状的消退。在其他实例中，如通过本领域技术人员可用的例如常规方法如超声、ct扫描、mri、动态造影增强mri或pet扫描所测量的，本文提供的用于治疗癌症的方法保持癌细胞数目，使其不增加，或使癌细胞数目增加得比施用标准疗法后的癌细胞数目增加少。在一些实例中，本文提供的用于治疗癌症的方法使癌细胞数目减少。在一些实例中，本文提供的用于治疗癌症的方法使癌细胞形成减少。在一些实例中，本文提供的用于治疗癌症的方法根除、去除或控制与该癌症相关的原发性、区域性和/或转移性癌细胞。在一些实例中，本文提供的用于治疗癌症的方法减少与该癌症相关的转移的次数或大小。在一些实例中，如通过例如ct扫描、mri、dce-mri或pet扫描所评估的，本文提供的用于治疗癌症的方法使受试者中的癌细胞数目相对于在施用所述拟肽大环化合物前受试者中的癌细胞数目减少一定量，该量在约5％-约10％、约5％-约20％、约10％-约20％、约15％-约20％、约10％-约30％、约20％-约30％、约20％-约40％、约30％-约40％、约10％-约50％、约20％-约50％、约30％-约50％、约40％-约50％、约10％-约60％、约20％-约60％、约30％-约60％、约40％-约60％、约50％-约60％、约10％-约70％、约20％-约70％、约30％-约70％、约40％-约70％、约50％-约70％、约60％-约70％、约10％-约80％、约20％-约80％、约30％-约80％、约40％-约80％、约50％-约80％、约60％-约80％、约70％-约80％、约10％-约90％、约20％-约90％、约30％-约90％、约40％-约90％、约50％-约90％、约60％-约90％、约70％-约90％、约80％-约90％、约10％-约100％、约20％％-约100％、约30％-约100％、约40％-约100％、约50％-约100％、约60％-约100％、约70％-约100％、约80％-约100％、约90％-约100％、约95％-约100％的范围内，或其间的任意范围内。在某些实施方案中，如通过例如ct扫描、mri、dce-mri或pet扫描所评估的，本文的方法使受试者中的癌细胞数目相对于施用所述拟肽大环化合物前的癌细胞数目减少至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％或约100％。在一些实施方案中，如通过例如mri、dce-mri或pet扫描所评估的，本文提供的方法使受试者中的癌细胞灌注相对于施用所述拟肽大环化合物前的癌细胞灌注减少一定量，该量在约5％-约10％、约5％-约20％、约10％-约20％、约15％-约20％、约10％-约30％、约20％-约30％、约20％-约40％、约30％-约40％、约10％-约50％、约20％-约50％、约30％-约50％、约40％-约50％、约10％-约60％、约20％-约60％、约30％-约60％、约40％-约60％、约50％-约60％、约10％-约70％、约20％-约70％、约30％-约70％、约40％-约70％、约50％-约70％、约60％-约70％、约10％-约80％、约20％-约80％、约30％-约80％、约40％-约80％、约50％-约80％、约60％-约80％、约70％-约80％、约10％-约90％、约20％-约90％、约30％-约90％、约40％-约90％、约50％-约90％、约60％-约90％、约70％-约90％、约80％-约90％、约10％-约100％、约20％％-约100％、约30％-约100％、约40％-约100％、约50％-约100％、约60％-约100％、约70％-约100％、约80％-约100％、约90％-约100％、约95％-约100％的范围内，或其间的任意范围内。在某些实施方案中，如通过例如mri、dce-mri或pet扫描所评估的，本文提供的方法使受试者中的癌细胞灌注相对于施用所述拟肽大环化合物前的癌细胞灌注减少至少约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约99％或约100％。在一些实施方案中，如通过例如mri、dce-mri或pet扫描所评估的，本文提供的方法使受试者中的癌细胞代谢相对于施用所述拟肽大环化合物前的癌细胞代谢抑制或减少约5％-约10％、约5％-约20％、约10％-约20％、约15％-约20％、约10％-约30％、约20％-约30％、约20％-约40％、约30％-约40％、约10％-约50％、约20％-约50％、约30％-约50％、约40％-约50％、约10％-约60％、约20％-约60％、约30％-约60％、约40％-约60％、约50％-约60％、约10％-约70％、约20％-约70％、约30％-约70％、约40％-约70％、约50％-约70％、约60％-约70％、约10％-约80％、约20％-约80％、约30％-约80％、约40％-约80％、约50％-约80％、约60％-约80％、约70％-约80％、约10％-约90％、约20％-约90％、约30％-约90％、约40％-约90％、约50％-约90％、约60％-约90％、约70％-约90％、约80％-约90％、约10％-约100％、约20％％-约100％、约30％-约100％、约40％-约100％、约50％-约100％、约60％-约100％、约70％-约100％、约80％-约100％、约90％-约100％、约95％-约100％，或其间的任意范围。在某些实施方案中，如通过例如pet扫描所评估的，本文提供的方法抑制或减少受试者中的癌细胞代谢。在特定实施方案中，本文提供的方法使受试者中的癌细胞代谢相对于施用所述拟肽大环化合物前的癌细胞代谢抑制或减少至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％。在其他方面，本发明提供了用于增加患有被确定为缺乏p53灭活突变的癌症并且/或者患有表达野生型p53的癌症的受试者的存活时间的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的拟肽大环化合物或其药学上可接受的盐，，其中该拟肽大环化合物与mdm2和/或mdmx蛋白结合。在一些实例中，所述受试者的存活时间比如果所述受试者没有根据本文提供的方法进行治疗而预期的受试者存活时间至少长30天。在一些实例中，所述受试者的存活时间比如果所述受试者没有根据本文提供的方法进行治疗而预期的受试者存活时间长1个月至约5年。例如，所述受试者的存活时间比如果所述受试者没有根据本文提供的方法进行治疗而预期的受试者存活时间长至少3个月、至少6个月、至少9个月、至少12个月、至少15个月、至少18个月、至少21个月或至少24个月。在一个方面，本发明提供了用于评估罹患癌症的受试者中生物标志物的存在、不存在或量的方法。在一些实例中，所述生物标志物包括患者生物标志物，例如，受试者的p53状态以及受试者的mdm2和mdmx表达水平。本发明的方法还可任选地包括研究和/或评价本文公开的拟肽大环化合物在所述受试者中的安全性和/或耐受性。本文还提供了用于重新激活患有缺乏p53灭活突变并且/或者表达野生型p53的癌症的受试者中的p53途径的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的拟肽大环化合物或其药学上可接受的盐，，其中该拟肽大环化合物与mdm2和/或mdmx蛋白结合。本文还提供了用于减少患有缺乏p53灭活突变并且/或者表达野生型p53的癌症的人类受试者中的癌细胞增殖的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的拟肽大环化合物或其药学上可接受的盐，，其中该拟肽大环化合物与mdm2和/或mdmx蛋白结合。本文还提供了用于增加患有缺乏p53灭活突变并且/或者表达野生型p53的癌症的受试者中的p53蛋白的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的拟肽大环化合物或其药学上可接受的盐，其中该拟肽大环化合物与mdm2和/或mdmx蛋白结合。本文还提供了用于增加患有缺乏p53灭活突变并且/或者表达野生型p53的癌症的受试者中的p21的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的拟肽大环化合物或其药学上可接受的盐，其中该拟肽大环化合物与mdm2和/或mdmx蛋白结合。本文还提供了用于增加患有缺乏p53灭活突变并且/或者表达野生型p53的癌症的受试者中的凋亡的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的拟肽大环化合物或其药学上可接受的盐，其中该拟肽大环化合物与mdm2和/或mdmx蛋白结合。在一些实施方案中，本发明还提供了用于确定本文公开的拟肽大环化合物在患有缺乏p53灭活突变并且/或者表达野生型p53的癌症(例如，淋巴瘤)的受试者中的剂量限制毒性(dlt)和/或最大耐受剂量(mtd或obd)或最佳生物学剂量(obd)的方法。本发明的方法可任选地包括本文公开的拟肽大环化合物的药代动力学分析。相应地，所述方法可进一步包括在一个或多个特定时间点从所述受试者收集一个或多个生物样品，并对该一个或多个生物样品的拟肽大环化合物和/或其代谢物的水平进行分析。所述生物样品可为来自所述受试者的血液样品，例如，来自人类受试者的血液样品。所述一个或多个特定时间点可包括在向受试者施用拟肽大环化合物之前、之后和/或期间的时间点。在一些实施方案中，一个或多个生物样品包括在每次向受试者施用拟肽大环化合物之前和之后收集的生物样品。在一些实施方案中，用于药代动力学分析的生物样品在第一次向受试者施用拟肽大环化合物之前，以及每次向受试者施用拟肽大环化合物之后的一个或多个时间点收集。在向受试者施用拟肽大环化合物之前收集的生物样品可在开始向受试者施用拟肽大环化合物前0-24小时内完成。例如，所述生物样品可在向受试者施用拟肽大环化合物前24h内、23h内、22h内、21h内、20h内、19h内、18h内、17h内、16h内、15h内、14h内、13h内、12h内、11h内、10h内、9h内、8h内、7h内、6h内、5h内、4h内、3h内、2h内、1h内、30min内、15min内收集，或临在施用前收集。在向受试者施用拟肽大环化合物之后收集的一个或多个生物样品可在向受试者施用拟肽大环化合物后，例如，在0min、5min、10min、20min、30min、45min、60min、1.25h、1.5h、1.75h、2.0h、2.25h、2.5h、2.75h、3.0h、3.25h、3.5h、3.75h、4.0h、4.25h、4.5h、4.75h、5.0h、5.25h、5.5h、5.75h、6.0h、6.25h、6.5h、6.75h、7.0h、7.25h、7.5h、7.75h、8.0h、8.25h、8.5h、8.75h、、9.0h、9.25h、9.5h、9.75h、10.0h、10.25h、10.5h、10.75h、11.0h、11.25h、11.5h、11.75h、12.0h、20h、24h、28h、32h、36h、40h、44h、48h、52h、56h、60h、64h、68h、72h或0-72h之后收集。在一些实施方案中，所述拟肽大环化合物在28天周期的第1天、第8天、第15天施用，并且在第1天施用前、第1天施用后(可以例如在施用后约0min、约30min、约1h、约2h、约4h、约8h、约24h和48小时收集多个生物样品)、第8天施用前、第8天施用后(可以例如在施用后约0min、约30min、约1h、约2h和约4h收集多个生物样品)、第15天施用前和第15天施用后(可以例如在施用后约0min、约30min、约1h、约2h、约4、约8h和约24h收集多个生物样品)收集生物样品。在一些实施方案中，所述拟肽大环化合物在21天周期的第1天、第8天、第11天施用，并且在第1天施用前、第1天施用后(可以例如在施用后约0min、约30min、约1h、约2h、约4h、约8h、约24h和48小时收集多个生物样品)、第8天施用前、第8天施用后(可以例如在施用后约0min、约30min、约1h、约2h和约4h收集多个生物样品)、第11天施用前和第11天施用后(可以例如在施用后约0min、约30min、约1h、约2h、约4、约8h和约24h收集多个生物样品)收集生物样品。本发明的方法可任选地包括本文公开的拟肽大环化合物的药效学分析。相应地，所述方法可包括在一个或多个特定时间点从受试者收集一个或多个生物样品以供药效学分析。药效学分析可包括分析生物样品中包括mic-1、p53、mdm2、mdmx、p21和/或病例在内的生物标志物的水平。生物样品中生物标志物的检测可通过，例如，直接测量、免疫组织化学、免疫印迹、免疫荧光、免疫吸附、免疫沉淀、蛋白质阵列、荧光原位杂交、facs分析、杂交、原位杂交、northern印迹法、southern印迹法、western印迹法、elisa、放射免疫测定、基因阵列/芯片、pcr、rt-pcr或细胞遗传学分析来进行。用于药效学分析的生物样品可为来自受试者的血液样品或癌细胞样本，例如，用于药效学分析的生物样品可为来自人类受试者的血液样品或癌细胞样本。用于拟肽大环化合物的药效学分析的生物样品可以在向受试者施用该拟肽大环化合物之前、期间或之后的任意时间收集。在一些实施方案中，用于药代动力学分析的血液样品在第一次向受试者施用拟肽大环化合物之前，以及每次向受试者施用拟肽大环化合物之后的一个或多个时间点收集。在向受试者施用拟肽大环化合物之前收集的血液样品可在开始向受试者施用拟肽大环化合物前0-24小时内完成。例如，所述生物样品可在向受试者施用拟肽大环化合物前24h内、23h内、22h内、21h内、20h内、19h内、18h内、17h内、16h内、15h内、14h内、13h内、12h内、11h内、10h内、9h内、8h内、7h内、6h内、5h内、4h内、3h内、2h内、1h内、30min内、15min内收集，或临在施用前收集。在向受试者施用拟肽大环化合物之后收集的用于药效学分析的一个或多个血液样品可在向受试者施用拟肽大环化合物后0-约72h，例如之后约12h、之后约24h、之后约36h或之后约48h收集。在一些实施方案中，所述拟肽大环化合物在28天周期的第1天、第8天、第15天施用，并且在第1天施用前、第1天施用后(可以例如在施用后约24h和48小时收集多个样品)、第8天施用前、第8天施用后(可以例如在施用后约1h收集多个样品)、第15天施用前和第15天施用后(可以例如在施用后约1h和约48h收集多个样品)以及第22天收集用于药效学分析的血液样品。可以在向受试者施用拟肽大环化合物之前、之后或期间的任意时间收集用于药效学分析的生物样品。例如，所述拟肽大环化合物可在28天周期的第1天、第8天、第15天施用，并且可在第1天施用前以及第14-18天之间，例如第16天，收集用于药效学分析的癌细胞样品。在一些实施方案中，所述拟肽大环化合物在21天周期的第1天、第8天、第11天施用，并且在第1天施用前、第1天施用后(可以例如在施用后约24h和48小时收集多个样品)、第8天施用前、第8天施用后(可以例如在施用后约1h收集多个样品)、第11天施用前和第11天施用后(可以例如在施用后约1h和约48h收集多个样品)以及第22天收集用于药效学分析的血液样品。可以在向受试者施用拟肽大环化合物之前、之后或期间的任意时间收集用于药效学分析的肿瘤样品。例如，所述拟肽大环化合物可在21天周期的第1天、第8天、第11天施用，并且可在第1天施用前以及第10-14天之间，例如第12天，收集用于药效学分析的癌细胞样品。本发明的方法可任选地包括本文公开的拟肽大环化合物的临床活性分析。相应地，所述方法可包括对在一个或多个特定时间点从受试者收集的一个或多个生物样品进行分析。可将任何合适的分析程序用于生物样品的分析。例如，可采用成像技术，如放射照片、超声、ct扫描、pet扫描、mri扫描、胸部x射线、腹腔镜检查、全血细胞计数(cbc)检验、骨扫描和粪便隐血试验。可使用的其他分析程序包括血液化学分析、染色体易位分析、针吸活检、组织活检、荧光原位杂交、实验室生物标志物分析、免疫组织化学染色法、流式细胞术，或它们的组合。所述方法可进一步包括将所述分析程序的结果制表和/或作图。例如，药效学可以通过对用拟肽大环化合物治疗之前和之后p53激活的若干生物标志物进行基于实验室的评价来评估，这些生物标志物包括癌细胞组织中和ctc(如果可以获得)中p21、胱天蛋白酶和mdm2的水平，以及血液中的mic-1。对于先前的遗传学和生物标志物检测，以及针对与拟肽大环化合物的安全性和效力相关的生物标志物对血液和癌细胞样品的其他检测，可以针对与患者结果可能的相关性对可从上述检测获得的结果进行研究。例如，临床活性或响应可通过标准成像评估如计算机断层扫描(ct)、磁共振成像(mri)和骨扫描来评价。此外，可以使用[18f]-氟脱氧葡萄糖和[18f]-氟胸苷正电子成像术(分别为fdg-pet和flt-pet)，或临床上认为适合于患者特定疾病类型的其他技术。例如，对于dr-a可以在第2周期结束时以及之后每2个周期(例如周期4和6)，而对于dr-b可以在周期3中的最后一次输注后以及之后每3个周期(例如，周期6和9)进行ct成像。对于淋巴瘤患者可以使用iwg(2014)(附录h)标准来评估抗癌细胞活性。此外，对于fdg-avid淋巴瘤患者，可以在基线时和基线后进行fdg-pet成像，如iwg2014中所概述的。对于通常显示出flt示踪剂充分摄取的具有癌细胞的患者，例如淋巴瘤患者，可以在基线时进行flt-pet成像。例如，在基线时表现出标准摄取值(suv)≥5的被指定为dr-a的患者，可以在第1周期中最后一次输注研究药物后一天(即第16天)进行重复的flt成像。例如，在基线时表现出标准摄取值(suv)≥5的dr-b患者，可以在第1周期中最后一次输注研究药物后一天(即第12天)进行重复的flt成像。生物样品如本申请中所用的，“生物样品”是指来源于正常或患病受试者的身体的任何流体或其他物质，如血液、血清、血浆、淋巴、尿、唾液、泪液、脑脊液、乳汁、羊水、胆汁、腹水、脓等。术语“生物样品”的含义内还包括器官或组织提取物，以及其中已经培养有来自受试者的任何细胞或组织制品的培养液。生物样品可以是可以从中获得遗传物质的任何样品。生物样品还可包括固体或液体癌细胞样品或样本。癌细胞样品可以是癌细胞组织样品。在一些实施方案中，癌细胞组织样品可从手术切除的组织获得。生物样品的示例性来源包括细针抽吸、芯针穿刺活检、真空辅助活检、切开活检、切除活检、穿刺活检、刮取活检或皮肤活检。在一些情况下，生物样品包括细针抽吸样品。在一些实施方案中，生物样品包括组织样品，包括例如切除活检物、切开活检物或其他活检物。生物样品可包含两种或更多种来源的混合物；例如，细针抽吸物和组织样品。组织样品和细胞样品还可在不进行侵入式手术的情况下通过例如用细针刺取胸壁或腹壁或乳房、甲状腺或其他部位的肿块，并取出细胞物质(细针抽吸活检)而获得。在一些实施方案中，生物样品是骨髓抽吸物样品。生物样品可以通过本领域已知的方法获得，如本文提供的活检方法、擦拭、刮擦、静脉切开术或任何其他合适的方法。根据样品的性质、所采用的测定和实施者的方便性，所获得的生物样品可以以新鲜、冷冻或固定(例如，甲醛固定-石蜡包埋)的形式使用。虽然新鲜、冷冻和固定的物质适用于各种rna和蛋白质测定，但通常新鲜组织对离体活性测量可能是优选的。还可采用固定的组织样品。常通过福尔马林、甲醛或戊二醛，或例如通过醇浸泡来固定通过活检获得的组织。固定的生物样品通常被脱水并包埋在石蜡或其他固体支持体中。参见文献plenat等人,2001,ann.pathol.21:29-47。未包埋、固定的组织，以及固定且包埋的组织均可在本方法中使用。可用有机溶剂去除用于包埋固定组织的固体支持体，以使得保存的组织随后能够再水合。在一些情况下，所述测定包括细胞或组织培养步骤。例如，可采用酶(如胶原酶和透明质酸酶)和/或物理破坏(例如，反复穿过25号针)使来自活检的细胞散开从而分离细胞，通过离心收集细胞，并将其重悬在所需的缓冲液或培养基中以供培养，立即分析，或进一步处理。受试者/患者群体在一些实施方案中，根据本文提供的方法对癌症进行治疗的受试者是已被诊断或被诊断为患有癌症者。在其他实施方案中，根据本文提供的方法对癌症进行治疗的受试者是易发或易患癌症的人。在一些实施方案中，根据本文提供的方法对癌症进行治疗的受试者是处于发展出癌症的风险中的人。在一些实施方案中，根据本文提供的方法对癌症进行治疗的受试者是已被诊断或被诊断为患有被确定为缺乏p53灭活突变并且/或者表达野生型p53的癌症的人。在其他实施方案中，根据本文提供的方法对癌症进行治疗的受试者是易发或易患被确定为缺乏p53灭活突变并且/或者表达野生型p53的癌症的人。在一些实施方案中，根据本文提供的方法对癌症进行治疗的受试者是处于发展出被确定为缺乏p53灭活突变并且/或者表达野生型p53的癌症的风险中的人。如本文所用的，p53灭活突变为导致p53的体外凋亡活性丧失(或降低)的任何突变。p53灭活突变的非限制性实例被包括在表1中。相应地，在一些实施方案中，根据如本文提供的组合物治疗的患有癌症的受试者是已被诊断或被诊断为患有被确定为缺乏p53灭活突变(如表7中所示的那些)的癌症的人。在一些实施方案中，根据本文提供的方法对癌症进行治疗的受试者是已被诊断或被诊断为患有被确定为缺乏p53灭活突变的癌症的人。如本文所用的，显性p53灭活突变或显性失活突变是其中突变的p53抑制或破坏野生型p53基因的活性的突变。表7p53灭活突变的示例表7是指图1中所示的野生型人tp53肿瘤蛋白p53的序列。氨基酸改变被报告为：被置换的氨基酸，紧接着是被置换的氨基酸在野生型p53序列中的位置，紧接着是用于置换的氨基酸。例如，l344p表明在野生型序列的344位置处的亮氨酸残基(l)被脯氨酸残基(p)替代。在一些实施方案中，根据本文提供的方法对癌症进行治疗的受试者是难治性的患者。在某些实施方案中，难治性患者是对标准疗法(例如，手术、放疗、抗雄激素疗法和/或药物疗法如化疗)而言难治性的患者。在某些实施方案中，当癌症未被显著根除和/或一种或多种症状未得到显著缓解时，患有该癌症的患者对疗法而言是难治性的。患者是否难治的确定可通过本领域已知的用于测定癌症治疗的有效性的任何方法在体内或体外进行。在多个实施方案中，当与癌症相关的ctc或mnbc数目未减少或已经增大时，癌症患者是难治性的。在多个实施方案中，当一个或多个癌细胞转移和/或扩散至另一器官时，癌症患者是难治性的。在一些实施方案中，根据本文提供的方法对癌症进行治疗的受试者是已被证实对除了用本发明拟肽大环化合物治疗之外的疗法而言是难治性的，但不再进行这些疗法的人。在某些实施方案中，根据本文提供的方法对癌症进行治疗的受试者是已接受一种或多种常规抗癌疗法如手术、药物疗法如化疗、抗雄激素疗法或放疗的人。这些患者中有难治性患者，对常规疗法而言太年轻的患者，以及尽管用现有疗法治疗但仍有癌细胞复发的患者。在一些实施方案中，所述受试者是已经历至少一次不成功的针对癌症的既往治疗和/或疗法的人。检测野生型p53和/或p53突变的方法在一些实施方案中，缺乏p53灭活突变的受试者是用本发明化合物治疗癌症的候选者。在用本发明化合物治疗之前，应测定来自患者组的癌细胞，以确定p53-灭活突变和/或野生型p53的表达。p53途径的活性可以通过p53途径中涉及的基因的突变状态来确定，这些基因包括，例如，akt1、akt2、akt3、alk、braf、cdk4、cdkn2a、ddr2、egfr、erbb2(her2)、fgfr1、fgfr3、gna11、gnq、gnas、kdr、kit、kras、map2k1(mek1)、met、hras、notch1、nras、ntrk2、pik3ca、nf1、pten、rac1、rb1、ntrk3、stk11、pik3r1、tsc1、tsc2、ret、tp53和vhl。还可以评估调节p53活性的基因，包括，例如，激酶：abl1、jak1、jaak2、jak3；受体酪氨酸激酶：flt3和kit；受体：csf3r、il7r、mpl和notch1；转录因子：bcor、cebpa、crebbp、etv6、gata1、gata2.mll、kzf1、pax5、runx1、stat3、wt1和tp53；表观遗传因子：asxl1、dnmt3a、ezh2、kdm6a(utx)、suz12、tet2、ptpn11、sf3b1、srsf2、u2af35、zrsr2；ras蛋白：hras、kras和nras；衔接子cbl和cbl-b；fbxw7、idh1、idh2和npm1。癌细胞样品可以例如通过原发性或转移性肿瘤切除术(例如全肺切除术、肺叶切除术、楔形切除术和颅骨切开术)、原发性或转移性疾病活检(例如经支气管或针芯)、胸膜或腹水(例如ffpe细胞沉淀)、骨髓抽吸、骨髓凝结和骨髓活检或肿瘤丰富区域(实体瘤)的宏观解剖肿瘤从固体或液体肿瘤获得。为了检测组织中的p53野生型基因和/或p53灭活突变的缺乏，可以从周围正常组织中分离癌组织。例如，可以从石蜡或低温恒温切片中分离出组织。还可以通过流式细胞术将癌细胞与正常细胞分离。如果癌细胞组织被正常细胞高度污染，则突变的检测可能更加困难。用于分析野生型p53和/或p53突变的各种方法和测定适用于本发明。测定的非限制性实例包括聚合酶链反应(pcr)、限制性片段长度多态性(rflp)、微阵列、southern印迹法、northern印迹法、western印迹法、eastern印迹法、h&e染色、肿瘤的显微镜评估、下一代dna测序(ngs)(例如dna的提取、纯化、定量和扩增，文库制备)、免疫组织化学和荧光原位杂交(fish)。微阵列允许研究人员研究附着于表面(例如，由玻璃或硅制成的dna芯片，或聚合物珠或树脂)的多个dna序列。dna序列与荧光或发光探针杂交。基于样品序列与探针的杂交，然后洗涤并随后检测该探针，微阵列可以指示样品中寡核苷酸序列的存在。荧光或发光信号的定量表明样品中存在已知的寡核苷酸序列。pcr允许快速扩增dna寡聚体，并且可用于鉴定样品中的寡核苷酸序列。pcr实验包括使寡核苷酸样品与pcr混合物接触，该pcr混合物含有与靶序列互补的引物，一种或多种dna聚合酶，脱氧核苷酸三磷酸(dntp)结构单元，包括datp、dgtp、dttp和dctp，以及合适的缓冲液、盐和添加剂。如果样品含有与一对引物互补的寡核苷酸序列，则该实验扩增可以收集并鉴定的样品序列。在一些实施方案中，测定包括从癌症样品中扩增生物分子。该生物分子可以是核酸分子，如dna或rna。在一些实施方案中，该测定包括核酸分子的环化，然后消化经环化的核酸分子。在一些实施方案中，所述测定包括使生物体或从生物体收集的生物化学样品如核酸样品与寡核苷酸文库如pcr引物接触。该文库可含有任何数量的寡核苷酸分子。该寡核苷酸分子可以结合单个dna或rna基序，或本文所述基序的任何组合。该基序可以相隔任何距离，并且该距离可以是已知的或未知的。在一些实施方案中，同一文库中的两个或更多个寡核苷酸结合亲本核酸序列中相距已知距离的基序。引物与亲本序列的结合可以基于引物与亲本序列的互补性而发生。结合可以例如在退火下或在严格条件下发生。在一些实施方案中，测定结果用于设计新的寡核苷酸序列以供将来使用。在一些实施方案中，测定结果用于设计新的寡核苷酸文库以供将来使用。在一些实施方案中，测定结果用于修改、细化或更新现有的寡核苷酸文库以供将来使用。例如，测定可以揭示先前未记录的核酸序列与靶物质的存在相关。该信息可用于设计或重新设计核酸分子和文库。在一些实施方案中，文库中的一个或多个核酸分子包含条形码标签。在一些实施方案中，文库中的一个或多个核酸分子包含适于环化和切割经扩增的样品核酸序列的i型或ii型限制位点。这类引物可用于使pcr产物环化并切割pcr产物以提供产物核酸序列，其序列的组织化与样品生物体的天然核酸序列不同。在pcr实验后，可以验证扩增序列的存在。用于发现扩增序列的方法的非限制性实例包括dna测序、全转录物组鸟枪测序(wtss或rna-seq)、质谱法(ms)、微阵列、焦磷酸测序、柱纯化分析、聚丙烯酰胺凝胶电泳和从索引标记的引物产生的pcr产物的索引标签测序。在一些实施方案中，扩增样品生物体中的超过一种核酸序列。分离pcr产物混合物中不同核酸序列的方法的非限制性实例包括柱纯化、高效液相色谱法(hplc)、hplc/ms、聚丙烯酰胺凝胶电泳、大小排阻色谱法。可以通过测序鉴定经扩增的核酸分子。可以在自动化仪器上进行核酸测序。测序实验可以平行进行，以同时分析数十、数百或数千个序列。以下是测序技术的非限制性实例。在焦磷酸测序中，在含有单个dna模板的小水滴内扩增dna，该dna模板与油溶液中的引物包被的珠子结合。将核苷酸添加到正在增长的序列中，并通过可见光证明每个碱基的添加。离子半导体测序通过与合成期间释放的氢离子相关的电信号形式检测核酸残基的添加。含有模板的反应孔用四种类型的核苷酸结构单元淹没，一次一个。电信号的时间顺序确定添加了哪个结构单元，并确定模板中的相应残基。dna纳米球使用滚环复制将dna扩增成纳米球。纳米球的解链连接测序揭示了dna序列。在可逆染料方法中，将核酸分子与载玻片上的引物退火并扩增。加入四种类型的荧光染料残基，每种都与天然核碱基互补，加入与核酸序列中下一碱基互补的残基，并从载玻片上漂洗未掺入的染料。添加四种类型的可逆终止子碱基(rt-碱基)，并洗去未掺入的核苷酸。荧光表明染料残基的添加，从而鉴定模板序列中的互补碱基。化学除去染料残留物，并重复该循环。可通过对存在于癌细胞组织中的p53等位基因进行分子克隆并对该等位基因进行测序来完成点突变的检测。或者，可使用聚合酶链反应直接从来自癌细胞组织的基因组dna制品扩增p53基因序列。然后可确定经扩增序列的dna序列。参见，例如，saiki等人,science,vol.239,p.487,1988；美国专利号4,683,202；以及美国专利号4,683,195。也可检测p53基因的特定缺失。例如，针对p53基因或周围标志物基因的限制性片段长度多态性(rflp)探针可用于对p53等位基因的丧失进行评分。还可基于p53基因的野生型表达产物的丧失来检测野生型p53基因的丧失。这样的表达产物包括mrna以及p53蛋白质产物本身。可通过直接对mrna进行测序或经由从mrna制备的cdna的分子克隆来检测点突变。可使用dna测序技术来确定所克隆的cdna的序列。还可经由聚合酶链反应(pcr)对cdna进行测序。或者，可使用错配检测来检测p53基因或其mrna产物中的点突变。该方法可涉及使用与人野生型p53基因互补的标记的核糖核酸探针。将核糖核酸探针与从癌细胞组织中分离的mrna或dna退火(杂交)在一起，并随后用能够检测双链体rna结构中的一些错配的rna酶a进行消化。如果rna酶a检测到错配，则该酶在错配位点切割。因此，当退火的rna制品在电泳凝胶基质上得到分离时，如果错配已被检测到并被rna酶a切割，则可看到比核糖核酸探针与p53mrna或dna的全长双链体rna更小的rna产物。核糖核酸探针不需要是p53mrna或基因的全长，而可为p53mrna或基因的区段。如果该核糖核酸探针仅包含p53mrna或基因的区段，则将期望使用多个这些探针来筛选整个mrna序列的错配。以类似的方式，可通过酶或化学切割，使用dna探针来检测错配。参见，例如，cotton等人,proc.natl.acad.sci.usa,vol.85,4397,1988；和shenk等人,proc.natl.acad.sci.usa,vol.72,p.989,1975。或者，可通过错配的双链体相对于匹配的双链体的电泳迁移率的变化来检测错配。参见，例如，cariello,humangenetics,vol.42,p.726,1988。采用核糖核酸探针或dna探针，可在杂交前使用pcr(参见下文)来扩增可能含有突变的细胞mrna或dna。还可使用等位基因特异性探针筛选已通过使用聚合酶链反应扩增的来自癌细胞组织的p53基因的dna序列。这些探针为核酸寡聚物，其各自含有携带已知突变的p53基因序列的区域。例如，一个寡聚物可为约30个核苷酸的长度，对应于p53基因序列的一部分。在编码p53基因的第175个密码子的位置，该寡聚物编码丙氨酸，而不是野生型密码子缬氨酸。通过使用一连串这样的等位基因特异性探针，可筛选pcr扩增产物以鉴别p53基因中先前鉴别的突变的存在。等位基因特异性探针与扩增的p53序列的杂交可在例如尼龙过滤器上进行。与特定探针的杂交表明，该癌细胞组织中存在与该等位基因特异性探针相同的突变。通过多样化的一系列高分辨率、高通量微阵列平台的应用，可促进癌细胞中p53基因结构改变的鉴别。基本上，两种类型的阵列包括携带来自克隆核酸的pcr产物的阵列(例如，cdna、bac、粘粒)和使用寡核苷酸的阵列。所述方法可提供调查全基因组dna拷贝数异常和表达水平的方式，从而允许将癌细胞的损失、增加和扩增与在相同样品中过表达和低表达的基因相互关联。提供癌细胞中mrna水平估计值的基因表达阵列已经产生了可鉴定基因表达水平、可变剪接事件和mrna加工改变的外显子特异性阵列。可使用寡核苷酸阵列来探询整个基因组中的单核苷酸多态性(snp)以供联系和关联研究，并且这些寡核苷酸阵列已经适应于量化拷贝数异常和杂合性丢失事件。dna测序阵列可允许染色体区域和整个基因组的重新测序。基于snp的阵列或其他基因阵列或芯片可确定野生型p53等位基因的存在以及突变的结构。单核苷酸多态性(snp)——dna中单个位点的变异——是基因组中最常见的变异类型。例如，在人类基因组中估计有500-1000万个snp。snp可以是同义或非同义置换。由于遗传密码的简并性，同义snp置换不会导致蛋白质中氨基酸的改变，但可以以其他方式影响功能。例如，编码膜转运蛋白的基因中看似沉默的突变可以减慢翻译速度，从而使肽链错误折叠，并产生功能较弱的突变膜转运蛋白。非同义snp置换可以是错义置换或无义置换。当单碱基改变导致蛋白质的氨基酸序列改变并且其功能障碍导致疾病时，发生错义置换。当点突变导致提前终止密码子或转录mrna中的无义密码子时，发生无义置换，这导致截短的且通常无功能的蛋白质产物。由于snp在整个进化中及群体内高度保守，因此将snp的图谱作为研究的优秀基因型标记物。snp阵列是用于研究整个基因组的有用工具。此外，snp阵列可用于研究杂合性丢失(loh)。loh是一种等位基因不平衡的形式，其可由等位基因完全丧失或一个等位基因相对于另一个等位基因的拷贝数增加而导致。虽然存在其他基于芯片的方法(例如，比较基因组杂交仅可检测基因组增加或缺失)，但snp阵列具有检测由于单亲二体性(upd)而导致的拷贝数中性loh的额外优点。在upd中，来自一个亲本的一个等位基因或整个染色体丢失，导致另一亲本等位基因的重复复制(单亲＝来自一个亲本，二体性＝复制的)。在疾病情况下，当野生型等位基因(例如，来自母本)丢失而存在两个拷贝的杂合等位基因(例如，来自父本)时，这种情况可能是病态的。snp阵列的使用在癌症诊断中具有巨大的潜力，因为loh是大多数人类癌症的显著特征。snp阵列技术已经表明，癌症(例如，胃癌，肝癌等)和血液恶性肿瘤(all、mds、cml等)由于基因组缺失或upd以及基因组获得而具有较高的loh率。在本公开内容中，使用高密度snp阵列检测loh允许鉴别等位基因不平衡的模式，以确定野生型p53等位基因的存在(lips等人,2005；lai等人,2007)。p53基因序列和单核苷酸多态性阵列的实例包括p53基因芯片(affymetrix,santaclara,ca)、rochep53ampli-chip(rochemolecularsystems,pleasanton,ca)、ampli-chip阵列(affymetrix,santaclara,ca)、snp阵列6.0(affymetrix,santaclara,ca)、beadarrays(illumina,sandiego,ca)等。还可基于p53基因的野生型表达产物的突变来检测野生型p53基因的突变。这样的表达产物包括mrna以及p53蛋白质产物本身。可通过直接对mrna进行测序或经由从mrna制备的cdna的分子克隆来检测点突变。可使用dna测序技术来确定所克隆的cdna的序列。还可经由聚合酶链反应(pcr)对cdna进行测序。可使用一组单克隆抗体，其中每个与p53功能有关的表位均由单克隆抗体表示。该组中单克隆抗体的结合的损失或干扰可指示p53蛋白的突变改变，并因此指示p53基因本身的突变改变。还可在包括例如血清、粪便、尿液和痰液等身体样品中检测到突变p53基因或基因产物。上述用于检测组织中突变p53基因或基因产物的相同技术可应用于其他身体样品。还可通过筛选野生型p53蛋白功能的丧失来检测野生型p53基因的丧失。尽管p53蛋白确定具有的所有功能尚未得到阐明，但至少两种具体功能是已知的。蛋白质p53与sv40大t抗原以及腺病毒e1b抗原结合。p53蛋白与这些抗原中的任一个或两者结合的能力的丧失表明蛋白质的突变改变，该突变改变反映出基因本身的突变改变。或者，可使用一组单克隆抗体，其中每个与p53功能有关的表位均由单克隆抗体表示。该组中单克隆抗体的结合的损失或干扰将指示p53蛋白的突变改变，并因此指示p53基因本身的突变改变。用于检测改变的p53蛋白的任何方法均可用于检测野生型p53基因的丧失。可在施用拟肽大环化合物之前、期间或之后进行患有癌症的受试者中p53灭活突变的缺乏和/或野生型p53表达的确定。在一些实施方案中，在向受试者第一次施用拟肽大环化合物之前，例如，在向受试者第一次施用拟肽大环化合物之前约5年–约1个月、约4年–约1个月、约3年–约1个月、约2年-约1个月、约1年–约1个月、约5年–约1周、约4年–约1周、约3年–约1个月、约2年-约1周、约1年–约1周、约5年–约1天、约4年–约1天、约3年–约1天、约2年-约1天、约1年–约1天、约15个月-约1个月、约15个月-约1周、约15个月-约1天、约12个月-约1个月、约12个月-约1周、约12个月-约1天、约6个月-约1个月、约6个月-约1周、约6个月-约1天、约3个月-约1个月、约3个月-约1周或约3个月-约1天进行p53灭活突变的缺乏和/或野生型p53表达的确定。在一些实例中，在向受试者第一次施用拟肽大环化合物之前至多6年、5年、4年、3年、24个月、23个月、22个月、21个月、20个月、19个月、18个月、17个月、16个月、15个月、14个月、13个月、12个月、11个月、10个月、9个月、8个月、7个月、6个月、5个月、4个月、3个月、2个月、1个月、4周(28天)、3周(21天)、2周(14天)、1周(7天)、6天、5天、4天、3天、2天或1天进行p53灭活突变的缺乏和/或野生型p53表达的确认。在一些实例中，在向受试者第一次施用拟肽大环化合物的1个月内进行p53灭活突变的缺乏的确认。在一些实例中，在向受试者第一次施用拟肽大环化合物的21天内进行p53灭活突变的缺乏的确认。癌症可通过本发明方法治疗的实体癌包括但不限于骨肿瘤(例如骨肉瘤、软骨母细胞瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤)、生殖细胞肿瘤、肾肿瘤(例如维尔姆斯瘤、恶性横纹肌样瘤)、肝肿瘤(例如肝母细胞瘤和肝细胞癌)、神经母细胞瘤、黑素瘤、肾上腺皮质癌、鼻咽癌、甲状腺癌、视网膜母细胞瘤、肉瘤和软组织肿瘤(例如，横纹肌肉瘤、硬纤维瘤、纤维肉瘤、脂肪肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤和周围神经鞘瘤(神经纤维肉瘤)。可以通过本发明方法治疗的液体癌包括但不限于淋巴瘤、白血病和骨髓瘤。根据所描述的方法治疗的淋巴瘤和白血病的实例包括但不限于慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞性淋巴瘤、b-细胞幼淋巴细胞性白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤(如瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症)、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞骨髓瘤、浆细胞瘤、单克隆免疫球蛋白沉积疾病、重链病、结外边缘区b细胞淋巴瘤(也称为malt淋巴瘤)、结节边缘区b细胞淋巴瘤(nmzl)、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大b细胞淋巴瘤、血管内大b细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤/白血病、t细胞幼淋巴细胞白血病、t细胞大颗粒淋巴细胞性白血病、侵袭性nk细胞白血病、成人t细胞白血病、结节外nk/t细胞淋巴瘤、鼻型、肠病型t细胞淋巴瘤、肝脾t细胞淋巴瘤、母细胞性nk细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿病/塞扎里综合征、原发性皮肤cd30阳性t细胞淋巴增生性病症、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性t细胞淋巴瘤、外周t细胞淋巴瘤、未指明的间变性大细胞淋巴瘤、经典霍奇金淋巴瘤(结节性硬化型、混合细胞型、富淋巴细胞型、淋巴细胞消耗或未消耗型)和以结节性淋巴细胞为主的霍奇金淋巴瘤。可以通过本发明的方法治疗的癌症的实例包括涉及造血来源的增生性/赘生性细胞的癌症，例如由髓样、淋巴样或红细胞谱系或其前体细胞引起的癌症。病症的实例包括：急性白血病，例如，成红细胞白血病和急性巨核母细胞性白血病。另外的示例性骨髓病症包括但不限于：急性早幼粒细胞白血病(apml)、急性髓性白血病(aml)和慢性髓性白血病(cml)(综述见vaickus,l.(1991)critrev.inoncol./hemotol.11:267-97)；淋巴样恶性肿瘤包括但不限于急性淋巴母细胞性白血病(all)，其包括b-谱系all和t-谱系all、慢性淋巴细胞性白血病(cll)、幼淋巴细胞性白血病(pll)、多发性骨髓瘤、多毛细胞白血病(hll)和瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(wm)。其他形式的恶性淋巴瘤包括但不限于：非霍奇金淋巴瘤及其变型、外周t细胞淋巴瘤、成人t细胞白血病/淋巴瘤(atl)、皮肤t细胞淋巴瘤(ctcl)、巨粒淋巴细胞白血病(lgf)、霍奇金病和里德-斯特恩伯格病。例如，癌症包括但不限于急性淋巴细胞性白血病(all)；t-细胞急性淋巴细胞性白血病(t-all)；间变性大细胞淋巴瘤(alcl)；慢性髓细胞性白血病(cml)；急性髓样白血病(aml)；b细胞慢性淋巴细胞性白血病(b-cll)；弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)；嗜酸粒细胞过多/慢性嗜酸粒细胞增多；和伯基特淋巴瘤。在一些实施方案中，通过本发明的方法治疗的癌症是急性淋巴母细胞性白血病；急性髓样白血病；aids相关癌症；aids相关淋巴瘤；慢性淋巴细胞性白血病；慢性髓性白血病；慢性骨髓增生性病症；皮肤t细胞淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；多发性骨髓瘤；多发性骨髓瘤/浆细胞肿瘤；非霍奇金淋巴瘤；原发性中枢神经系统(cns)淋巴瘤；或t细胞淋巴瘤；在多个实施方案中，所述癌症可以是b细胞慢性淋巴细胞性白血病、b细胞淋巴瘤-dlbcl、生发中心样b细胞淋巴瘤-dlbcl、活化b细胞样b细胞淋巴瘤-dlbcl或伯基特淋巴瘤。在一些实施方案中，通过本文公开的方法治疗的癌症不包括已知与hpv(人乳头瘤病毒)相关的癌症。通过本文公开的方法进行的癌症治疗的有效性和/或响应可通过任何合适的方法来确定。该响应可以是完全响应，其可以是客观响应、临床响应或对治疗的病理响应。例如，可根据如针对淋巴瘤患者的修订版国际工作组响应标准(revisedinternationalworkinggroupresponsecriteria)(iwg2014)所述的用于评价对癌症治疗的响应的技术来确定该响应，该文献通过引用以全文并入于此。该响应可以是存活持续时间(或这种持续时间的概率)或无进展间隔时间。这类事件的计时或持续时间可以大约从诊断时间，或大约从治疗开始的时间，或大约从治疗结束的时间(如拟肽大环化合物的最后施用)来确定。或者，该响应可基于癌细胞数目、每单位体积癌细胞数目或癌细胞代谢的减少，或基于癌细胞负荷，或基于血清标志物的水平(特别是在疾病状态下血清标志物升高的情况下)。个体患者的响应可被描述为完全响应、部分响应、病情稳定和病情进展。在一些实施方案中，该响应是完全响应(cr)。在一些实例中，完全响应可被定义为所有循环肿瘤细胞(ctc)或单核血细胞(mnbc)的消失，即任何病态淋巴结(无论是目标还是非目标的)的短轴均必须缩小至<10mm。在某些实施方案中，该响应是部分响应(pr)。部分响应可被定义为以基线直径总和为参考，循环肿瘤细胞(ctc)或单核血细胞(mnbc)的直径总和减少至少30％。在一些实施方案中，该响应为病情进展(pd)。病情进展可被定义为以研究的最小数目(如果基线数目是最小的，则这包括基线数目)为参考，循环肿瘤细胞(ctc)或单核血细胞(mnbc)的数目至少20％的增加，以及至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个、至少20个、至少30个、至少40个、至少50个或至少100个或更多个循环肿瘤细胞(ctc)或单核血细胞(mnbc)的绝对增加。一个或多个新病变的出现也可被视为进展。在一些实施方案中，该疾病可以病情稳定(sd)。病情稳定可被定义为以研究中的最小ctc和/或mnbc数目为参考，没有出现符合pr的癌细胞数目充分减少，也没有出现符合pd的充分增加的情况。在某些实施方案中，该响应是病理学完全响应。例如通过病理学家在检查手术或活检时移除的组织后确定的病理学完全响应通常是指手术样本中没有侵袭性和/或非侵袭性癌细胞的组织学证据。联合治疗本文还提供了用于治疗癌症的联合疗法，其包括将本文公开的拟肽大环化合物与一种或多种其他疗法联合施用至患有被确定为缺乏p53灭活突变并且/或者表达野生型p53的癌症的受试者。在特定实施方案中，本文呈现了用于治疗癌症的联合疗法，其包括将有效量的拟肽大环化合物与有效量的另一疗法联合施用至患有被确定为缺乏p53灭活突变的癌症并且/或者患有表达野生型p53的癌症的受试者。如本文所用的，在拟肽大环化合物施用的语境中，术语“联合”是指在施用用于治疗癌症的一种或多种其他疗法(例如，药剂、手术或放疗)之前、同时或之后施用拟肽大环化合物。术语“联合”的使用不限制向受试者施用拟肽大环化合物以及一种或多种其他疗法的顺序。在特定实施方案中，拟肽大环化合物的施用与一种或多种其他疗法的施用之间的时间间隔可为约1-约5分钟、约1-约30分钟、约30分钟至约60分钟、约1小时、约1-约2小时、约2-约6小时、约2-约12小时、约12-约24小时、约1-约2天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约1周、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约9周、约10周、约15周、约20周、约26周、约52周、约11-约15周、约15-约20周、约20-约30周、约30-约40周、约40-约50周、约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约7个月、约8个月、约9个月、约10个月、约11个月、约12个月、约1年、约2年，或其间的任意时间段。在某些实施方案中，拟肽大环化合物与一种或多种其他疗法的施用相隔少于1天、少于1周、少于2周、少于3周、少于4周、少于1个月、少于2个月、少于3个月、少于6个月、少于1年、少于2年或少于5年。在一些实施方案中，本文提供的联合疗法包括每周1-2次、每周一次、每2周一次、每3周一次、每4周一次、每5周一次、每6周一次、每7周一次或每8周一次的拟肽大环化合物施用，以及每周一次、每2周一次、每3周一次、每4周一次、每月一次、每2个月(例如，约8周)一次、每3个月(例如，约12周)一次或每4个月(例如，约16周)一次地施用一种或多种其他疗法。在某些实施方案中，拟肽大环化合物以及一种或多种其他疗法周期地施用至受试者。周期疗法包括持续一段时间施用拟肽大环化合物，紧接着持续一段时间施用一种或多种其他疗法，并且重复这种顺序施用。在某些实施方案中，周期疗法还可包括一段时间内不施用拟肽大环化合物或其他疗法的休息期(例如，2天、3天、4天、5天、6天、7天、1周、2周、3周、4周、5周、10周、20周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、2年或3年)。在一个实施方案中，所施用的周期的数目为1至12个周期、2至10个周期或2至8个周期。在一些实施方案中，本文提供的用于治疗癌症的方法包括在联合施用拟肽大环化合物与其他疗法之前，将拟肽大环化合物作为单一药剂施用一段时间。在某些实施方案中，本文提供的用于治疗癌症的方法包括在联合施用拟肽大环化合物与其他疗法之前，将其他疗法单独施用一段时间。在一些实施方案中，相对于单独施用拟肽大环化合物或一种或多种其他疗法，根据本文呈现的方法的拟肽大环化合物以及所述一种或多种其他疗法的施用具有叠加效应。在一些实施方案中，相对于单独施用拟肽大环化合物或一种或多种其他疗法，根据本文呈现的方法的拟肽大环化合物以及所述一种或多种其他疗法的施用具有协同效应。如本文所用的，“协同”是指拟肽大环化合物与一种或多种其他疗法(例如，药剂)联合施用的效果，该组合比任两种或更多种单一疗法(例如，药剂)的叠加效应更加有效。在特定实施方案中，联合疗法的协同效应允许使用更低剂量(例如，次优剂量)的拟肽大环化合物或其他疗法，并且/或者允许向受试者更低频率地施用拟肽大环化合物或其他疗法。在某些实施方案中，使用更低剂量的拟肽大环化合物或其他疗法和/或更低频率地施用该拟肽大环化合物或所述其他疗法的能力使得分别与该拟肽大环化合物或所述其他疗法的施用相关的对受试者的毒性降低，而不降低该拟肽大环化合物或所述其他疗法分别在治疗癌症中的效力。在一些实施方案中，协同效应导致该拟肽大环化合物或每一种所述其他疗法在治疗癌症中的效力提高。在一些实施方案中，拟肽大环化合物与一种或多种其他疗法的组合的协同效应避免或减少了与使用任一种疗法相关的不良作用或不想要的副作用。拟肽大环化合物与一种或多种其他疗法的组合可在同一药物组合物中施用至受试者。或者，拟肽大环化合物以及一种或多种其他疗法可在单独的药物组合物中同时施用至受试者。拟肽大环化合物以及一种或多种其他疗法可在单独的药物组合物中顺序地施用至受试者。还可通过相同或不同的给药途径将拟肽大环化合物以及一种或多种其他疗法施用至受试者。本文提供的联合疗法包括将拟肽大环化合物与常规或已知的用于治疗癌症的疗法联合施用至有需要的受试者。用于癌症或与癌症相关的状况的其他疗法旨在控制或减轻一种或多种症状。相应地，在一些实施方案中，本文提供的联合疗法包括向有需要的受试者施用止痛药或旨在缓解或控制与癌症相关的一种或多种症状或与该癌症相关的状况的其他疗法。可与拟肽大环化合物联合使用的抗癌剂的非限制性实例包括：激素剂(例如，芳香酶抑制剂、选择性雌激素受体调节剂(serm)和雌激素受体拮抗剂)、化疗剂(例如，微管解装配阻断剂、抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂和dna交联剂或损伤剂)、抗-抗原剂(例如，vegf拮抗剂、受体拮抗剂、整联蛋白拮抗剂、血管靶向剂(vta)/血管破坏剂(vda))、放射疗法以及常规手术。可与拟肽大环化合物联合使用的激素剂的非限制性实例包括芳香酶抑制剂、serm和雌激素受体拮抗剂。为芳香酶抑制剂的激素剂可以是甾体或非甾体的。非甾体激素剂的非限制性实例包括来曲唑、阿那曲唑、氨鲁米特、法倔唑和伏罗唑。甾体激素剂的非限制性实例包括阿诺新(依西美坦)、福美坦和睾内酯。为serm的激素剂的非限制性实例包括他莫昔芬(以为品牌/销售的)、阿非昔芬、阿佐昔芬、巴多昔芬、氯米芬、femarelle、拉索昔芬、奥美昔芬、雷洛昔芬和托瑞米芬。为雌激素受体拮抗剂的激素剂的非限制性实例包括氟维司群。其他激素剂包括但不限于阿比特龙和洛那立生。可与拟肽大环化合物联合使用的化疗剂的非限制性实例包括微管解装配阻断剂、抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂和dna交联剂或损伤剂。为微管解装配阻断剂的化疗剂包括但不限于紫杉烷类(例如，紫杉醇(以为品牌/销售的)、多西他赛、abraxane、拉罗他赛、奥他赛和替司他赛)；埃博霉素类(例如，伊沙匹隆)；以及长春花生物碱类(例如，长春瑞滨、长春碱、长春地辛和长春新碱(以为品牌/销售的))。作为抗代谢物的化疗剂包括但不限于叶酸抗代谢物(例如，甲氨蝶呤、氨基蝶呤、培美曲塞、雷替曲塞)；嘌呤抗代谢物(例如，克拉屈滨、氯法拉滨、氟达拉滨、巯基嘌呤、喷司他丁、硫鸟嘌呤)；嘧啶抗代谢物(例如，5-氟尿嘧啶、卡培他滨、吉西他滨阿糖胞苷、地西他滨、氟尿苷、喃氟啶)；以及脱氧核糖核苷酸抗代谢物(例如，羟基脲)。作为拓扑异构酶抑制剂的化疗剂包括但不限于i类(喜树属)拓扑异构酶抑制剂(例如，托泊替康(以为品牌/销售的)、伊立替康、芦比替康和贝洛替康)；ii类(鬼臼属)拓扑异构酶抑制剂(例如，依托泊苷或vp-16，以及替尼泊苷)；蒽环类(例如，多柔比星、表柔比星、doxil、阿柔比星、氨柔比星、柔红霉素、伊达比星、吡柔比星、戊柔比星和佐柔比星)；以及蒽二酮类(例如，米托蒽醌和匹克生琼)。作为dna交联剂(或dna损伤剂)的化疗剂包括但不限于烷化剂(例如，环磷酰胺、氮芥、异环磷酰胺(以为品牌/销售的)、曲磷胺、苯丁酸氮芥、美法仑、泼尼氮芥、苯达莫司汀、乌拉莫司汀、雌氮芥、卡莫司汀(以为品牌/销售的)、洛莫司汀、司莫司汀、福莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀、链脲菌素、白消安、甘露舒凡、曲奥舒凡、卡巴醌、n,n′n′-三亚乙基硫代磷酰胺、三亚胺醌、三乙撑密胺)；类烷化剂(例如，卡铂(以为品牌/销售的)、顺铂、奥沙利铂、奈达铂、四硝酸三铂、沙铂、吡铂)；非经典dna交联剂(例如，丙卡巴肼、达卡巴嗪、替莫唑胺(以为品牌/销售的)、六甲蜜胺、二溴甘露醇)；以及嵌入剂(例如，放线菌素、博来霉素、丝裂霉素和普利霉素)。可与拟肽大环化合物联合施用至受试者的其他疗法的非限制性实例包括：(1)他汀类，如洛伐他汀(例如，以为品牌/销售的)；(2)mtor抑制剂，诸如还被称为雷帕霉素的西罗莫司(以为品牌/销售的)、坦罗莫司(例如，以为品牌/销售的)、依罗莫司(例如，以为品牌/销售的)和地磷莫司；(3)法呢酰基转移酶抑制剂，如替匹法尼；(4)抗纤维化剂，如吡非尼酮；(5)聚乙二醇化的干扰素，如peg-干扰素α-2b；(6)cns兴奋剂，如哌醋甲酯(以为品牌/销售的)；(7)her-2拮抗剂，如抗her-2抗体(例如，曲妥珠单抗)和激酶抑制剂(例如，拉帕替尼)；(8)igf-1拮抗剂如抗igf-1抗体(例如，ave1642和imc-a11)或igf-1激酶抑制剂；(9)egfr/her-1拮抗剂，如抗egfr抗体(例如，西妥昔单抗、帕尼单抗)或egfr激酶抑制剂(例如，厄洛替尼；吉非替尼)；(10)src拮抗剂，如波舒替尼；(11)细胞周期蛋白依赖性激酶(cdk)抑制剂，如塞利西利；(12)janus激酶2抑制剂，如来妥替尼；(13)蛋白酶体抑制剂，如硼替佐米；(14)磷酸二酯酶抑制剂，如阿那格雷；(15)肌苷单磷酸脱氢酶抑制剂，如噻唑呋林；(16)脂氧合酶抑制剂，如马索罗酚；(17)内皮缩血管肽拮抗剂；(18)类视黄醇受体拮抗剂，如维a酸或阿利维a酸；(19)免疫调节剂，如来那度胺、泊马度胺或沙立度胺；(20)激酶(例如，酪氨酸激酶)抑制剂，如伊马替尼、达沙替尼、厄洛替尼、尼洛替尼、吉非替尼、索拉非尼、舒尼替尼、拉帕替尼或tg100801；(21)非甾体抗炎剂，如塞来昔布(以为品牌/销售的)；(22)人粒细胞集落刺激因子(g-csf)，如非格司亭(以为品牌/销售的)；(23)亚叶酸或亚叶酸钙；(24)整联蛋白拮抗剂，如整联蛋白α5β1-拮抗剂(例如，jsm6427)；(25)核因子κβ(nf-κβ)拮抗剂如ot-551，其也是抗氧化剂；(26)刺猬蛋白抑制剂，如cur61414、环杷明、gdc-0449和抗刺猬蛋白抗体；(27)组蛋白脱乙酰酶(hdac)抑制剂，如saha(也被称为伏林司他(以zolinza为品牌/销售的))、pci-24781、sb939、chr-3996、cra-024781、itf2357、jnj-26481585或pci-24781；(28)类视黄醇，如异维a酸(例如，以为品牌/销售的)；(29)肝细胞生长因子/分散因子(hgf/sf)拮抗剂，如hgf/sf单克隆抗体(例如，amg102)；(30)合成化学品，如抗瘤酮；(31)抗糖尿病剂，如罗格列酮(例如，以为品牌/销售的)；(32)抗疟疾药和杀阿米巴药，如氯喹(例如，以为品牌/销售的)；(33)合成缓激肽，如rmp-7；(34)血小板衍生生长因子受体抑制剂，如su-101；(35)flk-1/kdr/vegfr2、fgfr1和pdgfrβ的受体酪氨酸激酶抑制剂，如su5416和su6668；(36)抗炎剂，如柳氮磺胺吡啶(例如，以为品牌/销售的)；以及(37)tgf-β反义疗法。一些实施方案中，本文公开的拟肽大环化合物可在临床相关的浓度下抑制一种或多种转运蛋白酶(例如，oatp1b1、oatp1b3、bsep)。因此，本文公开的这类拟肽大环化合物可与主要由肝胆转运蛋白清除的药物相互作用。具体地，甲氨蝶呤和他汀类(例如，阿托伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀、瑞舒伐他汀和辛伐他汀)不能在施用本文公开的拟肽大环化合物的48h、36h、24h或12h内(例如，24h内)给药。可能受共施用本文公开的拟肽大环化合物影响的示例性药物在下面列出。在多个实施方案中，一种或多种选自表8的药物不能在施用本文公开的拟肽大环化合物的48h、36h、24h或12h内(例如，24h内)给药。可能受共施用表8公开的拟肽大环化合物影响的示例性药物。表8药物治疗领域伊立替康肿瘤学波生坦肺动脉高压卡泊芬净抗真菌甲氨蝶呤肿瘤学和风湿病学瑞格列奈糖尿病阿托伐他汀高胆固醇血症西立伐他汀高胆固醇血症氟伐他汀高胆固醇血症洛伐他汀高胆固醇血症匹伐他汀高胆固醇血症普伐他汀高胆固醇血症瑞舒伐他汀高胆固醇血症辛伐他汀高胆固醇血症实施例实施例1：6-氯色氨酸fmoc氨基酸的合成6-氯-3-甲酰基-1h-吲哚-1-甲酸叔丁酯，1。在氩气下于0℃向搅拌中的干dmf(12ml)的溶液中逐滴加入pocl3(3.92ml，43mmol，1.3当量)。在同一温度下搅拌该溶液20分钟，然后逐滴加入6-氯吲哚(5.0g，33mmol，1当量)的干dmf(30ml)溶液。使所得到的混合物升温至室温，并再搅拌2.5h。加水(50ml)，并用4mnaoh水溶液(ph～8)中和该溶液。滤出所得到的固体，用水洗涤，并在真空下干燥。这种材料无需额外的纯化而直接用于下一步骤。在n2下于室温向搅拌中的粗甲酰吲哚(33mmol，1当量)的thf(150ml)溶液中相继添加boc2o(7.91g，36.3mmol，1.1当量)和dmap(0.4g，3.3mmol，0.1当量)。在室温下搅拌所得到的混合物1.5h，减压蒸发溶剂。将残留物用etoac吸收，并用1nhc1洗涤，干燥并浓缩，从而得到白色固体甲酰吲哚1(经2步，9g，98％)。1hnmr(cdcl3)δ:1.70(s,boc,9h)；7.35(dd,1h)；8.21(m,3h)；10.07(s,1h)。6-氯-3-(羟甲基)-1h-吲哚-1-甲酸叔丁酯，2。向化合物1(8.86g，32mmol，1当量)的乙醇(150ml)溶液中加入nabh4(2.4g，63mmol，2当量)。在室温下搅拌反应液3h。浓缩反应混合物，并将残留物倒入乙醚和水中。分离有机层，用硫酸镁干燥并浓缩，从而得到白色固体(8.7g，98％)。这种材料无需额外的纯化而直接用于下一步骤。1hnmr(cdcl3)δ:1.65(s,boc,9h)；4.80(s,2h,ch2)；7.21(dd,1h)；7.53(m,2h)；8.16(bs,1h)。3-(溴甲基)-6-氯-1h-吲哚-1-甲酸叔丁酯，3。于-40℃向氩气下的化合物2(4.1g，14.6mmol，1当量)的二氯甲烷(50ml)溶液中加入三苯基膦(4.59g，17.5mmol，1.2当量)的二氯甲烷(50ml)溶液。在40℃下再搅拌反应溶液30分钟。然后加入nbs(3.38g，19mmol，1.3当量)。使所得到的混合物升温至室温并搅拌过夜。蒸发二氯甲烷，加入四氯化碳(100ml)，搅拌混合物1h并过滤。将滤液浓缩，将其装入二氧化硅柱塞，并用25％etoac的己烷溶液快速洗脱。浓缩溶液，得到白色泡沫(3.84g，77％)。1hnmr(cdcl3)δ:1.66(s,boc,9h)；4.63(s,2h,ch2)；7.28(dd,1h)；7.57(d,1h)；7.64(bs,1h)；8.18(bs,1h)。αme-6cl-trp(boc)-ni-s-bpb，4。在氩气下向s-ala-ni-s-bpb(2.66g，5.2mmol，1当量)和ko-tbu(0.87g，7.8mmol，1.5当量)中加入50mldmf。通过注射器加入溴化物衍生化合物3(2.68g，7.8mmol，1.5当量)在dmf(5.0ml)中的溶液。在环境温度下搅拌反应混合物1h。然后用5％的醋酸水溶液猝灭溶液，并用水稀释。在二氯甲烷中萃取所需产物，干燥并浓缩。在使用etoac和己烷作为洗脱液的正相上通过快速色谱法(固体加载)纯化油状产物4，得到红色固体(1.78g，45％产率)。αme-6cl-trp(boc)-ni-s-bpb，4：m+h计算775.21，m+h观测775.26；1hnmr(cdc13)δ:1.23(s,3h,αme)；1.56(m,11h,boc+ch2)；1.82-2.20(m,4h,2ch2)；3.03(m,1h,chα)；3.24(m,2h,ch2)；3.57和4.29(ab系统,2h,ch2(苯甲基),j＝12.8hz)；6.62(d,2h)；6.98(d,1h)；7.14(m,2h)；7.23(m,1h)；7.32-7.36(m,5h)；7.50(m,2h)；7.67(bs,1h)；7.98(d,2h)；8.27(m,2h)。fmoc-αme-6cl-trp(boc)-oh，6。向50℃的3nhcl/meoh(1/3，15ml)溶液中逐滴加入化合物4(1.75g，2.3mmol，1当量)的meoh(5ml)溶液。原始材料在3-4h内消失。然后用冰浴使酸性溶液冷却至0℃，并用na2co3(1.21g，11.5mmol，5当量)水溶液将其猝灭。除去甲醇，并向悬浮液中添加另外8当量的na2co3(1.95g，18.4mmol)。然后添加清除镍的edta二钠盐二水合物(1.68g，4.5mmol，2当量)，并搅拌该悬浮液2h。添加fmoc-osu(0.84g，2.5mmol，1.1当量)的丙酮(50ml)溶液并搅拌该反应液过夜。之后，用乙醚和1nhc1稀释该反应液。然后用硫酸镁干燥有机层，并在真空中浓缩。在正相上使用丙酮和二氯甲烷作为洗脱液纯化所需产物6，得到白色泡沫(0.9g，70％产率)。fmoc-αme-6cl-trp(boc)-oh，6：m+h计算575.19,m+h观测575.37；lhnmr(cdc13)1.59(s,9h,boc)；1.68(s,3h,me)；3.48(bs,2h,ch2)；4.22(m,1h,ch)；4.39(bs,2h,ch2)；5.47(s,1h,nh)；7.10(m,1h)；7.18(m,2h)；7.27(m,2h)；7.39(m,2h)；7.50(m,2h)；7.75(d,2h)；8.12(bs,1h)。6cl-trp(boc)-ni-s-bpb，5。在氩气下向gly-ni-s-bpb(4.6g，9.2mmol，1当量)和ko-tbu(1.14g，10.1mmol，1.1当量)中加入95mldmf。通过注射器添加溴化物衍生化合物3(3.5g，4.6mmol，1.1当量)在dmf(10ml)中的溶液。在环境温度下搅拌反应混合物1h。然后用5％的醋酸水溶液猝灭溶液，并用水稀释。在二氯甲烷中萃取所需产物，干燥并浓缩。在正相上使用etoac和己烷作为洗脱液通过快速色谱法(固体加载)纯化油状产物5，得到红色固体(5g，71％产率)。6cl-trp(boc)-ni-s-bpb，5：m+h计算761.20，m+h观测761.34；1hnmr(cdcl3)δ:1.58(m,11h,boc+ch2)；1.84(m,1h)；1.96(m,1h)；2.24(m,2h,ch2)；3.00(m,1h,chα)；3.22(m,2h,ch2)；3.45和4.25(ab系统,2h,ch2(苯甲基),j＝12.8hz)；4.27(m,1h,chα)；6.65(d,2h)；6.88(d,1h)；7.07(m,2h)；7.14(m,2h)；7.28(m,3h)；7.35-7.39(m,2h)；7.52(m,2h)；7.96(d,2h)；8.28(m,2h)。fmoc-6cl-trp(boc)-oh，7。向50℃下的3nhcl/meoh(1/3，44ml)溶液中逐滴加入化合物5(5g，6.6mmol，1当量)在meoh(10ml)中的溶液。原始材料在3-4h内消失。然后用冰浴使酸性溶液冷却至0℃，并用na2co3(3.48g，33mmol，5当量)水溶液将其猝灭。除去甲醇，并向悬浮液中添加另外8当量的na2co3(5.57g，52mmol)。然后添加清除镍的edta二钠盐二水合物(4.89g，13.1mmol，2当量)，并搅拌悬浮液2h。添加fmoc-osu(2.21g，6.55mmol，1.1当量)在丙酮(100ml)中的溶液，并搅拌反应液过夜。之后，用乙醚和1nhc1稀释该反应液。然后用硫酸镁干燥有机层，并在真空中浓缩。在正相上使用丙酮和二氯甲烷作为洗脱液纯化所需产物7，得到白色泡沫(2.6g，69％产率)。fmoc-6cl-trp(boc)-oh，7：m+h计算561.17，m+h观测561.37；1hnmr(cdc13)1.63(s,9h,boc)；3.26(m,2h,ch2)；4.19(m,1h,ch)；4.39(m,2h,ch2)；4.76(m,1h)；5.35(d,1h,nh)；7.18(m,2h)；7.28(m,2h)；7.39(m,3h)；7.50(m,2h)；7.75(d,2h)；8.14(bs,1h)。来自实施例1的反应在图1中示出。实施例2：本发明的拟肽大环化合物如以前所述以及如下所述合成、纯化和分析拟肽大环化合物(schafmeister等人，j.am.chem.soc.122:5891-5892(2000)；schafmeister和verdine，j.am.chem.soc.122:5891(2005)；walensky等人，science305:1466-1470(2004)；和美国专利号7,192,713)。通过用相对应的合成氨基酸替代两个或多个天然存在的氨基酸来设计拟肽大环化合物。替代发生在i和i+4以及i和i+7位。使用固相条件、rink酰胺am树脂(novabiochem)和fmoc主链保护基团化学方法人工地或在自动化肽合成仪(appliedbiosystems，433a型)上进行肽合成。对于天然fmoc保护的氨基酸(novabiochem)的偶联，使用10当量的氨基酸和1:1:2摩尔比的偶联试剂hbtu/hobt(novabiochem)/diea。非天然氨基酸(4当量)与1:1:2摩尔比的hatu(appliedbiosystems)/hobt/diea偶联。合成肽的n末端被乙酰化，而c末端被酰胺化。经完全保护的树脂结合的肽在rink酰胺mbha树脂(加载0.62mmol/g)上以0.1mmol的规模合成。通过用nmp中的25％(v/v)哌啶处理树脂结合的肽2×20min来实现临时fmoc基团的脱保护。在用nmp和二氯甲烷充分流动洗涤后，通过与适当预活化的fmoc-氨基酸衍生物孵育1×60min来实现每个连续氨基酸的偶联。将所有受保护的氨基酸(1mmol)溶解在nmp中并用hctu(1mmol)和diea(1mmol)活化，然后将偶联溶液转移到脱保护的树脂结合的肽。偶联完成后，将树脂充分流动洗涤，为下一次脱保护/偶联循环做准备。在nmp/nmm中的乙酸酐/diea的存在下进行氨基末端的乙酰化。完成从完全组装的树脂结合肽的等分试样获得的经切割和脱保护的样品的lc-ms分析，以验证每个偶联的完成。通过在反相c18柱(varian)上的高效液相色谱法(hplc)(varianprostar)来实现交联化合物的纯化，以产生纯的化合物。通过lc/ms质谱法(与agilent1100hplc系统接口连接的micromasslct)和氨基酸分析(appliedbiosystems，型号420a)确认该纯产物的化学组成。在包括sp662、sp663和sp664在内的二炔交联的拟肽大环化合物的合成中使用下列方案。以0.2mmol规模在peg-ps树脂(加载0.45mmol/g)上合成完全保护的结合树脂的肽。通过采用在dmf中的20％(v/v)的哌啶对结合树脂的肽进行3×10min的处理来实现临时fmoc基团的脱保护。用nmp(3×)、二氯甲烷(3×)和nmp(3x)洗涤后，通过与适当的预活化的fmoc-氨基酸衍生物进行1×60min的孵育来实现每个连续氨基酸的偶联。在将偶联溶液转移至脱保护的结合树脂的肽之前，将所有被保护的氨基酸(0.4mmol)溶解在nmp中，并用hctu(0.4mmol)和diea(0.8mmol)进行活化。偶联反应完成后，洗涤树脂，准备下一个脱保护/偶联循环。在存在于nmp中的乙酸酐/diea的存在下进行氨基末端的乙酰化。对从完全组装的结合树脂的肽的等分试样所获得的已切割和脱保护的样品进行lc-ms分析以验证每个偶联的完成。在典型的实例中，将四氢呋喃(4ml)和三乙胺(2ml)加入到在40ml玻璃小瓶中的肽树脂(0.2mmol)中并摇动10分钟。然后加入pd(pph3)2cl2(0.014g,0.02mmol)和碘化亚铜(0.008g,0.04mmol)，并将所得反应混合物在大气开放的同时机械摇动16小时。在室温下通过用tfa/h2o/tis(95/5/5v/v)处理2.5h来将二炔环化的结合树脂的肽脱保护并从固体支持体上切下。将树脂过滤后，使tfa溶液在冷乙醚中沉淀并进行离心，以生产呈固体的所需产物。通过制备型hplc对粗产物进行纯化。在典型的实例中，用dcm洗涤肽树脂(0.1mmol)。通过用2％tfa/dcm5％tips处理树脂结合的肽3×3min，然后处理30min直至在滤液中未观察到橙色，来实现临时mmt基团的脱保护。在处理之间，用dcm充分流动洗涤树脂。在完全除去mmt后，将树脂用5％diea/nmp溶液洗涤3次，并为双硫醚偶联作准备。将树脂装入反应小瓶中。向反应容器中加入1/1的dcm/dmf，随后加入diea(2.4当量)。充分混合5分钟后，加入4,4'-双(溴甲基)联苯(1.05当量)(tciamericab1921)。然后将反应在室温下机械搅拌过夜。需要时，让反应经历另外的时间以达到完成。类似的程序可用于制备五亚甲基、六亚甲基或七亚甲基交联体(“％c7”、“％c6”或“％c5”)。通过在室温下用tfa/h2o/tis(94/3/3v/v)处理3h，使双硫醚树脂结合的肽脱保护并从固体支持体上切下。过滤树脂后，将tfa溶液在冷乙醚中沉淀并离心，得到呈固体的所需产物。通过制备型hplc纯化粗产物。表20显示了拟肽大环化合物的列表。在包括sp665在内的单炔交联的拟肽大环化合物的合成中使用下列方案。以0.1mmol规模在rink酰胺mbha树脂(加载0.62mmol/g)上合成完全保护的结合树脂的肽。通过采用在nmp中的25％(v/v)的哌啶对结合树脂的肽进行2×20min的处理来实现临时fmoc基团的脱保护。采用nmp和二氯甲烷进行充分的流动洗涤后，通过与适当的预活化的fmoc-氨基酸衍生物进行1×60min的孵育来实现每个连续氨基酸的偶联。在将偶联溶液转移至脱保护的结合树脂的肽之前，将所有被保护的氨基酸(1mmol)溶解在nmp中，并用hctu(1mmol)和diea(1mmol)进行活化。偶联反应完成后，对树脂进行充分的流动洗涤，准备下一个脱保护/偶联循环。在存在于nmp/nmm中的乙酸酐/diea的存在下进行氨基末端的乙酰化。对从完全组装的结合树脂的肽的等分试样所获得的已切割和脱保护的样品进行lc-ms分析以验证每个偶联反应的完成。在一个典型的实例中，用dcm洗涤肽树脂(0.1mmol)。将树脂装入微波小瓶中。对容器进行抽真空并用氮气进行吹扫。加入六羰基钼(0.01当量,sigmaaldrich199959)。将无水氯苯加入到反应容器中。然后加入2-氟苯酚(1当量,sigmaaldrichf12804)。将反应物装入微波炉，并在130℃保持10分钟。可能需要在随后的时间推动反应以完成反应。在室温下通过用tfa/h2o/tis(94/3/3v/v)处理3h来对炔烃复分解的树脂结合肽进行脱保护并将其从固体支持体上切下。将树脂过滤后，使tfa溶液在冷乙醚中沉淀并进行离心，以得到呈固体的所需产物。通过制备型hplc对粗产物进行纯化。表9示出了所制备的本发明拟肽大环化合物的列表。表9在上文和别处显示的序列中，使用了以下缩写：“nle”表示正亮氨酸，“aib”表示2-氨基异丁酸，“ac”表示乙酰基，并且“pr”表示丙酰基。由“$”表示的氨基酸是由全碳i至i+4交联体连接的α-mes5-戊烯基-丙氨酸烯烃氨基酸，其包含一个双键。由“$r5”表示的氨基酸是由全碳i至i+4交联体连接的α-mer5-戊烯基-丙氨酸烯烃氨基酸，其包含一个双键。由“$s8”表示的氨基酸是由全碳i至i+7交联体连接的α-mes8-辛烯基-丙氨酸烯烃氨基酸，其包含一个双键。由“$r8”表示的氨基酸是由全碳i至i+7交联体连接的α-mer8-辛烯基-丙氨酸烯烃氨基酸，其包含一个双键。“ahx”表示氨基环己基连接体。该交联体是直链全碳交联体，其在每个氨基酸的α碳之间包含8个或11个碳原子。由“$/”表示的氨基酸是未由任何交联体连接的α-mes5-戊烯基-丙氨酸烯烃氨基酸。由“$/r5”表示的氨基酸是未由任何交联体连接的α-mer5-戊烯基-丙氨酸烯烃氨基酸。由“$/s8”表示的氨基酸是未由任何交联体连接的α-mes8-辛烯基-丙氨酸烯烃氨基酸。由“$/r8”表示的氨基酸是未由任何交联体连接的α-mer8-辛烯基-丙氨酸烯烃氨基酸。由“amw”表示的氨基酸是氨基酸α-me色氨酸。由“aml”表示的氨基酸是氨基酸α-me亮氨酸。由“2ff”表示的氨基酸是氨基酸2-氟-苯丙氨酸。由“3ff”表示的氨基酸是氨基酸3-氟-苯丙氨酸。由“st”表示的氨基酸是包含两条戊烯基丙氨酸烯烃侧链且如所示每条侧链与另一氨基酸交联的氨基酸。由“st//”表示的氨基酸是包含两条不交联的戊烯基丙氨酸烯烃侧链的氨基酸。由“％st”表示的氨基酸是包含两条戊烯基丙氨酸烯烃侧链且如所示每条侧链通过完全饱和的烃交联与另一氨基酸交联的氨基酸。例如，表示为sp-72、sp-56和sp-138的化合物具有以下结构：例如，其他化合物具有以下结构：表10-13示出了拟肽大环化合物的选择。表10表11表12在上文和别处显示的序列中，使用了以下缩写：“nle”表示正亮氨酸，“aib”表示2-氨基异丁酸，“ac”表示乙酰基，并且“pr”表示丙酰基。由“$”表示的氨基酸是由全碳交联体连接的α-mes5-戊烯基-丙氨酸烯烃氨基酸，其包含一个双键。由“$r5”表示的氨基酸是由全碳交联体连接的α-mer5-戊烯基-丙氨酸烯烃氨基酸，其包含一个双键。由“$s8”表示的氨基酸是由全碳交联体连接的α-mes8-辛烯基-丙氨酸烯烃氨基酸，其包含一个双键。由“$r8”表示的氨基酸是由全碳交联体连接的α-mer8-辛烯基-丙氨酸烯烃氨基酸，其包含一个双键。“ahx”表示氨基环己基连接体。该交联体是直链全碳交联体，其在每个氨基酸的α碳之间包含8个或11个碳原子。由“$/”表示的氨基酸是未由任何交联体连接的α-mes5-戊烯基-丙氨酸烯烃氨基酸。由“$/r5”表示的氨基酸是未由任何交联体连接的α-mer5-戊烯基-丙氨酸烯烃氨基酸。由“$/s8”表示的氨基酸是未由任何交联体连接的α-mes8-辛烯基-丙氨酸烯烃氨基酸。由“$/r8”表示的氨基酸是未由任何交联体连接的α-mer8-辛烯基-丙氨酸烯烃氨基酸。由“amw”表示的氨基酸是氨基酸α-me色氨酸。由“aml”表示的氨基酸是氨基酸α-me亮氨酸。由“amf”表示的氨基酸是氨基酸α-me苯丙氨酸。由“2ff”表示的氨基酸是氨基酸2-氟-苯丙氨酸。由“3ff”表示的氨基酸是氨基酸3-氟-苯丙氨酸。由“st”表示的氨基酸是包含两条戊烯基丙氨酸烯烃侧链且如所示每条侧链与另一氨基酸交联的氨基酸。由“st//”表示的氨基酸是包含两条不交联的戊烯基丙氨酸烯烃侧链的氨基酸。由“％st”表示的氨基酸是包含两条戊烯基丙氨酸烯烃侧链且如所示每条侧链通过完全饱和的烃交联与另一氨基酸交联的氨基酸。由“ba”表示的氨基酸是β-丙氨酸。交联氨基酸的名称内的小写字母“e”或“z”(例如“$er8”或“$zr8”)表示双键构型(分别为e或z)。在其他情况下，诸如“a”或“f”的小写字母表示d氨基酸(例如，分别为d-丙氨酸或d-苯丙氨酸)。指定为“nmw”的氨基酸表示n-甲基色氨酸。指定为“nmy”的氨基酸表示n-甲基酪氨酸。指定为“nma”的氨基酸表示n-甲基丙氨酸。“kbio”表示连接至赖氨酸残基的侧链氨基的生物素基团。指定为“sar”的氨基酸表示肌氨酸。指定为“cha”的氨基酸表示环己基丙氨酸。指定为“cpg”的氨基酸表示环戊基甘氨酸。指定为“cba”的氨基酸表示环丁基丙氨酸。指定为“f4i”的氨基酸表示4-碘代苯丙氨酸。“7l”表示n15同位素亮氨酸。指定为“f3cl”的氨基酸表示3-氯苯丙氨酸。指定为“f4cooh”的氨基酸表示4-羧基苯丙氨酸。指定为“f34f2”的氨基酸表示3,4-二氟苯丙氨酸。指定为“6clw”的氨基酸表示6-氯色氨酸。指定为“$rda6”的氨基酸表示经由二炔键交联至第二炔基氨基酸的α-mer6-己炔基-丙氨酸炔基氨基酸。指定为“$da5”的氨基酸表示α-mes5-戊炔基-丙氨酸炔基氨基酸，其中该炔烃与第二炔基氨基酸形成二炔键的一半。指定为“$ra9”的氨基酸表示经由炔烃复分解反应与第二炔基氨基酸交联的α-mer9-壬炔基-丙氨酸炔基氨基酸。指定为“$a6”的氨基酸表示经由炔烃复分解反应与第二炔基氨基酸交联的α-mes6-己炔基-丙氨酸炔基氨基酸。指定“iso1”或“iso2”指示该拟肽大环化合物是单一异构体。指定为“cit”的氨基酸表示瓜氨酸。分别指定为“cou4”、“cou6”、“cou7”和“cou8”的氨基酸表示下列结构：在一些实施方案中，拟肽大环化合物以多于一种异构体获得，例如这是由于交联体结构中双键的构型(e与z)造成的。此类异构体能够或不能通过常规的色谱法分离。在一些实施方案中，一种异构体相对于其他异构体具有改善的生物学性质。在一个实施方案中，拟肽大环化合物的e交联体烯烃异构体相对于其z对应物具有更好的溶解度、更好的靶标亲和性、更好的体内或体外效力、更高的螺旋度或提高的细胞透性。在一个实施方案中，拟肽大环化合物的z交联体烯烃异构体相对于其e对应物具有更好的溶解度、更好的靶标亲和性、更好的体内或体外效力、更高的螺旋度或提高的细胞透性。表13在一些实施方案中，拟肽大环化合物不包括表14所示的拟肽大环化合物。在一些实施方案中，拟肽大环化合物不包含表14所示的拟肽大环化合物结构。表14在表14中，x表示s或任意氨基酸。所示的肽可包含n-末端封端基团如乙酰基或另外的连接体，如在封端基团与肽序列的起点之间的β-丙氨酸。表15示出了包含d-氨基酸的非交联多肽的实例。表15拟肽大环化合物如本文和2008年2月25日提交的未决的美国专利申请号12/037,041所述制备，该申请特此通过引用整体并入。通常，以0.5mmol规模在peg-ps树脂(加载0.45mmol/g)上合成完全保护的结合树脂的肽。通过采用在dmf中的20％(v/v)的哌啶对结合树脂的肽进行3×10min的处理来实现临时fmoc基团的脱保护。用nmp(3×)、二氯甲烷(3×)和nmp(3x)洗涤后，通过与适当预活化的fmoc-氨基酸衍生物孵育1×60min来实现每个连续氨基酸的偶联。将所有被保护的氨基酸(1.0mmol)溶解在nmp中，并用hctu(1.0mmol)、cl-hobt(1.0mmol)和diea(2.0mmol)活化，之后将偶联溶液转移至脱保护的结合树脂的肽。偶联完成后，洗涤树脂，以准备下一个脱保护/偶联循环。在nmp中的乙酸酐/diea的存在下进行氨基末端的乙酰化。对从完全组装的树脂结合的肽的等分试样所获得的经切割和脱保护的样品进行lc-ms分析，以验证每个偶联的完成。在用于制备包含1,4-三唑基团的拟肽大环化合物(例如sp153)的典型实例中，将dmf中的20％(v/v)的2,6-二甲基吡啶加入到在40ml玻璃小瓶中的肽树脂(0.5mmol)中并摇动10分钟。然后加入抗坏血酸钠(0.25g，1.25mmol)和二异丙基乙胺(0.22ml，1.25mmol)，接着加入碘化亚铜(i)(0.24g,1.25mmol)，并将所得反应混合物在环境温度下机械摇动16小时。在用于制备包含1,5-三唑基团的拟肽大环化合物(sp932，sp933)的典型实例中，用无水dcm洗涤肽树脂(0.25mmol)。将树脂装入微波小瓶中。对容器进行抽真空并用氮气进行吹扫。加入氯(五甲基环戊二烯基)双(三苯基膦)钌(ii)，10％加载量(strem44-0117)。将无水甲苯加入到反应容器中。然后将反应物装入微波，并在90℃保持10分钟。可能需要在随后的时间推动反应以完成反应。在其他情况下，可使用氯(1,5-环辛二烯)(五甲基环戊二烯基)钌(“cp*rucl(cod)”)，例如，在室温下在包含甲苯的溶剂中。在用于制备包含碘取代的三唑基团的拟肽大环化合物(例如sp457)的典型实例中，将thf(2ml)加入到在40ml玻璃小瓶中的肽树脂(0.05mmol)中，并摇动10分钟。然后加入n-溴代琥珀酰亚胺(0.04g，0.25mmol)、碘化亚铜(i)(0.05g，0.25mmol)和二异丙基乙胺(0.04ml，0.25mmol)，并将所得反应混合物在环境温度下机械摇动16小时。碘代-三唑交联体可通过偶联反应进一步被取代，例如采用硼酸，以产生拟肽大环化合物如sp465。在典型的实例中，将dmf(3ml)加入到在40ml玻璃小瓶中的碘代-三唑肽树脂(0.1mmol)中，并摇动10分钟。然后加入苯基硼酸(0.04g，0.3mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(0.006g，0.005mmol)和碳酸钾(0.083g，0.6mmol)，并将所得反应混合物在70℃下机械摇动16小时。碘代-三唑交联体也可通过偶联反应进一步被取代，例如用末端炔(例如sonogashira偶联)，以产生拟肽大环化合物如sp468。在典型的实例中，将2：1的thf：三乙胺(3ml)加入到在40ml玻璃小瓶中的碘代-三唑肽树脂(0.1mmol)中，并摇动10分钟。加入n-boc-4-戊炔-1-胺(0.04g，0.2mmol)和双(三苯基膦)氯化钯(0.014g,0.02mmol)并摇动5分钟。然后加入碘化亚铜(i)(0.004g，0.02mmol)，并将所得反应混合物在70℃下机械摇动16小时。在室温下通过用tfa/h2o/tis(95/5/5v/v)处理2.5h来对三唑环化的树脂结合的肽进行脱保护并从固体支持体上切下。将树脂过滤后，使tfa溶液在冷乙醚中沉淀并进行离心，以产生呈固体的所需产物。通过制备型hplc对粗产物进行纯化。表16显示了拟肽大环化合物的列表。表16表17在上文和别处显示的序列中，使用了以下缩写：“nle”表示正亮氨酸，“aib”表示2-氨基异丁酸，“ac”表示乙酰基，并且“pr”表示丙酰基。由“$”表示的氨基酸是由全碳交联体连接的α-mes5-戊烯基-丙氨酸烯烃氨基酸，其包含一个双键。由“$r5”表示的氨基酸是由全碳交联体连接的α-mer5-戊烯基-丙氨酸烯烃氨基酸，其包含一个双键。由“$s8”表示的氨基酸是由全碳交联体连接的α-mes8-辛烯基-丙氨酸烯烃氨基酸，其包含一个双键。由“$r8”表示的氨基酸是由全碳交联体连接的α-mer8-辛烯基-丙氨酸烯烃氨基酸，其包含一个双键。“ahx”表示氨基环己基连接体。该交联体是直链全碳交联体，其在每个氨基酸的α碳之间包含8个或11个碳原子。由“$/”表示的氨基酸是未由任何交联体连接的α-mes5-戊烯基-丙氨酸烯烃氨基酸。由“$/r5”表示的氨基酸是未由任何交联体连接的α-mer5-戊烯基-丙氨酸烯烃氨基酸。由“$/s8”表示的氨基酸是未由任何交联体连接的α-mes8-辛烯基-丙氨酸烯烃氨基酸。由“$/r8”表示的氨基酸是未由任何交联体连接的α-mer8-辛烯基-丙氨酸烯烃氨基酸。由“amw”表示的氨基酸是氨基酸α-me色氨酸。由“aml”表示的氨基酸是氨基酸α-me亮氨酸。由“amf”表示的氨基酸是氨基酸α-me苯丙氨酸。由“2ff”表示的氨基酸是氨基酸2-氟-苯丙氨酸。由“3ff”表示的氨基酸是氨基酸3-氟-苯丙氨酸。由“st”表示的氨基酸是包含两条戊烯基丙氨酸烯烃侧链且如所示每条侧链与另一氨基酸交联的氨基酸。由“st//”表示的氨基酸是包含两条不交联的戊烯基丙氨酸烯烃侧链的氨基酸。由“％st”表示的氨基酸是包含两条戊烯基丙氨酸烯烃侧链且如所示每条侧链通过完全饱和的烃交联与另一氨基酸交联的氨基酸。由“ba”表示的氨基酸是β-丙氨酸。交联氨基酸的名称内的小写字母“e”或“z”(例如“$er8”或“$zr8”)表示双键构型(分别为e或z)。在其他情况下，诸如“a”或“f”的小写字母表示d氨基酸(例如，分别为d-丙氨酸或d-苯丙氨酸)。指定为“nmw”的氨基酸表示n-甲基色氨酸。指定为“nmy”的氨基酸表示n-甲基酪氨酸。指定为“nma”的氨基酸表示n-甲基丙氨酸。指定为“sar”的氨基酸表示肌氨酸。指定为“cha”的氨基酸表示环己基丙氨酸。指定为“cpg”的氨基酸表示环戊基甘氨酸。指定为“chg”的氨基酸表示环己基甘氨酸。指定为“cba”的氨基酸表示环丁基丙氨酸。指定为“f4i”的氨基酸表示4-碘代苯丙氨酸。指定为“f3cl”的氨基酸表示3-氯苯丙氨酸。指定为“f4cooh”的氨基酸表示4-羧基苯丙氨酸。指定为“f34f2”的氨基酸表示3,4-二氟苯丙氨酸。指定为“6clw”的氨基酸表示6-氯色氨酸。指定“iso1”或“iso2”指示该拟肽大环化合物是单一异构体。“ac3c”表示氨基环丙烷羧酸残基。氨基酸形成交联体按照如下所示的图例表示。除非另有指明，各个氨基酸在α位点上的立体化学为s。标记为“4me”的氨基酸用包含甲基取代的炔烃(内炔)的氨基酸来制备，从而产生在4-位包含甲基的三唑基。标记为“4ph”的氨基酸用包含苯基取代的炔烃(内炔)的氨基酸来制备，从而产生在4-位包含苯基的三唑基。对于叠氮氨基酸，所示碳原子的数目是指α碳与末端叠氮之间的亚甲基单位的数目。对于炔烃氨基酸，所示碳原子的数目是α位点与三唑部分之间的亚甲基单位的数目加上来源于炔烃的三唑基团内的两个碳原子。指定为“5i”、“5pennh2”、“5bnznh2”、“5prpome”、“5ph”和“5prp”的氨基酸是指以下拟肽大环化合物中所示类型的交联氨基酸：在上述结构中，x例如为下列取代基之一：其中“cyc”为合适的芳基、环烷基、环烯基、杂芳基或杂环基，它们是未取代的或任选地被如上所述的ra或rb基团取代。在一些实施方案中，三唑取代基选自：表18显示了示例性的拟肽大环化合物：表18在一些实施方案中，拟肽大环化合物不包括表19中示出的拟肽大环化合物。所示的肽可包含n-末端封端基团如乙酰基，或另外的连接体，如在封端基团与肽序列起点之间的β-丙氨酸。在一些实施方案中，拟肽大环化合物不包含如表19所示的拟肽大环化合物结构。表19#序列1ac-qsqqtf$5rn6nlwrll$5a5qn-nh22ac-qsqqtf$4rn5nlwrll$4a5qn-nh23ac-qsqqtf#5rn6nlwrll#5a5qn-nh24ac-qsqqtf#4rn5nlwrll#4a5qn-nh25ac-qsqqtf$5rn5nlwrll$5a5qn-nh26ac-qsqqtf$5ra5nlwrll$5n5qn-nh27ac-qsqqtf$5ra5nlwrll$5n6qn-nh28ac-qsqqtf$4ra5nlwrll$4n5qn-nh29ac-qsqqtf$4ra5nlwrll$4n6qn-nh210ac-qsqqtf$4rn6nlwrll$4a5qn-nh211ac-qsqqtf$5rn6nlwrll$5a6qn-nh212ac-qsqqtf$5ra6nlwrll$5n6qn-nh213ac-qsqqtf$4rn6nlwrll$4a6qn-nh214ac-qsqqtf$4ra6nlwrll$4n6qn-nh215ac-qsqqtf$4rn5nlwrll$4a6qn-nh216ac-qsqqtf4me$5rn6nlwrll4me$5a5qn-nh217ac-ltf$4ra5hywaql$4n6s-nh218h-f$4rn6hywaql$4a5s-nh219ac-ltf$4rn6hywaql$4a5s-nh220ac-f$4rn6hywaql$4a5s-nh221ac-ltf$4rn6hywaql$4a6s-nh222ac-ltf$5ra5hywaql$5n6s-nh223ac-ltf$4rn6aywaql$4a5a-nh224ac-ltf$5ra5hywaql$5n6s-nh225ac-ltf$4rn6aywaql$4a5a-nh226ac-ltfehywaqlts-nh2以0.1mmol规模在rink酰胺mbha树脂(加载0.62mmol/g)上合成经完全保护的树脂结合的肽。通过采用在nmp中的25％(v/v)的哌啶对树脂结合的肽进行2×20min的处理来实现临时fmoc基团的脱保护。用nmp和二氯甲烷进行充分的流动洗涤后，通过与适当预活化的fmoc-氨基酸衍生物孵育1×60min来实现每个连续氨基酸的偶联。将所有被保护的氨基酸(1mmol)溶解在nmp中，并用hctu(1mmol)和diea(1mmol)进行活化，之后将偶联溶液转移至脱保护的树脂结合的肽。偶联完成后，对树脂进行充分的流动洗涤，以准备下一个脱保护/偶联循环。在nmp/nmm中的乙酸酐/diea的存在下进行氨基末端的乙酰化。对从完全组装的树脂结合的肽的等分试样所获得的经切割和脱保护的样品进行lc-ms分析，以验证每个偶联反应的完成。在典型的实例中，用dcm洗涤肽树脂(0.1mmol)。通过用2％tfa/dcm5％tips对树脂结合的肽进行3×3min的处理来实现临时mmt基团的脱保护，然后进行30min的处理直到在滤液中观察不到橙色。在各次处理之间用dcm对树脂进行充分的流动洗涤。在完成mmt的去除之后，将树脂用5％的diea/nmp溶液洗涤3次，为双硫醚(bisthioether)偶联作准备。将树脂装入反应小瓶中。向反应容器中加入1/1的dcm/dmf，随后加入diea(2.4当量)。充分混合5分钟后，加入4,4'-双(溴甲基)联苯(1.05当量)(tciamericab1921)。然后在室温下机械搅拌反应混合物过夜。需要时，使反应进行另外的时间以达到反应完成。类似的程序可用于制备五亚甲基、六亚甲基或七亚甲基交联剂(“％c7”、“％c6”或“％c5”)。在室温下通过用tfa/h2o/tis(94/3/3v/v)处理3h来对双硫醚树脂结合肽进行脱保护并将其从固体支持体上切下。将树脂过滤后，使tfa溶液在冷乙醚中沉淀并离心，得到呈固体的所需产物。通过制备型hplc对粗产物进行纯化。表6示出了拟肽大环化合物的列表。表6表21示出了示例性的拟肽大环化合物：表21选定的示例性拟肽大环化合物的部分结构如下所示：示例性拟肽大环化合物的结构如下所示：示例性拟肽大环化合物的另一结构如下所示：表示为“#cs5”的氨基酸为通过i至i+7、五亚甲基交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的d-半胱氨酸。表示为“#c5”的氨基酸为通过i至i+7、五亚甲基交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的l-半胱氨酸。表示为“#cs6”的氨基酸为通过i至i+7、六亚甲基交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的d-半胱氨酸。表示为“#c6”的氨基酸为通过i至i+7、六亚甲基交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的l-半胱氨酸。表示为“#cs7”的氨基酸为通过i至i+7、七亚甲基交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的d-半胱氨酸。表示为“#c7”的氨基酸为通过i至i+7、七亚甲基交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的l-半胱氨酸。表示为“#cs8”的氨基酸为通过i至i+7、八亚甲基交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的d-半胱氨酸。表示为“#c8”的氨基酸为通过i至i+7、八亚甲基交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的l-半胱氨酸。表示为“％cs7”的氨基酸为通过i至i+7、七亚甲基交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的α-甲基-d-半胱氨酸。表示为“％c7”的氨基酸为通过i至i+7、七亚甲基交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的α-甲基-l-半胱氨酸。表示为“％cs8”的氨基酸为通过i至i+7、八亚甲基交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的α-甲基-d-半胱氨酸。表示为“％c8”的氨基酸为通过i至i+7、八亚甲基交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的α-甲基-l-半胱氨酸。表示为“％cs9”的氨基酸为通过i至i+7、九亚甲基交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的α-甲基-d-半胱氨酸。表示为“％c9”的氨基酸为通过i至i+7、九亚甲基交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的α-甲基-l-半胱氨酸。表示为“％cs10”的氨基酸为通过i至i+7、十亚甲基交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的α-甲基-d-半胱氨酸。表示为“％c10”的氨基酸为通过i至i+7、十亚甲基交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的α-甲基-l-半胱氨酸。表示为“pen8”氨基酸为通过i至i+7、八亚甲基交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的d-青霉胺。表示为“pen8”的氨基酸为通过i至i+7、八亚甲基交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的l-青霉胺。表示为“#csbph”的氨基酸为通过i至i+7、bph(4,4’-双甲基-二苯基)交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的d-半胱氨酸。表示为“#cbph”的氨基酸为通过i至i+7、bph(4,4’-双甲基-二苯基)交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的l-半胱氨酸。表示为“％csbph”的氨基酸为通过i至i+7、bph(4,4’-双甲基-二苯基)交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的α-甲基-d-半胱氨酸。表示为“％cbph”的氨基酸为通过i至i+7、bph(4,4’-双甲基-二苯基)交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的α-甲基-l-半胱氨酸。表示为“#csbpy”的氨基酸为通过i至i+7、bpy(6,6’-双甲基-[3,3’]联吡啶)交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的d-半胱氨酸。表示为“#cbpy”的氨基酸为通过i至i+7、bpy(6,6’-双甲基-[3,3’]联吡啶)交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的l-半胱氨酸。表示为“％csbpy”的氨基酸为通过i至i+7、bpy(6,6’-双甲基-[3,3’]联吡啶)交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的α-甲基-d-半胱氨酸。表示为“％cbpy”的氨基酸为通过i至i+7、bpy(6,6’-双甲基-[3,3’]联吡啶)交联体连接到另一个含巯基的氨基酸的α-甲基-l-半胱氨酸。以上指出的亚甲基单元的数目是指在交联体的两个巯基之间的亚甲基单元的数目。在一些实施方案中，拟肽大环化合物不包括表22所示的拟肽大环化合物。所示的肽可包含n-末端封端基团如乙酰基，或另外的连接体，如在封端基团和肽序列的起点之间的β-丙氨酸。在一些实施方案中，拟肽大环化合物不包含如表22所示的拟肽大环化合物结构。表22#序列1qsqqtf％csnlwll％cs6qn2qsqqtf％csnlwll％cs7qn3qsqqtf％csnlwll％cs8qn4qsqqtf％csnlwll％cs9qn在其他实施方案中，拟肽大环化合物不包括表23所示的拟肽大环化合物。在一些实施方案中，拟肽大环化合物不包含如表23所示的拟肽大环化合物结构。表23在其他实施方案中，拟肽大环化合物不包括表24所示并且在muppidi等人,chem.commun.(2011)doi:10.1039/c1cc13320a中公开的拟肽大环化合物。在一些实施方案中，拟肽大环化合物不包含如表24所示的拟肽大环化合物结构。表24其中c表示l-半胱氨酸而c表示d-半胱氨酸，且#cbph、#cbpy、#csbph和#csbpy如本文中所定义。实施例3：竞争性结合elisa(hdm2和hdmx)在室温下将p53-his6蛋白质(30nm/孔)在96孔immulon板的孔中包被过夜。在实验当天，使用自动elisa洗板器用1xpbs-吐温20(0.05％)洗板，在室温下采用elisa微孔封闭将板封闭30分钟；通过用1xpbs-吐温20(0.05％)洗板以洗掉过量的封闭剂。在无菌水中将肽从10mmdmso储备液稀释至500μμ工作储备液，在0.5％dmso中进行进一步稀释，以在样品中保持dmso浓度恒定。向孔中加入50μl体积的2x期望浓度的肽，随后添加稀释的gst-hdm2或gst-hmdx蛋白质(最终浓度：10nm)。在室温下孵育样品2h，用pbs-吐温20(0.05％)洗板，之后添加100μl的在hrp稳定缓冲液中稀释至0.5μg/ml的hrp偶联抗gst抗体[hypromatrix，inc]。在与检测抗体孵育30min后，洗板，并与100μl/孔的tmb-e底物溶液孵育高达30分钟；用1mhcl停止反应，并在微孔板阅读器上在450nm下测量吸光度。使用graphpadprism软件分析数据。实施例4：sjsa-1细胞活力分析在测定前一天，将sjsa1细胞以5000个细胞/100μl/孔的密度接种在96孔板中。在研究当天，用opti-mem培养基洗涤细胞一次，并将90μlopti-mem培养基加入细胞。将肽从10mmdmso储液在无菌水中稀释至500μm工作原液，在0.5％dmso中进一步稀释，以保持dmso浓度在样品中恒定。肽的最终浓度范围μm为在每孔100μl终体积中50、25、12.5、6.25、3.1、1.56、0.8和0μm。最终的最高dmso浓度为0.5％并用作阴性对照。caymanchemicalscell-basedassay(-)-nutlin-3(10mm)用作阳性对照。使用与肽相同的稀释方案稀释nutlin，将10μl的10x所需浓度加入适当的孔中以达到最终所需浓度。然后将细胞与肽在37℃、湿润的5％co2气氛中孵育20-24h。孵育后期，根据制造商的说明使用promegacelltiter-glo试剂测量细胞活力。实施例5.sjsa-1p21上调试验在测定前一天，将sjsa1细胞以80万个细胞/2ml/孔的密度接种在6孔板中。在研究当天，用opti-mem培养基洗涤细胞一次，并将1350μlopti-mem培养基加入细胞。将肽从10mmdmso储液在无菌水中稀释至500μm工作原液，进一步在0.5％dmso中进行稀释，以保持dmso浓度在样品中恒定。最终的最高dmso浓度为0.5％并用作阴性对照。caymanchemicalscell-basedassay(-)-nutlin-3(10mm)用作阳性对照。使用与肽相同的稀释方案稀释nutlin，将150μl的10x所需浓度加入适当的孔中以达到最终所需浓度。然后将细胞与肽在37℃、湿润的5％co2气氛中孵育18-20h。孵育后期，收获细胞，用1xpbs(不含ca++/mg++)洗涤，并在1x细胞裂解缓冲液(cellsignalingtechnologies10x缓冲液，稀释至1x，并补充有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂)中在冰上裂解30min。将裂解物在微量离心机中以13000rpm的速度在40℃下离心8min；收集澄清的上清液并储存在-80℃直至进一步使用。使用来自thermofisher的bca蛋白质检测试剂盒和bsa标准测量裂解物的总蛋白质含量。将25μg总蛋白质用于p21检测elisa测定。对于elisa板，每种条件一式三份设定。按照制造商的说明书遵循elisa测定方案。每孔使用25μg总蛋白质，每个孔一式三份建立。使用graphpadprism软件分析数据。实施例6：p53grip试验thermoscientific*bioimagep53-hdm2redistributeassay监测响应于药物化合物或其它刺激物，蛋白质与hdm2的相互作用以及gfp-标记的p53的细胞转位。重组cho-hir细胞稳定地表达与增强绿色荧光蛋白(egfp)的c末端融合的人p53(1-312)和pde4a4-hdm2(1-124)，后者是pde4a4和hdm2(1-124)之间的融合蛋白。它们提供了用于检测实验条件对p53和hdm2的相互作用的影响的即用型测定系统。使用hcs平台进行成像和分析。将cho-hir细胞常规维持在补充有1％青霉素-链霉素、0.5mg/ml遗传霉素、1mg/mlzeocin和10％fbs的hamf12培养基中。在进行测定之前18-24h，使用培养基以7000个细胞/100μl/孔的密度将细胞接种至96孔板中。第二天，更新培养基，并向细胞添加pd177至3μμ的最终浓度以激活灶形成。对照孔保持为不含pd-177溶液。用pd177刺激后24h，用opti-mem培养基洗涤细胞一次，并向细胞添加50μl补充有pd-177(6μμ)的opti-mem培养基。在无菌水中将肽从10mmdmso储备液稀释至500μμ工作储备液，在0.5％dmso中进行进一步稀释，以保持样品中的dmso浓度恒定。最终的最高dmso浓度是0.5％，并将其用作阴性对照。使用caymanchemicalscell-basedassay(-)-nutlin-3(10mm)作为阳性对照。使用与将50μl2x期望浓度的肽添加至适当的孔中相同的稀释方案稀释nutlin以达到最终期望浓度。然后在湿润的5％co2气氛和37℃下，细胞与肽孵育6h。在孵育期之后，在室温下通过轻轻地吸出培养基并每孔添加150μl固定溶液来固定细胞20分钟。每次用200μlpbs/孔洗涤固定的细胞4次。在最后一次洗涤结束时，添加100μl1μμhoechst染色液。将密封的板在黑暗中孵育至少30分钟，用pbs洗涤，以除去过量的染色剂，并向每孔中添加pbs。培养板可在4℃下于黑暗中储存长达3天。利用位于使用针对hoechst和gfp的10x物镜、xf-100滤光器组的cellomicsarrayscan仪器上的分子转位模块对p53/hdm2的转位进行成像。输出参数是mean-circringaveintenratio(核和细胞质的平均荧光强度的比例(孔平均值))。将用于图像分析的每孔最小可接受细胞数设置成500个细胞。实施例7：α-螺旋度的圆二色性(cd)分析使用带有第2版jascospectramanager系统软件的jascoj-815分光偏振计(jascoinc.,easton,md)通过cd光谱法分析肽溶液。使用珀尔帖(peltier)温度控制器保持对光单元的温度控制。结果表示为从公式[θ]＝θobs·mrw/10*l*c计算得到的平均摩尔椭圆度[θ](degcm2dmol-1)，在该公式中，θobs为观察到的以毫度为单位的椭圆度，mrw为肽的平均残基重量(肽的分子量/残基数)，l为以厘米为单位的单元的光程长度，c为以mg/ml为单位的肽浓度。通过氨基酸分析确定肽浓度。在温和cd缓冲液(20mm磷酸，ph2)中制备肽的储备溶液。使用该储备溶液在温和cd缓冲液或含有50％三氟乙醇(tfe)的cd缓冲液中制备0.05mg/ml的肽溶液，以供在10mm光程单元中分析。在4℃下，从195至250nm，以0.2nm的增量以及每分钟50nm的扫描速度扫描肽溶液的可变波长测量值。报告了六次扫描的平均值。表25示出了针对选定的拟肽大环化合物的圆二色性数据：表25实施例8：利用荧光偏振(fp)对mdm2的直接结合测定该测定按照以下一般方案进行：1.将mdm2(内部，41kd)稀释到fp缓冲液(高盐缓冲液-200mmnacl，5mmchaps，ph7.5)中，从而制备10μμ工作储备溶液。2.将30μl10μμ蛋白质储备溶液添加到96孔黑色he微孔板(moleculardevices)的a1和b1孔中。3.将30μlfp缓冲液填充到第a2至a12、b2至b12、c1至c12和d1至d12列中。4.蛋白质储备液从a1、b1经2或3倍系列稀释至a2、b2；a2、b2稀释至a3、b3；...在最后一个稀释点达到个位数的nm浓度。5.用dmso将1mm(在100％dmso中)fam标记的线性肽稀释到100μμ(1:10稀释)。然后，用水从100μμ稀释到10μμ(1:10稀释)，然后用fp缓冲液从10μμ稀释到40nm(1:250稀释)。这就是工作溶液，其在孔中将是10nμ浓度(1:4稀释)。将稀释的fam标记的肽保持在暗处，直至使用。6.将10μl10nμfam标记的肽添加到各孔中并孵育，在不同时间点读数。5-fam-baltfehywaqlts-nh2的kd为约13.38nm。5-fam-baltfehywaqlts-nh2的kd为约13.38nm。实施例9：对mdm2的竞争性荧光偏振测定该测定按照以下一般方案进行：1.将mdm2(内部，41kd)稀释到fp缓冲液(高盐缓冲液-200mmnacl，5mmchaps，ph7.5.)中，从而制备84nm(2x)工作储备溶液。2.将20μl84nm(2x)蛋白质储备溶液添加到96孔黑色he微孔板(moleculardevices)的各孔中。3.用dmso将1mm(在100％dmso中)fam标记的线性肽稀释到100μμ(1:10稀释)。然后，用水从100μμ稀释到10μμ(1:10稀释)，然后用fp缓冲液从10μμ稀释到40nm(1:250稀释)。这就是工作溶液，其在孔中将是10nμ浓度(1:4稀释)。将稀释的fam标记的肽保持在暗处，直至使用。4.用fp缓冲液制备未标记的肽剂量板，从1μμ(终浓度)肽开始，并使用以下稀释方案为6个点制备5倍系列稀释。5.用dmso将10mm(在100％dmso中)稀释到5mm(1:2稀释)。然后，用h2o从5mm稀释到500μμ(1:10稀释)，然后用fp缓冲液从500μμ稀释到20μμ(1:25稀释)。从20μμ(4x)为6个点制备5倍系列稀释。6.将10μl系列稀释的未标记的肽转移到充填有20μl84nm蛋白质的各孔中。7.将10μl10nμ(4x)fam标记的肽添加到各孔中并孵育3小时以读数。来自实施例8和9的结果在图6a-d中的hdm2数据中提供。实施例10：利用荧光偏振(fp)对mdmx的直接结合测定该测定按照以下一般方案进行：1.将mdmx(内部，40kd)稀释到fp缓冲液(高盐缓冲液-200mmnacl，5mmchaps，ph7.5)中，从而制备10μμ工作储备溶液。2.将30μl10μμ蛋白质储备溶液添加到96孔黑色he微孔板(moleculardevices)的a1和b1孔中。3.将30μlfp缓冲液填充到第a2至a12、b2至b12、c1至c12和d1至d12列中。4.蛋白质储备液从a1、b1经2或3倍系列稀释到a2、b2；a2、b2稀释到a3、b3；...在最后一个稀释点达到个位数的nm浓度。5.用dmso将1mm(在100％dmso中)fam标记的线性肽稀释到100μμ(1:10稀释)。然后，用水从100μμ稀释到10μμ(1:10稀释)，然后用fp缓冲液从10μμ稀释到40nm(1:250稀释)。这就是工作溶液，其在孔中将是10nμ浓度(1:4稀释)。将稀释的fam标记的肽保持在暗处，直至使用。6.将10μl10nμfam标记的肽添加到各孔中并孵育，在不同时间点读数。5-fam-baltfehywaqlts-nh2的kd为约51nm。实施例11：对mdmx的竞争性荧光偏振测定该测定按照以下一般方案进行：1.将mdmx(内部，40kd)稀释到fp缓冲液(高盐缓冲液-200mmnacl，5mmchaps，ph7.5)中，从而制备300nm(2x)工作储备溶液。2.将20μl300nm(2x)蛋白质储备溶液添加到96孔黑色he微孔板(moleculardevices)的各孔中。3.用dmso将1mm(在100％dmso中)fam标记的线性肽稀释到100μμ(1:10稀释)。然后，用水从100μμ稀释到10μμ(1:10稀释)，然后用fp缓冲液从10μμ稀释到40nm(1:250稀释)。这就是工作溶液，其在孔中将是10nμ浓度(1:4稀释)。将稀释的fam标记的肽保持在暗处，直至使用。4.用fp缓冲液准备未标记的肽剂量板，从5μμ(终浓度)肽开始，并使用以下稀释方案为6个点制备5倍系列稀释。5.用dmso将10mm(在100％dmso中)稀释到5mm(1:2稀释)。然后，用h2o从5mm稀释到500μμ(1:10稀释)，然后用fp缓冲液从500μμ稀释到20μμ(1:25稀释)。从4μμ(4x)为6个点制备5倍系列稀释。6.将10μl系列稀释的未标记的肽转移到填充有20μl300nm蛋白质的各孔中。7.将10μl10nμ(4x)fam标记的肽添加到各孔中并孵育3小时以读数。实施例10和11的结果在图6a-d中的hdmx数据中提供。实施例11的结果在表26a中示出。使用下列标度：“+”表示大于1000nm的值，“++”表示大于100nm且小于或等于1000nm的值，“+++”表示大于10nm且小于或等于100nm的值，而“++++”表示小于或等于10nm的值。表26a实施例11的结果也在表26b中示出。ic50和ki值使用下列标度：“+”表示大于1000nm的值，“++”表示大于100nm且小于或等于1000nm的值，“+++”表示大于10nm且小于或等于100nm的值，而“++++”表示小于或等于10nm的值。表26b实施例12：细胞活力分析该分析按照以下一般方案进行：细胞接种：在测定前一天对细胞进行胰蛋白酶化，计数，并以预定密度接种在96孔板中。对使用中的各个细胞系，使用以下细胞密度：sjsa-1：7500个细胞/孔，rko：5000个细胞/孔，rko-e6：5000个细胞/孔，hct-116：5000个细胞/孔，sw-480：2000个细胞/孔，且mcf-7：5000个细胞/孔。在研究当天，在室温下将培养基替换为含有11％fbs的新鲜培养基(测定培养基)。每孔添加180μl测定培养基。不含细胞的对照孔接收200μl培养基。肽稀释：所有稀释均在室温下进行并在室温下添加至细胞。在dmso中制备肽的10mm储备液。使用dmso作为稀释剂，利用1:3稀释方案连续稀释储备液，以得到10、3.3、1.1、0.33、0.11、0.03、0.01mm的溶液。使用无菌水将连续dmso稀释的肽稀释33.3倍。这产生了10x工作储备液的范围。也为对照孔准备了dmso/无菌水(3％dmso)混合物。因此工作储备浓度范围μμ是300、100、30、10、3、1、0.3和0μμ。使用多通道在各稀释步骤充分混合。h行含有对照。h1-h3将接收20μl测定培养基。h4-h9将接收20μl3％dmso-水媒介物。h10-h12将含有不含细胞的单独培养基对照。阳性对照：mdm2小分子抑制剂nutlin-3a(10mm)用作阳性对照。使用与肽相同的稀释方案稀释nutlin。向细胞添加工作储备液：向适当的孔中添加20μl10x期望浓度，以在孔中在200μl总体积中达到终浓度。(20μl300μμ肽+180μl培养基中的细胞＝在孔中在200μl体积中的30μμ终浓度)。使用移液管轻柔混合数次。因此，使用的终浓度范围将是30、10、3、1、0.3、0.1、0.03和0μμ(对于强的肽，包括进一步的稀释)。对照包括未获得肽但与包含肽的孔包含相同浓度的dmso的孔，和不含细胞的孔。在37℃在潮湿的5％co2气氛下孵育72小时。使用来自promega的mtt试剂测定细胞的活力。sjsa-1、rko、rko-e6、hct-116细胞的活力在第3天测定，mcf-7细胞在第5天测定，而sw-480细胞在第6天测定。在指定的孵育时间结束时，使板回到室温。从各孔中移除80μl测定培养基。向各孔添加15μl解冻的mtt试剂。将板在37℃在潮湿的5％co2气氛下孵育2h，并按照生产商的方案添加100μl增溶试剂。于室温在搅拌下孵育1h，并在synergybiotek多板阅读器上读取570nm处的吸光度。使用graphpadprism分析工具分析相对于dmso对照的细胞活力。试剂：invitrogen细胞培养基、falcon96孔透明细胞培养处理板(nunc353072)、dmso(sigmad2650)、rpmi1640(invitrogen72400)和mtt(promegag4000)。仪器：用于吸光度读出的多板阅读器(synergy2)。来自实施例4和5的结果在图6a-d中的sjsa-1ec50数据中提供。来自细胞活力试验的结果在表27和28中示出。使用下列标度：“+”表示大于30μm的值，“++”表示大于15μm且小于或等于30μm的值，“+++”表示大于5μm且小于或等于15μm的值，而“++++”表示小于或等于5μm的值。“ic50比”表示p53+/+细胞中的平均ic50相对于p53-/-细胞中的平均ic50的比值。表27表28实施例13：p21elisa测定该测定按照以下一般方案进行：细胞接种：在测定前一天对sjsa1细胞进行胰蛋白酶化，计数，并以7500个细胞/100μl/孔的密度接种在96孔板中。在研究当天，将培养基替换为新鲜的rpmi-11％fbs(测定培养基)。每孔添加90μl测定培养基。不含细胞的对照孔接收100μl培养基。肽稀释：在dmso中制备肽的10mm储备液。使用dmso作为稀释剂，利用1:3稀释方案连续稀释储备液，以得到10、3.3、1.1、0.33、0.11、0.03、0.01mm的溶液。使用无菌水将连续dmso稀释的肽稀释33.3倍。这产生了10x工作储备液范围。也为对照孔准备了dmso/无菌水(3％dmso)混合物。因此工作储备液浓度范围μμ是300、100、30、10、3、1、0.3和0μμ。使用多通道在各稀释步骤充分混合。h行含有对照。h1-h3将接收10μl测定培养基。h4-h9将接收10ul3％dmso-水载体。h10-h12将含有不含细胞的单独培养基对照。阳性对照：hdm2小分子抑制剂nutlin-3a(10mm)用作阳性对照。使用与肽相同的稀释方案稀释nutlin。向细胞添加工作储备液：向适当的孔中添加10μl10x所需浓度，以在孔中在100μl总体积中达到终浓度。(10μl300μμ肽+90μl培养基中的细胞＝在孔中在100μl体积中的30μμ终浓度)。因此，使用的终浓度范围是30、10、3、1、0.3和0μμ。对照包括未获得肽但与包含肽的孔包含相同浓度的dmso的孔，和不含细胞的孔。孵育后20h，吸出培养基；用1xpbs(不含ca++/mg++)洗涤细胞，并在冰上在60μl1x细胞裂解缓冲液(稀释到1x并补充有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的cellsignalingtechnologies10x缓冲液)中裂解30min。将板在4℃下以5000rpm的速度离心8min；收集澄清的上清液并于-80℃冷冻直至进一步使用。蛋白质估计：使用来自thermofisher的bca蛋白质检测试剂盒和bsa标准来测定裂解物的总蛋白质含量。通常，预期每孔约6-7μg蛋白质。每孔使用50μl裂解物来建立p21elisa。人类总p21elisa：elisa测定方案按照生产商的说明书进行。各孔使用50μl裂解物，并且各孔一式三份建立。试剂：-cell-basedassay(-)-nutlin-3(10mm)：caymanchemicals，目录号600034，-optimem，invitrogen目录号51985，cellsignaling裂解缓冲液(10x)，cellsignalingtechnology，目录号9803，蛋白酶抑制剂混合片(迷你)，rochechemicals，目录号04693124001，磷酸酶抑制剂混合片，rochechemicals，目录号04906837001，人类总p21elisa试剂盒，r&dsystems，dyc1047-5，以及终止溶液(1mhcl)，cellsignalingtechnologies，目录号7002。仪器：微型离心机-eppendorf5415d和用于吸光度读出的多板阅读器(synergy2)。来自实施例13的结果在图6a-d中的p21数据中提供。实施例14.胱天蛋白酶3检测试验：该试验按照以下一般方案进行：细胞接种：在测定前一天对sjsa1细胞进行胰蛋白酶化，计数，并以7500个细胞/100μl/孔的密度接种在96孔板中。在研究当天，将培养基替换为新鲜的rpmi-11％fbs(测定培养基)。每孔添加180μl测定培养基。不含细胞的对照孔接收200μl培养基。肽稀释：·在dmso中制备肽的10mm储备液。使用dmso作为稀释剂，利用1:3稀释方案连续稀释储备液，以得到10、3.3、1.1、0.33、0.11、0.03、0.01mm的溶液。使用无菌水将连续dmso稀释的肽稀释33.3倍。这产生了10x工作储备液范围。也为对照孔准备了dmso/无菌水(3％dmso)混合物。·因此工作储备液浓度范围μμ将是300、100、30、10、3、1、0.3和0μμ。使用多通道在各稀释步骤充分混合。向适当的孔中添加20ul10x工作储备液。·h行含有对照。h1-h3将接收20μl测定培养基。h4-h9将接收20ul3％dmso-水载体。h10-h12将含有不含细胞的单独培养基对照。·阳性对照：hdm2小分子抑制剂nutlin-3a(10mm)用作阳性对照。使用与肽相同的稀释方案稀释nutlin。向细胞添加工作储备液：·向适当的孔中添加10μl10x期望浓度，以在孔中在100μl总体积中达到终浓度。(10μl300μμ肽+90μl培养基中的细胞＝在孔中在100μl体积中的30μμ终浓度)。因此，使用的终浓度范围是30、10、3、1、0.3和0μμ。·对照包括未获得肽但与包含肽的孔包含相同浓度的dmso的孔，和不含细胞的孔。·孵育后48h，从各孔中吸出80μl培养基；每孔添加100μl胱天蛋白酶3/7glo测定试剂(promega胱天蛋白酶3/7glo测定系统，g8092)，于室温在轻柔振荡下孵育1h。在synergybiotek多板阅读器上对读取发光。数据作为胱天蛋白酶3对经dmso处理的细胞的激活而进行分析。来自实施例13和14的结果在图6a-d和表29中的p21数据中提供。表29实施例15.与mdmx复合的拟肽大环化合物的x-射线共结晶学为了与肽46的共结晶(表9)，将来自100mmdmso储备溶液的化学计量量的化合物加入到斑马鱼mdmx蛋白质溶液中，并在建立结晶实验之前在4℃静置过夜。程序类似于popowicz等人描述的程序，具有如下所述的一些变化。使用pet15b载体从大肠杆菌bl21(de3)表达系统中获得蛋白质(残基15-129，l46v/v95l)。使细胞在37℃生长并用1mmiptg诱导，od600为0.7。使细胞在23℃下再生长18hr。使用ni-nt琼脂糖，然后用50mmnapo4，ph8.0，150mmnacl，2mmtcep缓冲的superdex75纯化蛋白质，然后浓缩至24mg/ml。将缓冲液更换为20mmtris，ph8.0，50mmnacl，2mmdtt用于结晶实验。用nextal(qiagen)ams筛#94获得初始晶体，最终优化的储库为2.6mams，75mmhepes，ph7.5。晶体在4℃下作为薄板常规生长，并通过将其通过含有浓缩(3.4m)丙二酸盐的溶液然后快速冷却进行冷冻保护，储存，并在液氮中运输。在100k和波长下，在aps和束线31-id(sgx-cat)处进行数据采集。束线配备有rayonix225-he检测器。对于数据采集，使用0.8秒的曝光时间将晶体以1°的增量旋转180°。使用mosflm/scala(ccp4；参见ccp4suite:programsforproteincrystallography.actacrystallogr.d50,760-763(1994)；p.r.evans.jointccp4andesf-eacbmnewsletter33,22-24(1997))在空间群c2(晶胞：a＝109.2786，b＝81.0836，α＝90，β＝89.8577，γ＝90°)中处理并缩减数据。使用程序molrep(ccp4；参见a.vagin&a.teplyakov.j.appl.cryst.30,1022-1025(1997))的分子置换用popowicz等人确定的结构的mdmx组分(2z5s；参见g.m.popowicz,a.czarna,u.rothweiler,a.szwagierczak,m.krajewski,l.weber&t.a.holak.cellcycle6,2386-2392(2007))进行，并鉴定了不对称单元中的两个分子。使用程序refmac(ccp4；参见g.n.murshudov,a.a.vagin&e.j.dodson.actacrystallogr.d53,240-255(1997))对斑马鱼mdmx仅两个分子的初步细化得到r因子为0.3424(rfree＝0.3712)和键的rmsd值和角度(1.698°)。从gln19开始并包括整个脂肪族钉合的钉合肽组分的电子密度非常清楚。采用cnx(accelrys)对数据进一步细化到分辨率得到了一个模型(由来自mdmx的1448个原子，来自钉合肽的272个原子和46个水分子组成)，其被良好细化(rf＝0.2601，rfree＝0.3162，和rmsd角＝0.916°)。实施例15的结果显示在图3和图4中。实施例16：由拟肽大环化合物引起的细胞裂解提前一天以7500个细胞/孔并使用100ul/孔的生长培养基将sjsa-1细胞铺设在透明平底板(costar，目录号353072)中，保留h行10-12列为空用于单独放置培养基。在试验当天，将培养基更换为rpmi1％fbs培养基，每孔90ul培养基。在100％的dmso中制备拟肽大环化合物的10mm储备溶液。然后将拟肽大环化合物在100％的dmso中进行连续稀释，然后进一步在无菌水中稀释20倍，以制备各拟肽大环化合物在5％dmso/水中浓度为500um至62.5um的工作储备溶液。将10ul的各化合物加入到90ul的sjsa-1细胞中，以在含0.5％dmso的培养基中得到50um至6.25um的终浓度。阴性对照(非裂解)样品为单独的0.5％dmso，而阳性对照(裂解)样品包括10um蜂毒肽和1％tritonx-100。将细胞板在37℃下孵育1小时。在孵育1小时后，通过显微镜检查细胞的形态，然后在室温下将该板在1200rpm下离心5分钟。对于每个拟肽大环化合物和对照样品，将40μl上清液转移到透明的分析板上。使用来自caymen的目录号#1000882的ldh细胞毒性分析试剂盒测定ldh的释放。结果示于表30中。表30实施例17.使用sp315、sp249和sp154进行的mcf-7乳腺癌研究进行异种移植研究以测试sp315、sp249和sp154在mcf-7乳腺癌异种移植模型中抑制裸鼠的肿瘤生长的效力。在一组中还测试了阴性对照的钉肽、sp252、sp154的点突变(第19位f到a)；该肽在sjsa-1体外活力试验中已经显示无活性。在肿瘤细胞移植前一天(-1天)，将缓释90天的0.72mg的17β-雌二醇丸(innovativeresearch,sarasota,fl)皮下(sc)植入至颈部上的后颈上。在第0天将mcf-7肿瘤细胞皮下植入至雌性裸(crl:nu-foxn1nu)鼠的侧腹。在第18天，使用卡尺测量所得到的sc肿瘤，以确定它们的长度和宽度，并对小鼠进行称重。使用公式(长x宽2)/2计算出肿瘤的尺寸，并表示为立方毫米(mm3)。将肿瘤小于85.3mm3或大于417.4mm3的小鼠从随后的组形成中排除。随机形成13组小鼠，每组10只，以使组平均肿瘤尺寸基本等同(组的平均值±组的标准偏差＝180.7±17.5mm3)。sp315、sp249、sp154和sp252的给药溶液从在媒介物中配制的肽制备，该媒介物含有在ph7的10mm组氨酸缓冲盐水中的浓度为50mg/ml的mpeg(2k)-dspe。该制剂在研究期间制备一次。该媒介物用作随后的研究中的媒介物对照物。针对各组指定不同的治疗方案。第1组，作为媒介物阴性对照组，在第18-39天接收到以每周三次8ml/kg体重静脉内(iv)施用的煤质。第2和3组分别接收到以每周三次30mg/kg或一周两次40mg/kg静脉注射的sp154。第4组接收到以每周三次静脉注射的6.7mg/kg的sp249。第5、6、7和8组分别接收到每周三次26.7mg/kg、每周两次20mg/kg、每周两次30mg/kg静脉注射的sp315。第9组接收到以每周三次静脉注射的30mg/kg的sp252。在给药期间，对小鼠进行称重并每周1-2次测量肿瘤。关于肿瘤体积的结果示于图8-11中，且与媒介物组相比的肿瘤生长抑制率、体重变化和体重减轻值≥20％的小鼠的数目或死亡的小鼠的数目示于表31中。根据％tgi＝100-[(tuvol已治疗的天数-第x天–tuvol已治疗的天数-第18天)/(tuvol媒介物阴性对照-第x天-tuvol媒介物阴性对照-第18天)*100计算肿瘤生长抑制率(tgi)，其中x为正在进行治疗效果评定的那一天。对于该肿瘤模型，第1组、媒介物阴性对照组显示了良好的肿瘤生长速率。对于sp154，在以每周两次40mg/kg给药的组中，2只小鼠在治疗期间死亡，表明这种给药方案是不可耐受的。每周三次30mg/kg的sp154的给药方案耐受性良好，并取得了84％的tgi。对于sp249，在以每周三次6.7mg/kg给药的组中，4只小鼠在治疗期间死亡，表明这种给药方案是不可耐受的。用于sp315的所有给药方案均显示出良好的耐受性，无显著的体重减轻或死亡。采用每周两次40mg/kg的sp315的给药产生了最高的tgi(92％)。每周三次26.7mg/kg、每周两次20mg/kg、每周两次30mg/kg的sp315的给药方案分别产生86％、82％和85％的tgi。对于sp252，在体外试验中没有显示出明显的活性的sp154的点突变，采用每周三次30mg/kg的给药具有较好的耐受性，无明显的体重减轻或死亡。而到第32天观察到88％的tgi，该tgi到第39天减少至41％。来自实施例17的结果示于图8-11中并总结于表31中。表31*p≤0.05相比于媒介物对照实施例18.化合物1对人突变型和野生型p53的结合亲和力在人类受试者中使用本发明的钉合拟肽大环化合物，化合物1，以评估其对来自人癌细胞系的p53蛋白变体的结合亲和力。对从候选患者的癌症样品中获得的dna进行测序，以确定整个p53编码区，包括tp53外显子、内含子和剪接位点。从置换、插入缺失、移码突变、剪接位点突变、插入或缺失、拷贝数变异、大缺失或多态性的鉴定推断出功能障碍的p53。最低肿瘤含量为20％。平均读取深度约为750个读取/扩增子。检测下限是5％突变等位基因，平均读取深度>450个读数/扩增子。当平均读取深度<450个读取/扩增子时，检测限为15％突变等位基因。tp53基因拷贝数的检测基于来自肿瘤的tp53扩增子读取的数目与14个正常dna样品的平均读取数的比较。测定的限度：如果肿瘤含量>60％，可以确定一个或多个等位基因的丢失(99％灵敏度)；如果肿瘤样品含量>30％，则可确定两个等位基因的丢失(99％灵敏度)。超过10％的具有野生型tp53的肿瘤具有小于0.5(<0.5)的拷贝数。如图12所示，与突变型p53相比，对于野生型p53，化合物1对p53的结合亲和力(以半最大有效浓度(ec50)测量)显著更大。通常，化合物1优先结合野生型p53而不是突变型p53。然而，突变型p53的亚群也表现出对化合物1的强亲和力，而野生型p53的亚群表现出对化合物1的弱亲和力。当前第1页12